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EFECTO DEL FLÚOR EN LA EXPRESIÓN DE LOS TRANSPORTADORES
GLAST Y SNAT-3 EN CELULAS GLIALES DE BERGMANN
Janisse Silva Parra, Ciencias Químico Biológicas y Farmacéuticas, Universidad Autónoma
de Nayarit, [email protected] Asesor: Dr. Arturo Ortega Soto, Departamento de
Toxicología, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico
Nacional [email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El flúor es un halógeno que se encuentra en productos de higiene personal, tales
como dentífricos, enjuagues bucales, entre otros; la exposición crónica a este
xenobiótico tiene efectos neurotóxicos.
El glutamato es el principal neurotransmisor excitador del Sistema Nervioso
Central, sin embargo puede provocar muerte neuronal si no es removido
eficientemente de la hendidura sináptica, Los transportadores GLAST y SNAT-3
localizados en la glía son los encargados del reciclamiento de este
neurotransmisor (remoción de la hendidura sináptica, conversión a glutamina y
exporte de ésta). Actualmente existe evidencia de que el flúor disminuye la
síntesis de proteínas en las células gliales, razón por la cual se llevó a cabo la
evaluación de la expresión de estos transportadores en cultivos primarios de
células gliales de Bergmann de cerebelo de pollo.
METODOLOGÍA
Se realizó un cultivo primario de glía de Bergmann de cerebelo de embriones de
pollos de 14 días, cuando estos alcanzaron un 90% de confluencia celular se
expusieron a Flúor (NaF al 0.5%) previa supresión, en los tiempos 5,15, 30 y 60
minutos. Se retiró el estímulo y se dejaron por dos horas en solución de ensayo,
se cosecharon y se lisaron las células, posteriormente se realizó la cuantificación
de proteínas mediante el método de Bradford. Los extractos totales se analizaron
en geles de poliacrilamida, seguido por la transferencia de las proteínas a
membrana de nitrocelulosa. Las membranas fueron incubadas con anticuerpos
primarios contra los transportadores GLAST (1:1000) y SNAT-3 (1:1000) e
inmunodetectados con anticuerpos anti IgG de conejo (1:1000) acoplado a
peroxidasa de rábano. Las señales de quimioluminiscencia emitidas, fueron
captadas por un fotodocumentador, y las bandas relevantes analizadas por
densitometría.
CONCLUSIONES
La exposición a Flúor aumenta la expresión del transportador de glutamato GLAST
mientras que en la expresión de SNAT-3 no se presentan cambios.