Obtención de hipocampo humano en condiciones óptimas para la

Obtención de hipocampo humano en condiciones óptimas para la
realización de impregnación argéntica de Golgi.
Gómez E.1, Rodal I.1, Pastor A.1, Llorens-Martín M.2,3, Rábano A.1
1 Banco
de Tejidos de la Fundación CIEN (BT-CIEN), Madrid
Centro de Biología Molecular Severo Ochoa (CSIC-UAM), Madrid
3 Centro de Investigación Biomédica en Red sobre Enfermedades Neurodegenerativas
(CIBERNED, ISCIII), Madrid
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La impregnación argéntica de Golgi es un procedimiento histológico muy
efectivo para revelar la morfología neuronal completa en tres dimensiones, así
como de la glía. Se fundamenta en la formación de depósitos opacos
intracelulares de cromato argéntico, producto de la reacción entre dicromato
potásico y nitrato de plata (reacción negra). Presentamos un protocolo de
obtención de muestras de tejido cerebral post-mortem adecuado para la
realización de la técnica. Este protocolo se utiliza en el BT-CIEN cuando se
solicitan muestras al Biobanco específicamente con este fin.
Para realizar esta técnica histológica, el cerebro humano post-mortem debe ser
extraído tan rápido como sea posible, pero a su vez manipulado con cuidado
para evitar daños en el tejido. Una vez extraído el cerebro, se toma, en fresco,
un bloque de hipocampo (o de otra región cerebral), de un grosor aproximado
de 10mm, del hemiencéfalo derecho (el izquierdo es para diagnóstico). Tras un
aclarado en agua bidestilada, se introduce el hipocampo en varias soluciones,
dejándolo incubar para su impregnación. Luego se contrasta con violeta de
cresilo y finalmente se hacen cortes en vibratomo de 150µm. Para la
realización de la técnica el proceso debe ser muy escrupuloso desde la toma
de la muestra hasta el final de la tinción. Se destaca la importancia de la no
utilización de instrumentos metálicos en los pasos en los que están presentes
la solución A y B, así como de la protección de la luz siempre y cuando sea
posible, ya que puede ocasionar precipitados.
Utilizando esta técnica, se aprecian alteraciones sutiles en la morfología de las
dendritas neuronales y en las espinas dendríticas en cerebros post-mortem de
pacientes con enfermedades neurológicas. Gracias a que sólo se tiñen un
número restringido de neuronas, es posible seguir sus prolongaciones con
mayor facilidad y observar con claridad las espinas dendríticas.