NMX-FF-104-SCFI-2004 CDU: 634 SECRETARÍA DE ECONOMÍA PRODUCTOS ALIMENTICIOS NO INDUSTRIALIZADOS PARA CONSUMO HUMANO - JALEA REAL - ESPECIFICACIONES Y MÉTODOS DE PRUEBA NON INDUSTRIALIZED FOOD PRODUCTS FOR HUMAN CONSUMPTION - ROYAL JELLY - ESPECIFICATIONS AND TEST METHODS 1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIÓN Esta norma mexicana define al producto denominado Jalea Real y establece las especificaciones que ésta debe cumplir, así como los métodos de prueba para verificar los parámetros establecidos, la norma es de carácter voluntario y es aplicable al producto fresco y liofilizado. 2 REFERENCIAS Para la correcta aplicación de esta norma se deben consultar las siguientes normas oficiales mexicanas y la norma mexicana vigentes o las que las sustituyan: NOM-051-SCFI-1994 Especificaciones generales de etiquetado para alimentos y bebidas no alcohólicas preenvasados, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 24 de enero de 1996. NOM-092-SSA1-1994 Bienes y servicios - Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 12 de diciembre de 1995. NMX-FF-104-SCFI-2004 2/24 NOM-110-SSA1-1994 Bienes y servicios - Preparación y dilución de muestras de alimentos para sus análisis microbiológicos, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 16 de octubre de 1995. NOM-111-SSA1-1994 Bienes y Servicios - Método para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 13 de septiembre de 1995. NOM-112-SSA1-1994 Bienes y servicios - Determinación de bacterias coliformes - Técnica del número más probable, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 19 de octubre de 1995. NOM-114-SSA1-1994 Bienes y servicios - Método para determinación de salmonella en alimentos, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 22 de septiembre de 1995. NOM-145-SCFI-2001 Información comercial - Etiquetado de miel en sus diferentes presentaciones, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 23 de abril de 2001. NMX-F-036-1997-NORMEX Alimentos - Miel - Especificaciones y métodos de prueba. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 25 de abril de 1997. 3 DEFINICIONES Para los propósitos de esta norma se establecen las siguientes definiciones: 3.1 Jalea Real (fresca) Es una sustancia lechosa, secretada por las glándulas hipofaringeas de las abejas jóvenes obreras de 5 a 12 días (nodrizas) que la utilizan para alimentar en su inicio a las larvas de las abejas así como a las abejas reinas. Su sabor es ácido característico, un poco amarga, su color varía de amarillo o beige lechoso y de olor característico. Su viscosidad varía de acuerdo al contenido de agua. NMX-FF-104-SCFI-2004 3/24 Los principales componentes de la jalea real son: agua, proteínas, vitaminas, azúcares, lípidos y sales minerales, ácidos orgánicos siendo los principales ácidos el 10 hidroxi 2 decenoico y el 10 hidroxi decenoico. 3.2 Jalea Real liofilizada Se obtiene de la Jalea Real (fresca) a la cual se extrae la mayor cantidad de agua por congelamiento seco y alto vacío. 4 SÍMBOLOS Y ABREVIATURAS Para los propósitos de esta norma, se establecen los siguientes símbolos y abreviaturas: % °C µg cm g K Kg Km M meq/kg mg ml mm N pH W por ciento; grado centígrado o Celsius; microgramo; centímetro; gramo; Kelvin; kilogramo; kilómetro; molar; miliequivalente por kilogramo; miligramo; mililitro; milímetro; normalidad; potencial de hidrógeno, y watt. 5 CLASIFICACIÓN Y DESIGNACIÓN DEL PRODUCTO 5.1 Los productos naturales que satisfagan las disposiciones de la norma, deben ser designados con el término de Jalea Real. 5.2 El termino Jalea Real no podrá designarse con las denominaciones que figuran en el capitulo 3, a menos que se ajusten a la descripción correspondiente que aparece en dichos párrafos. NMX-FF-104-SCFI-2004 4/24 5.3 La Jalea Real por su presentación se clasifican en: 5.3.1 Jalea Real fresca 5.3.2 Jalea Real liofilizada NOTA 1: Debe llevar la palabra Jalea Real el producto que satisfaga las especificaciones indicadas en el capítulo 6 especificaciones. 6 ESPECIFICACIONES 6.1 Sensoriales - Color Amarillo crema lechoso; - Olor Propio característico, y - Sabor Característico. La Jalea Real no debe tener sabor o aroma desagradables de materias extrañas ni procesos de fermentación. 6.2 Físicas y químicas TABLA 1.- Especificaciones físico químicas de la Jalea Real (fresca) Especificaciones pH solución al 5 % Índice de acidez (meq/100 g) Azúcares reductores (%) Glucosa Sacarosa Humedad 12 h a 70°C (%) Lípidos totales (%) Cenizas a 500°C (%) Fósforo como P (mg) Proteína N X 6,25 (%) 10-HDA Mínimo 3,4 23 10 % Máximo 4,5 48 15 % máx 5 % 60 % 70 % 5% 7% 0,8 % 1,0 % 150 250 11 % 15 % No menos de 1,9 % NMX-FF-104-SCFI-2004 5/24 TABLA 2.- Especificaciones físico químicas de la Jalea Real (liofilizada) Especificaciones Humedad 12 h a 70°C (%) Proteína N X 6,25 (%) Azúcares reductores (%) Glucosa Sacarosa Lípidos totales (%) Cenizas a 500°C (%) Fósforo como P (mg) 10-HDA Mínimo 5% 27 % Máximo 10 % 40 % 11 % 26 % máx 10 % 10 % 35 % 2% 5% 1 800 mg 3 500 mg No menos de 5 % Contiene además vitaminas A, C, D, E, K y complejo B. 6.3 Contaminantes El producto objeto de esta norma no debe contener contaminante físico como restos de larvas, ni químico como plaguicidas, antibióticos, acaricidas, metales pesados, ácido fénico, nitrobenceno y otros que puedan representar un riesgo para la salud. 6.4 Microbiológicas El producto de esta norma debe cumplir con las especificaciones microbiológicas siguientes: TABLA 3.Parámetro Cuenta bacteriana total Coliformes Salmonella Hongos y levaduras Especificaciones microbiológicas de la Jalea Real Especificación Menor de 500 ufc No detectado /g No detectado /g No mayor de 10 ufc / g Método de prueba NOM-092-SSA1 NOM-112-SSA1 NOM-114-SSA1 NOM-111-SSA1 6.5 Materia extraña objetable 6.5.1 El producto objeto de esta norma debe estar libre de fragmentos o excretas de insectos, excretas de roedores, así como cualquier otra materia extraña. NMX-FF-104-SCFI-2004 6/24 6.6 Aditivos, inhibidores y adulterantes 6.6.1 No se permite el uso de aditivos alimentarios para su conservación, diluida en agua, ni mezclarla con azúcares, almidones y otras sustancias. No se permite el uso de inhibidores microbianos. 7 MUESTREO 7.1 La muestra de Jalea Real (fresca) debe ser colocada en frascos limpios de color ámbar con tapa de cierre hermético, marcarla con el número de lote y No. de muestra, anexando toda la información correspondiente al lote de la muestra como el nombre, teléfono y dirección del propietario. Se debe mantener a temperatura de refrigeración (4°C aprox.). 7.2 La preparación y dilución de la muestra para la realización de los análisis de la cuenta total, mohos y levaduras se deben realizar conforme a lo establecido en la norma oficial mexicana NOM-110-SSA1 (ver 2 Referencias). 8 MÉTODOS DE PRUEBA Para la verificación de las especificaciones físicas y químicas que se establecen en esta norma se deben aplicar los métodos de prueba que se indican a continuación: 8.1 Determinación del contenido de humedad 8.1.1 Principio del método o fundamento Una muestra de Jalea Real se somete a un secado en estufa a 70°C ± 2°C reportándose la pérdida de peso como humedad. 8.1.2 Material y equipo 8.1.2.1 Material • • • • Cajas para humedad de aluminio con tapadera; Pinzas para crisol; Espátula, y Desecador. NMX-FF-104-SCFI-2004 7/24 8.1.2.2 • • • 8.1.3 Equipo Estufa con termostato de 25°C a 150°C; Balanza analítica, y Guantes de hilo. Procedimiento Se regula la temperatura de la estufa hasta 70°C + 2°C. Se introducen las cajas de aluminio en la estufa por 12 h, a esta temperatura para que estén a peso constante. Enfriar las cajas dentro de un desecador y registrar el peso. 8.1.4 Determinación de humedad 8.1.4.1 Procedimiento Se pesan en las cajas 2 g de muestra y destapadas se colocan en la estufa por 12 h. Una vez transcurrido este tiempo, se sacan, tapan y colocan en el desecador, una vez frías se pesan. 8.1.4.2 Expresión de resultados Ca - CMS % de HUMEDAD = X 100 PM donde: Ca CMS PM es el peso de la caja con muestra húmeda; es el peso de la caja con muestra seca, y es el peso de la muestra. 8.2 Determinación del pH 8.2.1 Principio del método o fundamento Considerando los altos contenidos de ácidos grasos de la Jalea Real insolubles en el agua, es necesario para obtener resultados reproducibles, determinar el pH de estas soluciones en un medio metanólico. NMX-FF-104-SCFI-2004 8/24 En el caso de una mezcla de solvente se utilizará el más pequeño de los dos productos iónicos, el del agua o del solvente dependiendo de la concentración del agua en la mezcla y también del efecto de la constante dieléctrica de la mezcla sobre la disolución del agua. 8.2.2 Material, equipo, reactivos y soluciones 8.2.2.1 Material • • • • 8.2.2.2 • • • • • • 8.2.2.3 • • Pipeta volumétrica de 10 ml, 15 ml; Matraz volumétrico de 50 ml; Vaso de precipitado de 50 ml, y Agitador magnético. Equipo Agitador magnético; Potenciómetro; Balanza analítica; Lentes de seguridad; Guantes de látex, y Bata de laboratorio. Reactivos y soluciones Solución buffer 4,0, y Solución buffer 7,0. 8.2.3 Procedimiento 8.2.3.1 En un matraz volumétrico de 50 ml, pesar 500 mg de Jalea Real, disolverlo en 12,5 ml de alcohol metílico y llevar a volumen con agua destilada frescamente hervida. 8.2.3.2 Tomar 10 ml de la solución de Jalea Real y agregar 15 ml de agua destilada, agitar moderadamente con un agitador magnético. 8.2.3.3 Se obtiene una solución 0,4 % de Jalea Real en un solvente con una composición de agua 90 %, metanol 10 %. 8.2.3.4 Sumergir el electrodo del potenciómetro y esperar a que las lecturas sean estables esto tarda entre 30 s y 1 min y tomar la lectura del equipo. NMX-FF-104-SCFI-2004 9/24 8.3 Determinación de acidez (método volumétrico) 8.3.1 Principio Se basa en el proceso de neutralización de un ácido mediante un hidróxido en presencia de fenolftaleína como indicador. 8.3.2 Reactivos, materiales y equipo 8.3.2.1 Reactivos • • 8.3.2.2 • • • 8.3.2.3 • • Hidróxido de sodio grado reactivo, y Fenolftaleína grado reactivo. Material Bureta de 25 ml; Matraz Erlenmeyer de 125 ml, y Vaso de precipitado de 100 ml. Equipo Agitador magnético, y Balanza analítica. 8.3.3 Preparación de soluciones 8.3.3.1 Hidróxido de sodio 0,1 N Pesar 4,5 g de hidróxido de sodio, disolver con agua destilada libre de CO2, dejar enfriar y reposar 24 h. Al día siguiente llevar a volumen de 1 000 ml y valorar. 8.3.3.2 Indicador de fenolftaleína al 1 % Pesar 1 g de fenolftaleína, disolver en etanol y llevar a volumen de 100 ml. 8.3.4 Procedimiento 8.3.4.1 Pesar 5 g de muestra disolver con 75 ml de agua destilada libre de CO2. 8.3.4.2 Agregar 0,3 ml de fenolftaleína. 8.3.4.3 Titular con NaOH 0,1N. NMX-FF-104-SCFI-2004 10/24 8.3.4.4 La titulación se concluye cuando se obtiene un vire levemente rosáceo del indicador en la muestra de Jalea Real. 8.3.5 Expresión de resultados Los datos se expresan en miliequivalentes de ácido por kilogramo de Jalea Real (meq/kg). 8.4 Determinación de proteínas método Kjeldhal 8.4.1 Principio El método determina el nitrógeno total, en forma de amonio de los alimentos, sin diferenciar si proviene de proteínas o de otra fuente. En las condiciones en que se realiza la prueba no determina el contenido de nitrógeno en forma de nitratos o nitritos. Los métodos de cuantificación de proteínas se basan esencialmente en la determinación del contenido de nitrógeno en la muestra, suponiendo que todo el nitrógeno está en forma de proteína. Cuando la muestra contiene nitrógeno de otras fuentes como urea, frecuentemente adicionada en raciones para rumiantes o aminas o amidas provenientes de la descomposición de proteína, el método Kjeldhal sobrestimará el contenido de proteína. 8.4.2 Material y equipo 8.4.2.1 Material • • • • • • • • • • • • 8.4.2.2 • • Bureta graduada de 50 ml; Espátula; Gotero; Matraces Kjeldahl de 800 ml; Matraces Erlenmeyer de 500 ml; Matraces volumétricos de 1 000 ml y 2 000 ml; Pinzas para bureta; Pipetas volumétricas; Probetas de 25ml, 50 ml y 100 ml; Soporte universal; Tubos de digestión de 29 cm x 4,5 cm, y Vasos de precipitado. Equipo Agitador magnético; Balanza analítica; NMX-FF-104-SCFI-2004 11/24 • • • • • • • • • • • • Balanza granataria; Campana de extracción; Destilador; Digestor y destilador Kjeldahl; Digestor; Parrilla de agitación; Mascarilla con filtros para vapores orgánicos y gases tóxicos; Mascarilla con filtros para vapores ácidos; Goggles; Lentes de seguridad; Guantes para ácido, y Guantes aislantes. 8.4.3 • • • • • • • • Reactivos y soluciones Sulfato de sodio anhídro; Sulfato cúprico pentahidratado; Ácido sulfúrico concentrado; Agua destilada; Hidróxido de sodio (aprox. al 40 %); Ácido bórico al 4 %; Ácido sulfúrico al 0,1 N, y Rojo de metilo (sal sódica). 8.4.3.1 Preparación de soluciones 8.4.3.1.1 Solución de hidróxido de sodio aproximadamente al 40 %: Disolver 400 g - 450 g de hidróxido de sodio G. R. en 1 000 ml de agua en un matraz volumétrico. 8.4.3.1.2 Solución de ácido bórico al 4 %: Disolver 40 g de ácido bórico en agua destilada y llevar a volumen de 1 000 ml en un matraz volumétrico. 8.4.3.1.3 Indicador de rojo de metilo: Disolver 1g de rojo de metilo (sal sódica) en 100 ml de metanol. 8.4.3.1.4 - Solución de ácido sulfúrico 0,1 N: Agregar lentamente y con agitación 3 ml de ácido sulfúrico a 1 020 ml de agua destilada. Estandarizar la solución. NMX-FF-104-SCFI-2004 12/24 - Pesar 0,15 g de estándar primario de carbonato de sodio previamente secado a 270ºC por 1 h. Disolver en 100 ml de agua destilada, agregar 2 gotas de rojo de metilo TS. Lentamente de la bureta agregar el ácido sulfúrico 0,1 N, con agitación constante, hasta obtener un color rosa pálido. Calentar la solución hasta ebullición, enfriar y continuar la titulación. Calentar nuevamente la solución, hasta ebullición y titular hasta obtener color rosa pálido. Calcular la normalidad. Cada 52,99 g de carbonato de sodio anhidro equivale a 1 ml de ácido sulfúrico 1 N. Estandarización alterna: Pesar 0,1 g de carbonato de sodio previamente secado a 270ºC durante 1 h. Disolver en 50 ml de agua destilada. Agregar 0,1 ml de anaranjado de metilo. 8.4.3.1.5 a) b) c) Determinación de proteína Lentamente de la bureta agregar el ácido sulfúrico 0,1 N, con agitación constante hasta cambio de color a amarillo rojizo. Hervir la solución durante dos minutos enfriar y si es necesario titular hasta que el color amarillo rojizo no desaparezca. Calcular la normalidad. Cada 52,99 g de carbonato de sodio anhidro equivale a 1 ml de ácido sulfúrico 1 N. 8.4.4 Procedimiento (método Kjeldhal) 8.4.4.1 Pesar 1,00 g de muestra en un matraz de digestión. 8.4.4.2 Agregar 10 g de sulfato de sodio anhidro y 0,5 g-1,0 g de sulfato cúprico. 8.4.4.3 Adicionar 25 ml de ácido sulfúrico concentrado. 8.4.4.4 Calentar el matraz a una temperatura moderada, hasta el desprendimiento de humos blancos (aprox. 30 min) y aumentar gradualmente la temperatura a modo de mantener una ebullición activa hasta que la solución clarifique. 8.4.4.5 Girar lentamente y continuar calentando por 30 min más (tiempo total aproximado 90 min). NOTA 2: Proporción de los reactivos, punto de calentamiento y tiempo de digestión son factores críticos por lo que no deben cambiarse. 8.4.4.6 Enfriar con precaución, agregar 250 ml de agua destilada a temperatura ambiente (si se presenta turbulencia durante la digestión, el volumen del agua puede incrementarse a 275 ml). NMX-FF-104-SCFI-2004 13/24 8.4.4.7 Agregar 100 ml de hidróxido de sodio al 40 %. 8.4.4.8 Agregar de 8 a 10 granallas de zinc a cada matraz. 8.4.4.9 Recibir el destilado en un matraz de 500 ml con 50 ml-75 ml de ácido bórico al 4 %. 8.4.4.10 Recibir unos 250 ml en el destilador. 8.4.4.11 Agregar 3-4 gotas de indicador rojo de metilo. 8.4.4.12 Titular con ácido sulfúrico 0,1 N (vira de color verde a morado). (Substraer de esta cifra el volumen del estándar gastado en el blanco). NOTA 3: Hacer una prueba en blanco por lo menos una vez al día y cuando se cambien los reactivos. 8.4.5 Expresión de resultados [(ml de H2SO4)(N del H2SO4)(meq del N) (100)] % de N = --------------------------------------------------------------------% de proteína % de nitrógeno x F PM donde: ml N PM F son los ml gastados de ácido sulfúrico; es la normalidad; es el peso de la muestra, y es el factor para convertir nitrógeno a proteínas. Factor general para productos en el cual las proteínas específicas no están bien definidas = 6,25. 8.5 Determinación de glucosa y sacarosa 8.5.1 Método glucosa-oxidasa Principio del método o fundamento: La enzima glucosa oxidasa a un pH determinado, actúa sobre la glucosa oxidándola con formación de ácido glucurónico y peróxido de hidrógeno, éste por acción de la peroxidasa deja libre oxígeno activo que se hace reaccionar con la o-toluidina formando un complejo colorido que absorbe en la región visible a 530 nm. NMX-FF-104-SCFI-2004 14/24 8.5.2 Reactivos, soluciones y equipo 8.5.2.1 Reactivos y soluciones • • Glucosa oxidasa: Tipo II, purificada de 15 000 20 000 u/g. Sigma Chemical Co. G-6 125 ó equivalente. Peroxidasa: Tipo I. P 8 125. • Diclorhidrato de o-toluidina. • Solución de glucosa oxidasa - peroxidasa: En 200 ml de solución reguladora de pH 7,6, disolver 60 mg de glucosa oxidasa y 16 mg de peroxidasa. Agregar una solución de 135 mg de diclorhidrato de o-toluidina en 260 ml de agua destilada. Guardar en refrigeración en frasco oscuro. De ser necesario, filtrar antes de usar. Esta solución es estable por 6 semanas a 4°C. • Solución reguladora tris pH 7,6: Disolver 48,44 g de tris (hidroximetil) aminometano en 500 ml de agua destilada, añadir 384 ml de ácido clorhídrico 0,8 M; ajustar el pH a 7,6 si es necesario y aforar a un litro con agua destilada. • Ácido clorhídrico 4 N: En 200 ml de agua destilada agregar 330 ml de HCl concentrado (densidad = 1,19 g/ml, pureza = a 37,2 %) moviendo constantemente y aforar a un litro con agua destilada. • Ácido clorhídrico 6 N: En 200 ml de agua destilada agregar 494 ml de HCl concentrado (densidad = 1,19 g/ml, pureza = a 37,2 %), moviendo constantemente y aforar a un litro con agua destilada. • Ácido clorhídrico 0,8 N: En 200 ml de agua destilada agregar 66 ml de HCl concentrado (densidad = 1,19 g/ml, pureza = a 37,2 %), moviendo constantemente y aforar a un litro con agua destilada. • Hidróxido de sodio 5 N: Disolver 200 g de NaOH (reactivo analítico libre de carbonatos y humedad) en 500 ml de agua destilada y aforar a un litro con agua destilada. • Solución patrón de glucosa 0,1 mg/ml: En un matraz volumétrico de 250 ml, disolver 25 mg de glucosa (reactivo analítico) con 25 ml de agua. Calentar hasta ebullición durante 2 min y enfriar a temperatura ambiente y aforar al volumen con agua destilada. • Indicador de fenolftaleína 0,1 %: En 50 ml de etanol disolver 0,1 g de fenolftaleína y llevar a 100 ml con etanol. NMX-FF-104-SCFI-2004 15/24 8.5.2.2 • Equipo Espectrofotómetro VIS. 8.5.3 Procedimiento 8.5.3.1 Obtención de glucosa 8.5.3.1.1 Pesar un gramo de Jalea Real (con precisión de ± 0,000 3 g) anotando el peso exacto, disolver en agua destilada, transferir a un matraz volumétrico de 100 ml y completar el volumen con agua destilada. 8.5.3.1.2 Diluir una alícuota de 5,0 ml en un matraz volumétrico de 100 ml y llevar a volumen con agua destilada. En cada uno de dos tubos de ensaye de 18 mm X 150 mm pasar con pipeta 2 porciones de 2,0 ml de la muestra diluida tomados con una pipeta volumétrica de tipo "A". 8.5.3.1.3 En una gradilla poner un tubo con 2,0 ml de agua, seguido de un tubo conteniendo 2,0 ml de la solución patrón de glucosa, 2 tubos conteniendo la muestra diluida y otro tubo con 2,0 ml de solución patrón de glucosa. Repetir esta secuencia si se realizan más determinaciones. 8.5.3.1.4 Agregar a cada tubo 5,0 ml del reactivo de glucosa-oxidasa (manteniendo a temperatura ambiente) a intervalos apropiados dependiendo de la técnica de medición que se va a emplear (por ejemplo, de 30 s a 60 s cuando se utilizan celdas de flujo; para celdas normales deben ser necesarios tiempos más largos) comenzando con un tubo de agua que será el testigo de reactivos. 8.5.3.1.5 Después de 60 min de la adición del reactivo, agregar al primer tubo 0,15 ml de ácido clorhídrico 4 N, mezclar perfectamente con un agitador. Continuar con la misma secuencia de tiempo en las otras soluciones. Ajustar el cero del instrumento con el tubo que contiene agua y determinar la absorbancia del contenido de cada tubo a 530 nm un minuto después de la adición del ácido, empleando celdas de vidrio de 1 cm de paso de luz. 8.5.3.2 Hidrólisis (para obtención de sacarosa) 8.5.3.2.1 En un matraz de 50 ml poner 25 ml de la solución de Jalea Real, agregar 5,0 ml de ácido clorhídrico 6 N y poner en baño de agua a 333 K (60°C) por 17 min, enfriar la solución a temperatura ambiente y neutralizar con hidróxido de sodio 5 N y ácido clorhídrico 0,8 N, utilizando fenolftaleína como indicador. NMX-FF-104-SCFI-2004 16/24 8.5.3.2.2 Una vez que la muestra ha sido hidrolizada, se debe llevar a cabo la determinación de acuerdo a lo establecido en el inciso 8.2.1 que se utilizó para la determinación de glucosa; emplee 3 tubos para la muestra y 2 para estándar. 8.5.4 Expresión de resultados Para determinar el % en peso de glucosa se hará de acuerdo a las siguientes fórmulas: µg de glucosa antes de la = hidrólisis (Absorbancia de la muestra) X (µg del estándar) (Absorbancia del estándar) % de glucosa = (µg de la glucosa antes de la hidrólisis) X (factor de dilución) (g de muestra) Para determinar el % en peso se hará de acuerdo con las siguientes fórmulas: µg de glucosa después de la = (Absorbancia de la muestra después de la hidrólisis) X (µg del estándar) hidrólisis (Absorbancia del estándar) % de sacarosa = (referido en % glucosa) (µg de la glucosa después de hidrólisis -µg glucosa antes de hidrólisis) X (0,023 75) (g de muestra) donde: 0,02375 es el factor = µg de glucosa X 1,9 X 10-6 X (½) X 250 X 100; µg glucosa X 1,9 = µg sacarosa; 10-6 = µg / g; ½ = 2 ml analizados; 250 ml muestra diluida; 100 = para convertir a %. NMX-FF-104-SCFI-2004 17/24 8.5.5 Informe de prueba El informe de la prueba debe incluir lo siguiente: • • • % de azúcar invertido; % de sacarosa, y % glucosa. 8.6 Determinación de lípidos totales 8.6.1 Principio El método para determinar la cantidad de extracto etéreo en alimentos para animales, se basa en la cuantificación de los aceites y grasas presentes en la muestra mediante la extracción con un disolvente orgánico que puede ser éter etílico o éter de petróleo. 8.6.2 Material, equipo y reactivos 8.6.2.1 Material • • • • • • • • • 8.6.2.2 • • • • • • • 8.6.2.3 • Pinzas; Desecador; Algodón; Vasos para extracción de grasa; Dedales o cartuchos de papel filtro; Tubos recolectores de éter; Tubos porta dedales; Termómetro 0°C-150°C, y Espátula. Equipo Balanza analítica; Aparato para extracción de grasa; Estufa con termostato capaz de medir temperaturas de 25°C a 150°C; Mascarilla con filtros para solventes; Guantes de asbesto; Guantes de hilo, y Lentes de seguridad. Reactivos Éter etílico anhidro. NMX-FF-104-SCFI-2004 18/24 8.6.3 Procedimiento 8.6.3.1 Pesar 2 g de muestra en un dedal de extracción. 8.6.3.2 Secar la muestra a 100°C + 2°C por 1 h. 8.6.3.3 Poner los vasos para extracción de grasa en la estufa a peso constante a 100°C + 2°C mínimo 1 h. Pasarlos al desecador y enfriarlos, tomar el peso y registrarlo. 8.6.3.4 Colocar el dedal con la muestra en el porta dedal y fijarlo bajo condensador del aparato de extracción. 8.6.3.5 Agregar de 30 ml a 40 ml de éter al vaso y colocarlo sobre el condensador abrir la llave del agua que enfría el condensador, subir las placas calientes hasta que se pongan en contacto con los vasos, encender los calentadores y observar que no haya fugas de éter. 8.6.3.6 El período de extracción es de 4,30 h aproximadamente. 8.6.3.7 Una vez que la extracción se complete, bajar los calentadores, dejar que drenen completamente (es recomendable dejarlos hasta el día siguiente). 8.6.3.8 Retirar los vasos y en lugar de la muestra poner el recolector del éter, subir otra vez los vasos y las placas, calentar y destilar el éter en los tubos recolectores, poco antes de que se evapore a sequedad (aproximadamente 1 ml), bajar las placas calientes y remover los vasos. 8.6.3.9 Poner los vasos en la estufa a 100°C + 2°C por 30 min, enfriarlos en el desecador y pesarlos. 8.6.4 Expresión de resultados Porcentaje de extracto etéreo en base húmeda (original). PEE x 100 % Grasa = ------------------------PM donde: PEE PM es el peso del extracto etéreo, y es el peso de la muestra. NMX-FF-104-SCFI-2004 19/24 8.7 Determinación de cenizas (substancias minerales) 8.7.1 Principio del método o fundamento Se basa en determinar cuantitativamente la cantidad de minerales obtenidos después de haber sometido a calentamiento y calcinación una muestra. 8.7.2 Material y equipo 8.7.2.1 Material • 8.7.2.2 • 8.7.3 Cápsula de platino. Equipo Mufla. Procedimiento En una cápsula de platino calcinada hasta peso constante (± 0,000 3 g del peso de la cápsula), pesar de 5 g a 10 g de Jalea Real, poner bajo una lámpara infrarroja de 375 W hasta carbonizar la muestra evitando pérdidas por formación de espuma y derrames. Una vez que la muestra haya sido carbonizada y no presente espuma, calcinar en una mufla a (500°C) hasta peso constante. 8.7.4 Expresión de resultados % sólidos = _peso de cenizas X 100 de cenizas peso de la muestra 8.8 Determinación de fósforo p. 8.8.1 Principio del método o fundamento El método colorimétrico para la determinación de fósforo en alimentos, rocas fosfóricas, harina de hueso, fosfato de sodio y de calcio, se basa en la reacción de Misson, que consiste en tratar la solución ácida de ortofosfato con un reactivo ácido que contenga ácido molíbdico y ácido vanádico para formar un complejo estable de color amarillo naranja de ácido vanadimolibdifosfórico. NMX-FF-104-SCFI-2004 20/24 8.8.2 Material y equipo 8.8.2.1 Material • • • • • • • • • • 8.8.2.2 • • • • • • • • • • • • 8.8.3 • • • • • • • Matraz volumétrico de 100 ml, 250 ml y 500 ml; Pipetas volumétricas de 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml y 10 ml; Vasos de precipitados de 100 ml y 250 ml; Matraz Erlenmeyer de 250 ml; Piseta; Espátula; Crisoles; Probeta; Papel filtro No. 4, y Vaso de precipitado de 500 ml. Equipo Campana de extracción; Balanza analítica; Parrilla con agitación y calentamiento; Espectrofotómetro UV/VIS; Mufla; Desecador; Pinzas para crisol; Mascarilla; Filtros para ácido; Campana de extracción; Guantes para ácido, y Lentes de seguridad. Reactivos y soluciones Ácido clorhídrico 1:3; Ácido nítrico concentrado; Ácido sulfúrico al 10 %; Fosfato de potasio monobásico; Metavanadato de amonio; Molibdato de amonio, y Agua destilada. NMX-FF-104-SCFI-2004 21/24 8.8.3.1 Preparación de soluciones 8.8.3.1.1 Molibdovanadato de amonio a) Disolver 54 g de molibdato de amonio en 250 ml de agua destilada a 50oC. Enfriar, agregar 50 ml de ácido sulfúrico concentrado y llevar a volumen de 500 ml. b) Disolver 1,25 g de metavanadato de amonio en 250 ml de agua destilada a 25oC. Calentar lentamente hasta ebullición y enfriar, agregar 10 ml de ácido nítrico concentrado, llevar a volumen de 500 ml. - Mezclar volúmenes iguales de a y b. 8.8.3.1.2 Curva estándar - Secar fosfato de potasio monobásico por 2 h a 105oC. - Solución stock: disolver 0,878 8 g en 100 ml de agua destilada para obtener una concentración final de 2 mg de fósforo por ml. NOTA 4: - Tomar en cuenta la pureza del fosfato para el cálculo de la solución stock. Solución de trabajo: diluir 5 ml de la solución stock en 100 ml de agua destilada para obtener una concentración de 0,1 mg de fósforo por ml. Tomar de la solución de trabajo, alícuotas de 1 ml, 3 ml, 5 ml, 8 ml y 10 ml cada una en matraces de 100 ml, agregar 10 ml de ácido sulfúrico al 10 % y 10 ml de molibdovanadato de amonio, llevar a volumen con agua destilada y dejar reposar por 20 min, leer en el espectro a 430 nm. - Solución blanco En un matraz de 100 ml agregar 10 ml de ácido sulfúrico al 10 % y 10 ml de reactivo de molibdovanadato de amonio. Llevar a volumen. 8.8.4 Procedimiento 8.8.4.1 Pesar en un crisol 2 g - 3 g de muestra. 8.8.4.2 Calcinar por 4 h siguiendo el mismo procedimiento de las cenizas a 600oC. 8.8.4.3 Enfriar y pasar a un matraz de 125 ml. NMX-FF-104-SCFI-2004 22/24 8.8.4.4 Agregar 40 ml de ácido clorhídrico 1:3 y algunas gotas de ácido nítrico concentrado. 8.8.4.5 8.8.4.6 Calentar 15 min. Dejar enfriar filtrar en papel filtro No.4 y llevar a volumen de 250 ml. 8.8.4.7 Tomar 1 ml en un matraz de 100 ml y adicionar los reactivos para desarrollo de color, permitir que éste se dé y llevar a volumen de 100 ml. 8.8.4.8 Leer en el espectro a 430 nm. 8.8.5 Expresión de resultados Graficar la absorbancia contra la concentración en mg. w % de P = X 100 L donde: P W L es el fósforo; son los mg de fósforo encontrados en la alícuota, y es el factor de dilución en mg. 8.9 Determinación de 10 HDA (trans-10 hidroxy-decenoic acid, HO (CH2)CH=CHCOOH) 8.9.1 Principio Se basa en el de extracción del (10 HDA) en un solvente y leer la concentración del (trans-10 hidroxy-decenoic acid, HO (CH2)-CH=CHCOOH) por HPLC o GC en muestras de Jalea Real. 8.9.2 Material y equipo 8.9.2.1 Material • • • • • • • Matraz volumétrico de 25 ml, 50 ml y 100 ml; Columna C18 ODS 5 µm x 25 cm; Sistema de filtración con membranas Millipore 0,47 µm; Acrodiscos de 0,45 µm; Viales con tapa de teflón para HPLC; Tubos de centrífuga de polipropileno con tapón de rosca, y Matraz Kitazato. NMX-FF-104-SCFI-2004 23/24 8.9.2.2 • • • • • • • Equipo HPLC equipado con detector de arreglo de diodos con variable longitud de onda, horno de columna y automuestrador o equivalente; Software; Agitador mecánico; Centrífuga; Balanza analítica; Bomba de vacío; Pipetas clase “A” y micropipetas de volumen adecuado; NOTA 5: • • • • • 8.9.3 • • • • 8.9.4 Los materiales y equipos enlistados pueden ser sustituidos por otros equivalentes. Lentes de seguridad; Guantes de látex; Mascarilla con filtros para solventes; Bata de laboratorio, y Zapatos de seguridad. Reactivos Agua HPLC Metanol HPLC Diclorometano HPLC Estándar 10 HDA (trans-10 hidroxy-decenoic acid, HO (CH2)-CH=CHCOOH) pureza aproximada 99,0 % Procedimiento El contenido de 10 HDA en la muestra debe ser extraída con metanol o diclorometano, ajustar el pH, usar una columna C18 ó equivalente y una fase móvil metanol acuosa con pH ajustado utilizando un detector de longitud de onda variable a 210 nm. Alternativamente el 10 HDA puede ser derivatizado con éster metílico y determinado con detector FID por cromatografía de gases con columna SF30 ó equivalente. 8.9.5 Expresión de resultados Los resultados del contenido de 10 HDA se expresan en %. NMX-FF-104-SCFI-2004 24/24 9 BIBLIOGRAFÍA NOM-008-SCFI-2002 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 27 de noviembre de 2002. - Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemist. 15th Edition 1990/ 16 Edition 1995. Methods 920.39, 930.15, 934.01, 958.01, 965.17 and 984.13. - Tejada de Hernández Irma, Manual de Laboratorio para Análisis de Ingredientes utilizados en la Alimentación Animal, Primera Reimpresión, 1985. - Pearson Harold Egan, Ronald S. Kirk, Ronald Sawyer Análisis Químico de Alimentos. - Instruction manual labconco rapid digestor. Labconco corporation, Kansas city. - Boletín Apícola Controle de la Qualite de la Gelee Royale Revue Bibliograhique Des Travaux Sur Lacomposition les Proprietes Et les Utilisations de la Gelee Royale Pourtallier (J.), Mille Taliercio (Y.), Mussot (J.M.). - Therapeutic Goods Administration Graft Compositional Guideline Royal Jelly and derivates (TGA). - Código Alimentario Argentino, Capítulo X Jalea Real. 10 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES Esta norma mexicana no es equivalente a ninguna norma internacional por no existir referencia alguna al momento de su elaboración. México D. F., a MIGUEL AGUILAR ROMO DIRECTOR GENERAL RCG/DLR/MRG NMX-FF-104-SCFI-2004 PRODUCTOS ALIMENTICIOS NO INDUSTRIALIZADOS PARA CONSUMO HUMANO - JALEA REAL - ESPECIFICACIONES Y MÉTODOS DE PRUEBA NON INDUSTRIALIZED FOOD PRODUCTS FOR HUMAN CONSUMPTION - ROYAL JELLY - ESPECIFICATIONS AND TEST METHODS NMX-FF-104-SCFI-2004 PREFACIO En la elaboración de la presente norma mexicana participaron las siguientes empresas e instituciones: • ASOCIACIÓN DE MÉDICOS VETERINARIOS ESPECIALISTAS EN ABEJAS, A. C. • CONSEJO REGULADOR DE LA MIEL DE ABEJA MEXICANA, A. C. • COMITÉ TÉCNICO DE NORMALIZACIÓN NACIONAL DE PRODUCTOS AGRÍCOLAS, PECUARIOS Y FORESTALES • DISTRIBUIDORA DE PRODUCTOS APÍCOLAS NATURALES, S. A. DE C. V. • MIEL ABARCA, S. A. DE C. V. • MIEL ABJ, S. A. DE C. V. • RUCKER DE MÉXICO, S. A. DE C. V. • SECRETARÍA DE AGRICULTURA, GANADERÍA, DESARROLLO RURAL, PESCA Y ALIMENTACIÓN Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria; Coordinación General de Ganadería; Dirección General de Salud Animal; Programa Nacional para el Control de la Abeja Africana. • UNIÓN NACIONAL DE APICULTORES • UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MÉXICO Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. NMX-FF-104-SCFI-2004 ÍNDICE DEL CONTENIDO Número del capítulo Página 1 Objetivo y campo de aplicación 1 2 Referencias 1 3 Definiciones 2 4 Símbolos y abreviaturas 3 5 Clasificación y designación del producto 3 6 Especificaciones 4 7 Muestreo 6 8 Métodos de prueba 6 9 Bibliografía 24 10 Concordancias con normas internacionales 24 DECLARATORIA de vigencia de la Norma Mexicana NMX-FF-104-SCFI-2004. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Economía.Dirección General de Normas. DECLARATORIA DE VIGENCIA DE LA NORMA MEXICANA QUE SE INDICA La Secretaría de Economía, por conducto de la Dirección General de Normas, con fundamento en lo dispuesto por los artículos 34 fracciones XIII y XXX de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 51-A, 51-B, 54 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, 46, 47 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y 19 fracciones I y XV del Reglamento Interior de esta Secretaría y habiéndose satisfecho el procedimiento previsto por la Ley de la materia para estos efectos, expide la declaratoria de vigencia de la norma mexicana que se enlista a continuación, misma que ha sido elaborada y aprobada por el “Comité Técnico de Normalización Nacional de Productos Agrícolas, Pecuarios y Forestales”. El texto completo de la norma que se indica puede ser consultado gratuitamente en la biblioteca de la Dirección General de Normas de esta Secretaría, ubicada en Puente de Tecamachalco número 6, Lomas de Tecamachalco, sección Fuentes, Naucalpan de Juárez, código postal 53950, Estado de México o en el Catálogo Mexicano de Normas que se encuentra en la página de Internet de la Dirección General de Normas cuya dirección es http://www.economia.gob.mx. La presente Norma entrará en vigor 60 días naturales después de la publicación de esta Declaratoria de vigencia en el Diario Oficial de la Federación. CLAVE O CODIGO NMX-FF-104-SCFI-2004 TITULO DE LA NORMA PRODUCTOS ALIMENTICIOS NO INDUSTRIALIZADOS PARA CONSUMO HUMANOJALEA REAL-ESPECIFICACIONES Y MÉTODOS DE PRUEBA. Campo de aplicación Esta Norma Mexicana define al producto denominado Jalea Real y establece las especificaciones que ésta debe cumplir, así como los métodos de prueba para verificar los parámetros establecidos, la norma es de carácter voluntario y es aplicable al producto fresco y liofilizado. Concordancia con normas internacionales Esta Norma Mexicana no es equivalente a ninguna norma internacional por no existir referencia alguna al momento de su elaboración. México, D. F., a 9 de julio de 2004.- El Director General, Miguel Aguilar Romo.- Rúbrica. Publicado en el Diario Oficial del 20 de julio de 2004. 1 de 1