Acerca de Igen Biotech IGEN es una empresa de capital privado, centrada en I+D+i en el campo de la biotecnología. Desde su fundación en 2008, IGEN está colaborando Extraction de ADN a partir de muestras de baja celularidad. iGENatalTM Kit. IGEN Biotech. con centros de I+D de reconocido prestigio en el campo de la biomedicina, con el objetivo de crear un portfolio de productos y servicios de alto valor. Objetivos Materializar en aplicaciones prácticas los avances en investigación Alto rendimiento, alta pureza y alta calidad desde sólo 50.000 células. Rápido y sencillo Almacenamiento a temperatura ambiente I+D avalada por el CDTI. biomédica y llevarlos al mercado en forma de productos y servicios. Aportar valor a los proyectos y optimizar sus plazos de desarrollo, resultados y aplicaciones. Colaborar con entidades acreditadas para el desarrollo conjunto de proyectos estrictamente seleccionados. iGENatalTM, es el primer producto desarrollado por Igen Biotech. Consiste en un kit de extracción de ADN genómico diseñado especialmente para la extracción de ADN de muestras prenatales de baja celularidad como por ejemplo líquido amniótico o vellosidades coriónicas. Este sistema de extracción permite la extracción de una muestra de ADN de alta calidad desde una pequeña muestra mediante un ensayo rápido y sencillo, proporcionando una gran calidad a un coste menor que el de las marcas líderes de la extracción de ADN.. iGENatalTM tiene un precio asequible de 225 € por kit (válido para 50 extracciones). Abstract La extracción de ADN de muestras de baja celularidad, como líquido amniótico, vellosidad coriónicas, es un campo de gran dificultad debido, sobre todo a los pobres rendimientos de ADN obtenido o el tiempo necesario para la obtención del ADN necesario para su posterior aplicación. About iGENatalTM iGENatalTM kit ha sido específicamente diseñado para muestras prenatales de baja celularidad ofreciendo una rápida y fácil extracción cimentado en la técnica de extracción en fase orgánica. Sus fases son: lisis, aislamiento, precipitación, lavado, secado y resuspensión. La fase más larga es la lisis (entre 30-90 minutos, dependiendo del tipo de muestra), El procedimiento habitual tras la obtención de las muestras consiste en la para una duración total de ensayo de máximo 3 horas. expansión celular mediante largos cultivos in vitro con el fin de obtener la cantidad de células suficiente para su posterior análisis mediante técnicas citogenéticas o moleculares, llegando a atrasar el diagnóstico a días e incluso semanas, siendo clave en este tipo de diagnósticos el tiempo y la eficacia. iGENatalTM kit se basa en un proceso de extracción en fase orgánica (fenol/cloroformo) optimizado que implica lavado y diferenciación entre fases que ofrece una gran eficiencia y comodidad a la técnica de extracción. Además de un ahorro de tiempo, la eliminación de los cultivos se traduce en una reducción de horas de trabajo y un menor error debido a la intervención humana. Esto también significa que los sistemas automáticos no estén sobrecargados de trabajo, necesitando menor tiempo de ensayo y aumentando sus ciclos de vida. La cantidad y calidad del rendimiento generado por iGENatalTM es equivalente a aquellas generadas por caros sistemas automáticos. Figura 1. Pasos de la extracción de AND en fase orgánica iGENatalTM utilizando Alto rendimiento desde baja celularidad Gran pureza y calidad del ADN obtenido Los kits de extracción de ADN genómicos existentes en el mercado suelen La optimización del procedimiento de separación en fase orgánica de centrar su acción en sangre completa, plasma suero, tejido animal o iGENatalTM kit ofrece un ADN prácticamente libre de impurezas, sobre vegetal, etc., el Kit de IGEN Biotech es capaz de extraer ADN desde todo, impurezas de ARN o proteínas. El ADN obtenido posee la calidad aproximadamente 50.000 células, lo que le aporta un valor solo capaz de suficiente para cualquier ensayo subsecuente a diferencia de otros ser igualado por caros sistemas automáticos. productos como los basados en columnas de sílice que normalmente obtienen ADN contaminado de trazas de nucleótidos. Los ratios de La baja celularidad de la muestra inicial, no afecta al rendimiento del ADN recuperado. Cantidades mínimas de partida (2 mL de líquido amniótico o 2-3 mg de vellosidad coriónica) aseguran un alto absorbancia, A260/A280 y A260/A230 están entre 1.7 – 1.9 y por encima de 2 respectivamente. rendimiento (aproximadamente 80µg/ml de líquido amniótico y 800µg/ml de vellosidad coriónica). CHORIONIC VILLUS AMNIOTIC FLUID 141,26 150,00 500 424,3 400 100,00 300 200 100 78,22 229,64 50,00 72,83 0,00 0 50.000 150.000 250.000 50.000 100.000 Figura 2. Rendimiento de iGENatalTM Kit. Concentraciones (ng/µL) de AND obtenidas desde diferentes celularidades A) Vellosidad coriónica cultivada; B) Líquido amniótico. Figura 3. Ratios A260/A280 y A260/A230. Espectro de absorbancia del ADNA genómico obtenido de 2 mg de vellosidad coriónica mediante iGENatalTM Kit. Sequencing-grade DNA Optimización de los tiempos de extracción. La constante evolución de la biología molecular necesita, cada día más, de métodos capaces de trabajar a menores concentraciones, sin que se vean afectados la calidad, eficacia y rendimientos de los métodos. El Kit de Extracción de ADN Genómico de IGEN Biotech se adapta perfectamente a los nuevos métodos de análisis, siendo el ADN obtenido capaz de ser analizado mediante microarrays, q-PCR, a-CGH, X-MAP y cualquier tipo de secuenciación masiva como, por ejemplo, pirosecuenciación ya que apenas se producen fragmentaciones de ADN. A pesar de la especialización del kit en muestras de extracción complicada, esto no aumenta el tiempo de ensayo. El tiempo de procesamiento aproximadamente es de 90 minutos (a partir de líquidos amnióticos) y de 120 minutos (a partir de muestras de vellosidad coriónica). Referencias El kit está siendo validado en varios laboratorios europeos. Wessex Regional Genetics Laboratory, Salisbury District Hospital. UK. NE Thames Regional Genetics Service. Great Ormond Street Hospital NHS Trust. London, UK. Saint James University Hospital. NHS. Leeds, UK Instituto Valenciano de Infertilidad (Fundación IVI). Valencia, España Cytogenetics of Newcastle upon Tyne Hospital. NHS, UK Distribuidores Actuales Boca Scientific. Florida, US Figura 4. Electroforesis en Agarosa 0,8% de ADNs genómicos obtenidos a partir de muestras prenatales (AF, líquido amniótico; CVS, vellosidad coriónica) mediante iGENatalTM kit en comparación con AND genómico obtenido por métodos tradicionales a partir de muestras de sangre.