Diapositiva 1 - BCH Guatemala

Electroforesis: Fundamentos y aplicaciones.
Allan Urbizo
Laboratorio de Entomología Aplicada y Parasitología –LENAP –
Instituto de Investigación de Enfermedades Genéticas y Metabólicas –INVEGEMEscuela de Biología
Universidad de San Carlos de Guatemala
Introducción
• Método Analítico:
visualización.
Separación
y
• Acidos nucléicos (ADN, ARN),
proteínas y otras biomoléculas.
• Determinación:
Peso
molecular,
punto isoeléctrico y No. de cadenas
polipeptídicas de una proteína.
• Migración:
Carga
neta,
peso
molecular y estructura tridimensional.
Fundamento
• V = qE /f
• Densidad de carga de la
molécula
• Voltaje aplicado
• Exceso: Sobrecalentamiento
• Bajo: Pobre separación.
• Porosidad del gel.
Fundamento
• Biomacromoléculas: Carga
eléctrica con grupos aniónicos y
catiónicos capaces de
disociarse.
• Carga neta: pH del medio.
• Interacción con pequeñas
moléculas de iones u otras
macromoléculas.
• pH influye sobre la velocidad de
migración.
• Punto isoeléctrico: No hay
migración.
Fundamento
• Los soportes utilizados
• Polímeros
• Gel poroso
• Restringe el movimiento de las
moléculas
• Disminuyen los flujos de
convección del solvente.
• Utilizados: Celulosa, almidón,
poliacrilamida, agarosa, acetato de
celulosa
Equipo
• Fuente de poder
• Cubeta (vertical/horizontal)
• 2 electrodos
• Buffer (Solución tampón)
• Soporte (Agarosa/Poliacrilamida)
• Muestra/Loading dye
• Marcador Molecular
• Bromuro de Etidio
Geles de Agarosa
• Polisacárido
• Extraído de algas marinas
• 0.5 - 2%
• Preparación sencilla y
reproducible
• No tóxico
• Amplio rango de separación
• Utilizado para ADN
Preparación
• Agarosa (%)
• Buffer TBE
• Calentar hasta disolver
(microondas o estufa de
laboratorio).
• Enfriar hasta 50ºC
• Bromuro de Etidio
• Verter en el soporte
• Polimerización 30 min
Gel: Poliacrilamida
• Separación electroforética
• pH
• Fuerza iónica
• Gradiente de potencial
• Tiempo de corrida
• Concentración:
acrilamida/bisacrilamida
Gracias…. Preguntas?