XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
EFECTO DE SEÑALES MODULADORAS DE LA RESPUESTA INMUNE SOBRE
REGULADORES GLOBALES DE LA EXPRESIÓN GENÉTICA DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS ASOCIADA A LA MASTITIS BOVINA
Heriberto Santander Lucio, Facultad de Químico Farmacobiología de la Universidad
Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, [email protected] Asesor Dr. Juan José
Valdez Alarcón Centro Multidisciplinario de Estudios en Biotecnología, Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia, UMSNH [email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Los productos de la respuesta inflamatoria del huésped actúan como señales
modulando la expresión de los reguladores globales de la expresión de genes de
virulencia de S. aureus potenciando el daño.
METODOLOGÍA
Como primer punto se evalúa la cinetica de crecimiento de S. aureus de las cepas
MRI 188, MRI 158 y ATCC 25458 con fondos genéticos y agr-tipos distintos. Las
cepas forman parte de la colección del Laboratorio de Epidemiología Molecular y
Biotecnología de Enfermedades Infecciosas, en el CMEB de la Facultad de MVZ
de la UMSNH. Las cepas son tratadas con citosinas; una pro-inflamatoria (TNF-)
y una anti-inflamatoria (IL-10). El crecimiento bacteriano se lleva a cabo en el
medio de Luria-Bertani (LB) a 37 °C y agitación de 180-200 rpm. El ARNm se
extraerá con el kit de Trizol (Invitrogen®). Posteriormente se realiza limpieza una
con DNAsa I para eliminar las moléculas de DNA presentes en la muestra. El
ARNm sirve de molde para la síntesis de la molécula de ADNc empleando la
enzima RT (Reverse Transcriptase; Invitrogen®). Para evaluar la expresión de los
genes se someterá a la molécula de ADNc a una variante de la PCR, la RT-PCR
para valorar el número de copias sintetizadas in situ. Empleando los oligos del
gen arnIII que es el efector del locus agr, y como control positivo se emplean los
oligos del gen de la ADN girasa gyrA. Como control negativo se utilizará la
muestra que no contenía RT. Reactivos: Sybr 820 (10 µL), Oligo 1 (0.2 µL), Oligo
2 (0.2 µL), ROX (0.4 µL), Muestra (2 µL), Agua (7.2 µL).
CONCLUSIONES
Los resultados in vitro preliminares evidencian que los productos de la respuesta
inflamatoria del huésped (entre ellos las citosinas) actúan como señales
modulando la expresión de los reguladores globales de la expresión de genes de
virulencia de S. aureus potenciando el daño, aunque también cabe aclarar que no
se sabe con certeza el mecanismo por el cual se logra este efecto. Sin embargo
se espera que en investigaciones próximas se logre profundizar dicha incógnita,
misma que serviría a los médicos veterinarios y farmacéuticos el desarrollo de
nuevos antibióticos para tratar la mastitis bovina ocasionada por S. aureus y otras
bacterias resistentes a los antibióticos convencionales.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014