XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
ESTUDIO DEL CURSO TEMPORAL DE LA ENTRADA NUCLEAR DE LA
PROTEÍNA GPN3, UNA PROTEÍNA NECESARIA PARA LA IMPORTACIÓN
NUCLEAR DE LA RNA POLIMERASA II
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Martin Antonio Mora García, 2Griselda Peña Gómez, 2Mónica R. Calera y 2Roberto Sánchez
Olea. 1Unidad Académica Escuela de Biología de la Universidad Autónoma de Sinaloa
([email protected]). Asesor: Dr. Roberto Sánchez Olea. 2Instituto de Física,
Universidad Autónoma de San Luis Potosí ([email protected]).
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La proteína Gpn3 forma parte de la familia de las GTPasas GPN. Se ha descrito
que Gpn3 interactúa físicamente con la RNA polimerasa II, la enzima que sintetiza
los mRNAs y la mayoría de los snRNAs, y que es necesaria para su acumulación
nuclear, lugar en donde realiza su función. La localización sub-celular de Gpn3 se
ha podido estudiar mediante el uso de la proteína Gpn3 fusionada a proteínas
fluorescentes, como la EYFP. La proteína Gpn3-EYFP de distribuye entre entre el
núcleo y el citoplasma. Sin embargo, cuando Gpn3-EYFP se co-expresa con
Gpn1, una proteína de la misma familia que Gpn3, Gpn3-EYFP se localiza
principalmente en el citoplasma. Recientemente, se encontró que este efecto
habitual de retención de Gpn3-EYFP en el citoplasma mediado por Gpn1 se pierde
sustancialmente al tratar a las células con leptomicina B (LMB), un fármaco
inhibidor de la exportina CRM1, ocasionando su acumulación nuclear. Lo anterior
demuestra que Gpn3 posee un ciclo de transporte núcleo-citoplasmático. En este
proyecto se cuantificará el curso temporal de la entrada de Gpn3-EYFP al núcleo
celular.
METODOLOGÌA
Se sobre-expresó a las proteínas Gpn3-EYFP y Gpn1-Flag en células HEK
293/T17 mediante la transfección de las construcciones Gpn3-pEYFP y Gpn1Flag-pCMV5a por el método de fosfato de calcio. A las 24 horas se aplicó un
tratamiento con LMB y se evaluó la localización de Gpn3-EYFP mediante
microscopía de fluorescencia a diferentes tiempos. Como condición control se
utilizaron a células transfectadas con Gpn3-pEYFP y Gpn1-Flag-pCMV5a sin
tratamiento con LMB. Mediante el uso del software Image J, se medirá la
intensidad media de fluorescencia tanto del citoplasma como del núcleo de las
células. Los resultados se expresarán como el cociente de la intensidad media de
fluorescencia del núcleo y la intensidad media de fluorescencia del citoplasma ± la
desviación
estándar,
y
se
graficarán
en
función
del
tiempo.
CONCLUSIONES
Este trabajo de investigación aún se encuentra en proceso, sin embargo con los
experimentos realizados a la fecha, hemos podido determinar que cuando se
coexpresa con Gpn1-Flag, la proteína Gpn3-EYFP se acumula en el núcleo celular
entre las 8 y las 24 horas después del tratamiento con LMB.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014