uso de il-4 para mejorar la respuesta inmunitaria frente a

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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
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ES 2 079 851
kInt. Cl. : A61K 39/39
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ESPAÑA
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A61K 39/08
TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA
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kNúmero de solicitud europea: 92903012.0
kFecha de presentación : 17.12.91
kNúmero de publicación de la solicitud: 0 563 254
kFecha de publicación de la solicitud: 06.10.93
T3
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54 Tı́tulo: Uso de IL-4 para mejorar la respuesta inmunitaria frente a inmunógenos en vacunas.
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73 Titular/es: Schering Corporation
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72 Inventor/es: Rozhon, Edward J.;
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74 Agente: Elzaburu Márquez, Alberto
30 Prioridad: 19.12.90 US 629800
2000 Galloping Hill Road
Kenilworth
New Jersey 07033, US
45 Fecha de la publicación de la mención BOPI:
16.01.96
45 Fecha de la publicación del folleto de patente:
ES 2 079 851 T3
16.01.96
Aviso:
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o’Connell, John, F.;
Cox, Stuart, A.;
Hayre, Michael, D. y
Schwartz, Jerome
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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes,
de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar
motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposición (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas).
Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid
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DESCRIPCION
Antecedentes de la invención
Esta invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden interleuquina-4 como
un ingrediente activo para mejorar la respuesta
inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos en vacunas. La invención se refiere
también al uso de interleuquina-4 para la fabricación de un medicamento destinado a aumentar
la respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero
frente a inmunógenos presentes en una vacuna,
ası́ como a métodos para mejorar la respuesta inmunitaria primaria eficaz en mamı́feros frente a
inmunógenos presentes en vacunas, mediante la
administración a dichos mamı́feros de una cantidad eficaz de interleuquina-4 en asociación con
dicha vacuna.
Introducción
La interleuquina-4 [denominada en lo sucesivo
“IL-4”, pero conocida también como Factor 1 Estimulador de las Células B (BSF-1)], fue descrita
originalmente por M. Howard y cols. en J. Exp.
Med. (1982), Vol. 155, págs. 914-23, como un
factor de crecimiento procedente de células T,
distinto de la IL-2, el cual permitı́a un cultivo
tisular a largo plazo de linfocitos B normales de
ratón e interactuaba con linfocitos B activados
para mantener su proliferación durante hasta 4
meses. Aunque se han usado explantes de linfocitos B mixtos para iniciar cultivos, se manifiesta
que los linfocitos B con fenotipo inmaduro son aumentados especı́ficamente por la IL-4 en cultivo
tisular. Véase por ejemplo C. Perchel y cols., J.
Immunol. (1989), Vol. 142, 1558-1568. Además,
G. Trenn y cols., J. Immunol. (1988), Vol. 140,
1101-1106, describen que la IL-4 estimula el desarrollo de células T citotóxicas a partir de una
subpoblación Lyt-2+ de linfocitos T de múrido
en reposo. H. Spits y cols., J. Immunol. (1987),
Vol. 139, 1142-47, describen que la IL-4 puede
actuar como un factor de crecimiento de células
T en células humanas in vitro a partir de IL-2.
El gen para IL-4 de ratón se clonó y expresó
en células COS-7 [véase T. Otsuka y cols., Nuc.
Acids Res. (1987), Vol. 15, 333-334]. El factor clonado tenı́a todas las actividades en cultivo
tisular observadas para el factor purificado a partir de sobrenadantes de cultivos de células T. La
clonación y la expresión del gen para IL-4 humano han sido descritas por N. Arai y cols., J.
Immunol. (1989), Vol. 142, 274-282 y T. Yokota y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. (1986),
Vol. 83, 5844-5848, teniendo el factor producido en células COS-7 actividades similares a las
de las moléculas nativas, tal como se ha estudiado en cultivos tisulares. Puesto que la IL-4
fue estudiada en sistemas celulares tanto de seres humanos como de múridos, las actividades
in vitro adicionales se atribuyeron a la molécula:
i) la IL-4 desempeñó un papel importante en la
inducción y regulación de la sı́ntesis de IgE, un
proceso que tenı́a lugar cuando a subpoblaciones
de linfocitos B se les inducı́a a proliferación [véase
Pene, J. Proc. Natl. Acad. Sci. (1988), Vol.
85, 6880-6884]; ii) la IL-4 indujo receptores Fc
de baja afinidad (CD23) en linfocitos B humanos
normales en cultivo tisular [véase T. DeFrance y
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cols., J. Exp. Med. (1987), Vol. 165, 1459-1457];
iii) la IL-4 interactuaba con otras linfoquinas, notablemente el interferón-γ [véase R. L. Coffman y
cols., Immunol. Res. (1988), Vol. 102, 5-27], y S.
Romagnani y cols., supra, y células T [véase R.
L. Coffman y cols., supra, S. Romagnani y cols.,
supra, y M. D. Widmer y cols., Nature (1987),
Vol. 326, 795-98], para causar una proliferación
y alteración de células B; iv) la IL-4 mejoró la
secreción de clases de anticuerpos especı́ficos, p.
ej. Ig, por células B humanas [véase J. B. Splawski y cols., J. Immunol. (1989), Vol. 142, 15691572]; v) la IL-4 tiene efectos estimulantes sobre
células T, células cebadas y macrófagos [véase K.
H. Grabstein y cols., J. Immunol. (1987), Vol.
139, 1148-1153; F. Lee y cols., Proc. Natl. Acad.
Sci. (1986), Vol. 83, 2061; y A. Zlotnik y cols.,
J. Immunol. (1987), Vol. 138, 4275-4279]; y vi)
la IL-4 aumentó la expresión de antı́geno de clase
II del MHC (complejo principal de histocompatibilidad) en las células B en reposo (R. Noelle
y cols., PNAS 81.6149-6153, 1984). T. R. Mosmann y cols. en J. Immunol., Vol. 138, 1813-1816
describieron que las IL-4 de seres humanos y de
múridos, que son homólogas en un 50 % en las
secuencias de aminoácidos 1-90 y 129-149, eran
especı́ficas de cada especie.
El uso de IL-4 para mejorar la respuesta inmunitaria frente a provocaciones por antı́genos infecciosos, p. ej. infecciones crónicas debidas a virus,
bacterias, hongos o protozoos, se describe en el
documento WO 91/14450.
El documento WO 91/01143 describe composiciones de vacunas que comprenden un antı́geno
tal como una bacteria o virus, en combinación
con una interleuquina tal como IL-1, IL-2 o IL4, preferiblemente IL-2, cuya composición se adsorbe sobre un mineral tal como un alumbre, y se
presenta en forma de una suspensión, y también
contiene un agente conservante añadido.
El documento EP-A-0.351.876 describe composiciones para potenciar el efecto de la vacunación, las cuales contienen factor de diferenciación de células B humano (“BCDF humano”)
como el ingrediente eficaz para potenciar la producción de anticuerpos frente a una vacuna tal
como bacterias o virus.
Además de BCDF humano, las composiciones
pueden contener también una o más citoquinas,
tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, los interferones y M-CSF o G-CSF.
El documento WO 88/00971 describe una vacuna recombinante que comprende un vector de
vacuna el cual incorpora un primer nucleótido capaz de expresar todo o parte de un polipéptido
antı́geno, p. ej. poxvirus del grupo al que pertenece la viruela, virus de herpes, adenovirus junto
con una segunda secuencia de nucleótidos capaz
de expresarse como todo o parte de una linfoquina, p. ej. una interleuquina tal como IL-1,
2, 3 o 4, o interferón gamma, eficaz para aumentar la respuesta inmunitaria frente al polipéptido
antigénico.
El documento EP-A-0.302.429 describe que la
IL-4 humana mejora la respuesta inmunitaria y
es útil para el tratamiento y la prevención de enfermedades tales como cáncer, infecciones, SIDA
y deficiencia inmunitaria funcional.
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De acuerdo con la presente invención, se crea
el uso de IL-4 recombinante humana procedente
de E. coli, para la fabricación de un medicamento
destinado a mejorar la respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos presentes en una vacuna de toxoide, con la condición
de que el medicamento esté exento de factor de
diferenciación de células B humano (BCDF humano).
Descripción de las figuras
La Figura 1 ilustra la cronologı́a de la respuesta inmunitaria lograda por la administración
de IL-4 recombinante humana y una vacuna de
toxoide de tétanos a macacos de laboratorio (Macaca sp.), de acuerdo con la presente invención.
Las figuras 2-5 ilustran gráficamente la aparición de anticuerpos de tétanos en función del
tiempo, frente a la vacuna de toxoide de tétanos,
en el modelo del macaco de laboratorio, administrando 0,5 mcg/kg y 20 mcg/kg de IL-4 humana
recombinante y una vacuna de toxoide de tétanos
de acuerdo con la presente invención.
Descripción detallada de la invención y de
las realizaciones preferidas
Sorprendentemente, se ha hallado que la administración de IL-4 humana recombinante (en
lo sucesivo denominada “rhIL-4”) a macacos de
laboratorio, simultáneamente con una vacuna de
toxoide de tétanos dio por resultado una respuesta inmunitaria primaria mejorada en los monos. Este resultado es particularmente sorprendente dado que, cuando se administró rhIL-4 a
macacos de laboratorio durante la inoculación de
vacuna de recuerdo con virus recombinante de
hepatitis B (rHBVax) aproximadamente dos meses después de administrar vacuna rHBVax, y ası́
como cuando se administró IL-4 a macacos de laboratorio durante la inoculación de vacuna de recuerdo con vacuna de poliovirus inactivados de
Salk, aproximadamente un mes después de administrar vacuna de poliovrius inactivados de Salk,
no se observó ninguna respuesta anamnésica, es
decir, secundaria o de memoria. Los métodos de
esta invención para disponer la administración de
IL-4 con una vacuna tienen las siguientes ventajas. Puede reducirse la carga antigénica total de
la vacuna que se ha de administrar, puesto que
menos cantidad de antı́geno en presencia de IL4 provocarı́a una respuesta inmunológica al menos equivalente a la lograda por administración
de la vacuna antes indicada. Dado que se requerirı́a menos antı́geno por cada vacunación administrando IL-4 de acuerdo con esta invención, se
reducirı́a la probabilidad de efectos colaterales indeseables asociados con algunas vacunas actualmente en uso. Además, puesto que se requiere
menos inmunógeno para lograr una protección
efectiva, se reducirı́a el coste global de la vacuna
por cada paciente. La respuesta inmunitaria de
cierto tipo de individuos que responde deficientemente a la vacunación se mejorarı́a administrando
IL-4 de acuerdo con esta invención. Tales tipos
de individuos que se beneficiarı́an de los métodos
de esta invención incluyen (1) los tipos que tienen una sensibilidad inmunitaria deteriorada, tal
como niños nacidos con ciertas deficiencias inmunitarias, (2) individuos supuestamente normales
que no son sensibles frente a ciertas vacunas, ası́
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como (3) individuos que se someten a terapias
inmunosupresivas, inclusive con radiación, corticosteroides, etc.
Por tanto, los autores de la presente invención
han descubierto métodos eficaces para (1) mejorar una respuesta inmunitaria primaria eficaz en
tales mamı́feros frente a inmunógenos presentes
en una vacuna; (2) mejorar un nivel eficaz de anticuerpos en mamı́feros expuestos a inmunógenos
presentes en vacunas; y (3) mejorar una respuesta
inmunitaria primaria en mamı́feros frente a inmunógenos presentes en una vacuna, en los cuales la respuesta inmunitaria por dicho mamı́fero
en ausencia de IL-4 no es suficientemente fuerte ni
suficientemente rápida para evitar una enfermedad. Las respuestas inmunitarias desarrolladas
por dichos mamı́feros en ausencia de IL-4 pueden no ser suficientemente fuertes o rápidas para
evitar una enfermedad en dichos mamı́feros, pero
los autores han hallado métodos eficaces que comprenden administrar a tales mamı́feros una cierta
cantidad de IL-4, preferiblemente IL-4 humano
recombinante, eficaz para cada una de tales finalidades.
Las vacunas consideradas para uso de acuerdo
con esta invención incluyen vacunas bacterianas,
vacunas de toxoides (toxinas inactivadas) y vacunas vı́ricas, o sus mezclas (“antı́genos múltiples”),
usadas para inmunización activa en un ser humano. Véase por ejemplo el capı́tulo 75, titulado
“Immunizing Agents”, en Pharmaceutical Sciences de Remington, 14a¯ edición, 1990, Mack Publishing Co., págs. 1426-1441, y las antitoxinas,
toxoides, vacunas y vacunas vivas aprobadas por
la FDA y enumeradas en la pág. 210 (Product
Category Index) de la “Physicians’ Desk Reference”, 44a¯ edición, 1990. Entre las vacunas bacterianas adecuadas se incluyen vacunas bacterianas contra las siguientes entidades o condiciones
de enfermedad: cólera, tos ferina, peste, fiebre tifoidea, meningitis, neumonı́a neumocócica, infecciones por H. influenzae del tipo B, lepra, gonorrea, infecciones por meningococos del grupo B,
infecciones por estreptococos del grupo B, septicemia por bacterias Gram-negativas, septicemia
por E. coli, e infecciones por Pseudomonas aeruginosa. Entre los toxoides adecuados se incluyen
toxoide de difteria, toxoide de botulismo y toxoide
de tétanos. Entre las vacunas vı́ricas adecuadas se
incluyen vacunas vı́ricas vivas e inactivadas contra las siguientes entidades o estados de enfermedad: poliomielitis, sarampión, rubéola, fiebre
amarilla, parotiditis y hepatitis B.
Entre los “antı́genos múltiples” adecuados se
incluyen toxoides de difteria y de tétanos, el
antı́geno triple-toxoides de difteria, tos ferina
y tétanos tal como están disponibles de Connaught Laboratories, Inc., Swiftevater, Pensilvania 18370, EE.UU. La amplia variedad de cepas
vı́ricas y de sustratos celulares usados en diferentes paı́ses y el esquema de inmunización se describen en las Tablas 10-6 y 10-7, respectivamente,
del capı́tulo 10, titulado “Immunization against
viral diseases”, en la pág. 4, renglón 27, y págs.
283-301 de un libro de D. O. White & F. Fenner, Medical Virology (1986), 3a¯ edición, Academic Press Inc., Orlando, Florida, EE.UU.
La expresión “en asociación con”, tal como se
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usa aquı́, se refiere a la administración de IL-4
simultáneamente, durante o inmediatamente antes, o a continuación de la administración de la
vacuna. Por ejemplo, la IL-4 puede administrarse
durante 10 a 14 dı́as antes y después de administrarse la vacuna apropiada. Normalmente, se administrarı́a IL-4 antes de administrar la vacuna
apropiada, durante un tiempo suficiente para obtener niveles de IL-4 en estado estable en el tejido
linfoide de un mamı́fero. Tales niveles se determinan mediante el uso de mediciones con patrones
farmacocinéticos. La administración de IL-4 se
continuarı́a después de administrarse la vacuna,
en el perı́odo durante el cual los inmunógenos presentes en la vacuna están siendo procesados por
el sistema inmunitario del mamı́fero, y durante
un tiempo suficiente para permitir que la IL-4
proporcione una respuesta inmunitaria primaria
aumentada. La vacuna se administra por la vı́a
y con la concentración recomendadas para cada
especie usada.
Cualquier IL-4 adecuada puede emplearse en
la presente invención. Moléculas de ADN complementario (cDNA) para IL-4 se han clonado y
secuenciado recientemente en diversos laboratorios, p. ej. Yokota y cols., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA (1986), Vol. 83, 5894-5898 (ser humano); Lee y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
(1986), Vol. 83, 2061-2065 (ratón); Noma y cols.,
Nature (1986), Vol. 319, 640-646 (ratón); y Genzyme Corporation, Boston, Massachusetts (ser humano y ratón). Además, se ha purificado IL-4
no recombinante a partir de sobrenadantes de diversos cultivos, p. ej. Sanderson y cols., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA (1986), Vol. 83, 437-440
(ratón); Grabstein y cols., J. Exp. Med. (1985),
Vol. 163, 1405-1413 (ratón); Ohara y cols., J.
Immunol. (1985), Vol. 135, 2518-2523 (BSF-1 de
ratón); Butler y cols., J. Immunol. (1984), Vol.
133, 251-255 (BCGF de ser humano); y Farrar y
cols., J. Immunol. (1983), Vol. 131, 1838-1842
(BCGF de ratón). Las descripciones de todos estos artı́culos se incorporan aquı́ por sus referencias, por sus enseñanzas sobre las secuencias de
ADN y aminoácidos y sobre métodos para obtener materiales de IL-4 adecuados para su uso en
la presente invención.
Preferiblemente, la IL-4 usada en la presente
invención es IL-4 humana, y con la máxima preferencia es la versión humana con la secuencia descrita por Yokoto y cols., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA (1986), Vol. 83, 5894-5898, y en la Solicitud de Patente PCT n◦ 87/02990, publicada el
21 de mayo de 1987, que se expresa en y aı́sla
a partir de E. coli (documentos WO 89/01046 y
US-A-4.958.007). La producción de IL-4 a partir
de células CHO se describe en el documento WO
91/01744. La producción de IL-4 a partir de E.
coli se describe en el documento WO 91/06655.
La expresión “cantidad eficaz”, tal como se
usa aquı́ como la cantidad eficaz de IL-4 administrada de acuerdo con esta invención, significa
una cantidad de IL-4 que produce una elevación
en el nivel de anticuerpo, suficiente para proporcionar una protección aumentada frente a un
agente infeccioso. El aumento exacto en el nivel
de anticuerpo que podrı́a considerarse significativo puede ser pequeño. La cantidad eficaz de
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IL-4 administrada con preferencia es tı́picamente
de 0,25 hasta 15 microgramos de IL-4, preferiblemente IL-4 humana producida de modo recombinante a partir de E. coli o de células CHO, por
kilogramo de peso corporal y por dı́a. Más preferiblemente, se administran a los mamı́feros desde
0,25 a 5 microgramos de rhIL-4 por kilogramo de
peso corporal y por dı́a, y con la máxima preferencia se administran a los mamı́feros desde 0,25
a 1 microgramos de rhIL-4 por kilogramo de peso
corporal y por dı́a.
La cantidad, la frecuencia y el perı́odo de administración variarán dependiendo de factores tales como el nivel de los tı́tulos especı́ficos de anticuerpo, la clase de anticuerpo que se ha de inducir
y el tipo de vacuna, ası́ como la edad del paciente,
nutrición, etc. Usualmente, la administración de
IL-4 será inicialmente diaria, y puede continuar
periódicamente durante toda la vida del paciente.
Las cantidades y frecuencia posológicas pueden
determinarse durante las exploraciones selectivas
iniciales del tı́tulo de anticuerpo especı́fico y de la
magnitud del efecto de la IL-4 sobre la elevación
de los tı́tulos de anticuerpo.
La administración de la dosis puede realizarse
por las vı́as intravenosa, nasal, parenteral, oral,
subcutánea, tópica, transdérmica, o por cualquier
otro método aceptable. La IL-4 puede administrarse en cualquier número de formas convencionales de dosificación. Los preparados parenterales
incluyen soluciones o suspensiones estériles. La
administración por inhalación puede realizarse en
forma de una nebulización nasal u oral, o por
insuflación. Las formas tópicas de dosificación
incluyen cremas, pomadas, lociones, dispositivos
transdérmicos (p. ej. del tipo de parche convencional de reservorio o matriz), y similares.
Las formulaciones de composiciones farmacéuticas consideradas por las formas de dosificación antes indicadas pueden prepararse
con excipientes y aditivos convencionales farmacéuticamente aceptables, usando técnicas convencionales.
En el momento presente, la IL-4 se administra
preferiblemente por vı́a intravenosa. Las soluciones que se han de administrar pueden ser polvos liofilizados reconstituidos, y adicionalmente
pueden contener agentes conservantes, tampones,
agentes dispersantes, etc.
Preferiblemente, la IL-4 se reconstituye con
tampón citrato 10 milimolar de pH apropiado y
agua estéril exenta de agentes conservantes, con
una concentración máxima que no exceda de 100
microgramos por mililitro, y se administra por
infusión intravenosa continua o por inyección intravenosa. Para infusión continua, la dosis diaria
puede añadirse a 5 ml de solución salina normal, y
la solución puede infundirse por bomba mecánica
o por gravedad.
Materiales y métodos
La IL-4 recombinante humana usada en los
siguientes experimentos procedı́a de células CHO,
y el método para su preparación se describe en el
documento WO 91/01744.
Diseño de experimentos
Monos
Macacos de laboratorio machos adultos, obtenidos del Sureste de Asia, se adquirieron de una
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fuente comercial, p. ej. de Hazelton and Charles
River Laboratories. Todos los monos se pusieron
en cuarentena durante un mı́nimo de 90 dı́as antes
de su utilización.
Toxoide de tétanos e inoculación de los animales
La vacuna de toxoide de tétanos usada en este
experimento fue el fluido de toxoide de tétanos
R
, obtenido de Lederle Laboratories,
Purgonated
Pearl River, Nueva York 10965, EE.UU.
Quince (15) macacos de laboratorio desarrollados hasta la edad adulta se infectaron con citomegalovirus de primates (PCMV) antes de empezar este estudio. En ese momento, todos los
animales presentaban un tı́tulo apreciable de anticuerpo contra el PCMV. La finalidad de incluir
este testigo interno fue ensayar si el tratamiento
con IL-4 afectarı́a inespecı́ficamente a los niveles de anticuerpo. No era de esperar que la IL4 produjera una mejora del anticuerpo contra el
PCMV, ya que no se administró una vacuna de
PCMV. Los procedimientos estándar usados para
medir respuestas de anticuerpos fueron un radioinmunoanálisis para el PCMV y un radioinmunoanálisis en fase sólida (véase J. A. Berzofasky y cols., “Antigen-Antibody Interactions and
Monoclonal Antibodies”, págs. 315-356 de “Fundamental Immunology” (1989), 2a
¯ edición, W.
E. Paul (compilador), Raven Press, Nueva York,
EE.UU.) para la vacuna rHBVax y la vacuna de
poliovirus inactivados de Salk.
Se hicieron sangrı́as para obtener sangre destinada a los análisis de anticuerpos de toxoides de
PCMV y de tétanos, una vez a la semana durante
nueve semanas (2 a 7 en la Figura 1) antes de la
administración de IL-4, y dos veces cada semana
durante las 22 semanas (8 a 30) del estudio. La
administración de rhIL-4 por vı́a intravenosa con
niveles posológicos de dos veces por dı́a [5,0 y 20,0
µg/(kg.dı́a) = B.I.D.] y la de placebo se empezaron en el medio de la semana 8, hasta el medio de
la semana 12, y se continuaron durante un total
de 25 dı́as. Se administró vacuna de toxoide de
tétanos (0,5 ml, que contenı́an 5 unidades Lf de
toxoide de tétanos) por inyección intramuscular
a cada uno de los 15 monos, en el dı́a 11◦ de la
administración de rhIL-4. Los resultados de la
determinación de los tı́tulos de anticuerpo contra tétanos, para los tres grupos (datos medios
de los grupos) se muestran en la Figura 2 y la
Tabla I. La Figura 2 ilustra gráficamente la res-
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puesta mejorada del grupo de 5 µg/(kg.dı́a), comparado con los grupos testigo y de 20 µg/(kg.dı́a)
(véase la Figura 5). La respuesta del grupo de
5 µg/kg (mostrada en las Figuras 2 y 4) fue
estadı́sticamente significativa, comparada con la
respuesta del grupo testigo, mostrada en las Figuras 2 y 3.
La Tabla I demuestra que (1) en las semanas 4-6 siguientes a la vacunación con toxoide
de tétanos, el grupo que recibió la dosis de 5
µg/kg de IL-4 tuvo un tı́tulo de anticuerpo estadı́sticamente mayor que el del grupo testigo de
placebo; (2) en las semanas 7-9 siguientes a la vacunación, los dos grupos que habı́an recibido IL-4
(5,0 µg/kg y 20 mg/kg) tuvieron un tı́tulo de anticuerpo de tétanos mayor que el de los grupos
testigo de placebo.
TABLA I
Respuesta de anticuerpo a vacuna de tétanos
primaria:
Efecto de la IL-4
Dosis de IL-4(1)
Grupo Nivel Semana Semanas Semanas Semanas
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12-13
14-16
17-19
I
0 37±21(2) 2127±606 2456±488 1223±139
II
5
49±30 2178±529 5333±697 3973±631
III
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46±20 1560±228 2355±152 1677±227
(1)
(2)
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µg/kg de peso del animal.
Los valores representan el tı́tulo medio de
anticuerpo durante el perı́odo de tiempo;
N = 5 monos por grupo (± = error tı́pico
de la medida).
En vista de los resultados de los experimentos
antes indicados, es de esperar que la IL-4, preferiblemente rhIL-4, mejorarı́a una respuesta inmunitaria en mamı́feros después de una exposición
primaria a una vacuna en la que la respuesta inmunitaria por dichos mamı́feros no es suficientemente fuerte ni suficientemente rápida para evitar
una enfermedad.
Serı́an de esperar resultados similares para vacunas bacterianas y vı́ricas, y para mezclas de
cada una de éstas con toxoides.
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REIVINDICACIONES
1. El uso de IL-4 humano recombinante procedente de E. coli, para la fabricación de un medicamento destinado a mejorar una respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos presentes en una vacuna de toxoide,
con la condición de que el medicamento esté
exento de factor de diferenciación de células B
humano (BCDF humano).
2. El uso de la reivindicación 1, en el
que la IL-4 se administra a dicho mamı́fero si-
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multáneamente con dicha vacuna.
3. El uso de cualesquiera reivindicaciones precedentes, en el que la IL-4 se administra por vı́a
parenteral.
4. El uso de cualquier reivindicación precedente, en el que la cantidad de IL-4 administrada
está en el intervalo de 0,25 hasta 15 microgramos
por kilogramo de peso corporal y por dı́a.
5. El uso de cualquier reivindicación precedente, en el que la vacuna de toxoide es una vacuna de toxoide de tétanos.
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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva
del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD
2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación
del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del
7-10-1992, no producirán ningún efecto en España
en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales.
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Esta información no prejuzga que la patente esté o
no incluı́da en la mencionada reserva.
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