INFORME TÉCNICO PUBLICABLE PROYECTO CENIT: CEN20072016 ACRÓNIMO: FUTURAL “Contribución de las nuevas tecnologías en la obtención de futuros alimentos”. Liderado por la empresa ALIMENTACIÓN Y SALUD DEL FUTURO, AIE. CONSORCIO/AIE: ANUALIDADES: 2007 - 2010 ÍNDICE GENERAL 1. TITULO Y AUTORES................................................................................................................ 9 2. AGRADECIMIENTOS. ...........................................................................................................11 3. PRÓLOGO. .................................................................................................................................12 4. RESUMEN EJECUTIVO .........................................................................................................15 4.1. INTRODUCCIÓN. ...........................................................................................................15 4.2. ORGANIZACIÓN DEL PROYECTO. .......................................................................16 4.3. OBJETIVOS GENERALES DEL PROYECTO. .......................................................22 4.4. OBJETIVOS POR ACTIVIDAD. ..................................................................................22 5. RESULTADOS POR ACTIVIDAD Y TAREA. ..................................................................27 5.1. ACTIVIDAD 1. ESTERILIZACIÓN POR ALTA PRESIÓN DE CONSERVAS VEGETALES, DE PESCADO Y MARISCO. ....................................................................27 5.2. ACTIVIDAD 2. PASTEURIZACIÓN POR ALTA PRESIÓN. COMBINACIÓN DE LA ALTA PRESIÓN CON OTRAS TÉCNICAS DE CONSERVACIÓN. .........47 5.3. ACTIVIDAD 3. PROCESADO DE LECHE, DE PRODUCTOS LÁCTEOS Y OTROS LÍQUIDOS POR TECNOLOGÍA DE ALTA PRESIÓN. ..............................92 5.4. ACTIVIDAD 4. SUSTITUCIÓN DEL TRATAMIENTO TÉRMICO CONVENCIONAL (TRANSFERENCIA DE CALOR) POR EL DE ALTA FRECUENCIA (GENERACIÓN INTERNA DE CALOR). ....................................... 112 5.5. ACTIVIDAD 5. DESARROLLO DE NUEVOS SISTEMAS DE ENVASADO ................................................................................................................................................... 143 5.6. ACTIVIDAD 6. NUEVAS APLICACIONES DE LOS FLUIDOS SUPERCRÍTICOS EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA. ......................................... 186 6. CONCLUSIONES GENERALES....................................................................................... 202 1 ÍNDICE TABLAS Y FIGURAS TABLAS 4.2.1. Coordinación científica de las líneas de investigación del Consorcio. ...........................17 4.2.2. Distribución de las empresas participantes y de los organismos de investigación en función de las actividades.....................................................................................................18 5.1.1. Resumen de resultados de valores nutricionales obtenidos en productos elaborados a base de “atún en salsa de tomate” sometidos a distintos tratamientos de conservación. .........................................................................................................................33 5.1.2. Resumen de resultados de valores nutricionales obtenidos en productos a base de “berberechos al natural” sometidos a distintos tratamientos de conservación. ...........34 5.2.1. Comparación de las características de los equipos NCHyperbaric ................................48 5.2.2. Velocidad de subida de presión (hasta 6000 bar) y tiempo de mantenimiento de presión. (Tratamiento UBU)................................................................................................52 5.2.3. Velocidad de subida de presión (hasta 6000 bar) y tiempo de mantenimiento de presión. (Tratamiento IRTA)...............................................................................................53 5.2.4. Medias de TBARES (ug MDA/g muestra) en función del lote y día de muestreo. ....74 5.4.1. Reducciones microbiológicas y parámetros térmicos obtenidos durante los diferentes ensayos. ................................................................................................................................ 133 5.5.1. Recuentos de células viables de los distintos microorganismos (ufc/ml) para la sustancia ensayada y muerte celular expresada en reducción logarítmica .................. 146 5.5.2. Recuentos de células viables de los distintos microorganismos (ufc/ml) para la sustancia ensayada y muerte celular expresada en porcentaje...................................... 147 5.5.3. Efectividad antimicrobiana de los nanoaditivos sobre el crecimiento de S. aureus ... 152 5.5.4. Efectividad antioxidante de los nanoaditivos por el método del DPPH ................... 153 5.5.5. Efectividad antioxidante de los barnices aditivados por el método del DPPH. ....... 154 5.5.6. Efectividad antioxidante de los barnices aditivados por el método del DPPH. ....... 154 5.5.7. Efectividad antimicrobiana de los barnices aditivados sobre el crecimiento de S. aureus. .................................................................................................................................... 155 5.5.8. Efectividad antimicrobiana de los barnices aditivados sobre el crecimiento de S. aureus. .................................................................................................................................... 155 5.5.9. Efectividad antioxidante del PCL aditivado mediante el método del DPPH. .......... 156 2 5.5.10. Efectividad antioxidante del EVA aditivado mediante el método del DPPH. ....... 156 5.5.11. Efectividad antioxidante del LDPE aditivado mediante el método del DPPH. ..... 156 5.5.12. Capacidad antimicrobiana del film activo a diferentes microorganismos. ............... 164 5.5.13. Capacidad antimicrobiana del film activo en concentraciones superiores de principio activo. ................................................................................................................................... 165 5.5.14. Grado de oxidación lipídica de la carne de cerdo mediante el método TBARS. .... 168 5.5.15. Grado de oxidación lipídica de la carne de vacuno mediante el método TBARS. . 169 5.5.16. Capacidad antimicrobiana del film activo. .................................................................... 172 FIGURAS 5.1.1. Resumen de resultados de cizallamiento obtenidos para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “atún en salsa de tomate”......................................31 5.1.2. Resumen de resultados de cizallamiento-extrusión para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “atún en salsa de tomate”......................................31 5.1.3. Resumen de resultados de cizallamiento para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “berberechos al natural”........................................32 5.1.4. Resumen de resultados de cizallamiento-extrusión para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “berberechos al natural”........................................32 5.1.5. Aspecto de las acelgas y las espinacas escaldadas y tratadas a 700 MPa/10 min a 90 ºC. ............................................................................................................................................40 5.1.6. Aspecto de la acelga tratada a 700 MPA durante 3 x (5min) y 4 x (5 min) a 70 ºC. ....40 5.1.7. Aspecto del guisante tratado a 700 MPa durante 10 minutos a 90 ºC. ..........................40 5.1.8. Aspecto del guisante tratado a 700 Mpa durante 3 x (5min) y 4 x (5 min) a 60 ºC. ....41 5.1.9. Aspecto de una crema de verduras sin tratamiento (control), de una crema tratada mediante altas presiones y temperatura (HPT) a 800MPa/80 ºC durante 10 minutos y de una crema comercial tratada por calor ..........................................................................42 5.1.10. Aspecto de una crema de champiñón sin tratamiento (control), de una crema tratada mediante altas presiones y temperatura (HPT) a 800MPa/80 ºC durante 15 minutos y de una crema comercial tratada por calor. .........................................................................42 3 5.1.11. Aspecto de una crema de zanahoria sin tratamiento (control), de una crema tratada mediante altas presiones y temperatura (HPT) a 800MPa/80 ºC durante 15 minutos y de una crema comercial tratada por calor. .........................................................................43 5.1.12. Aspecto de los champiñones escaldados por microondas o por el método tradicional, a lo largo de 6 semanas de almacenamiento. ................................................44 5.1.13. Aspecto de las alcachofas tras los tratamientos en el túnel semiindustrial. ................45 5.2.1. Dibujo 3D de la máquina Wave 6000/420. .......................................................................48 5.2.2. Comparación dimensiones W300 / W420 (figura en rojo). ............................................49 5.2.3. Vista de la primera máquina W420. ....................................................................................50 5.2.4. Diseño de cinta escamoteable..............................................................................................51 5.2.5. Esquema de funcionamiento de los equipos de alta presión. Detalle de la cámara hiperbárica. .............................................................................................................................53 5.2.6. Vista de la primera máquina W420. ....................................................................................54 5.2.7. Aspecto de los diferentes productos después de un día del tratamiento por alta presión: Control (no presurizado), APUR, FLASH o NORMAL .................................56 5.2.8. Detalle de las deslaminaciones (burbujas de aire) presentes en toda la superficie de la base termoformable metalizada...........................................................................................60 5.2.9. Envase termoformado original y envasado en bolsa retráctil BB950. ...........................61 5.2.10. Presurización de productos a base de hígado. ................................................................61 5.2.11. Control (izquierda), presurizado (derecha). .....................................................................62 5.2.12. Control (izquierda), presurizado (derecha). .....................................................................62 5.2.13. Aspecto de la escalibada control (izquierda), presurizada (medio) y procesada por autoclave (derecha)................................................................................................................63 5.2.14. Aspecto de las bolsas VPP control (izquierda) y presurizadas (derecha). ...................64 5.2.15. Imagen de la máquina termoformadora tipo skin adquirida por Mas Parés...............73 5.2.16. a) Muestras de bloc de foie-gras tratadas por alta presión y almacenadas en refrigeración con y sin luz. b) muestras de bloc de foie-gras no tratadas por alta presión almacenadas también en refrigeración con y sin luz. .........................................74 5.2.17. Evolución de L. monocytogenes en el Bloc de foie-gras para las muestras tratadas por alta presión (HPP+), control y el perfil de temperatura durante el almacenamiento de éstas. ........................................................................................................................................75 4 5.2.18. Evolución de Salmonella en Bloc de foie-gras tratado por alta presión (HHP+) o no tratado (control) y perfil de temperatura a lo largo del estudio de Challenge Test. ....75 5.3.1. a) Comparación del perfil sensorial de un producto lácteo con y sin tratamiento de presurización. b) Comparación del perfil sensorial de un producto lácteo probiótico testigo con y sin tratamiento de presurización. .................................................................93 5.3.2. Comparación del perfil sensorial del tercer producto lácteo probiótico evaluado con y sin tratamiento de presurización y almacenado a dos temperaturas de conservación. .........................................................................................................................94 5.3.3. Influencia de la adición de productos fermentados sobre el porcentaje de supervivencia observado en una población de nemátodos tras ser sometidos a un estrés oxidativo en los ensayos realizados. ........................................................................95 5.3.4. PAGE-SDS de los sobrenadantes obtenidos por ultracentrifugación (a) y por precipitación a pH 4.6 (proteínas séricas) de leche cruda de vaca y sometida a diferentes presiones (de 250 MPa a 900 MPa). .................................................................98 5.3.5. PAGE-SDS de los sobrenadantes obtenidos por ultracentrifugación de leche presurizada en un equipo industrial y en un equipo piloto con despresurización rápida y lenta. .........................................................................................................................99 5.3.6. Contenido en lactoferrina de leche cruda de vaca y los sobrenadantes obtenidos por precipitación a pH 4,6 y por ultracentrifugación. .......................................................... 100 5.3.7. Representación de los tamaños de micelas de leche cruda desnatada y presurizada observados por microscopía electrónica de trasmisión. ............................................... 100 5.3.8. Comparativa de cromatograma de leche cruda de vaca y leche tratada por alta presión (900 Mpa). ........................................................................................................................... 101 5.3.9. Gráficos del efecto de la alta presión en diferentes compuestos lipídicos. ................ 102 5.3.10. Contenido en lactoferrina de fórmula infantil control, presurizada a 650 MPa, 5 min y tratada por UHT. ............................................................................................................. 103 5.4.1. Aspecto de la patata escaldada por microondas o por el método convencional, a lo largo de 10 semanas de almacenamiento a -5ºC. ........................................................... 116 5.4.2. Aspecto del pimiento escaldado por microondas o por el método tradicional, a lo largo de 10 semanas de almacenamiento a -5ºC. ........................................................... 117 5.4.3. Aspecto de la judía verde escaldada por microondas o por el método tradicional, a lo largo de 12 semanas de almacenamiento a -5ºC. ........................................................... 118 5.4.4. Parámetros de composición de los productos lasaña boloñesa y vegetal y de cada una de las fases que los componen, sin pasteurizar. ............................................................. 121 5 5.4.5. Parámetros termodinámicos de los productos lasaña boloñesa y vegetal y de cada una de las fases que los componen, sin pasteurizar. ............................................................. 121 5.4.6. Perspectiva del interior del microondas. Lasaña vegetal con sondas de fibra óptica insertadas en el producto por la parte superior justo antes del tratamiento. ............ 123 5.4.7. Perfil de temperatura promedio en el centro y en los bordes del plato. .................... 124 5.4.8. Platos preparados por NOEL (sin pasteurizar); (a) macarrones con salsa boloñesa, (b) tortellinis al pesto, (c) rigatonis al formaggio y (d) raviolis al funghi. .................................... 125 5.4.9. Perfil de temperatura promedio de la salsa centro, salsa borde, dentro de la cavidad de los macarrones o en el espacio entre los macarrones. ............................................. 125 5.4.10. Perfiles de temperatura de los diferentes componentes del plato preparado raviolis al funghi tras el procesamiento por microondas piloto. .................................................... 126 5.4.11. Perfiles de temperatura de los diferentes componentes del plato preparado raviolis al funghi tras el procesado por microondas semiindustrial. .............................................. 127 5.4.12. Estudio de vida útil del plato raviolis al funghi pasteurizado con autoclave y microondas. ........................................................................................................................ 128 5.4.13. Posible configuración de la línea de pasteurización y etiquetado. ............................. 128 5.4.14. Microondas 5800 MHz .................................................................................................... 131 5.4.15. Ejemplo de los envases utilizados a) placa de petri, b) bote estéril rojo c) bote tapón amarillo. ............................................................................................................................... 131 5.4.16. Relación del incremento de la potencia con el incremento de la velocidad de calentamiento en función del tipo de envase utilizado en una leche fermentada. .... 132 5.4.17. Velocidad de calentamiento de la leche fermentada con un microondas de 5800MHz a diferentes tiempos de abertura del magnetrón. ........................................ 132 5.4.18. Proceso de regeneración del pulpo envasado con la tecnología de SimpleStep a potencia 900W durante 75 segundos. Detalle del producto con las sondas insertadas por la parte inferior (1), formación de la burbuja de cocción durante el procesado (2), imagen del producto al finalizar el calentamiento dentro del microondas (3) y después de 5 minutos (4). ................................................................................................................. 141 5.4.19. Aspecto de la escalibada control (izquierda), autoclave (medio) y procesada por microondas industrial (derecha) con la tecnología Lidding. ...................................... 142 5.4.20. Imagen de la descongelación de lomos de cerdo envasados en bolsa termoretráctil. ............................................................................................................................................... 142 6 5.5.1. Muestra de extracto obtenido a partir de una corriente residual del proceso cervecero ............................................................................................................................................... 144 5.5.2. Relación licor/acetato de etilo obtenido en la primera extracción.............................. 145 5.5.3. Extractos obtenidos por fluidos supercríticos (SFE). ................................................... 148 5.5.4. Muestra de arcillas pertenecientes al estudio. ................................................................ 151 5.5.5. Patrones de difracción de rayos X de las arcillas estudiadas ........................................ 152 5.5.6. Fotografía de barnices nitrocelulósicos con 1% de nanoaditivo ................................. 154 5.5.7. Efectividad antimicrobiana de 0.5 gr de película en 25 ml de solución Ringer sobre el crecimiento de S. aureus (CECT 239). Nanoaditivo empleado: Nanobioter ® 101 A1.41-20% agente activo Estudio realizado en Gaiker. .............................................. 157 5.5.8. Efectividad antioxidante de films de EVA aditivados con nanoarcilla por contacto directo sobre carne. Nanoaditivo empleado: Nanobioter ® 101 A1.41-20% agente activo. Estudio realizado en la USC. ............................................................................... 158 5.5.9. Fotografía del concentrado de EVA + 10% Nanobioter ® 101 A1.41-20% agente activo enviado a AIMPLAS. ............................................................................................ 158 5.5.10. Fotografías de los films obtenidos en AIMPLAS. A la izquierda, film virgen procesado sin aditivo. A la derecha, film aditivado con 10% de Nanbioter-17% agente activo........................................................................................................................ 159 5.5.11. Film con recubrimiento activo. ...................................................................................... 162 5.5.12. Izquierda: film con al aditivo activo Derecha: film control, sin aditivo. ................. 162 5.5.13. Izda: Estructura 1; Centro: Estructura 2; Decha: Estructura 3. ................................ 163 5.5.14. Grado de oxidación lipídica de la carne de cerdo mediante el método TBARS. .... 169 5.5.15. Grado de oxidación lipídica de la carne de vacuno mediante el método TBARS. . 169 5.5.16. Efectividad antioxidante de todos los films con el agente activo en diferentes concentraciones. ................................................................................................................. 170 5.5.17. Estudio para la evaluación de la efectividad antioxidante de los films incorporados con el extracto de agente activo, en contacto directo con el alimento cárnico por el método de TBARS. ............................................................................................................ 171 5.5.18. Estudio para la evaluación de la efectividad antioxidante de los films incorporados con el extracto de agente activo en forma de Nanoaditivo, en contacto directo con el alimento cárnico por el método de TBARS. .................................................................. 171 5.5.19. Ensayo de oxidación lipídica en carne de porcino. ..................................................... 173 7 5.5.20. Ensayo de oxidación lipídica en carne de vacuno. ...................................................... 173 5.5.21. Muestra de las zonas de una máquina de envasado. ................................................... 179 5.5.22. Realización de pruebas en planta piloto. ....................................................................... 180 5.5.23. Realización de pruebas para la definición de recomendaciones para la limpieza y desinfección de termoformadoras higienizables. ........................................................... 181 5.5.24. Pruebas de adhesión entre films..................................................................................... 182 5.5.25. Resultados de los diferentes materiales (E1, E2 y E3)................................................ 183 5.5.26. Resultados obtenidos en las pruebas de sellado entre una bandeja y los films evaluados. ............................................................................................................................ 184 5.5.27. Resultados obtenidos para la estructura EVA (6% agente activo)/ adh/EVOH/ adh/EVA (6% agente activo). .......................................................................................... 184 5.5.28. Resultados obtenidos para la estructura EVA (10%Nano)/ adh/EVOH/ adh/EVA (10%Nano). ......................................................................................................................... 184 5.6.1. Planta piloto de procesado con fluidos supercríticos PFS20 (AINIA). ..................... 191 5.6.2. Cinéticas de extracción en pruebas con materia prima de elevado contenido lipídico ............................................................................................................................................... 193 5.6.3 y 5.6.4. Cinéticas de extracción en pruebas realizadas con dos tipologías de materias primas. ................................................................................................................................. 194 5.6.5. Ejemplo de extractos obtenidos a partir de una materia prima de elevado contenido lipídico.................................................................................................................................. 194 5.6.6. Ejemplo de extractos obtenidos en el separador 1 (S.1) y en el separador 2 (S.2) a partir de una materia prima de elevado contenido lipídico. ........................................ 195 8 1. TÍTULO T Y AUTO ORES Futu ural es el accrónimo del Proyecto "Contribuciión de las Nuevas N Teecnologías en la obtención de futuros f alim mentos tam mbién doccumentado como futu uros alimeentos: más seguros, más m nutritivvos, más con nvenientes y más inteeligentes". El proyecto p se aprobó en n la tercera convocatorria del Proggrama CEN NIT el año 2007, enmaarcado en laa iniciativa Ingenio 20100 y dirigido o a fomentaar la coopeeración púb blicoprivaada en I+D D+i, ha teniddo una duraación de cuaatro años fin nalizándose en diciembre del 2010. El Centro de d Desarrollo Tecnológico Industrial I (CD DTI) destinó ó un total dde 9 millonees de euros al Proyeccto en form ma de subvvención siendo el presupuesto to otal aceptad do de aproxximadamentte 21 millon nes de euros. El Consorcio C e estuvo form mado por 23 empreesas del seector agroaalimentario y 12 orgaanismos de investigacción estatalees lideradoss por Alimeentación y SSalud del Fuuturo, AIE,, entidad crreada para liderar el proyecto p y formada por p las siguuientes emp presas: Labo oratorios Orrdesa, S.L., NChyperbaaric, S.A.; Lllet de Catallunya, S.L.; Nanobiomaatters, S.L. y Sociedad Cooperativa C Ganadera del d Valle de los Pedroch hes (COVAP P). La Coordinación C n Científico o-técnica deel Proyecto recayó sobre el organ nismo públicco de invesstigación IRT TA y las tarreas propias de una Oficcina de Proyyecto las reaalizó la consuultora Deloititte. EMP PRESAS: Lab boratorios Ordesa, O S.L. Am mcor Flexibles, S.L. Barrrufet, S.A. Bio osearchlife, S.A. S Cassademont, S.A. S Conservas Cucca, S.A. Daanone, S.A. Ero oski S.Coop p. Fun ndació Alíciia M Miguel Grupo Mahou-San Grupo Riberebro (G Gutarra) Innoducky, S.L. Llet de Catalunya, S.L. S Metalquuimia, S.A. Nanobiiomatters, S..A. NChyperbaric, S.A. Noel Allimentaria, S.A.U. S Sealed Air, A S.L. 9 SSociedad Co oop. G Ganadera deel Valle de lo os P Pedroches S Soria Naturaal, S.A. T Tecnologia y Calidad Lááctea U Ulma Packaging U Ultracongela ados Virto, S.A. S UNIIVERSIDA ADES, C CENTROS PÚB BLICOS DE E INVEST TIGACIÓN N: TECNO OLÓGICO OS Y O ORGANISMOS GAIKER G IATA-CSIC I IF/IFI-CSIC I C IRTA I ITCL I Universidad U d Burgos (U de UBU) Universidad U d Santiago dde Compostella de (USC) ( AIN NIA ANF FACO-CECO OPESCA AZT TI-TECNALIIA CEN NTA CNT TA-LABORA ATORIO DEL L EBRO COO ORDINACIÓN PROY YECTO: CIENT TÍFICO-TÉC CNICA ECONÓM MICO-FINA ANCIERA 10 2. AGRADECIMIENTOS El Consorcio formado por las empresas, organismos de investigación, universidades y centros tecnológicos participantes, agradecen al equipo de trabajo del Centro para el Desarrollo Tecnológico e Industrial (CDTI), y en particular a la Sra. Marta de Diego, Técnico Responsable de Seguimiento asignada al Proyecto (TRSP), el apoyo recibido, lo cual ha facilitado que el proyecto finalizara con éxito. A su vez, el Consorcio agradece la financiación recibida a través del Programa CENIT, enmarcado en la iniciativa Ingenio 2010 y dirigido a estimular la colaboración en I+D+i entre las empresas, las universidades, los organismos y centros públicos de investigación, centros tecnológicos, etc., aumentando la cooperación público-privada en I+D+i. El Consorcio del FUTURAL agradece también al Comité de Coordinación General, presidido por el Sr. D. Félix Parellada Jofre la labor realizada durante la ejecución del proyecto. Por su parte, el Comité de Coordinación General agradece el esfuerzo realizado por todos los participantes que con sus ganas, empeño, dinamismo, constancia, ilusión, gran capacidad de trabajo y motivación han permitido alcanzar con éxito los objetivos científicotécnicos planteados en el proyecto y, a su vez, nos han proporcionado la oportunidad de trabajar con un gran equipo de personas y de profesionales a lo largo de los cuatro años del proyecto FUTURAL. Para el Comité de Coordinación General ha sido una gran satisfacción acompañaros, incluso en momentos complicados, y haber compartido con vosotros esta experiencia llena de éxitos. Coordinadoras del Proyecto Oficina del Proyecto Sras. Mireia Molins y Anna Masdeu Sres. Óscar Navós y Josep M Ràfols IRTA Deloitte Director Científico Presidente de la AIE Dr. Jacint Arnau Sr. Fèlix Parellada 11 3. PRÓLOGO Los hábitos de consumo de alimentos en la sociedad actual está evolucionando, y la industria agroalimentaria se enfrenta al reto imperioso que supone aumentar su competitividad a través de la innovación para poder adaptar la calidad de los alimentos transformados a la demanda de productos seguros, nutritivos, saludables, cómodos y de alta calidad sensorial. Para ello un grupo constituido por 23 empresas1 liderado por Alimentación y Salud del Futuro, una AIE (Asociación de Interés Empresarial representada por Laboratorios Ordesa, S.L, NC Hyperbaric, S.A, Llet de Catalunya, S.L, Nanobiomatters S.L y Sociedad Cooperativa del Valle de los Pedroches (COVAP), y 12 organismos de investigación2 se organizó para ejecutar un proyecto de investigación que permitiera sentar las bases científicas para aplicar, a nivel industrial, nuevas tecnologías en la elaboración y conservación de los alimentos del futuro para adaptarlos a las necesidades del consumidor del siglo XXI aumentando la competitividad de las empresas participantes y del sector agroalimentario en general. La Coordinación del Proyecto recayó en el IRTA y las tareas propias de una Oficina de Proyecto las realizó la consultora Deloitte. El proyecto de investigación que se denominó FUTURAL, acrónimo de "Contribución de las nuevas tecnologías en la obtención de futuros alimentos", fue uno de los 16 proyectos que merecieron el apoyo del programa de Consorcios Estratégicos Nacionales de Investigación Tecnológica (CENIT) en su tercera convocatoria del año 2007, enmarcado en la iniciativa Ingenio 2010 y dirigido a fomentar la cooperación público-privada en I+D+i. Este proyecto tuvo una duración de 4 años finalizándose en diciembre de 2010. El Centro de Desarrollo Tecnológico Industrial (CDTI) destinó un total de 9 millones de euros al Proyecto en forma de subvención, siendo el presupuesto total aceptado de unos 21 millones de euros. A pesar de las dificultades económicas que surgieron durante la ejecución del proyecto, las empresas mostraron el compromiso de alcanzar los objetivos planteados, sin que se apreciaran retrasos o desánimo en la ejecución de las tareas. FUTURAL ha sido, una herramienta para aumentar de forma significativa la colaboración entre empresas y organismos de investigación, puesto que una parte importante de las actividades del proyecto se realizaron en centros tecnológicos, universidades e institutos de investigación y desarrollo. La ejecución del proyecto permitió la incorporación de nuevos investigadores en los departamentos de I+D de las empresas y organismos de investigación para poder llevar a cabo todas las actividades contempladas. La creación, ampliación o consolidación de grupos de I+D en las estructuras empresariales del sector alimentario (la mayoría PYMES) constituye un estímulo importante para la adopción de un cultura empresarial basada en la innovación. FUTURAL se estructuró en seis actividades en las que cada una de ellas abordaba una tecnología nueva a través de un conjunto de objetivos científicos enmarcados en las matrices alimentarias más apropiadas a su incorporación. Cada actividad se subdividió en diversas tareas. En el presente informe, se describen para cada tarea los objetivos planteados, un resumen ejecutivo, los principales resultados que son objeto de difusión y las conclusiones derivadas de los mismos. Durante el período de ejecución del proyecto y 12 hasta finales del año 2012 se dispone, además, de una página web, para informar a los sectores públicos y privados (http://www.cenitfutural.org) y ofrece documentación complementaria a la contenida en el presente informe. A lo largo de este documento se presentan los numerosos resultados obtenidos a partir de la aplicación de las nuevas tecnologías incorporadas en el sector alimentario. Entre ellas, el procesado por alta presión (HPP) ha recibido una gran atención, ya que permite la inactivación a temperatura ambiente de microorganismos y enzimas, causando tan sólo ligeros cambios en las propiedades sensoriales, nutricionales y funcionales de los productos alimenticios, en comparación con aquellos ocasionados por las tecnologías convencionales. Desafortunadamente, las esporas bacterianas son muy resistentes a la alta presión que se aplica actualmente en condiciones industriales. Para superar este problema, se planteó la combinación de la alta presión con otras tecnologías de proceso. A este respecto, el procesado de alta presión en combinación con temperatura ha demostrado ser la alternativa más eficaz para inactivar las endosporas bacterianas. Se abre, por tanto, una importante vía de desarrollo de nuevos productos esterilizados mediante la aplicación de esta tecnología. Las altas presiones pueden representar también una ventaja importante para acceder a nuevos mercados, altamente exigentes en calidad y en seguridad alimentaria. Por ejemplo, la exportación de jamón curado español o de embutidos crudos curados es ya una realidad que tiene un elevado impacto económico debido a su efecto de “pasteurización en frio”, el único proceso tecnológico de higienización post-envasado disponible en la actualidad que es aceptado por el consumidor y en el que las empresas cárnicas españolas han sido pioneras en su aplicación. Otro ejemplo a destacar de tecnología estudiada lo constituye la de altas frecuencias. Así por ejemplo, en este caso, la sustitución del tratamiento térmico de escaldado de productos vegetales por un tratamiento por microondas ha concluido con la obtención de resultados prometedores, pues se ha superado la calidad de los productos vegetales procesados de forma convencional. También, la tecnología de fluidos supercríticos ha mostrado sus posibilidades tecnológicas para conseguir productos alimentarios a través de procesos seguros y eficientes. El lector tiene a su disposición a lo largo de este Informe Publicable otros muchos casos de resultados interesantes y novedosos, que espero sean de utilidad y sirvan de estímulo a la innovación en el sector alimentario. Consideramos que la consecución de los objetivos del proyecto representa que las empresas participantes adquieran una ventaja competitiva que las sitúa en la vanguardia de la introducción de nuevas tecnologías y procesos en la industria agroalimentaria y esperamos que ello sirva de aliciente para la implantación de estrategias de I+D en otras empresas del sector alimentario español. 1 . Barrufet, Casademont, Cervezas San Miguel, Conservas Azagresa, COVAP, Danone, Innoducky, Eroski, Exxentia, Fundació Alícia, Grupo Amcor Flexibles, N.C. Hyperbaric, Llet Nostra, Metalquimia, Nanobiomatters, Noel Alimentaria, Laboratorios Ordesa, Pita Hermanos, Sealed Air, Soria Natural, Tecnolat, Ulma Packaging y Ultracongelados Virto. 13 2 . Centros tecnológicos (AZTI y GAIKER del País Vasco, el CNTA-Laboratorio del Ebro de Navarra, ANFACO-CECOPESCA de Galicia, AINIA de Valencia, el CENTA de Cataluña, el ITCL de Castilla y León); universidades (de Burgos y de Santiago de Compostela) e institutos de investigación y desarrollo (el IRTA de Cataluña, el IATA-CSIC de Valencia y el Instituto del FríoCSIC de Madrid). Dr. Jacint Arnau Arboix Director científico del proyecto CENIT-FUTURAL 14 4. RESUMEN EJECUTIVO 4.1. INTRODUCCIÓN En el 2006, año anterior al inicio de este proyecto, la industria alimentaria española ocupaba en ventas el quinto puesto en la UE (un 10,3%), por detrás de Alemania (20,2%), Francia (18,2%), Inglaterra (16,5%) e Italia (10,7%). La elevada atomización y la falta de tradición innovadora en esta industria requería un claro impulso para mantener su competitividad. Según el documento 26 de vigilancia tecnológica publicado por la Fundación OPTI en el 2006, a nivel mundial en el sector alimentario se habían publicado 29 patentes, 14 de las cuales fueron publicadas por empresas de la UE, pero ninguna de ellas era española. El Programa CENIT, enmarcado bajo la iniciativa Ingenio 2010 del Gobierno de España, estimuló a las 23 empresas alimentarias participantes a aumentar la cooperación con organismos públicos de investigación, universidades, centros tecnológicos, etc. y a invertir un total de 21 millones de euros en recursos en I+D+i, de los cuales un 44,9 % fueron retornados en forma de subvención por el CDTI. La industria alimentaria española en general y las empresas participantes en el proyecto en particular, se enfrentaban al reto de aumentar su competitividad produciendo productos alimentarios transformados/procesados de calidad a través de la innovación, para poder así adaptarse a las nuevas demandas de consumo. Estas nuevas demandas se pueden englobar en cinco grandes ejes: la comodidad, la palatabilidad, la seguridad alimentaria, la salubridad y la regularidad. De estos cinco ejes, tres, comodidad, seguridad alimentaria y salubridad, constituyeron el objetivo genérico del proyecto y dieron título al mismo “Contribución de las nuevas tecnologías en la obtención de futuros alimentos. También documentado como FUTUros ALimentos: más seguros, más nutritivos, más convenientes, más inteligentes” (Acrónimo: FUTURAL). Josep Maria Monfort (2006) justificaba así el objetivo genérico del proyecto basado en la comodidad, seguridad alimentaria y salubridad: • Comodidad: La comodidad en los alimentos es todo aquello que hace que la elección de un producto permita llevar a cabo la multiplicidad de actividades del día y, a la vez, incrementar el tiempo para el disfrute (Haselgrove, 2006). La adaptación de las demandas a través de los denominados alimentos de comodidad (convenience foods) requiere en la mayoría de los casos del empleo de nuevas tecnologías de procesado y/o conservación, como por ejemplo, el envasado activo e inteligente, pasteurización no térmica por alta presión hidrostática (HPP), pasteurización térmica por microondas o por radiofrecuencias, etc.). • Seguridad alimentaria: La industria alimentaria, a demás de producir alimentos tradicionales, orienta sus actividades de acuerdo con la demanda de los consumidores, las rigurosas exigencias higiénicas impuestas por las autoridades sanitarias y las necesidades nutricionales de la población, tanto de carácter general (alimentos saludables) como para colectivos sensibles (hipertensos, ancianos, immunodeprimidos, obesos, diabéticos, etc.). 15 Esta evolución de la industria para adaptarse a los hábitos de consumo del siglo XXI, ha dado lugar, por una parte, a nuevos problemas, algunos de gran importancia que es necesario atajar, y por otra, a la necesidad de estudiar las consecuencias que pueden conllevar algunos de los cambios que se han introducido en la elaboración industrial de nuevos productos. En ocasiones, por ejemplo, éstas son tan agresivas que producen cambios en sus propiedades sensoriales que causan rechazo del producto por parte del consumidor. Existen tecnologías emergentes (altas presiones isostáticas, radiofrecuencias, etc.) que higienizan los alimentos, minimizando los cambios en sus propiedades sensoriales y nutricionales, y, a su vez, proporcionan una vida útil adecuada para el uso que se espera de ellos. Existen otro tipo de tecnologías, como los fluidos supercríticos (FSC), que permiten la obtención de ingredientes alimentarios de forma saludable y que además son respetuosas con el medio ambiente, ya que constituyen una alternativa al uso de disolventes orgánicos como técnica de extracción (separación de sustancias integrantes de una mezcla). En este punto, cabe también mencionar que las áreas de investigación de mayor auge en todo el mundo se centran en el desarrollo de nuevos materiales de envase destinados a la conservación de alimentos, no solamente en lo que concierne a la seguridad alimentaria, sino también a la conservación de la calidad del alimento a lo largo de su vida útil. Los materiales activos están diseñados para incorporar, de forma intencionada, componentes que liberan sustancias en el alimento envasado. En envases es donde los materiales barrera activos tienen mayor demanda ya que en el momento del envasado los alimentos presentan condiciones sensoriales óptimas (sabor, olor y apariencia visual) y también de calidad microbiológica que deben mantener hasta el momento de su consumo. • Salubridad: Los aspectos relacionados con la salud y la nutrición humana constituyen uno de los ejes fundamentales que explican los cambios en la actitud de los consumidores. Según la Sociedad Española de Nutrición Comunitaria (SENC) y HERO Nutrición, 2006, la obesidad infantil pasó en los países ricos del 5% al 15% en apenas dos décadas. El incremento de la obesidad infantil fue el detonante para la creación de la Estrategia Naos en el año 2005, estrategia consensuada entre la Administración del Estado en su día a través de los Ministerios de Sanidad y Consumo, Industria y Educación y Ciencia, la Agencia Española de Seguridad Alimentaria y Nutrición (AESAN), la Federación de Industrias, Alimentos y Bebidas (FIAB) y grandes empresas. En este contexto, se hace del todo necesaria la aplicación de tecnologías de proceso o el desarrollo de nuevas para poder afrontar con éxito la reformulación de muchos alimentos en base a, por ejemplo, la reducción sodio sin comprometer los aspectos de seguridad alimentaria. 4.2. ORGANIZACIÓN DEL PROYECTO Para lograr una coordinación eficiente del consorcio los Organismos de Investigación participantes, actuaron como Coordinadores Científicos de las actividades, las cuales se subdividieron en tareas lideradas por una empresa que trabajó conjuntamente con los organismos de investigación subcontratados y los coordinadores científicos (Tablas 4.2.1 y 4.2.2). 16 Tabla 4.2.1. Coordinación científica de las líneas de investigación del Consorcio. ACTIVIDADES LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN COORDINACIÓN CIENTÍFICA Actividad 1 Esterilización por alta presión de conservas vegetales, de pescado y marisco. Actividad 2 Pasteurización por alta presión. Combinación con otras técnicas de conservación. Actividad 3 Pasteurización de alimentos líquidos por altas presiones, o en combinación con las altas presiones. IRTA Actividad 4 Sustitución del tratamiento térmico convencional (transferencia de calor) por el de altas frecuencias (radiofrecuencias y microondas). IRTA Actividad 5 Desarrollo de nuevos sistemas de envasado. Actividad 6 Nuevas aplicaciones de fluidos supercríticos en la industria alimentaria. 17 CNTA CENTA GAIKER AINIA Tabla 4.2.2. Distribución de las empresas participantes y de los organismos de investigación en función de las actividades. ACTIVIDADES 1 2 3 4 5 6 ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN EMPRESAS Conservas Cuca, S.A. (antes Pita Hermanos, S.A.) Grupo Riberebro Nchyperbaric, S.A. Barrufet, S.A. Sealed Air, S.L. Innoducky, S.L. Coop. Ganadera Valle de los Pedroches Metalquimia, S.A. Casademont, S.A. Fundació Alícia Danone, S.A. Laboratorios Ordesa, S.L. Llet de Catalunya, S.L. Tecnología y Calidad Láctea, S.L Fundació Alícia Ultracongelados Virto, S.A. Noel Alimentaria, S.A.U. Sealed Air, S.L. Danone, S.A. Grupo Riberebro Fundació Alícia Grupo Mahou- San Miguel Amcor Flexibles Hispania, S.L. Nanobiomatters, S.L. Eroski, S. Coop. Coop. Ganadera Valle de los Pedroches Ulma Packaging Biosearchlife, S.A. Soria Natural, S.A. ANFACO-CECOPESCA CNTA IRTA, UBU e ITCL IRTA y CENTA IRTA IRTA IRTA IRTA IRTA IRTA IRTA IRTA, CENTA e IF/IFI-CSIC AZTI-TECNALIA AZTI-TECNALIA IRTA CNTA e IRTA IRTA IRTA IRTA CNTA e IRTA IRTA GAIKER e USC GAIKER IATA-CSIC GAIKER e USC GAIKER e USC GAIKER, AINIA e USC AINIA AINIA A su vez, se crearon dos Comités de Coordinación del Proyecto: • • Comité de Coordinación General: Presidido por el Presidente de Alimentación y Salud del Futuro, el Sr. D. Félix Parellada; el Director Científico, el Dr. Jacint Arnau de IRTA; la Coordinación técnica del Proyecto, la Sra. Mireia Molins y la Sra. Anna Masdeu de IRTA; y la Oficina del proyecto, el Sr. Óscar Navós y el Sr. Josep Maria Ráfols de Deloitte. Comité de Coordinación Científica: Dirigido por el Director Científico, el Dr. Jacint Arnau de IRTA y formado por los Coordinadores Científicos de cada Actividad: 18 Actividad 1: Dra. Silvia Garcia del CNTA-Laboratorio del Ebro. Actividad 2: Sr. Narcís Grèbol del CENTA. Actividad 3: Dr. Xavier Felipe del IRTA. Actividad 4: Dr. Pierre Picouet del IRTA. Actividad 5: Sra. Inmaculada Angulo de GAIKER. Actividad 6: Dr. Miguel Blasco de AINIA. Las funciones del Comité de Coordinación General consistieron en: - Aprobar los Planes de Trabajo de las anualidades correspondientes (20072010). Dirigir las reuniones ordinarias trimestrales. Evaluar las cuestiones relacionadas con el presupuesto y las tareas técnicas del proyecto. Dirigir las reuniones anuales con todos los miembros participantes en el proyecto. Aprobar el Plan de Difusión del conocimiento y los resultados obtenidos a lo largo del proyecto, elaborado por el Comité de Coordinación Técnica. Aprobar la Memoria técnica y económica justificativa anual y final, elaboradas por la Coordinación técnica y la Oficina de proyecto, respectivamente. Velar por el buen funcionamiento del proyecto siguiendo las normas de los proyectos CENIT. Distribuir la ayuda concedida entre los miembros del Consorcio. Aprobar la estructuración y re-estructuración de las Actividades realizada por el Comité de Coordinación Científica. Las funciones de la coordinación técnica realizadas por IRTA fueron: - Realizar la Gestión General del Proyecto (de las áreas de impacto socioeconómico del Proyecto, visibilidad y comunicación). - Elaborar, junto con el Comité de Coordinación General el Plan de trabajo. - Recopilar cuantos informes técnicos se indiquen en las normas del Programa CENIT manteniendo los formatos y tiempos de entrega propuestos por el CDTI. - Realizar las acciones oportunas para agilizar la gestión del proceso de seguimiento, así como realizar propuestas al Comité de Coordinación General y al Comité de Coordinación Técnica sobre la gestión general del Proyecto. - Gestión de los participantes (personal de las empresas que figuran en el Consorcio, así como los diferentes organismos de investigación). - Calcular el tiempo de producción de cada uno de los documentos necesarios para la correcta ejecución del Proyecto y del desarrollo de cada una de las actividades del mismo. 19 - Verificar las tareas desarrolladas por los miembros del Consorcio y del tiempo de elaboración de las mismas para la correcta gestión del tiempo, con el fin de evitar posibles desviaciones temporales. - Efectuar una comparación continua entre la planificación y el estado de desarrollo de las Actividades del Proyecto. - Dar soporte al Comité de Coordinación Científica. - Gestionar la agenda de los eventos realizado por los miembros del Consorcio y de los vencimientos de las anualidades. - Preparar y organizar las reuniones ordinarias trimestrales con los miembros del Comité de Coordinación General, redactar actas, ejecutar las decisiones acordadas por el Comité y enviar la información a los miembros del Consorcio y al CDTI. - Preparar y organizar reuniones anuales con todos los miembros participantes. - Preparar y organizar reuniones anuales del Comité de Coordinación Científica, redactar actas, ejecutar las decisiones acordadas por el Comité y enviar la información a los miembros del Consorcio y al CDTI. - Organizar y archivar los documentos generados en el transcurso del Proyecto durante el período de duración del mismo. - Gestionar las versiones y revisiones de los documentos generados en el transcurso del Proyecto. - Gestionar las comunicaciones internas entre los miembros del Consorcio y las externas con el resto de participantes, como Centros públicos de investigación. - Definir las acciones a elaborar para cada tarea relacionada con la gestión económico-administrativa del Proyecto (aplicación, plantillas, etc.). - Informar al Comité de Coordinación General de las incidencias detectadas y otras cuestiones, tanto administrativas como legales, vinculadas al Proyecto (p.e. modificaciones en el Acuerdo de Consorcio, cambios y modificaciones presupuestarias, etc.). - Mantener una comunicación continuada con el Comité de Coordinación General, el Comité de Coordinación Técnica y con el CDTI. La consultora Deloitte actuó como Oficina de Proyecto, órgano de soporte administrativo y legal cuyas funciones se describen a continuación: - Realizar las tareas de seguimiento y control del gasto realizado por cada uno de los integrantes del Consorcio. - La tramitación de las justificaciones económicas y de sus respectivos informes de auditoría. - Recopilar los informes económicos y de otra naturaleza de la Partes para su envío al CDTI. 20 - Preparar, con el apoyo de los miembros del Comité de Coordinación General los informes y documentos requeridos por el CDTI. - Asegurar la diligencia en el envío de los datos identificados como entregables en el Contrato o requeridos por el CDTI para su revisión o auditoria, incluyendo los resultados de las auditorias financieras preparadas por auditores independientes. - Preparar y asistir a las reuniones del Comité de Coordinación General y la Asamblea Plenaria. - Dar soporte al Presidente de la Asamblea Plenaria en la dirección de las Juntas. - Asesorar a las Partes a fin de que determinen un auditor para que puedan obtener el Informe de Gastos. - Dar soporte al Project Manager. - Dar soporte legal al Consorcio y a las Partes en relación a sus derechos y obligaciones del presente acuerdo. - Asesorar en las incidencias y otras cuestiones, tanto administrativas como legales, vinculadas al Proyecto (p.e. modificaciones en el acuerdo de Consorcio, cambios y modificaciones presupuestarias, etc.). A destacar las siguientes Actividades organizadas por el Comité de Coordinación General: – – – – – – – – 11 reuniones del Comité a lo largo del proyecto. Todas las reuniones constaron en acta y se enviaron a todo el Consorcio para el seguimiento de las mismas. Creación de la página web del proyecto en la anualidad 2008 www.cenitfutural.org que estará activa hasta el mes de diciembre del 2012. Envío de 4 newsletters a los miembros del Consorcio con información seleccionada de interés para los participantes en el proyecto, como por ejemplo, información de convocatorias de ayudas públicas. Organización de 4 Asambleas Generales en 4 ubicaciones distintas y repartidas por el territorio nacional, con el objetivo de mantener el contacto constante entre los participantes y un conocimiento de los resultados y Actividades en las que participaban cada uno de ellos. Se realizaron 4 reuniones con la Técnico Responsable de Seguimiento del Proyecto (TRSP) del CDTI asignada para este proyecto, la Sra. Marta de Diego. Se visitaron 21 empresas y 8 organismos de investigación. Se organizaron sesiones dinámicas de grupo con los participantes del proyecto. Se realizó un Workshop sobre nuevas tecnologías alimentarias: Altas presiones y Radiofrecuencias y una Jornada de Envases. Puesto que uno de los objetivos de las ayudas del Programa CENIT era el de extender la cultura de cooperación en I+D entre todos los agentes del sistema ciencia-tecnologíaempresa, se creó un Comité de Coordinación Científica, cuya función fue coordinar y 21 gestionar las cuestiones tecnológicas y científicas de las entidades participantes en el proyecto (empresas, organismos públicos de investigación, centros tecnológicos, universidades, etc.). De las funciones del Comité de Coordinación Técnica se destacan las siguientes: - Gestionar las cuestiones tecnológico-científicas que surgieron durante el Proyecto. Gestionar las actividades de investigación, desarrollo e innovación (I+D+i), formación y gestión del proyecto. Dirigir las reuniones anuales con los miembros del Comité de Coordinación Técnica. Realizar el seguimiento y evaluación de las tareas técnicas realizadas por todo el Consorcio. 4.3. OBJETIVOS GENERALES DEL PROYECTO Los objetivos generales del proyecto CENIT Futural fueron: • • Promover la cooperación entre empresas y organismos públicos de investigación trabajando conjuntamente a lo largo de los cuatro años investigando y desarrollando nuevos procesos, aplicaciones, productos, etc. Estudiar la contribución de las nuevas tecnologías para obtener los alimentos del futuro, es decir, sentar las bases para la aplicación de nuevas tecnologías para la elaboración de alimentos, como las altas presiones, las radiofrecuencias, las microondas, etc., adaptándolos a las nuevas necesidades de consumo. 4.4. OBJETIVOS POR ACTIVIDAD Vistos los objetivos del proyecto, a continuación se detallan los objetivos para cada una de las Actividades. Actividad 1: Esterilización por alta presión de conservas vegetales, de pescado y marisco. El objetivo de la Actividad 1 fue el estudio de la tecnología de procesado por alta presión como alternativa a la esterilización térmica tradicional de productos vegetales, de la pesca y del marisqueo. En esta Actividad participaron dos empresas: • • Conservas Cuca, S.A. (antes Pita Hermanos, S.A.) con el organismo de investigación ANFACO-CECOPESCA. Grupo Riberebro con el organismo de investigación CNTA-Laboratorio del Ebro. Los objetivos específicos fueron: – Reunir información disponible en bibliografía científica sobre la aplicación de altas presiones en alimentos modelo. 22 – – – Conocer los cambios en la composición físico-química, atributos sensoriales y la microbiología de los alimentos modelo sometidos al tratamiento de pasteurización y esterilización por altas presiones. Optimizar la combinación de acondicionamiento-pretratamiento por altas presiones para los alimentos modelo seleccionados, para conseguir su conservación óptima a temperatura ambiente y en refrigeración. Evaluar los aspectos característicos y el valor añadido del nuevo método de procesado, comparándolo con los procesos tradicionales, teniendo en cuenta los siguientes aspectos: o Aumento de vida útil o Posibilidad de diseño de nuevos productos o Conservación de las propiedades nutricionales y sensoriales Actividad 2: Pasteurización por alta presión. Combinación de la alta presión con otras técnicas de conservación. El principal objetivo de esta Actividad fue el estudio de la aplicación industrial de la tecnología de las Altas Presiones y de su asociación con otras nuevas tecnologías, para obtener alimentos más seguros, más saludables y más convenientes. En esta Actividad participaron ocho empresas: • • • • • • • • N.C.Hyperbaric, S.A. Barrufet, S.A. Sealed Air, S.L. Innoducky, S.L. Coop. Ganadera del Valle de los Pedroches (COVAP) Metalquimia, S.A. Casademont, S.A. Fundació Alícia Se fijaron objetivos más específicos asociados a las distintas tareas englobadas dentro de la Actividad, y que pueden agruparse en tres: – – – Diseñar equipos industriales de altas presiones más fiables y de mayor capacidad de producción, optimizando costes de inversión y mantenimiento, y explorando nuevos procesos. Desarrollar aplicaciones industriales de las altas presiones que permitieran elaborar nuevos productos, investigar nuevos conceptos, optimizar la seguridad alimentaria, extender la vida comercial y mejorar la percepción sensorial en el momento del consumo. Estudiar la combinación del uso de la tecnología de las altas presiones con otras tecnologías, tales como tratamientos térmicos tradicionales o tecnologías de secado ultra-rápido (QDS, Quick Dry Slice Process). 23 Actividad 3: Pasteurización de alimentos líquidos por altas presiones, o en combinación con las altas presiones. El principal objetivo de esta Actividad fue el estudio del efecto de las tecnologías emergentes (principalmente altas presiones hidrostáticas), en diferentes alimentos líquidos, principalmente derivados de la leche. En esta Actividad participaron cinco empresas: • • • • • Danone, S.A. Laboratorios Ordesa, S.L. Llet de Catalunya, S.L. Tecnología y Calidad Láctea, S.L. Fundació Alícia Se fijaron objetivos más específicos asociados a las distintas tareas, que se detallan a continuación: − − − − Estudiar las condiciones de presurización isostática y/o de tratamiento térmico para la estabilización de la flora probiótica de leches fermentadas. Estudiar la combinación de nuevas tecnologías (alta presión con radiofrecuencia y/o pulsos eléctricos) para la obtención de nuevas fracciones proteicas de la leche. Pasteurizar la leche, preparados lácteos y preparados de frutas a baja temperatura mediante tecnologías alternativas al proceso UHT. Obtener alimentos líquidos, viscosos o pastosos saludables y apetitosos a través de un procesado alimentario mínimo. Actividad 4: Sustitución del tratamiento térmico convencional (transferencia de calor) por el de altas frecuencias (transferencia de calor interna). El objetivo de la Actividad 4 fue el estudio de la tecnología de altas frecuencias como alternativa a los tratamientos térmicos convencionales de productos alimentarios así como el efecto que ocasionan estos tratamientos en los envases que los contienen. En esta Actividad participaron seis empresas: • • • • • • Ultracongelados Virto, S.A. Noel Alimentaria, S.A.U. Danone, S.A. Sealed Air, S.L. Fundació Alícia Grupo Riberebro (esta empresa se añadió a esta Actividad en la última anualidad del proyecto, en el 2010). Los objetivos específicos fueron: − Higienización y estabilización sustituyendo el tratamiento térmico aplicado en el escaldado tradicional por altas frecuencias en matrices vegetales que 24 − − − − posteriormente serán sometidos a congelación y/o eventualmente a esterilización. Pasteurización por altas frecuencias en platos preparados en substitución del tratamiento convencional. Investigar el uso de una frecuencia alternativa para inactivar microorganismos en productos lácteos. Estudiar el efecto de los procesos térmicos por altas frecuencias (microondas, radiofrecuencias y ultrasonidos) sobre el valor nutricional, textura y conservación de preparaciones culinarias. Definir los envases y su condición de uso en los tratamientos por altas frecuencias. Actividad 5: Desarrollo de nuevos sistemas de envasado activo. El objetivo de esta Actividad fue el desarrollo de nuevos sistemas de envasado activo (polifenoles y nanopartículas fibrilares) con la finalidad de aportar a la industria alimentaria las siguientes ventajas: Incrementar la calidad y la vida útil y/o comercial de alimentos envasados. Reducir el contenido de aditivos conservantes en los alimentos envasados. Garantizar la seguridad alimentaria de los alimentos mínimamente procesados y envasados. En esta Actividad participaron seis empresas: • • • • • • Grupo Mahou-San Miguel Nanobiomatters, S.L. Amcor Flexibles Hispania, S.L. Eroski Soc. Coop. Coop. Ganadera del Valle de los Pedroches (COVAP) Ulma packaging Los objetivos específicos fueron: − − Aprovechar una corriente residual de la industria cervecera para obtener un extracto de naturaleza polifenólica con elevada capacidad antioxidante y antimicrobiana. Desarrollar nanoaditivos activos (y masterbatches1) basados en arcillas laminares y tubulares con capacidad de incrementar la barrera pasiva de los materiales plásticos convencionales y con capacidad de liberación controlada de componentes antimicrobianos basado en extractos y componentes naturales. 1 Masterbatches: Palabra inglesa que define una pequeña cantidad de una sustancia altamente concentrada que se añade a grandes cantidades de un compuesto estándar con el fin de producir un resultado deseado. 25 − − − − Incorporar agentes activos en envases. Dichas sustancias activas interaccionarán favorablemente con el alimento envasado conservando sus características sensoriales. Diseñar e implantar un sistema de fabricación industrial que permita incorporar los agentes activos en los materiales de envase para su comercialización. Evaluar el efecto de estos materiales de envase en el grado de oxidación y contaminación microbiana en productos cárnicos (porcino y vacuno). Desarrollar una máquina de envasado higienizable adaptada a los nuevos sistemas de envasado activo desarrollados. Actividad 6: Nuevas aplicaciones de fluidos supercríticos en la industria alimentaria. El objetivo de la Actividad 6 fue el desarrollo de procesos basados en la aplicación de CO2 a presión para la obtención de ingredientes alimentarios de valor añadido mediante el seguimiento de la influencia de las variables principales del proceso sobre el rendimiento y la calidad de los productos, antes y después del tratamiento, así como los posibles efectos sinérgicos entre las variables anteriores y las características de cada matriz seleccionada como objeto de estudio. En esta Actividad participaron dos empresas: • • Biosearchlife, S.A (antes Puleva Biotech, S.A) con el centro tecnológico AINIA. Soria Natural, S.A con el centro tecnológico AINIA. Los objetivos específicos fueron: − − Definir un proceso de reducción de la carga microbiológica en ingredientes sólidos en polvo, basado en la aplicación de CO2 a presión, previa evaluación del papel de las variables del proceso. Evaluar el papel de las variables de proceso así como los efectos sinérgicos de la presencia de componentes mayoritarios sobre la calidad y el rendimiento de la extracción supercrítica con el fin de definir un proceso de extracción supercrítico especialmente adaptado para la obtención de sustancias objetivo. 26 5. RESULTADOS POR ACTIVIDAD Y TAREA 5.1. ACTIVIDAD 1. ESTERILIZACIÓN POR ALTA PRESIÓN DE CONSERVAS VEGETALES, DE PESCADO Y MARISCO. 5.1.1. Tarea 1.1. Optimización de tratamientos por altas presiones isostáticas en alimentos-modelo con pescados y mariscos como componentes principales (Conservas Cuca, S.A – ANFACO-CECOPESCA e IRTA). Objetivos: El objetivo general de esta tarea fue estudiar la aplicación de la alta presión isostática en productos de la pesca y comparar los resultados con aquellos obtenidos mediante los tratamientos de conservación convencionales (esterilización térmica). Se plantearon los siguientes objetivos parciales agrupados en varias subtareas: 1. Recopilación y estudio de información de interés. Se pretendía obtener información relativa a los fundamentos científico-técnicos de las técnicas de conservación basadas en la aplicación de altas presiones, así como de las condiciones de aplicación de altas presiones en procesos de pasteurización aplicados a productos de diferente naturaleza ya existentes en el mercado. Esta información se complementó con el estudio de los diferentes equipos disponibles en el mercado para el tratamiento de esterilización por altas presiones en diferentes productos alimentarios y la valoración de las ventajas e inconvenientes de la utilización de cada uno de ellos en el tratamiento por altas presiones en productos de la pesca y el marisqueo. 2. Aplicación de la esterilización y pasteurización con altas presiones en los productos de la pesca y marisqueo existentes, habituales en otras presentaciones y sometidos a diferentes tratamientos. El objetivo de esta subtarea fue optimizar los tratamientos de pasteurización y esterilización por altas presiones en alimentos con base de pescado y marisco habituales en otras presentaciones. Para ello, se realizó en primer lugar una selección de los productos de la pesca y el marisqueo sobre los que se realizó el estudio y, posteriormente, se sometieron a diferentes tratamientos de altas presiones para lograr definir las condiciones óptimas de trabajo. Tras la optimización de todas las condiciones de tratamiento por altas presiones, se realizó la comparación de los productos resultado de este tratamiento con los productos tratados mediante métodos térmicos convencionales de esterilización y pasteurización. 3. Caracterización analítica. Se determinó el efecto de los tratamientos de altas presiones sobre alimentos con base de pescado y marisco en comparación con los métodos térmicos tradicionales de esterilización y pasteurización. También se evaluó la evolución de las características sensoriales, físicoquímicas, nutricionales y microbiológicas de los productos con base de pescado y marisco, comparándose estos datos con los correspondientes a los tratamientos térmicos convencionales. Además, se realizaron estudios para determinar la vida útil de los 27 productos tratados por altas presiones para establecer el periodo en el cual estos alimentos son aptos para su consumo. 4. Aplicación de esterilización y pasteurización con altas presiones sobre nuevos productos y/o preparaciones desarrollados en la planta de elaboración con base de pescado y marisco. El objetivo de esta subtarea fue desarrollar nuevas preparaciones a base de pescado y marisco empleando las técnicas de conservación basadas en la aplicación de altas presiones. Esta subtarea no se llevó a cabo en el marco de este proyecto porque se consideró necesario ampliar el estudio sobre la aplicación de altas presiones sobre productos tradicionales de la pesca y el marisqueo (subtarea 2). 5. Caracterización analítica de los nuevos productos sometidos a los citados tratamientos. El objetivo de esta subtarea fue conocer los cambios en la composición físico-química, parámetros organolépticos y microbiológicos sobre el pescado, así como de otras preparaciones de marisco, sometidos al tratamiento de pasteurización y esterilización con altas presiones. Al igual que en el apartado anterior (subtarea 4), esta tarea no se llevó a cabo porque se consideró necesario ampliar el estudio sobre la aplicación de altas presiones sobre productos tradicionales de la pesca y el marisqueo (subtarea 2). 6. Elaboración de las conclusiones y valoraciones finales. El objetivo de esta tarea fue valorar los aspectos característicos de la aplicación de las altas presiones en los productos de la pesca y el marisqueo seleccionados para este estudio. A partir de los resultados obtenidos en la caracterización analítica de los productos tratados por altas presiones, se valoró el efecto de las altas presiones en las características nutricionales, físico-químicas, microbiológicas y organolépticas. Además, también se determinó el efecto de las altas presiones en la vida útil de los productos tratados con esta técnica. Resumen ejecutivo: Para la realización de los estudios de aplicación de altas presiones en productos procedentes de la pesca y el marisqueo, se procedió a la elección de los productos a estudiar en función de los siguientes criterios: • Berberecho (Marisco): Posee un elevado valor comercial y es muy apreciado por el consumidor por sus cualidades organolépticas. • Atún claro (Pescado): Es la especie más ampliamente extendida en el mercado de los pescados procesados. Las pruebas que se realizaron se describen a continuación: • Berberechos al natural: – Apertura de berberechos mediante el método habitual en industria (al vapor o cocidos en agua) frente a la apertura por aplicación de altas presiones. 28 – Ensayos con diferentes tipos de envasado: o o • Barqueta al vacío tipo skin con berberechos en media concha. Bolsas selladas térmicamente con berberecho en salmuera. Finalmente se seleccionó este envasado por ser más interesante a nivel comercial. – Ensayos con distintos tratamientos de 600MPa/5min/7ºC y 600MPa/10 min/7ºC. – Ensayos con diferentes tratamientos de esterilización/pasteurización térmica convencional: 100ºC/10 min y 100ºC/30 min. altas presiones: ciclo de Atún en salsa de tomate (envasado en barqueta al vacío tipo skin). – Ensayos iniciales con distintas salsas (tomate y queso) para determinar la composición óptima de la misma frente a un tratamiento de altas presiones. Finalmente se escogió la salsa de tomate por ser la que presentó mejor estabilidad frente a los distintos tratamientos. – Ensayos con atún crudo y atún cocido: Se seleccionó el atún cocido por presentar mejores resultados a nivel organoléptico. – Ensayos con distintos tratamientos de altas presiones: ciclo de 600MPa/5 min/7ºC y 600MPa/10 min/7ºC. – Ensayos con diferentes tratamientos de esterilización/pasteurización térmica convencional: 100ºC/10 min, 100ºC/30 min., 90ºC/10 min y 90ºC/5 min. – Esterilización térmica industrial (tratamiento de conservación térmica convencional): 110ºC/105 min. y 110ºC / 75 min. En ambos casos (berberechos y atún en salsa de tomate) se realizaron unas pruebas preliminares en las instalaciones del IRTA-CENTA para seleccionar el envase más adecuado para cada tipo de tratamiento y producto. Una vez obtenidos los productos se realizó su caracterización en las instalaciones de ANFACO-CECOPESCA: • Evaluación de los distintos parámetros nutricionales. • Estudio de propiedades organolépticas (color, olor, sabor, etc.) y reológicas (textura). • Estudio de características microbiológicas (enterobacterias, coliformes totales, microorganismos aerobios mesófilos, Escherichia coli, Staphilococcus aureus, Salmonella, Listeria, psicrófilos). • Estudio de vida útil (análisis organoléptico y microbiológico). A partir de los resultados obtenidos, se determinó cuál fue el efecto de los tratamientos de altas presiones sobre alimentos con base de pescado y marisco en comparación con los métodos térmicos tradicionales de esterilización y pasteurización. Para ello, se realizó la 29 caracterización de los productos inmediatamente después de su tratamiento a nivel nutricional, organoléptico, microbiológico y físico-químico. También se evaluó la evolución de las características organolépticas y microbiológicas de los productos con base de pescado y marisco a lo largo de su vida útil, comparándose estos datos con los correspondientes a los tratamientos térmicos tradicionales Finalmente, a partir de los resultados obtenidos se diseñó un tratamiento de altas presiones idóneo para preservar la calidad organoléptica de los productos tratados (en este caso, berberechos y filete de atún en salsa de tomate) así como para que éstos se mantengan de forma adecuada durante el periodo de vida útil del alimento. Resultados: A continuación se detallan los resultados obtenidos en ambos productos. Preparación de las muestras • • Atún claro en salsa de tomate: Se trataron las siguientes muestras con “Atún claro en salsa de tomate”: – Muestra 1 (HPP5): Barqueta plástica termosellada al vacío con film con tratamiento 600MPa/5 min/7ºC. – Muestra 2 (HPP10): Barqueta plástica termosellada al vacío con film con tratamiento 600MPa/10 min/7ºC. – Muestra 3 (Tratamiento 5 min.): Barqueta plástica termosellada al vacío con film con tratamiento térmico 110ºC / 5 min. – Muestra 4 (Tratamiento 10 min.): Barqueta plástica termosellada al vacío con film con tratamiento térmico 110ºC / 10 min. – Muestra 5 (Conserva): Envase de hojalata con tratamiento térmico 110ºC, 105 min. Berberechos al Natural: Se realizaron las siguientes muestras con “Berberechos al Natural”: – Muestra 1 (HPP5): Bolsa plástica termosellada al vacío con tratamiento 600MPa/5 min/7ºC. – Muestra 2 (HPP10): Bolsa plástica termosellada al vacío con tratamiento 600MPa/10 min/7ºC. – Muestra 3 (Tratamiento 5 min.): Bolsa plástica termosellada al vacío con tratamiento térmico 110ºC / 5 min. – Muestra 4 (Tratamiento 10 min.): Bolsa plástica termosellada al vacío con tratamiento térmico 110ºC / 10 min. – Muestra 5 (Conserva): Envase de hojalata con tratamiento térmico 110ºC, 105 min. 30 Las muestras se conservaron en condiciones de refrigeración (0-4ºC) durante la realización de los diferentes estudios. Caracterización de los productos obtenidos Análisis de textura (prueba de cizallamiento y extrusión) • Atún Claro en Salsa de Tomate: Los resultados de la prueba de cizallamiento muestran que no existen diferencias significativas en este parámetro para las muestras estudiadas (Figura 5.1.1). Figura 5.1.1 Resumen de resultados de cizallamiento obtenidos para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “atún en salsa de tomate”. Sin embargo, en el parámetro cizallamiento-extrusión sí se observan diferencias significativas entre las diferentes muestras (Figura 5.1.2). De acuerdo a los resultados, se observan diferencias significativas en este parámetro entre la muestra 5 (conserva) y las muestras 1, 3 y 4, que forman un grupo homogéneo entre ellas. El tratamiento 2 se sitúa entre ambos, pudiendo formar grupo tanto con el tratamiento 5 como con el conjunto formado con los tratamientos 1, 3 y 4. Figura 5.1.2. Resumen de resultados de cizallamiento-extrusión para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “atún en salsa de tomate”. 31 • Berberechos al Natural: Los resultados obtenidos en la prueba de cizallamiento (Figura 5.1.3) muestran que existen diferencias significativas para los diferentes tratamientos, de modo que es posible establecer tres grupos homogéneos de tratamientos: tratamiento 5 (conserva); tratamientos 1, 2 y 4; y tratamiento 3. Figura 5.1.3. Resumen de resultados de cizallamiento para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “berberechos al natural”. En cuanto al parámetro cizallamiento-extrusión, los resultados también muestran diferencias significativas entre las muestras estudiadas (Figura 5.1.4) de modo que éstas pueden clasificarse en dos grupos: muestra 5 (conserva) y muestras 1, 2, 3 y 4. Figura 5.1.4. Resumen de resultados de cizallamiento-extrusión para los distintos tratamientos de conservación aplicados al producto “berberechos al natural”. Ensayo de clasificación por ordenación • Atún Claro en Salsa de Tomate: Los resultados obtenidos en la prueba de ordenación para todos los atributos analizados (aspecto, color, olor, textura y sabor) mostraron diferencias significativas en el aspecto general entre la muestra 5 (conserva) y las restantes muestras analizadas. 32 • Berberechos al Natural: – Atributo: Aspecto, color y textura. Los resultados obtenidos en la prueba de ordenación para estos atributos mostraron la existencia de diferencias significativas entre la muestra 5 (conserva) y las restantes muestras analizadas. – Atributo: olor. Los resultados obtenidos mostraron diferencias significativas entre las muestras 1 y 2 (tratamientos HPP) y las muestras 3, 4 y 5 (tratamientos térmicos). – Atributo: sabor. Los resultados obtenidos mostraron la existencia de diferencias significativas entre las muestras 1, 3 y 4 y las muestras 2 y 5. Perfil nutricional de los productos tratados • Atún Claro en Salsa de Tomate: Se estudiaron los siguientes parámetros: humedad, proteína, grasa, ceniza, carbohidratos totales, valor energético total, valor energético de la grasa, fósforo total, vitamina B3, vitamina B12, y selenio. Tabla 5.1.1. Resumen de resultados de valores nutricionales obtenidos en productos elaborados a base de “atún en salsa de tomate” sometidos a distintos tratamientos de conservación. 33 Los resultados obtenidos (Tabla 5.1.1) muestran que las muestras 1, 2, 3 y 4 presentan un perfil nutricional similar. Este grupo de muestras difiere de los resultados presentados por la muestra 5, que presenta diferencias importantes en el nivel de humedad, contenido de grasa y valores energéticos (total y de la grasa). • Berberechos al Natural: Se estudiaron los siguientes parámetros: humedad, proteínas, grasa, ceniza, carbohidratos totales, valor energético total, valor energético de la grasa, fósforo total, vitamina B3 y hierro. Tabla 5.1.2. Resumen de resultados de valores nutricionales obtenidos en productos a base de “berberechos al natural” sometidos a distintos tratamientos de conservación. Los resultados obtenidos (Tabla 5.1.2) muestran que, análogamente a lo observado para el producto “Atún Claro en Salsa de Tomate”, los valores nutricionales son similares para las muestras 1, 2, 3 y 4, mientras que la muestra 5 (conserva) presenta valores diferentes para los parámetros: humedad, valor energético total y vitamina B3. Estudio de vida útil • • Atún Claro en Salsa de Tomate: Los estudios de vida útil mostraron estabilidad organoléptica y microbiológica durante 54 días. A partir de este punto los resultados de los análisis microbiológicos ofrecieron resultados que hicieron sospechar de la presencia de microorganismos patógenos. Se realizaron los correspondientes análisis de aislamiento e identificación de los mismos, comprobándose que efectivamente se trataba de patógenas. Consecuentemente, se continuó solamente con los análisis microbiológicos, comprobándose que los parámetros microbiológicos analizados fueron estables para todas las muestras durante 100 días. Berberechos al Natural: Los estudios de vida útil mostraron posible presencia de patógenos en el día 0 de análisis, por lo que solamente se realizaron análisis 34 organolépticos este día. Los valores obtenidos para los parámetros microbiológicos muestran estabilidad durante 33 días para las muestras 1, 2, 3 y 4. Conclusiones: • • Atún Claro en Salsa de Tomate: – La textura de las muestras tratadas (análisis de cizallamiento y cizallamientoextrusión) es similar entre los productos tratados mediante altas presiones y pasteurización térmica tradicional, pero en el caso de productos en conserva (esterilización térmica tradicional) la textura es claramente diferente. – Análogamente, las características organolépticas (estudio de ordenación) son claramente similares entre los productos tratados mediante altas presiones y pasteurización térmica tradicional, mientras que en el caso de productos en conserva (esterilización térmica tradicional) es claramente diferente. – En cuanto a los parámetros nutricionales, ocurre exactamente lo mismo: los valores son similares para los productos tratados mediante altas presiones y pasteurización térmica tradicional, mientras que en el caso de los productos en conserva (esterilización térmica tradicional), existen diferencias significativas para los parámetros: humedad, contenido de grasa y valores energéticos (total y de la grasa). – Los estudios de vida útil muestran que este producto es apto para el consumo durante 54 días, en los que se ha verificado que presenta estabilidad organoléptica y microbiológica. A partir de este momento el producto podría presentar problemas para su consumo debido a la posibilidad de la presencia de patógenos, aunque se ha verificado que mantiene estabilidad para los parámetros microbiológicos analizados durante 100 días. – Los resultados obtenidos muestran que los tratamientos por altas presiones dan lugar a productos con vidas útiles similares a los obtenidos mediante tratamientos térmicos tradicionales. Los resultados obtenidos muestran que ambos tratamientos son similares en cuanto a conservación de las propiedades organolépticas, nutricionales y físico-químicas (textura) de los productos; asimismo, ambos tratamientos proporcionan vidas útiles similares al producto tratado. Berberechos al Natural: – La textura de las muestras tratadas (análisis de cizallamiento y cizallamientoextrusión) es similar entre los productos tratados mediante altas presiones y pasteurización térmica tradicional, pero en el caso de productos en conserva (esterilización térmica tradicional) la textura es claramente diferente. – Aunque con algunas excepciones, las características organolépticas (estudio de ordenación) son similares entre los productos tratados mediante altas presiones y pasteurización térmica tradicional, mientras que en el caso de productos en conserva (esterilización térmica tradicional) es claramente diferente. 35 – En cuanto a los parámetros nutricionales, los valores son similares para los productos tratados mediante altas presiones y pasteurización térmica tradicional, mientras que en el caso de los productos en conserva (esterilización térmica tradicional), existen diferencias significativas para los parámetros: humedad y valor energético total. – Los estudios de vida útil muestran que este producto es apto para el consumo durante 2 días, en los que se ha verificado que presenta estabilidad organoléptica y microbiológica. A partir de este momento el producto podría presentar problemas para su consumo debido a la posibilidad de la presencia de patógenos, aunque se ha verificado que mantiene estabilidad para los parámetros microbiológicos analizados durante 33 días. – Los resultados obtenidos muestran que los tratamientos por altas presiones dan lugar a productos con vidas útiles similares a los obtenidos mediante tratamientos térmicos tradicionales. Los resultados obtenidos muestran que ambos tratamientos son similares en cuanto a conservación de las propiedades organolépticas, nutricionales y físico-químicas (textura) de los productos; asimismo, ambos tratamientos proporcionan vidas útiles similares al producto tratado. 5.1.2 Tarea 1.2. Optimización de la conservación de cremas vegetales y platos preparados a base de verduras (Grupo Riberebro – CNTA- Laboratorio del Ebro). Objetivos: El objetivo general de esta tarea fue preparar productos vegetales comercialmente estériles y su mantenimiento posterior a temperatura ambiente, mediante la sustitución de la esterilización en autoclave por tratamientos de altas presiones. Teniendo en cuenta la flora bacteriana (formas esporuladas) predominante en la mayoría de los productos vegetales, se hace necesario el uso combinado de las altas presiones con otro tratamiento tecnológico que permita obtener efectos sinérgicos entre ambos. La combinación de alta presión y temperaturas moderadas se ha revelado como una tecnología efectiva en el control de estos microorganismos, mejorando sensiblemente tanto la calidad nutricional como la calidad sensorial de los mismos (por ejemplo, inactivando los enzimas que intervienen en las reacciones de degradación, pardeamiento, oxidación y otras que afectan sensiblemente a la calidad de estos productos vegetales). Para alcanzar este objetivo global, se dividió la tarea en distintas subtareas con los siguientes objetivos técnicos: • Formulación y pretratamiento de alimentos modelo. El objetivo fue evaluar qué tratamientos podían aplicarse previamente a los tratamientos de altas presiones para mejorar el efecto de los mismos. Los vegetales objeto de estudio fueron: – Verdura de hoja: acelga y espinaca – Verdura de tallo: cardo – Legumbres: guisantes, lentejas 36 – – Champiñón entero y laminado Crema: de champiñón, de verduras y de zanahoria Así pues, se evaluaron las características físico-químicas, microbiológicas y nutricionales de los distintos productos y de las materias primas, así como el diagrama de flujo tradicional en la elaboración de los mismos. Estos datos fueron la base para poder realizar un diseño experimental óptimo y contar con unos valores de control que permitieran evaluar objetivamente el efecto del tratamiento posterior de altas presiones. Además, se evaluaron los posibles pretratamientos a realizar, previos a la aplicación de las altas presiones, para mejorar el efecto de dichos tratamientos y obtener un producto óptimo. • • • Optimización del tratamiento por altas presiones. El objetivo principal fue conocer el comportamiento de los distintos vegetales y cremas objeto de estudio ante el tratamiento de altas presiones (sólo o en combinación con temperatura) y optimizar dichos tratamientos hasta alcanzar los objetivos de seguridad y calidad establecidos. Para la validación de los alimentos modelo y como consecuencia de los resultados obtenidos en la subtarea anterior se decidió continuar trabajando únicamente con crema/puré y champiñón. El objetivo fue validar los resultados obtenidos en las subtareas anteriores comprobando que los procesos seleccionados permitían una adecuada higienización (análisis microbiológicos) y unas correctas características fisicoquímicas y sensoriales para la comercialización del producto. En los trabajos anteriores quedó patente la necesidad de un pretratamiento del material vegetal antes de ser sometido al proceso de esterilización por alta presión. En la mayoría de las conservas vegetales es necesario un pretratamiento de los mismos previo al tratamiento de esterilización por calor. Este tratamiento previo permite estabilizar el color e higienizar el producto y sensibilizar a los microorganismos para el tratamiento posterior. Estudio de pretratamientos alternativos por escaldado por microondas. El objetivo fue la optimización del tratamiento por altas frecuencias como alternativa al escaldado en los productos champiñón y alcachofa. Resumen ejecutivo: En primer lugar, se realizó el diseño de las formulaciones y del proceso de los alimentos modelo. Para ello, se realizaron numerosas pruebas a nivel de planta piloto variando las concentraciones de los distintos ingredientes, así como los parámetros de proceso de las distintas etapas, forma de mezclado y batido, tiempos y temperaturas, etc.. Tras el diseño se efectuó la evaluación de las características microbiológicas (aerobios totales, enterobacterias y coliformes) y sensoriales (apariencia y textura) de los distintos productos, tanto de la materia prima, como de los productos finales tras el procesado industrial. También se realizaron estudios de aplicación de distintos pretratamientos en el caso de los vegetales modelo tipo hoja, tallo y legumbres. Mediante la aplicación de estos pretratamientos se buscaba acondicionar la materia prima con el fin de favorecer la inactivación de las enzimas responsables del deterioro de la calidad del producto y, por otro lado sensibilizar a los microorganismos frente a un tratamiento posterior por alta presión. 37 En todos los casos, se decidió aplicar un escaldado por inmersión en agua caliente. Se realizaron distintas pruebas variando la intensidad del tratamiento (tiempo y temperatura) y evaluando el efecto higienizante e inactivante del escaldado, a la vez que se estudió el efecto de dicho tratamiento sobre el color y la textura del producto (se buscaba mantener el producto lo más similar posible al producto fresco de partida). Para incrementar el efecto de los pretratamientos, se valoró la adición de ácidos orgánicos, con el objetivo de disminuir el pH de los alimentos, puesto que los pHs bajos actúan directamente inhibiendo el crecimiento de determinados microorganismos e indirectamente disminuyendo la resistencia a las altas presiones y al calor de los microorganismos. Además, al reducir el pH, se inhiben o retardan diferentes reacciones enzimáticas y no enzimáticas, lo cual permite evitar pardeamientos y oxidaciones no deseados. Se usaron distintos ácidos orgánicos (cítrico, ascórbico y láctico) que se adicionaron de tres formas: directamente en el agua de escaldado, mediante la adición directa sobre el producto antes del envasado y una combinación de ambos. En todos los casos se realizó un recuento inicial sobre el producto en fresco y en el producto después la adición de los ácidos orgánicos y del posterior escaldado. Posteriormente, se optimizó el tratamiento por altas presiones. Los productos se prepararon según las condiciones obtenidas anteriormente y se realizó un análisis microbiológico y de aspecto inmediatamente después del tratamiento por alta presión. A continuación, las muestras se envasaron en bolsas de plástico termoselladas al vacío y se sometieron a distintos tratamientos de alta presión y de combinación alta presión y temperatura, tanto en tratamientos de un solo ciclo como en tratamientos de varios ciclos de alta presión. Los tratamientos de alta presión utilizada fueron siempre superiores a 600 MPa y, en el caso de las temperaturas variaron entre los 45 y los 90 ºC. Los tiempos de tratamiento nunca fueron superiores a los 15 minutos ni en los tratamientos de un solo ciclo, ni en los tratamientos de varios ciclos. Una vez realizados los distintos tratamientos ensayados, se realizó un nuevo recuento microbiano (aerobios mesófilos totales), así como estudios de estabilidad de la conserva, para determinar y evaluar el efecto higienizante de los distintos tratamientos. Además se realizó un estudio de las características de calidad sensorial del producto tratado (aspecto y textura). Por último, se procedió a la validación de los resultados obtenidos en las subtareas anteriores. Esta tarea se realizó sólo en las cremas de verduras ya que fue en este tipo de producto dónde se consiguieron los mejores resultados de esterilidad comercial y mantenimiento de las características sensoriales (similares a las del producto recién cocinado). Para ello, las cremas se sometieron al tratamiento que mejores resultados había mostrado y se llevó a cabo una: • • Caracterización microbiológica: recuento de mesófilos y termófilos aerobios y anaerobios, bacterias mesófilas sulfitorreductoras y estudios de estabilidad. Caracterización sensorial: se realizó un análisis sensorial con un panel de cata formado por técnicos de Gutarra y del CNTA. Los parámetros evaluados fueron 38 apariencia (intensidad de color, defectos), olor (intensidad de olor, defectos), sabor (intensidad de sabor, defectos) y textura (viscosidad, defectos) y valoración global. Durante la realización del estudio de pretratamientos alternativos mediante el escaldado por microondas, se estudió la eficacia de la tecnología en dos productos distintos: champiñón y alcachofa. Los estudios se realizaron en una primera fase con un microondas de laboratorio y, posteriormente, con un equipo microondas semiindustrial. En cada producto se aplicó una batería de tratamientos, variando los parámetros de tratamiento: potencia, tiempo de tratamiento, condiciones del entorno (vapor de agua, inmersión en agua). Tras la aplicación de cada tratamiento se evaluaron los siguientes parámetros: • • • Color y Firmeza Recuento de mesófilos aerobios Actividad polifenoloxidasa Después de la evaluación inicial, el producto se procesó para la consecución de una conserva convencional mediante un tratamiento térmico en autoclave. Tras el procesado se volvió a realizar un análisis de los siguientes parámetros de calidad: • • Peso neto, pH, calibre, color, olor, textura y defectos Estabilidad microbiológica de productos conservados a temperatura ambiente La evaluación de los resultados permitió seleccionar los mejores tratamientos. Con ellos se realizaron los correspondientes estudios de vida útil, en los que se estudió la evolución de la calidad a lo largo del tiempo de almacenamiento. En el caso de alcachofa no se realizaron los estudios de vida útil porqué no se alcanzaron los objetivos de calidad establecidos. Resultados: A continuación se muestran los resultados obtenidos en el estudio de la aplicación de las altas presiones en combinación con calor para el tratamiento de vegetales. En el caso de vegetales tipo hoja (acelga y espinaca), se definió como pretratamiento óptimo el escaldado en agua a 90 ºC durante 5-6 min. En acelga y en espinaca, se consiguió la inactivación de la flora microbiana por debajo del límite de detección (< 10 ufc/g) tanto en el tratamiento en que se aplicó un solo ciclo de presión (700 MPa/90 ºC/10 min) como en el que se aplicaron varios ciclos de alta presión (700 MPa/temperatura> 60 ºC/15 min). Tanto las acelgas como las espinacas presentaron un ligero pardeamiento tras el tratamiento, que fue mayor conforme aumentó el tiempo y la temperatura de tratamiento. No obstante, la degradación del color verde característico no fue muy marcada y, en todo caso, fue significativamente menor que la degradación que sufrieron estos productos por esterilización térmica (Figuras 5.15 y 5.1.6). 39 Acelga escaldada Espinaca escaldada 700MPa/10min/ 90 ºC 700MPa/10min/ 90 ºC Figura 5.1.5. Aspecto de las acelgas y las espinacas escaldadas y tratadas a 700 MPa/10 min a 90 ºC. 700 MPa/5+5+5 min./70 ºC 700 MPa/5+5+5+5 min./70 ºC Figura 5.1.6. Aspecto de la acelga tratada a 700 MPA durante 3 x (5min) y 4 x (5 min) a 70 ºC. En el caso de los guisantes, se definió como pretratamiento óptimo el escaldado en agua a 95 ºC durante 5-6 min. La aplicación de tratamientos de alta presión demostró, tal y como ocurre en la acelga y la espinaca, que cuando se utiliza un solo ciclo de alta presión, es necesario aplicar, al menos 700 MPa, a 90 ºC, durante 10 minutos para conseguir la inactivación de la población microbiana deseada. En la Figura 5.1.7 se observa como el tratamiento a 90 ºC produce una pérdida de la tonalidad verdosa típica del guisante, aunque es sensiblemente mejor que la tonalidad del producto en conserva. Guisante escaldado 700 MPa/10min/ 90 ºC Figura 5.1.7. Aspecto del guisante tratado a 700 MPa durante 10 minutos a 90 ºC. 40 En el caso de aplicar varios ciclos de alta presión, fue necesario aplicar 3-4 ciclos de 5 minutos cada uno, de 700 MPa a 60-70 ºC para conseguir la inactivación deseada (<10 ufc/g). Por otro lado, la pérdida del color verde fue más acusada a medida que aumentó la temperatura y el número de ciclos (Figura 5.1.8). Guisante escaldado 700MPa/5+5+5min/ 60 ºC 700MPa/5+5+5+5min/ 60 ºC Figura 5.1.8. Aspecto del guisante tratado a 700 Mpa durante 3 x (5min) y 4 x (5 min) a 60 ºC. En el caso de las lentejas fue necesario aplicar un tratamiento térmico elevado previo al tratamiento de altas presiones para conseguir el ablandamiento del producto. Por este motivo, y por el poco valor añadido del producto, se decidió no continuar trabajando con lentejas. En el caso de vegetales tipo tallo (cardo), el pretratamiento seleccionado fue, una vez más el escaldado, en este caso, 10 minutos a 85ºC. Los tratamientos preliminares de alta presión no consiguieron reducir por completo su población microbiana. Además, no se consiguió evitar el pardeamiento de las muestras durante su conservación en refrigeración. Por otra parte, la textura del producto después de los tratamientos de alta presión no fue la adecuada. En este caso, sería necesario una fase previa más intensa de cocinado para conseguir que el producto esté listo para consumir. Por todos estos motivos se decidió no continuar con el estudio en este producto. En el caso de las cremas (crema de verduras, crema de zanahoria y crema de champiñón), el pretratamiento de acondicionado se basó en el cocinado de las propias cremas. Las condiciones mínimas de proceso para conseguir la inactivación de la carga microbiana por debajo del límite de detección (< 10 ufc/g) fueron 800 MPa/ 80 ºC/5-10 minutos. Los estudios de estabilidad de conservas realizados en la fase de validación demostraron que las muestras fueron estables microbiológicamente. Asimismo, un ensayo realizado en crema de champiñón, inoculada con C. sporogenes en una concentración de 107 ufc/ml, demostró que el tratamiento combinado conseguía la inactivación de este microorganismo por debajo del límite de detección (< 10 ufc/ml). En lo que respecta a la calidad sensorial, los resultados obtenidos fueron muy satisfactorios: 41 • en la crema de verduras, se mantuvo su color verde característico, muy similar a la crema sin tratamiento de conservación y sensiblemente mejor que la crema esterilizada por calor, aunque se observó un ligero pardeamiento a medida que se aumentó el tiempo de tratamiento (Figura 5.1.9). El olor, el sabor y la textura fueron similares a los de la crema recién cocinada. Crema control Crema por HPT Crema por HPT Crema comercial Crema comercial Figura 5.1.9: Aspecto de una crema de verduras sin tratamiento (control), de una crema tratada mediante altas presiones y temperatura (HPT) a 800MPa/80 ºC durante 10 minutos y de una crema comercial tratada por calor. • en el caso de la crema de champiñón las muestras tratadas mostraron un aspecto similar al de la crema no tratada, independientemente del tiempo de tratamiento (Figura 5.1.10). El aspecto fue mejor que el que presentaron las muestras sometidas al tratamiento térmico convencional. El olor, el sabor y la textura se mantuvieron como los que presenta la crema recién cocinada. Incluso, se apreció una mayor intensidad de flavor a champiñón en el producto tratado por altas presiones. Crema control Crema comercial Crema Crema HPT Figura 5.1.10: Aspecto de una crema de champiñón sin tratamiento (control), de una crema tratada mediante altas presiones y temperatura (HPT) a 800MPa/80 ºC durante 15 minutos y de una crema comercial tratada por calor. • la crema de zanahoria tratada por alta presión y temperatura, presentó un color ligeramente más oscuro que el recién elaborado, con un tono naranja más intenso. Este cambio no se consideró como defecto (Figura 5.1.11). 42 • la crema de zanahoria tratada por HPT, presentó un color más oscuro que el recién elaborado, con un tono naranja más intenso, aunque no llegó a ser pardo, por lo que no se consideró defecto. (Figura 5.1.11). Crema control Crema HPT Crema comercial Figura 5.1.11: Aspecto de una crema de zanahoria sin tratamiento (control), de una crema tratada mediante altas presiones y temperatura (HPT) a 800MPa/80 ºC durante 15 minutos y de una crema comercial tratada por calor. Además, se observó una mayor intensidad del sabor dulce de la zanahoria en el producto tratado por alta presión. La valoración fue mejor que la del producto convencional. En el caso del champiñón, en ninguno de los tratamientos ensayados se alcanzó la estabilidad de las muestras. Los niveles de inactivación que se consiguieron, en algunos casos, se situaron por debajo del límite de detección, sin embargo, los estudios de estabilidad demostraron la alteración de las muestras lo cual era indicativo de una insuficiente esterilización. En el caso del champiñón, el tratamiento más eficaz fue seleccionado en base a los resultados obtenidos en los ensayos a escala laboratorio y en la posterior adaptación a condiciones preindustriales. Este tratamiento consistió en una fase de calentamiento a 11000 W durante 2 minutos 30 segundos y una de mantenimiento a 2000 W durante 2 minutos. Los efectos de este tratamiento sobre el producto fueron: – – – – Recuentos microbiológicos similares a los obtenidos en el escaldado convencional. Se consiguió una inactivación efectiva de la polifenoloxidasa. Color y textura similares a los de productos sometidos a escaldado convencional. Similar pérdida de peso. A lo largo de la vida útil del producto, la evolución de los parámetros de color (Figura 5.1.12) y firmeza fue similar en ambos tratamientos, escaldado por microondas y escaldado convencional. 43 TRATADO MO SEMANA 2 ESCALDADO SEMANA 4 SEMANA 6 Figura 5.1.12: Aspecto de los champiñones escaldados por microondas o por el método tradicional, a lo largo de 6 semanas de almacenamiento. En el caso de la alcachofa, el tratamiento más eficaz, seleccionado después de los estudios a escala de laboratorio, fue de 1000 W durante 2 minutos 20 segundos hasta alcanzar 95 ºC y mantenimiento a 500 W durante 14 minutos. Con este tratamiento, los resultados sobre el producto fueron: – – – Recuentos microbiológicos similares a los obtenidos mediante el escaldado convencional. Inactivación de la polifenoloxidasa. Textura ligeramente más firme. Sin embargo, en la adaptación a escala preindustrial, no se consiguió evitar totalmente el pardeamiento del interior de la alcachofa con ninguno de los tratamientos aplicados (Figura 5.1.13). Contrariamente, la aplicación del tratamiento potenció el sabor propio de la alcachofa, cualidad que se valoró positivamente. 44 TRATAMIENTO 1 TRATAMIENTO 2 TRATAMIENTO 3 TRATAMIENTO 4 TRATAMIENTO 5 TRATAMIENTO 6 ESCALDADA Figura 5.1.13: Aspecto de las alcachofas tras los tratamientos en el túnel semi industrial. Conclusiones: En esta tarea el objetivo principal fue el estudio del uso de la Alta Presión como método de esterilización (para almacenamiento a temperatura ambiente) de una amplia gama de productos vegetales: • • • • • Verdura de hoja: acelga y espinaca Verdura de tallo: cardo Legumbres: guisante, lentejas Champiñón entero y laminado Cremas: de champiñón, de verduras y de zanahoria Como se deduce de los resultados obtenidos en los distintos productos y detallados anteriormente, la aplicación combinada de alta presión y temperatura proporciona un efecto higienizante mayor que el obtenido con un tratamiento sólo de alta presión. De hecho es necesaria la aplicación de temperaturas elevadas (90 ºC) para inactivar la flora microbiana presente en el producto y estabilizar el producto a temperatura ambiente. Esta temperatura aunque elevada, es inferior a las temperaturas utilizadas habitualmente en los 45 procesos de esterilización térmica, lo que confiere al producto unas características sensoriales mejores que las del producto esterilizado por calor. Por otro lado, la aplicación de ciclos de alta presión y temperatura, no tan sólo reduce la población esporulada, sino que permite la aplicación de temperaturas más bajas. Los resultados obtenidos demuestran que un tratamiento a 700 MPa de 3 ciclos de 5 minutos a 60ºC destruye la flora microbiana y permite mantener mejor las características sensoriales del producto. Se ha demostrado, por tanto, que es posible conseguir la esterilidad comercial de determinados productos vegetales con la combinación de alta presión y temperatura, obteniendo una calidad sensorial diferenciada respecto a los productos que se comercializan actualmente. Otro de los objetivos de la actividad fue evaluar el tratamiento de microondas como alternativa al escaldado tradicional de verduras. Los resultados obtenidos varían según el producto estudiado. En el caso del champiñón, el escaldado por microondas obtuvo resultados satisfactorios desde el punto de vista microbiológico y sensorial, alcanzándose calidades similares a las obtenidas con el escaldado convencional. El valor añadido de la tecnología podría, por tanto, ser, no por la mejora del producto, sino por la reducción del consumo de agua durante el proceso. En lo que respecta a la alcachofa, no se consiguieron resultados satisfactorios ya que no se consiguió inhibir la elevada capacidad oxidativa sin deteriorar la calidad. Para este tipo de productos sería necesario utilizar un sistema mixto adaptado, es decir, basado en la utilización de microondas y túnel de vapor tradicional. 46 5.2. ACTIVIDAD 2. PASTEURIZACIÓN POR ALTA PRESIÓN. COMBINACIÓN DE LA ALTA PRESIÓN CON OTRAS TÉCNICAS DE CONSERVACIÓN El principal objetivo de la actividad 2 fue el de impulsar el uso de la tecnología de altas presiones en las empresas agroalimentarias ya que, a pesar de las innumerables ventajas de la tecnología, éstas se mostraban (hace unos años) aún reticentes a la incorporación de esta tecnología en las líneas de producción. Se plantearon una serie de pautas para conseguir una tecnología más atractiva, aplicable y ventajosa para el sector agroalimentario. 5.2.1 Tarea 2.1. Investigación de las condiciones de presurización ultrarápida (N.C.Hyperbaric, S.A, IRTA, UBU e ITCL). Objetivos: Los principales objetivos de esta tarea fueron: • Conseguir una mayor capacidad productiva de los equipos de alta presión aumentando el volumen útil de los mismos y mejorando su fiabilidad. • Estudiar los efectos de la tecnología en diferentes matrices alimentarias. En función de estos objetivos se definieron las subtareas que se exponen a continuación y que corresponden a cada uno de los cuatro años de duración del proyecto: – • Mejorar la capacidad productiva aumentando el diámetro del cilindro y prediseño. o Diseñar un nuevo modelo de máquina con mayor diámetro interno, atendiendo principalmente a aspectos como dimensionamiento básico de componentes estructurales del equipo. o Determinar la influencia del procesado por alta presión de diferentes matrices alimentarias para poder comparar posteriormente con productos procesados mediante altas presiones ultra-rápidas (APUR). Mejorar la capacidad productiva aumentando el diámetro del cilindro y optimización. o En base a los resultados obtenidos en la subtarea 1, se optimizó el diseño y se construyó el primer prototipo de 420L. o • En el campo de aplicaciones se continuó con el estudio del efecto de la tecnología de alta presión en otras matrices alimentarias, ampliando la base de datos disponible. Mejorar la capacidad productiva aumentando el diámetro del cilindro y construcción. o Mejorar la fiabilidad del equipo de 420L (investigación de nuevos materiales) y construcción de un equipo de laboratorio APUR. o Iniciar la investigación del efecto del procesado APUR de diferentes matrices alimentarias. 47 • Mejorar la capacidad productiva por medio del ascenso ultra-rápido de la presión. o Mejorar la capacidad productiva del equipo APUR (Investigación de nuevos materiales y soluciones). Estudio de viabilidad del equipo. o Caracterizar los efectos del procesado de diferentes matrices alimentarias mediante APUR y comparación de los resultados con los obtenidos mediante el procesado por alta presión clásica. Resumen ejecutivo: Inicialmente se realizó el diseño y construcción de un nuevo modelo de máquina denominado Wave 6000/420. Figura 5.2.1: Dibujo 3D de la máquina Wave 6000/420 En este modelo se incrementó su volumen útil en relación al mayor modelo existente en dicho momento (Wave 6000/300) aumentando su diámetro interior. En la siguiente tabla se muestran las diferencias entre el nuevo modelo y el ya existente: Tabla 5.2.1 Comparación de las características de los equipos NCHyperbaric W 6000/300 W 6000/420 Presión de diseño 6300 bar 6600 bar Volumen 300 litros 420 litros Diámetro interior 300 mm 380 mm Longitud vasija 4500 mm 4000 mm Peso estimado 62Tn 72Tn 48 Con este nuevo equipo se alcanza a una gran g optimización ya quue con tan ssólo un 16% % más de peeso se conssigue un 40% más de volumen v (yy alrededor de d un 55% de volumeen útil estim mado). En la l siguiente figura se muestra m la comparación entre las dimension nes de ambo os equipos: Figura 5.2.2. 5 Comparaciónn dimensiones W3300 / W420 (figuura en rojo) Antees de poder acometer a la construcció ón del nuevo o equipo se llevó a cabo o el prediseñ ño del mism mo, validado o a partir de un modelo de elemento os finitos paara el yugo y la vasija (U UBU). Las partes p princiipales en las que centrarron las tareass de diseño y optimizaciión (realizad das en colab boración con n la UBU) fuueron: • Vasija. La L configuración final de d la vasija responde r al objetivo dee maximizar en la medida de d lo posiblee su vida útiil, además de d cumplir co on el código o ASME (Código de diseño o, construccción, inspección y pruebas para eqquipos, entree otros caldeeras y recipientees a presión n de la Ameriican Society off Mechanical Engineers). E • Tapones.. El diseño de d estas piezzas se basa en e el sistemaa empleado en los equip pos de menor taamaño. • Cuñas. En E este caso el diseño caambia totalm mente respeccto a modelo os inferioress pues en este nuevo n equipo o el aumento o del diámettro interno desde d 300 m mm hasta 3800 mm supone un u aumento o considerab ble de los esfuerzos en n el yugo. P Por ello las cuñas existentes no son lo suficientemente robustaas. • Yugo. Essta es la partte de mayorr peso del eqquipo por lo o que su optiimización ess muy importan nte (ahorro de d material y disminuciión de peso o). Se consiggue, con un 7.3% más de material m quee el yugo soporte un 65% más de d esfuerzoss a la presió ón de diseño. 49 • Instalaciones auxiliares. En este apartado cabe destacar la notable mejora del sistema de adquisición de datos (Scada), desarrollado de forma conjunta con ITCL. Una vez realizado el diseño se construyó el primer prototipo (Figura 5.2.3). Figura 5.2.3. Vista de la primera máquina W420 Sobre este primer prototipo se realizarán las modificaciones pertinentes para conseguir los siguientes objetivos: • Aumento de la vida útil de la vasija: Cambio del diseño del bobinado de la vasija (los parámetros modificados no se indican por ser confidenciales) • Mejor integración del equipo en la línea de producción: diseño de una línea de carga y descarga escamoteable (Figura 5.2.4): 50 Figura 5.2.4. Diseño de cinta escamoteable De forma paralela al diseño del nuevo equipo se llevaron a cabo dos actuaciones complementarias en colaboración con Desmasa: • Banco de ensayos. Diseñado para el estudio de soluciones de juntas de intensificadores. • Diseño de un equipo cuya finalidad es caracterizar el proceso de introducción de tensiones residuales en tubería de alta presión y probar el comportamiento de nuevos tubos para aumentar la vida útil de los mismos. Uno de los retos fundamentales de NC Hyperbaric en este proyecto era el de investigar los efectos del ascenso ultra-rápido de la presión en el procesado de alimentos, así como el estudio de la eventual mejora de la capacidad productiva. Para ello se llevó a cabo la construcción de un equipo denominado short-time (integrado por dos equipos de alta presión coordinados) con el que se alcanzan 6000 bar de presión en 20s (normalmente esta presión se alcanza en 150 s). En dicho equipo se implementaron tanto el software de control como el sistema de adquisición de datos (en colaboración con el Instituto Tecnológico de Castilla y León) y se desarrollaron nuevas aplicaciones que permiten el mejor manejo del gran número de variables en juego para el tratamiento de productos con tecnología APUR. Finalmente se llevó a cabo un estudio de la viabilidad de la implantación de la tecnología APUR en una planta de procesado de alimentos. De forma paralela se llevó a cabo el estudio de los efectos de la tecnología (alta presión tradicional y APUR) en diferentes matrices alimentarias, para lo que se contó con la colaboración de IRTA y UBU. Las distintas líneas de investigación adoptadas por estos centros de investigación han sido las siguientes: 51 • Jamón curado. Este producto puede estar contaminado por Listeria monocytogenes hecho que impide la exportación a Estados Unidos y Canadá. • Solomillo de buey. Se pretende garantizar la seguridad alimentaria frente a los patógenos Salmonella spp. y Listeria monocytogenes. • Embutidos ibéricos. De forma similar al jamón curado, la baja actividad de agua de estos productos podría dificultar la inactivación microbiana por alta presión. • Productos preparados basados en productos del mar: berberechos y atún. Estudio del efecto de la alta presión para sentar las bases de futuros estudios de esterilización por altas presiones. • Langostino crudo en salsa. Aplicación de la tecnología de altas presiones para aumentar la vida útil del producto con el mínimo impacto posible en las propiedades sensoriales. • Estudio de la influencia de diferentes parámetros de alta presión en 6 microorganismos de interés para la calidad y la seguridad alimentaria: Weissella viridescens, Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Salmonella enterica y Staphylococcus aureus. En este apartado se ha comparado el efecto de la alta presión convencional y las APUR. Tabla 5.2.2. Velocidad de subida de presión (hasta 6000 bar) y tiempo de mantenimiento de presión. (Tratamiento UBU) Tipo de tratamiento Veloc. Subida Presión, bar/min Tiempo mantenimiento de presión, s 1 Normal 2000 15 180 1 Flash 6000 15 180 1 APUR 18000 15 180 Comparación del efecto del procesado por alta presión convencional y APUR en 4 matrices diferentes: pechuga de pollo, filete de ternera, cola de rape y rodaja de salmón. 52 Tabla 5.2.3. Velocidad de subida de presión (hasta 6000 bar) y tiempo de mantenimiento de presión. (Tratamineto IRTA) Tipo de tratamiento Veloc. Subida Presión, bar/min Tiempo mantenimiento de presión, s Normal 2000 bar/min 180 Flash 2000 bar/min 15 APUR 18000 bar/min 1 Resultados: Para entender bien los resultados obtenidos por NC Hyperbaric en este proyecto conviene comenzar con una breve explicación del funcionamiento de la tecnología de altas presiones. Los alimentos, previamente dispuestos en su envase final flexible, se introducen en una vasija de acero, que se llena de agua, hasta un 15% más de su capacidad real, consiguiendo altos niveles de presiones isostáticas, que pueden alcanzar los 6000 bar. Figura 5.2.5. Esquema de funcionamiento de los equipos de alta presión. Detalle de la cámara hiperbárica Antes del inicio del proyecto la gama de equipos de alta presión de NC Hyperbaric ofrecía modelos en los que el volumen de su vasija oscilaba entre 55L y 300L. El primer reto de NC Hyperbaric fue el de diseñar y construir un primer prototipo de mayor volumen útil que los existentes: 420 L. 53 Figura 5.2.6. Vista de la primera máquina W420 Posteriormente se estudió la posibilidad de implementar la tecnología, construyendo un prototipo capaz de alcanzar 6000 bar de presión en 20s. Dicho prototipo está integrado por dos equipos de alta presión coordinados, uno de los cuales es el W 420 diseñado en la primera parte del proyecto (Figura 5.2.6). El estudio de las aplicaciones del procesado por altas presiones (AP y APUR) en diferentes matrices alimentarias ha sido realizado por los centros de investigación UBU e IRTA. Durante las dos primeras anualidades se realizaron estudios de procesado por altas presiones “clásicas” de diferentes productos, obteniendo resultados muy satisfactorios en los siguientes casos: • El estudio realizado con productos cárnicos: jamón curado, solomillo de buey y embutidos ibéricos dio lugar a resultados satisfactorios, pues se garantiza la seguridad alimentaria de los mismos frente a los patógenos Salmonella spp. y Listeria monocytogenes, aumentando significativamente su vida útil. En concreto: – Jamón curado: Los resultados fueron satisfactorios tanto desde un punto de vista microbiológico como desde el sensorial. – Solomillo de buey: Mediante un tratamiento de 6000 bar durante 6 minutos, se alcanzó una vida útil de 120 días, garantizando en este periodo la seguridad alimentaria frente a los patógenos Salmonella sp. y Listeria monocytogenes. – Embutidos ibéricos: Como resultado de un tratamiento de 6000 bares durante 10 minutos se obtuvo una inactivación microbiana efectiva. También se realizaron estudios con productos de mar, en concreto los estudios con langostino crudo en salsa reportaron un aumento de la vida útil del producto de un tercio respecto al producto no tratado, sin observarse modificaciones en las propiedades sensoriales del producto. Una vez construido el prototipo short-time se estudió el efecto que las altas presiones ultrarápidas (APUR) ejercen sobre diferentes matrices alimentarias, y la comparación del mismo con las altas presiones “clásicas” (AP). 54 • • Se estudió este efecto sobre 6 microorganismos relevantes para la industria alimentaria: Weissella viridescens, Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Salmonella enterica y Staphylococcus aureus. De los resultados se desprende que la eficacia de la tecnología APUR (subida a 18000 bar/min) a 6000 bar (con un tiempo de mantenimiento de la presión de 1 ó 15 s) es menor (entre 1 log y 6 log ciclos) que la AP “clásica” (subida a 2000 bar/min con el mismo tiempo de mantenimiento de la presión), concluyéndose que en ninguno de los casos estudiados (ni en el buffer ni en los modelos de alimentos) la inactivación alcanza el valor mínimo requerido por la industria (que es de 3 log ciclos). Se evaluó la eficacia del procesado por altas presiones (APUR y AP) de los siguientes productos frescos: pechuga de pollo, filete de ternera, rodaja de rape y rodaja de salmón. En este caso también se demuestra la menor eficacia de la tecnología APUR en cuanto a extensión de la vida útil de los diferentes productos. La textura y el color de los productos procesados por APUR se aproximan más a la apariencia de los productos frescos, pero en general se sigue observando una diferencia de aspecto que debería reducirse notablemente para evitar el rechazo del consumidor final. En la Figura 5.2.7 se puede observar los cambios de color de cada uno de los tratamientos realizados tanto en pollo y ternera como en rape y salmón. 55 Figura 5.2.7: Aspecto de los diferentes productos después de un día del tratamiento por alta presión: Control (no presurizado), APUR, FLASH o NORMAL Conclusiones: El primer gran reto que se planteó fue el de diseñar un nuevo equipo que aumentara su capacidad y por lo tanto su productividad en relación a los modelos ya existentes. Tras una primera etapa de prediseño de los componentes críticos del equipo y posterior optimización se obtuvo el Wave 6000/420, que posteriormente fue galardonado con el premio a la innovación del Instituto de Tecnólogos de Alimentos (IFT Innovation Award) por ser considerado el equipo de procesado por altas presiones de mayor tamaño y capacidad productiva del mundo. Con este nuevo modelo, se consigue pasar de una producción de 1252 kg/h, ofrecida por el Wave 6000/300 (en su configuración de máxima productividad, con 6 intensificadores) a 2030 kg/h de la Wave 6000/420 con 8 56 intensificadores. A pesar de que al final de la primera anualidad ya se disponía un prediseño del equipo, este ha continuado optimizándose durante todo el tiempo de vida del proyecto. De forma paralela al diseño y construcción del nuevo equipo se fabricaron equipos (totalmente nuevos tanto en diseño como en concepto) cuya finalidad era la de realizar las pruebas de intensificadores y del comportamiento de nuevos tubos de alta presión para aumentar la vida útil de los mismos. La investigación de una nueva aplicación de las altas presiones denominada APUR -Altas presiones ultra-rápidas- dio lugar a resultados muy interesantes, sobre todo desde el punto de vista científico. En primer lugar se consiguió diseñar un prototipo (como combinación de dos equipos de alta presión) capaz de alcanzar 6000 bar en 20 s. El diseño del mismo experimentó cambios respecto al planteamiento inicial, pero el resultado final fue satisfactorio, realizándose además avances significativos en su software de gestión. A partir de los resultados extraidos de los ciclos de prueba realizados y completados con una serie de cálculos se realizó un estudio de viabilidad del equipo short-time que permite concluir que, para empresas agroalimentarias interesadas en la combinación de las dos formas de procesado, APUR y AP, el conjunto short-time diseñado resulta una opción muy atractiva y rentable, pues se podría, por un lado mantener una elevada producción AP además de procesar de forma simultánea productos mediante APUR (un menor volumen). La parte ingenieril del proyecto estuvo respaldada por un estudio del efecto de las AP y las APUR en el procesado de diferentes matrices alimentarias, para lo que se contó con la colaboración de IRTA y UBU. Durante la primera mitad del proyecto las pruebas realizadas por ambos grupos de investigación se orientaron al estudio del comportamiento de ciertos productos cárnicos y platos preparados a base de marisco frente al procesado por altas presiones convencional. Los resultados referentes a esta parte fueron muy positivos observándose una notable mejora de la seguridad alimentaria (inactivación microbiana) y del aumento de la vida útil sin afectar negativamente los atributos sensoriales de los productos estudiados. De forma paralela se estudió la influencia que los parámetros presión y tiempo, ejercen sobre 6 microorganismos relevantes en el campo de la seguridad alimentaria (Weissella viridescens, Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Salmonella enterica y Staphylococcus aureus) y sobre 4 matrices alimentarias diferentes (pechuga de pollo, filete de ternera, cola de rape y rodaja de salmón) comparando por tanto los resultados obtenidos con procesado AP y APUR. En ambos casos se concluyó una menor eficacia del procesado APUR sobre la inactivación microbiana y la extensión de la vida útil de los diferentes productos. A nivel de textura y color la subida rápida de presión (APUR) es más respetuosa, pero la diferencia con muestras no procesadas es aún notable. La nueva tecnología APUR no alcanza un nivel suficiente de destrucción de microorganismos contaminantes ni consigue un aumento de la vida útil de los productos, por lo que su interés para la industria es muy limitado. Se concluye que, a pesar del interés científico de los estudios llevados a cabo por UBU e IRTA, los resultados obtenidos no avalan la explotación comercial de la tecnología APUR, al menos en el momento actual de desarrollo de la misma. 57 5.2.2 Tarea 2.2. Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la presurización ultrarrápida. Pasteurización por alta presión. Combinación de la alta presión con otras técnicas de conservación (Sealed Air Packaging, S.L.U e IRTA). Objetivos: Las tareas en las que participó Sealed Air en el marco de la actividad 2 (“Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la presurización ultrarrápida. Pasteurización por alta presión. Combinación de la alta presión con otras técnicas de conservación”) y en el de la actividad 4 (“Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la sustitución del tratamiento térmico convencional por el de altas frecuencias”) fueron planteadas desde el punto de vista de tecnología de envasado con el objetivo de analizar los posibles cambios en las propiedades de los materiales del envase tras ser sometidos a los nuevos procesos de conservación/regeneración de alimentos, bien por pasteurización por alta presión (Tarea 2.2) bien por tratamiento por altas frecuencias (Tarea 4.5), adaptándose a las necesidades exigidas del proceso y estudiando, a su vez, las ventajas ofrecidas por los nuevos procesos tecnológicos respecto a los convencionales. En altas presiones se estudió el efecto del tratamiento combinado de tiempo, presión y temperatura sobre alimentos modelo de origen cárnico, de pescado y vegetal, envasados en diferentes combinaciones de materiales plásticos y tecnologías de envasado, antes y después del procesado, así como durante su vida útil. Tanto en esta tarea como en la de la Actividad 4, el objetivo último tras la validación previa realizada con los modelos fue la de optimizar y adecuar las condiciones del proceso a la tecnología de envasado más conveniente para productos cárnicos, de pescado o de vegetales. A su vez, los resultados obtenidos de análisis de las propiedades mecánicas, de permeabilidad al oxígeno (OTR) y de migración global para los materiales seleccionados antes y después de su procesado por altas presiones o altas frecuencias fueron comparados con la finalidad de verificar la existencia o no de diferencias debidas a la tecnología aplicada. Resumen ejecutivo: las tareas realizadas entre Sealed Air Cryovac e IRTA tituladas “Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la presurización ultrarrápida. Pasteurización por alta presión. Combinación de la alta presión con otras técnicas de conservación” y “Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la sustitución del tratamiento térmico convencional (transferencia de calor) por el de altas frecuencias (generación interna del calor)” se desarrollaron siguiendo un mismo eje común y, adecuando en cada caso, los sistemas y materiales de envasado óptimos a la nueva tecnología de procesado de los alimentos. Así pues, durante el período inicial del proyecto, se definieron los materiales plásticos de interés para ser sometidos a altas presiones y al procesado por altas frecuencias. Las tecnologías de envasado SimpleSteps y en Bolsa termoretráctil fueron seleccionadas para ser evaluadas en ambos procesos de conservación/regeneración; por otro lado, la tecnología Darfresh y Bolsa VPP (“Vertical Pouch Packaging”) fueron seleccionadas para su 58 uso en altas presiones y el sistema Lidding y N’Oven, para el procesado por altas frecuencias. En ambas actividades, el objetivo final fue estudiar los posibles cambios en las propiedades de los materiales de envase después de la aplicación de la tecnología seleccionada, el posible efecto del proceso o el de la matriz alimentaria contenida en el envase, la adecuación entre el envase-tecnología y las ventajas de los nuevos procesos tecnológicos respecto a los convencionales. Para ello se prepararon modelos alimentarios estándar con base cárnica, pescado y vegetal. A continuación, éstos modelos fueron envasados mediante las tecnologías de envasado citadas anteriormente y procesados para estudiar el efecto envase-tecnología como paso previo a la realización de estudios de análisis sensorial y de vida útil en productos reales, pudiéndose así comparar las ventajas/inconvenientes de las nuevas tecnologías respecto a los procesos convencionales. En el procesado por altas presiones se seleccionaron 7 tratamientos combinando presión (500 ó 600MPa), tiempo (6 ó 10 minutos) y temperatura (7, 15 ó 40ºC). Para el estudio con altas presiones se seleccionaron productos cárnicos curados enteros (jamón curado deshuesado), loncheados ibéricos (salchichón, chorizo, caña de lomo, paleta ibérica), frescos (panceta con corteza), cocidos (roast beef con/sin aditivos) y productos a base de hígado de pato (foie). En cuanto a productos de la pesca, se procesaron diferentes especies de pescado crudo (salmón, pescadilla, rape), cocidos con salsa (sardinas en escabeche, pulpo a la Gallega, gambas al ajillo) y platos preparados (merluza con verduras). Los productos de origen vegetal seleccionados fueron vegetales frescos laminados (champiñones en salmuera), platos preparados (escalibada) y salsas (triturado de tomate). Para los productos de formato industrial fue utilizada la tecnología de envasado en bolsa termoretráctil o en bolsa VPP, mientras que la tecnología Darfresh y SimpleSteps fue la empleada para la unidad consumidor. Los parámetros de proceso aplicados fueron modificados según la tecnología, envase y producto. El objetivo en ambas tareas, fue la de obtener productos envasados con la combinación más adecuada de materiales plásticos aptos para el procesado por altas presiones o altas frecuencias, garantizando protección, mayor vida comercial, con mejores o iguales características sensoriales, a su vez que una mejora en la capacidad de producción al poder reducir el tiempo de procesado respecto las tecnologías convencionales (autoclave). Para verificar la eficacia de estas tecnologías, se realizaron los análisis físico-químicos, sensoriales y microbiológicos pertinentes del producto procesado respecto al no tratado. En las aplicaciones en que fue necesario se realizaron los tratamientos convencionales de conservación (autoclave) para verificar las ventajas e inconvenientes respecto a las nuevas tecnologías propuestas. A su vez, se realizaron diferentes ensayos para el estudio de las propiedades mecánicas, de resistencia a la apertura, de permeabilidad al oxígeno (OTR) y de migración global de los materiales plásticos procesados por altas presiones en las condiciones más extremas (40ºC/10minutos/600MPa), comparándolos con los resultados obtenidos en los materiales no tratados. 59 Resultados: Un total de 16 combinaciones de materiales plásticos en sistema skin (Darfresh o SimpleStep), 3 bolsas termoretráctiles al vacío y una bolsa VPP fueron sometidas a 7 tratamientos por altas presiones, combinando presión (500MPa ó 600MPa), tiempo (6 ó 10 minutos) y temperatura (7, 15 ó 40ºC). Todos los materiales plásticos superaron satisfactoriamente el análisis visual post-tratamiento realizado para los modelos cárnico, pescado y vegetal. Únicamente fueron observados problemas de deslaminación (burbujas en la superficie del envase) en 2 referencias de bases termoformables metalizadas (Figura 5.2.8). Estas referencias fueron descartadas de la lista de materiales a utilizar por altas presiones. En los análisis de las propiedades mecánicas (modulus, tensión-elongación, resistencia a la punción y flexión), permeabilidad al oxígeno (OTR, “Oxygen Transmission Rate”) y de resistencia a la apertura para las referencias que superaron el análisis visual, no fueron detectados cambios significativos. En la mayoría de los casos, los valores obtenidos antes y después del tratamiento fueron idénticos. Los valores obtenidos en el análisis de migración global realizado antes y después de la presurización, cumplieron con la legislación europea de materiales plásticos en contacto con alimentos (Reglamento 10/2011; L12 de 15.01.2011). Control HP Figura 5.2.8. Detalle de las deslaminaciones (burbujas de aire) presentes en toda la superficie de la base termoformable metalizada En productos curados enteros o loncheados, el envasado en bolsa termoretráctil o sistema Darfresh, respectivamente, permitió realizar el tratamiento por alta presión de estos productos garantizando la eliminación de Listeria monocytogenes sin verse afectadas sus propiedades sensoriales, aumentar la vida comercial y protegerlos de posibles cambios de coloración y oxidación de lípidos gracias a su barrera al oxígeno; a su vez, estas tecnologías de envasado ofrecieron una mejora considerable de la presentación del producto al adaptarse a su forma, evitando los pliegues que aparecen en el formato termoformado o bolsa laminada convencional y reduciendo la cantidad de plástico por unidad de envasado (Figura 5.2.9). 60 Figura 5.2.9. Envase termoformado original y envasado en bolsa retráctil BB950. Esta tecnología de envasado y de procesado permiten la exportación a países como EUA, Canadá, Australia y Japón, donde se exige ausencia de Listeria monocytogenes en productos curados. En el procesado de productos cárnicos frescos (panceta con corteza) en bolsa termoretráctil, el tratamiento por altas presiones no afectó las propiedades de la bolsa aunque provocó una desnaturalización de la proteína cárnica ofreciendo un aspecto cocido poco adecuado para el canal de distribución; cabría pero explorar las posibilidades dentro del sector HORECA como producto fresco respecto a la exportación en congelado, sistema utilizado actualmente. En productos cocidos envasados en sistema Darfresh (roast beef) las altas presiones podrían ofrecer ventajas significativas al posibilitar la higienización tras el loncheado del producto, prolongándose su vida útil con la reducción/eliminación de aditivos, a su vez que manteniendo las características sensoriales del producto no procesado a nivel de aspecto y flavor. Finalmente, la presurización de productos a base de hígado de pato mediante la tecnología Darfresh (Figura 5.2.10) consiguió triplicar su vida útil hasta 90 días, evitándose la oxidación de las grasas por su alta barrera al oxígeno sin modificarse las características sensoriales de este producto gourmet, al mismo tiempo que ofreciendo una presentación atractiva sin presencia de exudados como acostumbra a suceder en las bolsas laminadas al vacío. Figura 5.2.10. Presurización de productos a base de hígado. La falta de tiempo y la voluntad de los consumidores de buscar una mayor comodidad en la cocina han hecho avanzar en el desarrollo de platos listos para calentar o cocinar. Dentro 61 de este concepto, se han desarrollado diferentes productos a base de pescado “listos para ser calentados/cocinados al microondas” mediante la tecnología de envasado SimpleSteps. La combinación entre ambas tecnologías, envasado y altas presiones, fue fundamental para poder prolongar la vida comercial de productos de rápido deterioro. La vida útil de los productos cocidos con salsa (Figura 5.2.11) y pescado crudo con verduras (Figura 5.2.12) presurizados se cuadriplicó respecto los productos no tratados. Figura 5.2.11. Control (izquierda), presurizado (derecha) Figura 5.2.12. Control (izquierda), presurizado (derecha) Sensorialmente las muestras presurizadas se caracterizaron por presentar una textura ligeramente más tierna, de superior intensidad aromática y flavor, así como con superior intensidad de sabor salado. En cuanto al envasado de pescado fresco, las altas presiones 62 provocan una desnaturalización de la proteína de la carne del pescado, lo que implica un cambio de color hacia tonalidades más blanquecinas o rosadas-cocidas en pescados blancos/magros y pescados azules/grasos, respectivamente. El contenido en agua, proteína y materia grasa de cada especie tuvo un papel importante en la conservación del producto. La tecnología SimpleSteps contribuyó favorablemente a aumentar la vida comercial del producto al disminuir la presencia de exudados provenientes del pescado, garantizando al mismo tiempo una buena presentación. En productos de origen vegetal se trabajó en formato consumidor Simple Steps para el envasado de escalibada y en unidad industrial con bolsa VPP para champiñones laminados en salmuera y un triturado de tomate natural. En la escalibada y los champiñones, el objetivo fue evaluar el efecto de las altas presiones respecto al tratamiento convencional (pasteurización por autoclave) en cuanto a vida útil, resistencia del envase y características sensoriales del producto, mientras que para el triturado de tomate presurizado únicamente fue comparado respecto al producto no tratado. Los análisis microbiológicos realizados de las muestras presurizadas y pasteurizadas por autoclave corroboraron la eficacia de ambos tratamientos respecto al producto no procesado, aumentando significativamente su vida comercial. Tanto el envase SimpleSteps como la bolsa VPP resistieron al procesado por altas presiones y por autoclave sin detectarse pérdidas de la hermeticidad, deslaminaciones o deformaciones del envase. En la escalibada, se obtuvieron recuentos inferiores a 1 Log para ambos tratamientos durante los 60 días de muestreo, mientras que en las muestras control se obtuvieron valores superiores a los límites máximos permitidos según la normativa microbiológica (Reglamento (CE) 1441/2007) una semana después de ser envasadas. Además las muestras presurizadas y los controles se valoraron mejor en cuanto a aspecto, textura, valoración global del producto e intención de compra que las procesadas por autoclave (Figura 5.2.13). Figura 5.2.13. Aspecto de la escalibada control (izquierda), presurizada (medio) y procesada por autoclave (derecha) Los champiñones tratados por altas presiones y por autoclave obtuvieron recuentos inferiores a 3 y 1 Log, respectivamente, durante los 90 días de muestreo, sin evidenciarse tendencias al aumento, mientras que los valores obtenidos en las muestras control se 63 encontraron fueera del máxximo permiitido a parttir del día 2 post-envvasado. Las altas presiones no mo odificaron el e color de la l salmuera ni de los champiñone c s (Figura 5..2.14), ntras que sí ocurrió o en laas muestras pasteurizad das por autoclave. En cuuanto al trituurado mien de to omate naturaal envasado en la bolsaa VPP, las alltas presiones no afectaaron la integgridad del material, m perm mitiendo aumentar su vida v comerciial respecto al a producto no procesad do. Figura 5.2.14. Aspecto A de las bollsas VPP control (izquierda) ( y presuurizadas (derecha) Concclusiones: Se S puede co oncluir que las bolsas termoretráct t tiles, el sisteema de envvasado verticcal VPP y ell sistema skiin Darfresh® ® y SimpleSSteps® son adecuados p para el procesado de diferentes d tiipos de alim mentos porr altas pressiones, perm mitiendo auumentar suu vida comeercial sin altterar sus pro opiedades sensoriales. Estos E materriales mantieenen íntegraas sus propiiedades durrante todo el tratamien nto y por lo l tanto no o afectan al contenido. La eleccción de un tiipo u otro de d sistema deependerá deel producto a envasar y ddel mercado o final al quue va destinaado. Asimism mo, este tip po de processado permitte disminuir los recuenttos de Listeria en los prroductos cárrnicos curaddos, de maneera que se aumentan a lass posibilidad des de exportación. Alggunos ejemp plos de loss alimentos procesadoss han sido el jamón cuurado lonch heado envassado en matteriales Darffresh®) o en n pieza entera en bolsass termoretrááctiles, los champiñone c es y el trituurado de to omate envassados en bolsas Cryovvac® VPP y los prepaarados cárniicos y de pesscado mediaante materiaales Darfresh h® y SimpleeSteps®. 5.2.3 Taarea 2.3. Pasteurizaci P ión por altta presión.. Combinaación de laa alta preesión con otras o técniicas de con nservación en producctos de la pesca p (Barrufet, B S.A A e IRTA-C CENTA). Objeetivos: Los objetivos o planteados en n esta tarea fueron f los sigguientes: • Estudiar procesos dee preparació ón, envasado o y procesaddo de produuctos frescoss de la pesca, paara una com mercializació ón eficiente,, en formatos cómodos para el ussuario (cocinas centrales, catering, c co onsumidor final...), f con n una segurridad alimeentaria optimizada y una vidda comerciall prolongadaa, mediante el uso de alltas presionees y/u otras tecn nologías em mergentes. • Diseñar nuevas n form mulaciones de d platos preeparados en base a prodductos de la pesca que se adapten a las actuales demandas d del mercado relacionadaas con prod ductos saludablees, de fácil y rápida prep paración. 64 • Estudiar procesos de preparación, elaboración, cocinado, procesado y envasado de platos preparados y de productos elaborados de la pesca, en formatos cómodos para el usuario (restauración, consumidor final), listos para su consumo o listos para la preparación culinaria, con una seguridad alimentaria optimizada y una vida comercial prolongada, mediante el uso de altas presiones y/u otras tecnologías emergentes. • Estudiar las condiciones óptimas de conservación de estos nuevos productos en base a pescado y de cómo afecta la aplicación de estas nuevas tecnologías a las características sensoriales y en la evolución microbiológica de los mismos. • Valorizar productos de la pesca de especial interés nutricional, mediante presentaciones fáciles de usar, adaptadas al consumo moderno, y aceptables por los grupos sociales de interés. • Definir y desarrollar nuevos productos del mar, que aporten valor añadido y con la posibilidad de ser tratados con diferentes técnicas de conservación que alarguen su vida comercial. Resumen ejecutivo: En una primera fase del proyecto se realizó una revisión bibliográfica y se asistió a varios acontecimientos del sector con la finalidad de: • Analizar la situación actual del mercado • Analizar el comportamiento del consumidor • Captar las necesidades de los clientes • Realizar un seguimiento de las tendencias del mercado Esta primera fase facilitó la definición de productos de interés para ser estudiados y que se adaptaran a las necesidades del mercado en cuanto a formatos de presentación, variedad de productos, facilidad de preparación y que resultaran saludables. Una vez definidos los productos, se procedió a la caracterización de cada una de las referencias con el objetivo de definir sus atributos sensoriales y de alteración que puedan afectar a la vida comercial de los productos seleccionados. Esta caracterización se realizó mediante una evaluación objetiva de los parámetros, basada en un sistema de puntuación numérico (Método Quality Index Method) y por tanto, totalmente repetible. Se aplicó tanto en productos enteros como preparados, frescos y/o cocinados. Paralelamente se realizaron ensayos para determinar la presentación óptima para cada una de las referencias seleccionadas. Se buscó la combinación comercial idónea de talla, cantidad de producto, modo de presentación (lomo, filete, pelado, entero…) y formato de presentación siempre teniendo en cuenta la premisa de producto cómodo y de calidad garantizada para el consumidor. 65 Uno de los principales inconvenientes que surgieron fue la gran variabilidad de especies que engloba el concepto productos del mar, y la gran diferencia de composición que existe entre ellas. Esto supuso realizar más esfuerzos en esta primera etapa de los previstos en un principio, para asentar bien las bases de las diversas fases del proyecto. Una vez caracterizados los productos se iniciaron los ensayos de conservación, con el objetivo de encontrar las condiciones que maximizaran la vida comercial de estos productos, manteniendo unas buenas características sensoriales, microbiológicas y físicoquímicas. Estas pruebas se diseñaron en base a diferentes técnicas y en algunos productos también se plantearon a modo comparativo. Las principales técnicas/tecnologías que se estudiaron, fueron: − Envasado en atmósfera protectora (MAP) − Altas presiones isostáticas La tecnología MAP consiste en envasar un alimento en una atmósfera constituida por mezclas de gases: dióxido de carbono (CO2), oxígeno (O2) y nitrógeno (N2) en distintas proporciones en función de las características de cada producto. La técnica MAP se aplicó tanto en productos del mar frescos como preparados, así como a las diferentes especies (crustáceos, bivalvos, cefalópodos, pescado blanco y pescado azul). En relación al método de conservación por altas presiones se realizaron pruebas con un número inferior de productos. Se seleccionaron referencias de marisco crustáceo y pescado blanco, que se caracterizan por ser productos de elevado potencial comercial y estratégico para la empresa para la realización de esta prueba. Al mismo tiempo se diseñaron nuevos productos en base a pescado con la finalidad de aportar un valor añadido al sector de los productos del mar y equipararlo a otros sectores más avanzados en este sentido (por ejemplo, el sector cárnico). Los esfuerzos se centraron principalmente en crear una línea de productos preparados, destinados en un principio, a restauración colectiva y que reunieran las características de ser “cómodos” para los consumidores. Esto implica que deben ser de fácil preparación, larga durabilidad, saludables y con formatos adecuados a la demanda del mercado. También se formularon platos preparados y elaborados destinados a colectividades especiales que precisan de productos que aporten soluciones (sin espina, de fácil deglución…) y que puedan ser procesados mediante estos sistemas de conservación. Una vez validadas las fórmulas y aceptados los diseños de cada desarrollo, se procedió a realizar pruebas de conservación de estos nuevos productos. También se combinaron técnicas de preparación de productos con pruebas de conservación con la finalidad de potenciar sinergias. 66 Resultados: Después de realizar un seguimiento de las tendencias de mercado se concluyó que el mercado actual demanda productos saludables, cómodos y rápidos de preparar. Con estas premisas se seleccionaron una serie de productos representativos de los productos del mar. Se incluyeron referencias de pescado azul (sardina, salmón, etc.), pescado blanco (rape, dorada, bacalao, limanda, perca, etc.), cefalópodos (sepia, calamar, pulpitos, etc.), marisco crustáceo (langostino, cigala, gamba langostinera, etc.) y marisco bivalvo (mejillón y almeja), entre otros. Una vez definidos estos productos se procedió a su caracterización con la finalidad de conocer los parámetros de alteración que afectan a la materia prima y poder actuar así mediante las técnicas de conservación que se incluyen en este proyecto. Para la definición de los parámetros de alteración de las especies modelo seleccionadas se utilizó la metodología QIM en aquellas especies en que está definida. Esta metodología está basada en la evaluación de ciertos atributos del pescado fresco (branquias, ojos, piel…) mediante un sistema de puntuación numérico, y por tanto repetible. De esta manera un producto no puede ser rechazado por un único criterio sino que se valoran varios simultáneamente. En aquellos productos en que no había metodología específica, se adaptó la del producto más similar. De esta manera, se realizó una caracterización de los atributos sensoriales de cada especie estudiada para valorar su estado de frescor. Se realizó para productos enteros o preparados (filetes, colas, brochetas, etc) y tanto en fresco como en cocido. En fresco se definieron los parámetros siguientes: aspecto, olor y textura de la piel, pupilas y forma de los ojos, color y olor de las agallas. Una vez cocido se evaluó: el color, olor, flavor, jugosidad y textura (ver Anexo 1). Considerando que se buscaba un tipo de envasado libre servicio que aporte comodidad al consumidor (tanto a nivel de colectividades como consumidor final), también se realizaron pruebas para determinar la presentación comercial ideal para cada uno de los productos. Así se consideraron los siguientes factores: tipo de envase, modo de presentación, cantidad de producto y talla (ver Anexo 2). Paralelamente, se realizaron pruebas con la intención de mejorar los procesos post-pesca a los que son sometidos algunos de los productos (pelado, eviscerado, decapitado…) y que pueden afectar directamente a la calidad higiénica de los productos antes de su envasado. Estas pruebas consistieron en la realización de una serie de ensayos con diferentes aditivos con la finalidad de encontrar las dosis mínimas efectivas que nos permitieran garantizar una calidad higiénica del producto previo tratamiento de conservación. Estas pruebas se realizaron principalmente con: – Cefalópodos: Para evitar la oxidación de la carne y la piel, que aporta un color atípico en estos productos. – Crustáceos: Para evitar la melanosis, reacción enzimática que supone ennegrecimiento de los tejidos y que aporta un aspecto desagradable a estos productos. 67 – Pescado fresco, eviscerado o fileteado: Limpieza (higienización) de los productos tras su eviscerado y manipulación. En el caso de los crustáceos, los resultados obtenidos fueron muy satisfactorios en relación al tratamiento antimelanósico, ya que hasta el momento los únicos aditivos efectivos frente a la melanosis, eran aditivos formulados en base a sulfitos, un aditivo muy efectivo pero altamente alérgeno y de fuerte olor. Por este motivo, se creyó interesante centrar esfuerzos en encontrar una alternativa a su uso. Tras la aplicación de un tratamiento con un aditivo formulado en base a un componente diferente a los sulfitos, se consiguió retardar la aparición de la melanosis (concretamente en cigalas) respecto a los mismos tratamientos pero usando el aditivo en base a sulfitos (ver Anexo 3). En relación a las pruebas de higienización realizadas en pescado fresco, los resultados no fueron tan satisfactorios. Se trataba de aplicar un lavado con agua estéril a diferentes referencias de pescado frescos tras un eviscerado, fileteado, etc., con la finalidad de retardar la degradación sensorial y microbiológica. Se observó que el efecto germicida del agua se perdía a los pocos segundos de su fabricación por lo que su aplicación en planta es difícil. Una vez definidos los factores que afectan a la vida comercial de las distintas referencias se propusieron y se diseñaron las pruebas de conservación basadas en el desarrollo de tecnologías emergentes para aumentar la vida útil del pescado fresco y platos preparados en base a productos de la pesca. Se realizaron pruebas con las tecnologías MAP (envasado en atmósfera protectora) y alta presión. En el caso de las pruebas con tecnología MAP, las muestras se presentaron en un envase de plástico termosellado. Debido a que existen gran cantidad de posibilidades en cuanto a opciones de tamaño, materiales, formas, etc. se decidió a realizar pruebas de formato destinadas a definir las mejores opciones para cada referencia. En las pruebas de aplicación de altas presiones se requería un tipo de envasado sin aire o en el caso de aquellos productos de gran tamaño que aguanten el contacto con el agua, se puede realizar el tratamiento directamente al producto sin envasar. De esta manera, para las muestras susceptibles que pueden ser tratadas por altas presiones se realizaron pruebas de presentación en vacío, skin, envase plástico precintado con salmuera, y con producto directamente sin envasado. Estos primeros ensayos sirvieron para descartar la presentación en vacío debido a que le confería un aspecto poco agradable debido al desprendimiento de líquidos (ver Anexo 4). Por este motivo los ensayos de alta presión se llevaron a cabo con las opciones restantes. En los ensayos realizados mediante MAP, se definieron los parámetros críticos que pueden condicionar la calidad del producto envasado, como son la combinación de gases (O2, CO2 y N2), volumen gases vs peso, tipo de envase, temperaturas de envasado y conservación (en refrigeración) y especie de pescado. De esta manera las pruebas se plantearon como la realización de varias series de diferentes combinaciones entre estos parámetros, para cada 68 uno de los grupos de especies a estudiar, y que se fueron evaluando a lo largo del tiempo. Las referencias se valoraron tanto en estado fresco como cocinadas. Debido a las diferencias de composición entre las referencias de un mismo grupo fue necesario considerar las particularidades de cada especie. Concretamente, en el caso del pescado azul se observaron problemas de oxidación que afectan directamente al color del producto. Así, fue necesario ajustar muy bien la combinación de gases con la presentación del producto y la calidad de la materia prima. Los resultados obtenidos en cuanto a caducidad fueron satisfactorios. Mediante estas pruebas se evidenció que la vida útil de la mayoría de las referencias envasadas en MAP era superior a la de los productos envasados en aire en cuanto a recuentos microbiológicos se refiere, por lo que se evidencia una disminución del crecimiento microbiano. En cuanto a especies, los mejores resultados se obtuvieron en los pescados blancos, seguidos de los observados en cefalópodos, moluscos, crustáceos y por último los pescados azules. En el caso de los productos tratados por alta presión se seleccionaron productos frescos de alto valor comercial (tanto pescado blanco como marisco), cefalópodos y marisco envasados en salmuera (semiconserva) y una referencia de cefalópodo precocinado (producto desarrollado en este proyecto) y productos preparados (brochetas). Tal y como se comentó anteriormente y previo al tratamiento con altas presiones, se envasó pescado blanco, brochetas y cefalópodos precocinados en skin. Los crustáceos y los cefalópodos se envasaron en un envase de plástico precintado con salmuera (semiconserva) y se reservaron los crustáceos de mayor tamaño para aplicar el tratamiento directamente en el agua del tanque de presión. Los resultados de la aplicación de esta técnica en cuanto a caducidad también fueron muy satisfactorios. La vida útil se alargó considerablemente en todos los casos en relación a la caducidad establecida para estos productos. No obstante, las características sensoriales se alteraron ligeramente, dando un aspecto atípico a las muestras tratadas que recuerda al producto cocido. En el caso de los productos en salmuera, el líquido quedó opaco, confiriendo un aspecto desagradable a este tipo de presentación. En el caso de los cefalópodos, la textura y el calor se vieron afectados negativamente. Los mejores resultados se obtuvieron con los crustáceos en los cuales se pudo triplicar su vida útil sin verse apenas afectadas las características sensoriales. Estas pruebas también se plantearon a modo comparativo entre las tecnologías MAP y alta presión para alguno de los productos estudiados. Se trata de productos frescos (filete de rape) y en platos preparados a base de productos del mar (cefalópodos precocinados). En el caso de los productos frescos las pruebas realizadas con alta presión proporcionaron mejores resultados en cuanto a vida útil que las pruebas realizadas con MAP. Sin embargo, el tratamiento por alta presión confirió al producto aspecto a cocido (ver Anexo 5). 69 En el caso de los productos elaborados, como cefalópodos precocinados también se aumentó su vida útil en refrigeración con la tecnología alta presión en comparación con el envasado MAP. En este caso también la aplicación de la alta presión cambió las propiedades sensoriales del producto ya que la textura se vio afectada negativamente. La aplicación de la alta presión en crustáceos aparte de aumentar la vida útil facilitó su pelado (ver Anexo 6). Paralelamente a las pruebas de conservación se diseñaron nuevas formulaciones de platos preparados en base a productos de la pesca. En un principio se basó en la revalorización de productos que pudieran aportar soluciones a los consumidores, siempre bajo la premisa de producto saludable, de alta calidad y fácil preparación. A la hora de diseñar y formular los productos y los modos de presentación, se consideró que el producto resultante aportara comodidad y seguridad alimentaria. Se trabajó en las siguientes líneas de desarrollo: – Brochetas de productos del mar (pescado, cefalópodos y crustáceos) – Hamburguesas de productos del mar (pescado y cefalópodos) – Producto precocinado a base a cefalópodos – Salchichas de pescado (tipo frankfurter) En el caso de las brochetas de productos del mar se intentó desarrollar una línea de productos que recordase a las brochetas elaboradas a partir de carne. De esta manera se escogió como base, las brochetas de rape ya que se trata de un pescado blanco que por sus características de textura y sabor neutro recuerda menos al pescado. A continuación se realizaron una serie de marinados a partir de fórmulas comerciales de empresas de aditivos y especias con la finalidad de realizar una selección para el desarrollo de nuevos productos. Para seleccionar las fórmulas más adecuadas se realizaron una serie de sesiones de cata a nivel de empresa que fueron la base de las futuras aplicaciones. En cuanto a las hamburguesas y a las salchichas de pescado, era una línea de productos pensada para colectividades que demandaban productos saludables, muy homogéneos y estandarizados. Por otro lado, eran de interés potencial para la empresa ya que supone la revalorización de subproductos de la pesca de alta calidad que por motivos de presentación no son aptos para venta directa (ver Anexo 7). En el caso de las hamburguesas se desarrollaron dos líneas de producto, una en base a rape y otra en base a cefalópodos. Ambos productos se caracterizaban por tener un sabor neutro que no recordaba al pescado. Este era un punto importante a tener en cuenta juntamente con la textura, debido al sector de población para el que está pensado este producto. En cuanto a la formulación de los productos, hubo dificultades para lograr la gelificación de las proteínas. 70 Finalmente se consiguió una fórmula y un proceso estable y reproducible para ambas referencias y de sabor agradable. Paralelamente y como consecuencia de los problemas observados en la gelificación de las proteínas para los reestructurados de pescado, se pensó como solución aplicar una cocción a una emulsión de pescado de textura más fina, para facilitar la coagulación de las proteínas. De esta manera se preparó un prototipo de producto similar a las salchichas tipo frankfurter pero en base a pescado. Es importante destacar la limitación que supone la utilización de pescado azul en este tipo de producto ya que la potenciación del sabor observada después de la cocción resultó poco aceptable. En este caso también se tuvo en cuenta el uso de aromas para que el producto recordase poco a pescado y sí a carne y a ahumado. Como resultado de estas pruebas de formulación de nuevos productos en base a productos de la pesca se obtuvieron algunos prototipos potencialmente interesantes que se continuaran desarrollando y que encajan con las premisas establecidas a lo largo del proyecto (ver Anexo 8). Conclusiones: • • • En cuanto a la aplicación de nuevas tecnologías de envasado en productos en base a pescado, se ha alcanzado un conocimiento exhaustivo de los parámetros de alteración de los principales productos de la pesca en su fase de materia prima y se ha logrado obtener mezclas óptimas de gases (CO2, O2, N2) para su envasado en MAP lo cual permite aumentar la vida útil y mejorar la seguridad alimentaria de los productos envasados. Se han ampliado las posibilidades de negocio en una gran variedad de productos presentados en diferentes formatos (envases, cantidades…). La aplicación de las altas presiones ha permitido alargar la vida comercial de los productos en base a pescado respondiendo así a la demanda actual del mercado. Se ha apostado por el diseño y desarrollo de nuevas fórmulas de platos preparados que puedan tratarse por altas presiones con el objetivo de obtener productos de fácil preparación, saludables y adaptados al estilo de vida actual. Los resultados obtenidos han permitido posicionarse estratégicamente en un mercado emergente de productos del mar envasados para la venta en libre servicio. 5.2.4 Tarea 2.4. Estudio de diferentes tipos de procesos de alta presión isostática en la estabilidad del foie-gras y en la inactivación de su flora microbiana (Innoducky, S.L e IRTA). Objetivos: El objetivo principal planteado en este proyecto ha sido evaluar la aplicación de las altas presiones en un producto en base a foie gras para mejorar su vida útil. Éste objetivo general se subdividió en los siguientes objetivos parciales: 71 • Determinar los factores que afectan a la estabilidad de la emulsión del foie-gras tratado por altas presiones. Establecer los parámetros de clasificación de la materia prima según su calidad. • Formular el foie-gras de forma que mejore la estabilidad de la emulsión frente a los tratamientos por alta presión. Estudiar la congelación y el tratamiento térmico suave del foie gras previo a la presurización como elementos estabilizadores de la emulsión. • Optimizar los parámetros de los tratamientos de alta presión (presión, temperatura, tiempo), en relación a las propiedades sensoriales, culinarias y de vida útil del foiegras. • Estudiar la inactivación de microorganismos patógenos por alta presión en foiegras, y la equivalencia química entre productos no tratados por alta presión y productos presurizados. Resumen ejecutivo: El hígado de pato es un producto muy heterogéneo en cuanto a contenido de proteínas, grasas e hidratos de carbono. Por esta razón, se decidió evaluar otros factores de calidad tales como el tiempo de embocado, tipo de alimentación, tipo de evisceración y tiempo transcurrido entre el eviscerado y la fabricación del producto. Con los parámetros de calidad fijados se elaboró un producto reconstituido a partir de foiegras, llamado bloc de foie-gras que sirvió como base de todas las pruebas. Los parámetros físico-químicos de textura, color y pH del bloc de foie-gras que se determinaron en distintos procesos de presurización, sirvieron de base para determinar la mejor combinación presión/tiempo, que posteriormente se utilizó para el resto de los ensayos. Desde el inicio del proyecto se realizaron varios estudios microbiológicos del producto y de vida útil, dónde se evaluó el efecto de las altas presiones en las bacterias ácido-lácticas, aerobios mesófilos y enterobacterias del bloc de foie-gras. Durante el periodo de almacenamiento del producto en refrigeración, se observó un exudado en el interior de la bolsa al vacío. Para reducir este problema, se comparó, el envase tipo Skin con la bolsa al vacío. Se evaluaron parámetros sensoriales, físico-químicos y microbiológicos del producto a lo largo de su almacenamiento. Para reducir el coste del tratamiento térmico se estudió la disminución del tiempo de cocción, combinándolo con el tratamiento por alta presión. En este ensayo también se estudió el efecto de la congelación del producto previo a la presurización. Con los envases y parámetros de pasteurización ya definidos, y en 2 ensayos independientes, se estudiaron, respectivamente y durante el periodo de almacenamiento en refrigeración: – El efecto de la iluminación (en condiciones que simulaban un expositor comercial) sobre el color en producto pasteurizado y no pasteurizado. 72 – El efecto de la presurización sobre la calidad sensorial del bloc de foie-gras. Se realizó un estudio de equivalencia química, donde se compararon los parámetros físicoquímicos de contenido de grasa, proteína y vitaminas y grado de oxidación de producto presurizado y sin presurizar. En el segundo ensayo se realizó un estudio de inoculación de patógenos (challenge test), en el que se inoculó un cóctel de cepas de Salmonella enterica y Listeria monocytogenes en un bloc de foie-gras y, posteriormente, se presurizó con la combinación de presión y tiempo seleccionados. Con este ensayo se determinó la capacidad que tienen estos dos microorganismos para crecer y/o sobrevivir en este producto. Resultados: La textura y color de las muestras de bloc de foie-gras no se modificaron debido al tratamiento de presurización aplicado. En cuanto a los parámetros microbiológicos se observó que los recuentos de bacterias ácido-lácticas y de aerobios mesófilos se mantuvieron a lo largo de su vida útil en valores bajos en aquellas muestras que fueron tratadas por alta presión, mientras que las muestras que no se presurizaron presentaron valores superiores al final del tiempo de almacenamiento. En cambio, no se apreció ningún efecto de la presurización sobre las enterobacterias ya que éstas no crecieron a lo largo de la vida útil ni en las muestras presurizadas ni en las muestras no presurizadas. También se observó que el envase tipo skin ayudó a la conservación del producto, ya que el hecho de utilizar temperaturas elevadas para la extensión del film superior supuso una reducción de la carga microbiológica en la capa exterior del producto y por lo tanto una mejora en la calidad del producto final. En base a estos resultados se decidió cambiar el tipo de envasado, pasando de un envasado en bolsa al vacío a un envasado tipo skin. Ello supuso una gran inversión en las instalaciones ya que se cambió todo el sistema de envasado industrial (Figura 5.2.15). Con el cambio a este último sistema, se mejoró la calidad tanto microbiológica como sensorial del producto acabado. Figura 5.2.15. Imagen de la máquina termoformadora tipo skin adquirida por Mas Parés. Los resultados en los ensayos de la mejora de la rentabilidad del proceso térmico no fueron satisfactorios ya que la disminución del tiempo de cocción provocó cambios importantes 73 en la textura. Por el contrario, la congelación previa del producto, no produjo cambios importantes en calidad microbiológica, físico-química y sensorial. La aplicación de luz provocó cambios en el color del bloc de foie-gras. Se encontraron diferencias en el color rojo entre las muestras almacenadas a oscuras y las almacenadas con iluminación (12 h en 1200 lux). Por el contrario, el tratamiento de presurización no provocó cambios de color en las muestras sometidas o no a iluminación (Figura 5.2.16). Figura 5.2.16. a) Muestras de bloc de foie-gras tratadas por alta presión y almacenadas en refrigeración con y sin luz. b) muestras de bloc de foie-gras no tratadas por alta presión almacenadas también en refrigeración con y sin luz. Respecto al efecto de los factores de fabricación del bloc de foie-gras (presurización, congelación previa del producto y reducción del tiempo de cocción previa) sobre los parámetros sensoriales evaluados por el panel entrenado del IRTA, únicamente la reducción del tiempo del tratamiento térmico durante la fabricación del producto, dio lugar a cambios significativos en las características sensoriales, concretamente en la disminución de la dureza dando lugar a un producto más blando. En el estudio de equivalencia química se observó que no hubo cambios nutricionales debidos a la presurización. Se observó que la oxidación del producto varía en función del tiempo y de los lotes de fabricación. El producto, a los 90 días de conservación, presentó, en tres de los cuatro lotes estudiados, valores del índice de oxidación TBA (Malonaldehído (MDA)) significativamente superiores a los del día 1 independientemente de si fueron tratados o no por alta presión (Tabla 5.2.4). Tabla 5.2.4. Medias de TBARES (ug MDA/g muestra) en función del lote y día de muestreo. a-b: letras diferentes en una misma columna indican diferencias significativas (P<0,05) 74 En el caso del challenge test se apreció que el tratamiento de presurización utilizado fue suficiente para prevenir el crecimiento de Listeria monocytogenes y Salmonella enterica en un bloc de foie-gras en las condiciones de almacenamiento previstas. En la Figura 5.2.17 se observa que el tratamiento de alta presión realizado en este tipo de muestras, ejerció un efecto bactericida inmediato y que a lo largo de la vida útil de éste, L. monocytogenes no creció, y por lo tanto difícilmente significaría un riesgo para el consumidor ya que los recuentos estuvieron por debajo del límite de detección. Figura 5.2.17. Evolución de L. monocytogenes en el Bloc de foie-gras para las muestras tratadas por alta presión (HPP+), control y el perfil de temperatura durante el almacenamiento de éstas. En la Figura 5.2.18 se observa que Salmonella muestra un comportamiento análogo. Este microorganismo no fue capaz de crecer en aquellas muestras que fueron presurizadas y por tanto el proceso de presurización ejerció un efecto bactericida inmediato. Figura 5.2.18. Evolución de Salmonella en Bloc de foie-gras tratado por alta presión (HHP+) o no tratado (control) y perfil de temperatura a lo largo del estudio de Challenge Test. Conclusiones: • Las condiciones óptimas para la obtención del foie-gras apto para la fabricación del bloc de foie-gras fueron las siguientes: – – Tiempo de embocado: 13-14 días. Tipo de alimentación: mixta (50% pasta + 50% grano de maíz). 75 – – Tipo de evisceración: caliente. Tiempo transcurrido (días) entre el eviscerado y la producción del producto inferior a 4 días. • Los parámetros evaluados de textura y color no se ven modificados por la aplicación de las altas presiones al bloc de foie-gras. • El envase tipo Skin definido en el proyecto mejora la calidad microbiológica y sensorial del bloc de foie-gras. • La reducción del tiempo de tratamiento térmico del bloc de foie-gras provoca cambios apreciables en la textura tanto en muestras presurizadas como sin presurizar dando como resultado un producto más blando. • Se observa una reducción del color rojo en aquellas muestras de bloc de foie-gras almacenadas durante 90 días a 1200 lux durante 12h diarias con respecto a otras almacenadas a oscuras. El color no se ve afectado por el tratamiento de alta presión aplicado. • La presurización del producto no modificó las características sensoriales. • Los parámetros nutricionales como el contenido de proteína, grasa, ácidos grasos y % vitaminas y el estado de oxidación, no variaron debido a la presurización del producto bajo las condiciones de ensayo evaluadas. • La presurización aplicada ejerce un efecto bactericida inmediato para aquellas muestras inoculadas con Salmonella enterica y Listeria monocytogenes. 5.2.5 Tarea 2.5. Pasteurización por alta presión en productos cárnicos (Covap e IRTA). Objetivos: Los productos crudos curados de tradición mediterránea, como el jamón curado, tienen un potencial exportador muy importante, por tratarse de productos de muy alta calidad sensorial y nutritiva, que en sus presentaciones envasadas (loncheados, tiras, tacos, etc.), presentan las características demandadas por los consumidores actuales (comodidad, listo para comer, combinación fácil con otros alimentos). Al mismo tiempo, la rigidez de las normativas sanitarias y criterios microbiológicos de otros países suele ser una barrera que dificulta la exportación del jamón curado y otros productos listos para el consumo, a no ser que se apliquen tratamientos higienizantes después de su envasado. En la práctica, la principal barrera sanitaria a la exportación, es la dificultad de cumplir estrictamente con la “tolerancia cero” en relación a la presencia de Listeria monocytogenes en los alimentos listos para el consumo. En el jamón curado, los procesos térmicos no son aplicables debido a los cambios que provocan en el producto (alteración extrema del aspecto, color y textura, fusión de las grasas y fuerte aumento del sabor salado). Por ello, la mejor alternativa disponible actualmente para higienizar el jamón curado envasado es la pasteurización fría mediante 76 altas presiones. Aunque el procesado por altas presiones se aplica en algunos productos cárnicos listos para el consumo, la disponibilidad de datos científicos que permitan evaluar con precisión la eficacia higienizante en el jamón curado español y su impacto a nivel sensorial, es aún insuficiente. En este marco, los objetivos planteados en el proyecto incluían: • • • Estudiar la pasteurización en frío por altas presiones del jamón curado ibérico para garantizar su seguridad alimentaria frente a los principales patógenos de interés y, especialmente para garantizar la ausencia de Listeria monocytogenes, exigida por los principales mercados de exportación de este producto y que no se puede obtener de forma adecuada por otros procedimientos. Mejorar la calidad sensorial del jamón curado ibérico a lo largo de su vida comercial, por reducción de la población y de la actividad de los principales grupos de microorganismos de alteración de este producto. Verificar la capacidad bacteriostática del producto tratado por alta presión durante la vida comercial. Resumen ejecutivo: Los trabajos de investigación desarrollados en el marco del proyecto se plantearon con el objetivo de estudiar y aportar datos sobre la eficacia de las altas presiones en relación a la inactivación de microorganismos indeseables (patógenos y alterantes) en el jamón curado, así como evaluar el impacto de esta tecnología en las características físico-químicas y sensoriales de estos productos cárnicos curados, justo después del tratamiento y a lo largo de su almacenamiento. Se realizó la caracterización del jamón curado ibérico producido por COVAP mediante análisis físico-químicos, incluyendo la composición nutricional, del producto curado y la caracterización de la microbiota presente en dos momentos importantes en el proceso de curación del jamón: la etapa de postsalado y la etapa de maduración en bodega. El seguimiento de la microbiota presente en el producto desde la fase inicial, permitió identificar microorganismos alterantes, presuntamente relacionados con problemas de cala, y que fueron incluidos en el estudio del efecto del tratamiento de alta presión para la pasteurización en frío del jamón curado ibérico de COVAP. Se realizaron ensayos preliminares de presurización evaluando la resistencia a la alta presión de diferentes cepas de microorganismos patógenos (Listeria monocytogenes) y alterantes (Serratia liquefaciens y Enterococcus spp.). Destaca la moderada resistencia a los tratamientos de alta presión de la cepa L. monocytogenes CTC 1034, de la colección del grupo de investigación IRTA y previamente aislada de jamón curado, resultando ser un buen organismo indicador y por tanto utilizada en el trabajo experimental de la segunda mitad del proyecto. Se completaron estudios sobre el efecto del tratamiento de alta presión sobre los patógenos y microorganismos alterantes inoculados en jamón curado ibérico loncheado con el fin de determinar el grado de inactivación bacteriana conseguido a diferentes condiciones de procesado (combinación de presión, tiempo y temperatura). A partir de los resultados de la caracterización microbiológica proporcionados por la empresa y los ensayos de 77 presurización realizados, se planificó el diseño experimental de los experimentos sucesivos del proyecto. El estudio comparativo realizado sobre la idoneidad de distintos materiales de envasado para jamón ibérico curado loncheado destinado a tratamientos de alta presión, permitió seleccionar el envasado tipo “Skin” (Cryovac), con barrera EVOH, como el sistema más apropiado para realizar los estudios de vida útil en productos ibéricos curados procesado por alta presión en comparación con los productos sin procesar. Se estudió la influencia de la actividad de agua (aw) del jamón curado en el grado de inactivación de L. monocytogenes por alta presión. Los resultados evidenciaron la relevancia de las características físico-químicas de los productos cárnicos. Así, los productos con valores inferiores de aw evidenciaron una disminución de la eficacia bactericida de la alta presión contra L. monocytogenes, en comparación con los productos con valores superiores de aw. Se realizaron diversos estudios “challenge test” para evaluar la capacidad bactericida/bacteriostática frente a L. monocytogenes de diferentes productos ibéricos curados (paleta ibérica de recebo curada, paleta ibérica de bellota curada, lomo ibérico curado y chorizo ibérico) procesados por alta presión en comparación con los productos sin procesar durante la vida útil de los mismos. Los resultados obtenidos aportan datos científicos que validan la capacidad bacteriostática e incluso bactericida de estos productos, provocando una reducción significativa de los niveles de L. monocytogenes inoculada. Sin embargo, parece que sólo con el tratamiento de alta presión se conseguiría la ausencia en 25 g en una parte importante del número de muestras analizadas durante el posterior almacenamiento. Paralelamente, se evaluó el efecto de la alta presión en las características físico-químicas y sensoriales de los mismos productos. El procesado por alta presión sólo provocó ligeros cambios en algunos atributos específicos, pero no ejerció ningún efecto significativo en cuanto a la puntuación hedónica global ni en las características físicoquímicas. Resultados: Los resultados más relevantes obtenidos durante el desarrollo del proyecto se describen a continuación. • Caracterización de jamón ibérico curado producido por COVAP. Se realizaron análisis físico-químicos, incluyendo la composición nutricional, del producto curado y la caracterización de la microbiota presente en dos momentos importantes en el proceso de curación del jamón: la etapa de postsalado y la etapa de maduración en bodega. El seguimiento de la microbiota presente en el producto desde la fase inicial, nos permitió identificar microorganismos alterantes, presuntamente relacionados con problemas de cala, y que se incluyeron en el estudio del efecto del tratamiento de alta presión para la pasteurización en frío del jamón COVAP. • Estudio de la inactivación por alta presión de microorganismos patógenos y alterantes relevantes para el jamón ibérico curado. 78 Siguiendo el diseño experimental planteado como resultado de la subtarea 2.5.1, se estudió Listeria monocytogenes como microorganismo patógeno y Serratia liquefaciens y Enterococcus como microorganismos relacionados con fenómenos de alteración. – Inactivación de Listeria monocytogenes en jamón curado tratado por alta presión en función del tiempo de tratamiento. La inactivación por AP de Listeria monocytogenes CTC1034 inoculada en paleta ibérica curada loncheada (a razón de 106-107 ufc/g) presentó una tendencia lineal hasta los 25 min aproximadamente. Aunque algunos de los tratamientos ensayados han conseguido reducciones de hasta 6 unidades logarítmicas (6D), tratamientos de 600MPa más prolongados, no consiguieron la eliminación total del patógeno (ausencia en 25g) ya que se detectó presencia de L. monocytogenes después del enriquecimiento de las muestras. – Evaluación de la inactivación de Serratia liquefaciens en jamón ibérico curado loncheado procesado por alta presión. Se estudió la influencia de diferentes combinaciones de presión (entre 450 y 750 MPa), temperatura (7,6 – 24,4 ºC) y tiempo (2,3 y 15,8 min) de tratamiento en la supervivencia de la cepa de S. liquefaciens seleccionada (previamente aislada del producto (jamón ibérico COVAP) e inoculada en las lonchas de paleta ibérica curada a razón de 106 – 107 ufc/g. Presiones del orden de 450 MPa provocan una disminución significativa de los recuentos de S. liquefaciens. Fueron necesarios tratamientos a presiones superiores (e.g. 600 MPa) para conseguir al menos en alguno de los replicados la ausencia de la bacteria inoculada (límite de detección 5 ufc/g). A la luz de los resultados, la resistencia a la alta presión isostática de esta especie de la familia de las enterobacterias es muy inferior al patógeno Listeria monocytogenes estudiado con anterioridad, por lo que se estima que cualquier tratamiento aplicado para mejorar la seguridad del producto será suficiente para inactivar este grupo de microorganismos de alteración. – Evaluación de la inactivación de Enterococcus faecalis en jamón ibérico curado loncheado procesado por alta presión. A partir de los resultados de los experimentos preliminares, se seleccionó una cepa de E. faecalis CTC8000, con capacidad tiraminogénica y con factores de virulencia. Se inoculó en las lonchas de paleta ibérica curada a razón de 106 – 107ufc/g para evaluar su resistencia a diferentes tratamientos de diferente presión (entre 450 y 750 MPa), temperatura (7,6 – 24,4 ºC) y tiempo (2,3 y 15,8 min). Los resultados obtenidos indican que son necesarios tratamientos a presiones de 600 MPa o superiores para producir reducciones significativas, por lo que el enterococo se mostró mucho más baroresistente que la enterobacteria alterante (S. liquefaciens) estudiada con anterioridad. Aunque la intensidad del tratamiento fue un factor determinante del grado de inactivación, la influencia del tiempo de tratamiento fue relevante, especialmente a presiones elevadas. A la luz de los resultados, y a diferencia de lo ocurrido con L.monocytogenes, podrían justificarse tratamientos más prolongados para maximizar el efecto de la alta presión frente los enterococos. • Estudio comparativo de la idoneidad de materiales de envasado para productos ibéricos curado loncheado destinado a tratamientos de alta presión. 79 Se evaluaron diversos materiales de envasado proporcionados por distintos fabricantes, incluyendo sistemas como: – poliamida/polietileno extrusionado (PA/PE) o con poliamida orientada laminada (OPA/PE), – polietileno tereftalato con una capa de poliéster metalizado (PETmet/PE), – polietileno tereftalato/aluminio/polietileno (PET/ALU/PE), – barrera de etilen vinil alcohol (EVOH) en envasado tipo “Skin”. Las lonchas de paleta ibérica curada se envasaron con los distintos materiales y se sometieron a diferentes tratamientos de alta presión (entre 400 y 600 MPa, de 5 a 15 min) y se almacenaron a 1ºC hasta 3 meses. El análisis sensorial, realizado en varias sesiones, inmediatamente después del tratamiento y a lo largo del almacenamiento, puso de manifiesto el efecto del envase sobre algunas propiedades sensoriales (como el color y el flavor) en las muestras envasadas con bolsas de (O)PA/PE y PETmet/PE, en comparación con las de PET/ALU/PE y de barrera EVOH. La textura se vio afectada por la alta presión pero la influencia del material del envase fue menos relevante. El envase tipo Skin con barrera EVOH se mostró como el más indicado para la realización de los estudios de vida útil previstos para la segunda parte del proyecto. • Influencia de la actividad de agua (aw) del producto en la inactivación de L. monocytogenes por altas presiones en jamón ibérico curado loncheado. El comportamiento de L. monocytogenes frente a las AP se estudió en jamón curado de aw alta (0,92) y baja (0,88). Las lonchas de jamón se inocularon con 106-107 ufc/g del patógeno y se sometieron a un tratamiento de 600MPa (5 min). La alta presión redujo los recuentos de L. monocytogenes del orden de 3 y 1 unidades logarítmicas en el producto con mayor y menor aw, respectivamente. La diferente efectividad de la alta presión en productos con distinta aw podría explicarse por la baroprotección que, una baja aw, confiere a las células del patógeno. La aw del producto también fue determinante del comportamiento del patógeno durante el posterior almacenamiento de las muestras en refrigeración. En las muestras sin presurizar sólo se observó una ligera disminución en el jamón curado con valores inferiores de aw. En el caso de los productos tratados por alta presión, se observó una tendencia a la disminución de los niveles de L.monocytogenes con una intensidad muy distinta según el tipo de producto. Así, en el jamón de aw superior, la reducción del patógeno posterior a la alta presión fue mucho más pronunciada, del orden de 3,65 Logs, en comparación con la reducción de 1 Log observada en el de aw inferior. • Estudio de vida comercial del jamón ibérico curado loncheado procesado por alta presión en comparación con el producto sin tratar. Verificación de la capacidad bacteriostática/bactericida del producto y el tratamiento por alta presión. Se estudió el comportamiento de L. monocytogenes (mezcla de tres cepas) frente a la alta presión después de su inoculación en paleta curada loncheada, proveniente de cerdo ibérico con dos tipos de alimentación: bellota y cebo. Paralelamente, se estudió la influencia del 80 procesado por alta presión en las características físico-químicas y sensoriales de los mismos productos, tratados y sin tratar. El producto mostró cierta capacidad bactericida provocando una reducción inmediata del número de L. monocytogenes. Durante el almacenamiento, se observó una tendencia a la reducción de los niveles de L. monocytogenes en las lonchas de paleta ibérica curada, lo que coincide con la posible capacidad bactericida del producto y las condiciones ensayadas. Sin embargo, cabe destacar que la ausencia en 25g del patógeno sólo se obtuvo de forma mayoritaria en los productos procesados por altas presiones. Las resultados sobre la caracterización físico-química de las muestras evidenciaron ligeras diferencias en algunos parámetros (e.g. porcentaje graso y composición de ácidos grasos) según el tipo de producto, debidas a la alimentación del animal de procedencia. Sin embargo, no se detectaron diferencias relevantes debidas a la aplicación de la alta presión. A nivel sensorial, las muestras presurizadas se caracterizaron por presentar ligeras diferencias en algunos atributos particulares respecto de las muestras no tratadas por alta presión. En cuanto a la puntuación hedónica de las muestras, no se observaron diferencias significativas. • Verificación de la capacidad bacteriostática de productos ibéricos curados y efecto bactericida del tratamiento por alta presión durante la vida comercial de los productos. Se estudió el comportamiento de L. monocytogenes (mezcla de tres cepas) frente a la alta presión en chorizo y lomo ibéricos curados, durante la vida comercial de los mismos. Paralelamente, se estudió el impacto del procesado por alta presión en las características físico-químicas y sensoriales de los mismos productos, tratados y sin tratar. Los productos estudiados mostraron cierta capacidad bactericida, provocando una reducción inmediata en L. monocytogenes, así como una tendencia a la disminución a lo largo del almacenamiento que puede relacionarse con un ligero efecto bactericida de los productos derivado de sus características físico-químicas (i.e. baja actividad de agua). La aplicación de la alta presión causó una importante reducción inmediata del patógeno, hasta niveles próximos o inferiores al límite de detección en placa en la mayoría de muestras. Además, la ausencia en 25g del patógeno se obtuvo principalmente en los productos procesados por altas presiones. En general no se observaron efectos relevantes ni significativos del tratamiento de presurización en las características físico-químicas de los productos estudiados. En cuanto a las características sensoriales de los productos estudiados a tiempo cero (justo después del tratamiento), el efecto de la alta presión fue prácticamente nulo en las muestras de chorizo. En el lomo, las muestras tratadas por alta presión se caracterizaron por presentar ligeras diferencias en algunos atributos concretos en comparación con las muestras no tratadas por alta presión. Según la evaluación conjunta de los resultados de la evaluación sensorial (incluyendo todas las muestras a lo largo de los 6 meses de 81 almacenamiento), las diferencias en la puntuación hedónica entre las muestras tratadas y sin tratar no fueron significativas en ninguno de los dos productos estudiados. Conclusiones: La caracterización físico-química y microbiológica de los jamones ibéricos curados producidos por COVAP permitió identificar los microorganismos más relevantes en relación al deterioro (Serratia liquefaciens y Enterococcus spp.) y la seguridad (Listeria monocytogenes). La evaluación preliminar desde el punto de vista sensorial del jamón ibérico curado loncheado tratado por alta presión indicó una cierta afectación en determinados aspectos a medida que aumentaba la intensidad del tratamiento. Se detectó un efecto importante del envase sobre algunas propiedades del producto, lo que indica la necesidad de seleccionar un material de envase adecuado para los productos destinados a ser tratados por alta presión (e.g. material barrera que incluya etilen vinil alcohol (EVOH)). De los resultados del estudio de la inactivación de microorganismos relacionados con fenómenos de alteración del jamón curado, se ha observado la importancia, no sólo de la intensidad de presurización sino también del tiempo de tratamiento en el grado de inactivación de enterococos. Enterococcus faecalis se ha mostrado mucho más resistente que la enterobacteria estudiada (Serratia liquefaciens). El estudio de la influencia de la aw en el comportamiento de L. monocytogenes frente a las altas presiones, ha evidenciado la relevancia de las características físico-químicas de los productos cárnicos en el grado de inactivación bacteriana mediada por la alta presión. En este sentido, los productos con valores de aw menores ejercen un marcado efecto baroprotector, es decir disminuyen la eficacia bactericida de la alta presión en comparación con los productos de mayor aw. Los resultados obtenidos en relación al estudio de vida útil (“challenge test”) en los productos ibéricos curados elaborados por COVAP (paleta, chorizo y lomo) aportan datos científicos que validan la capacidad bacteriostática e incluso bactericida de la alta presión, provocando una reducción significativa de los niveles de L. monocytogenes inoculada. Sin embargo, parece que sólo con el tratamiento con alta presión se conseguiría la ausencia en 25 g en un parte significativa del número de muestras durante el posterior almacenamiento. Desde un punto de vista práctico en relación a las exigencias sanitarias para una posible exportación de los productos estudiados, la aplicación de las AP como tratamiento listericida post-procesado de los productos ibéricos curados cumpliría con los requerimientos de la alternativa 1 especificada en la Listeria interim final rule, 9 CFR 430.4(b) del Food Safety and Inspection Service (FSIS) de la administración americana. Además de los resultados sobre la caracterización físico-química y sensorial de los productos presurizados, se puede deducir que el efecto del procesado por alta presión sólo provoca ligeros cambios en algunos atributos específicos pero no así en la puntuación hedónica global. Sólo un estudio de consumidores podría dilucidar si estos cambios serían detectados de forma significativa. 82 5.2.6 Tarea 2.6. Alta presión en combinación con sistemas de secado (Casademont, S.A, Metalquimia, S.A. e IRTA). Objetivos: El objetivo principal de esta tarea fue desarrollar varios productos crudocurados loncheados secados mediante el sistema de secado rápido Quick Dry Slice process® (QDS Process) y la evaluación de su seguridad alimentaria. Concretamente, se desarrollaron los siguientes productos: • • • embutidos crudos curados (chorizo): producto ácido y poco ácido. Producto estándar y producto reducido en sodio. cárnico de pieza entera (jamón curado): producto estándar y producto reducido en sodio. embutido de pescado. Para cada tipo de producto se realizaron estudios de inoculación (“challenge tests”) para evaluar la evolución de los patógenos Salmonella y Listeria monocytogenes inoculados a baja concentración (alrededor de 100 ufc/g) simulando una contaminación en las materias primas (en productos embutidos) o una recontaminación durante el loncheado (en jamón). También se realizó un seguimiento del comportamiento de los patógenos y de la microbiota tecnológica (bacterias del ácido láctico y cocos grampositivos catalasa positivos) durante el almacenaje en refrigeración de los productos loncheados y envasados al vacío. De forma paralela, se estudió el efecto de los principales factores estresantes presentes en los productos crudos curados de forma intrínseca o extrínseca (NaCl, NaNO2, lactato potásico, acidez y temperatura) sobre el crecimiento y fisiología de Salmonella y L. monocytogenes con el fin de profundizar en el papel que tienen las combinaciones de estreses propias de los productos cárnicos curados y las protecciones cruzadas que los patógenos generan frente a estos mediante (i) la caracterización de la capacidad de crecimiento de Salmonella y L. monocytogenes según la acidez y en presencia de sal, lactato y nitrito, y procesado por alta presión hidrostática (AP), (ii) la realización de estudios proteómicos para determinar que proteínas se inducen en respuesta a un tratamiento de AP y (iii) el análisis de la expresión génica de algunos de los genes de dichas proteínas para determinar su inducción frente a otros estreses y valorar el nivel de estrés de las bacterias en producto alimentario. Resumen ejecutivo: Los distintos sistemas de conservación que se aplican a los productos cárnicos como el frío, la acidificación, la disminución de la actividad de agua, la alta presión (AP), etc. suponen situaciones de estrés para las bacterias, y en algunos casos, cuando los niveles aplicados son subletales, se adaptan aumentando así su supervivencia, lo cual no es deseable desde el punto de vista de la seguridad alimentaria. Sin embargo, una combinación inteligente de estos factores puede permitir controlar el crecimiento de los patógenos Salmonella y L. monocytogenes durante el procesado y almacenaje de los alimentos. La conservación de productos cárnicos a partir de la salazón y el secado se basa, principalmente, en la disminución de la actividad de agua. En algunos de estos productos, además, se puede añadir el efecto conservante debido a la disminución del pH u otros 83 aditivos. El NaCl (sal) se ha usado como conservante en productos cárnicos durante muchos años. Sin embargo, su consumo excesivo se ha relacionado con hipertensión y enfermedades cardiovasculares, y la investigación y desarrollo de productos reducidos en sal o sin sal ha aumentado en los últimos años. El NaCl es un ingrediente multifuncional muy importante en los productos curados, ya que participa en la inhibición del crecimiento microbiano, reducción de la aw, liberación de proteínas solubles, aumento del flavor, etc. y su eliminación podría afectar tanto la calidad como la seguridad alimentaria. Por lo tanto, el desarrollo de productos reducidos en Na+ requiere el diseño de nuevas combinaciones de ingredientes y/o la aplicación de nuevas tecnologías de conservación como la AP. Durante la maduración-secado de los embutidos fermentados tradicionales se produce un encadenamiento de obstáculos (sales de curado, potencial redox, microbiota competitiva, pH y actividad de agua) que tiene como consecuencia la inhibición del crecimiento de los patógenos. El proceso QDS (Quick Dry Slice process®) es un nuevo sistema de secado acelerado de productos cárnicos loncheados que se aplica inmediatamente después del proceso de fermentación y que acorta el período de secado-maduración de varias semanas a unos 45 min en el caso de embutidos crudo-curados como el chorizo. El proceso QDS permite elaborar productos equivalentes a los secados mediante el sistema tradicional, y además ofrece una gran oportunidad para diseñar productos de acuerdo con la estrategia NAOS (con menos sal y grasa) y la demanda del mercado (menor acidez). Sin embargo, el efecto sobre la seguridad alimentaria de los productos secados a través del QDS process® es desconocida. En chorizo ácido y poco ácido se ha observado que los cambios físico-químicos que se producen durante la maduración-secado tanto del producto tradicional como del producto secado mediante el sistema QDS son suficientes para la completa eliminación de los patógenos L. monocytogenes y Salmonella inoculados a bajos niveles en la materia prima y, por lo tanto, en este caso la AP no aporta un incremento en la seguridad alimentaria. En chorizos reducidos en Na+ (sustitución de NaCl por KCl + lactato potásico), la eliminación de los patógenos se produce de forma más lenta en el producto poco ácido que en el ácido y el proceso QDS es más seguro que el tradicional. Sólo en el caso de la supresión de varios obstáculos para el crecimiento microbiano como es el caso del chorizo poco ácido y reducido en sal, la aplicación de un tratamiento de AP es necesaria para alcanzar los niveles de seguridad alimentaria requeridos. El proceso de elaboración del jamón curado es largo, debido principalmente a la etapa de secado-maduración. Con el sistema de secado QDS process®, el tiempo de secado puede reducirse considerablemente y se presenta como una alternativa para la obtención de jamón curado loncheado en un tiempo menor sin necesidad de sacrificar ni la calidad ni la seguridad alimentaria. Los estudios de inoculación han demostrado que el tipo de secado y, especialmente, el proceso de elaboración y composición del producto determinan la seguridad alimentaria del producto acabado, siendo el producto tradicional y el producto acidificado secado mediante el proceso QDS los que más inhiben L. monocytogenes. La reducción del Na+ no afecta de 84 forma significativa la seguridad alimentaria de los jamones no tratados por AP pero la disminuye ligeramente en jamones presurizados. El sistema QDS permite también el desarrollo de nuevos productos. En este caso se ha desarrollado un embutido crudo curado de pescado (pH 4.8) que se valora muy positivamente tanto desde el punto de vista sensorial como de seguridad alimentaria. En general, la seguridad alimentaria de los productos crudos curados embutidos picados y de pieza entera se ve principalmente afectada por los cambios en las propiedades físicoquímicas de los productos (disminución de la acidez y el Na+ y/o introducción de nuevos aditivos) y menos por cambios en el tipo de secado. En el caso de los productos estudiados en esta tarea, en todos los casos (y generalmente sin la necesidad de aplicar un tratamiento de AP) se cumpliría con el FSO (objetivo de seguridad alimentaria) establecido por la Scientific Committee on Veterinary Measures relating to Public Health (SCVPH) y en el cual se basan los criterios microbiológicos establecidos por la UE (Reglamento (CE) nº 2073/2005, que requiere niveles de L. monocytogenes inferiores a 2 log ufc/g durante la vida útil de los productos listos para el consumo que no permiten el crecimiento del patógeno. Resultados: • Estudio de la respuesta bacteriana a una combinación de estrés relacionados con el secado de productos cárnicos y el procesado por alta presión. El estudio de la respuesta bacteriana a una combinación de estrés relacionado con el secado de productos cárnicos y el procesado por alta presión mediante la evaluación de la capacidad de crecimiento de Salmonella y L. monocytogenes mostró que los distintos sistemas de conservación que se aplican a los productos cárnicos como el frío, la acidez, la disminución de la actividad de agua, la alta presión (AP), etc. suponen situaciones de estrés para las bacterias a las cuales responden y en algunos casos, cuando los niveles aplicados son subletales, se adaptan aumentando así su supervivencia, lo cual no es deseable desde el punto de vista de la seguridad alimentaria. Sin embargo, se determinó que la cantidad de sal añadida y el pH son factores clave para el control microbiológico en el modelo cárnico estudiado. La adición de lactato también se mostró efectiva para la inhibición del crecimiento de Salmonella y L. monocytogenes y su uso podría ser interesante en productos reducidos en sal o poco ácidos. A nivel fisiológico, la aplicación de un tratamiento de AP genera una respuesta celular en forma de cambios en el proteoma de L. monocytogenes y Salmonella. Estos cambios incluyen la acumulación de proteínas de estrés y proteínas del metabolismo general, que son diferentes dependiendo de la especie y cuyos genes también se expresan en respuesta a otros tipos de estrés como la sal, la temperatura elevada o la acidez, un hecho que explicaría las reacciones cruzadas que se observan entre distintos tipos de estrés y que pueden ser favorables o perjudiciales según disminuyan o incrementen la supervivencia de los patógenos. • Estudio de la seguridad alimentaria de un embutido crudo curado loncheado ácido y poco ácido durante la maduración-secado y almacenaje en refrigeración. Efecto del secado QDS y la AP. 85 Se desarrollaron dos tipos de embutido, chorizo ácido (pH 4.8) y chorizo poco ácido (pH 5.3) los cuales se secaron de forma tradicional y mediante el sistema QDS. Los 4 tipos de chorizo se sometieron a un estudio de inoculación o challenge test simulando una contaminación de bajo nivel (< 100 ufc/g) con Salmonella y L. monocytogenes en la materia prima. Después de la fermentación, común para los 4 tipos de chorizo, se procedió a la maduración-secado a través del sistema tradicional y el sistema QDS. Finalizado el secado, las lonchas de chorizo se envasaron al vacío y la mitad de ellas se sometieron a un tratamiento de AP de 600 MPa durante 5 min. Finalmente, las muestras se almacenaron en refrigeración durante 91 días. Los resultados mostraron que la acidez del producto tenía un efecto sobre la disminución de Salmonella pero no L. monocytogenes. Aunque se observaron diferencias dependiendo del patógeno y acidez del producto, en todos los casos se observó una disminución progresiva de los niveles de patógenos a lo largo del proceso de maduración-secado. La ausencia de recuperación de los patógenos durante el almacenaje confirmó la total eliminación de los mismos, especialmente en el caso de L. monocytogenes, una bacteria psicrotrófica capaz de crecer a temperaturas de refrigeración. La aplicación de un tratamiento de AP de 600 MPa durante 5 min no incrementó la seguridad alimentaria del producto ya que en el momento de la aplicación del tratamiento de AP los niveles de los dos patógenos ya eran inferiores al límite de detección y así se mantuvieron durante los posteriores 91 días de almacenaje. • Estudio de la seguridad alimentaria de un embutido crudo curado loncheado ácido y poco ácido y reducido en NaCl durante la maduración secado y almacenaje en refrigeración. Efecto del secado QDS y la AP. En la presente tarea se desarrollaron matrices cárnicas sin sal añadida y sensorialmente aceptables para chorizo ácido y poco ácido. En general, la eliminación de los patógenos Salmonella y L. monocytogenes fue más lenta en el chorizo reducido en sal poco ácido que en el ácido. Considerando el tipo de secado, el proceso QDS fue más seguro que el tradicional. En el caso del chorizo tradicional poco ácido la completa eliminación de los patógenos requirió de la aplicación de un tratamiento de AP. En comparación con los resultados obtenidos previamente en chorizo no reducido en sal, la sustitución del Na+ proveniente de NaCl no disminuyó la seguridad alimentaria del producto QDS ni el tradicional ácido, sin embargo, retrasó la desaparición tanto de L. monocytogenes como en Salmonella en chorizo tradicional poco ácido en el caso de muestras no tratadas por AP. Los resultados del conjunto de estudios de inoculación realizados en chorizo muestran la necesidad de evaluar la seguridad alimentaria de productos con modificaciones en la formulación o procesado, ya que la supresión de obstáculos para el crecimiento microbiano como la acidez o el NaCl modifican las propiedades físicoquímicas del alimento y su seguridad alimentaria. • Estudio de la seguridad alimentaria de un producto cárnico crudo curado de pieza entera, loncheado, elaborado de forma tradicional y mediante el sistema QDS. Efecto del tipo de secado y la AP durante el almacenaje. 86 Se desarrollaron varios productos cárnicos crudos curados de músculo entero (tipo jamón curado) adecuados tecnológicamente al proceso QDS y con unas características similares a las de un producto cárnico crudo curado de músculo entero tradicional. Una vez desarrolladas las matrices cárnicas, se realizó un estudio de inoculación para determinar la inhibición de L. monocytogenes en un proceso de jamón tradicional tipo centro-europeo ahumado y de tres tipos de jamones procesados mediante QDS: jamón sin hueso reestructurado ahumado con un presecado tradicional, jamón acidificado y jamón acidificado ahumado. Los cuatro tipos de jamón fueron inoculados con L. monocytogenes (<100 ufc/g) después del loncheado para simular una contaminación cruzada en este punto. Las lonchas se envasaron al vacío y la mitad de ellas fueron sometidas a un tratamiento de alta presión a 600 MPa durante 5 min. Todas ellas se almacenaron en refrigeración durante 16 semanas. Durante este período las diferencias más importantes que se registraron fueron entre las lonchas presurizadas y las no presurizadas. En ausencia de tratamiento de AP los recuentos de L. monocytogenes disminuyeron gradualmente a lo largo del tiempo de almacenaje, siendo el jamón tradicional y el reestructurado ahumado los que mostraron una disminución mayor y menor, respectivamente, de los niveles de L. monocytogenes. Este mismo comportamiento se observó en las muestras de jamón tratado por AP. Aunque en este caso los recuentos fueron inferiores al límite de detección en placa (10 ufc/g) y predominaron las muestras con ausencia del patógeno en 25 g de jamón, el reestructurado ahumado continuó siendo el que registró niveles mayores del patógeno mientras que el jamón secado de forma tradicional y el acidificado ahumado fueron más seguros, con ausencia de L. monocytogenes durante los primeros 28 días de almacenaje. • Estudio de la seguridad alimentaria de un producto cárnico crudo curado de pieza entera, loncheado, reducido en sal, elaborado de forma tradicional y mediante el sistema QDS. Efecto del tipo de secado y la AP durante el almacenaje. En la presente tarea se desarrollaron distintas matrices cárnicas equivalentes a las desarrolladas en la tarea 2.6.4 pero sin la adición de NaCl durante el procesado y sensorialmente aceptables. Para ello, se desarrollaron distintos procesos de salado adaptados a los sustitutos de NaCl seleccionados (KCl + lactato potásico). Una vez desarrollados los distintos tipos de jamón curado sin sal añadida se realizó un estudio de inoculación igual que el realizado en la tarea 2.6.4 para evaluar la seguridad alimentaria (inhibición de L. monocytogenes) de los nuevos productos. Los resultados mostraron que en los jamones procesados sin adición de NaCl, tanto la composición de la salmuera como el tipo de secado influyen en la seguridad alimentaria. En los jamones secados por el sistema QDS, L. monocytogenes disminuyó progresivamente en los 4 tipos de jamón aunque los jamones acidificado-ahumados fueron los únicos que registraron ausencia al final del almacenaje en refrigeración. En jamones secados de forma tradicional, en cambio, la disminución del patógeno fue más lenta. El tratamiento de AP produjo una reducción inmediata en los niveles del L. monocytogenes y todos los tipos de jamón, tradicional y QDS, registraron ausencia del patógeno al final del almacenaje en refrigeración. 87 En comparación con los resultados obtenidos en jamón curado procesado con NaCl, la eliminación de la sal durante el procesado retrasó la disminución de los niveles de L. monocytogenes en jamón tradicional y no mostró diferencias significativas en los jamones secados a través del sistema QDS. En ambos tipos de jamón (procesados con y sin NaCl), los mejores resultados a nivel de seguridad alimentaria (ausencia del patógeno al final del almacenaje), se obtuvieron en los jamones acidificados-ahumados. La aplicación de un tratamiento de AP de 600 MPa fue más efectiva en los jamones con sal, en los cuales L. monocytogenes fue eliminada inmediatamente después del tratamiento de AP y permaneció ausente durante los 112 días de almacenaje en refrigeración. • Estudio de la seguridad alimentaria de un embutido de pescado secado mediante el sistema QDS y tratado por AP. El embutido de pescado desarrollado es un producto curado, fermentado (pH 4.8), loncheado y secado mediante el sistema QDS. La inoculación de los patógenos Salmonella y L. monocytogenes (<100 ufc/g) se realizó durante el amasado del producto para simular una contaminación en la materia prima. Después del secado de las lonchas, la mitad de las muestras se sometieron a un tratamiento de AP (600 MPa durante 5 min) y todas ellas se almacenaron en refrigeración durante 27 días. Los resultados del ensayo mostraron una disminución progresiva de los niveles de ambos patógenos a lo largo del ensayo. En el caso de lonchas no presurizadas, la reducción de Salmonella fue más rápida que la de L. monocytogenes y la ausencia (en 25 g de producto) se consiguió después de 20 y 27 días de almacenaje, respectivamente. En cambio, en lonchas tratadas por AP ambos patógenos fueron eliminados inmediatamente después del tratamiento y no se observó recuperación durante el almacenaje. Conclusiones: Los distintos sistemas de conservación que se aplican a los productos alimenticios como el frío, la acidez, la disminución de la actividad de agua, la alta presión (AP), etc. suponen situaciones de estrés para las bacterias. Una combinación inteligente de estos factores puede permitir controlar el crecimiento de patógenos durante el procesado y almacenaje de los alimentos. En chorizo ácido y poco ácido los cambios físico-químicos que se producen durante la maduración-secado tanto del producto tradicional como del producto secado mediante el sistema QDS son suficientes para la completa eliminación de los patógenos L. monocytogenes y Salmonella presentes a bajos niveles en la materia prima y, por lo tanto, la AP no aporta un incremento de seguridad alimentaria. En chorizos reducidos en Na+ (sustitución de NaCl por KCl + lactato potásico), la eliminación de los patógenos se produce de forma más lenta en el producto poco ácido que el ácido, y el proceso QDS es más seguro que el tradicional. Sólo en el caso de la supresión de varios obstáculos para el crecimiento microbiano como es el caso del chorizo poco ácido y reducido en sal, la aplicación de un tratamiento de AP es necesario para alcanzar los niveles de seguridad alimentaria requeridos (Reglamento (CE) número 2073/2005 de la Comisión de 15 de noviembre de 2005 relativo a los criterios microbiológicos aplicables a los productos alimenticios). 88 En producto cárnico de músculo entero (e.g. jamón curado) el tipo de secado y especialmente el proceso de elaboración y composición determinan la seguridad alimentaria del producto acabado, siendo el producto tradicional y el acidificado secado mediante el proceso QDS los que más inhiben L. monocytogenes. La reducción del Na+ no afecta de forma significativa la seguridad alimentaria de los jamones no tratados por AP. En jamones presurizados, en cambio, la capacidad de la matriz cárnica de inhibir L. monocytogenes disminuye, especialmente en jamones secados de forma tradicional y acidificados secados mediante el proceso QDS. La seguridad alimentaria de los productos crudos-curados embutidos picados y de pieza entera se ve principalmente afectada por los cambios en las propiedades físico-químicas de los productos (disminución de la acidez y el Na+ e introducción de nuevos aditivos) y menos por cambios en el tipo de secado. Todos los productos estudiados en esta tarea a través de estudios de inoculación cumplirían los criterios microbiológicos establecidos por la UE (Reglamento (CE) nº 2073/2005. 5.2.7 Tarea 2.7. Pasteurización por altas presiones de preparaciones culinarias y alimentos sólidos, para asegurar su conservación sin alterar sus propiedades nutricionales o sensoriales (Fundació Alíca e IRTA). Objetivos: Los principales objetivos fueron los siguientes: • Conseguir un procesado mínimo garantizando la seguridad alimentaria y la conservación de las propiedades nutricionales de alimentos sólidos y preparaciones culinarias saludables y de alto interés nutricional (especialmente frutas, verduras y pescado) mediante el uso de las altas presiones. Al mismo tiempo, facilitar el consumo de alimentos. • Diseño de fórmulas y técnicas culinarias para optimizar el uso de las altas presiones en alimentos sólidos. • Estudio de los efectos de las altas presiones sobre los ingredientes (proteínas, almidones, grasas, etc.) de los alimentos sólidos y preparaciones culinarias. • Estudio de los efectos de algunos ingredientes culinarios y de los procesos anteriores a la presurización, sobre la eficacia de las altas presiones. • Estudio del efecto del procesado por altas presiones sobre la textura y sobre la aceptabilidad sensorial de alimentos y preparaciones culinarias. Resumen ejecutivo: Se estudió el efecto de la tecnología de altas presiones sobre los alimentos y algunos productos gelificantes; “Inactivación por altas presiones de Anisakis y otros en pescados, crustáceos, etc.” en que se estudió el efecto de las altas presiones sobre ostras, y sobre pescado cocido al vacío; “Estudio de productos para regímenes alimentarios”, en donde se investigaron elaboraciones culinarias para dietas específicas; “Altas presiones para obtener alimentos que permitan la ingesta”, en la que se estudió la 89 obtención de productos para disfágicos por altas presiones;“Investigación de los efectos de las altas presiones en ingredientes y elaboraciones”, donde se estudió el desconchado de cangrejo de rio por altas presiones, la conservación de setas y la formación de geles por altas presiones. Resultados: La participación de la Fundació Alícia durante los 4 años del proyecto permitó la obtención de nuevos conocimientos en este ámbito destacando los resultados siguientes: Se ampliaron los conocimientos de la Fundació Alícia sobre el comportamiento e interacciones de los gelificantes focalizando el interés culinario en las gelificaciones en frío, por altas presiones, del alginato sódico, gellan rígido y pectina. Se definieron las soluciones y las fórmulas a utilizar en los distintos estudios, a la vez que se estudió el efecto de otros ingredientes en la gelificación por altas presiones, en concreto el efecto de la sal, del azúcar, del ácido cítrico y del aceite. Posteriormente, se estudió el efecto de alimentos líquidos, en concreto zumo de limón, zumo de manzana, pulpa de mango, leche, nata, zumo de zanahoria, agua de tomate, whisky, vino, campari, agua de menta, salsa de soja y vinagre, en la gelificación en frío del alginato sódico por altas presiones. Los alimentos fibrosos y lácticos no permiten obtener geles bien formados. Con el limón y el campari, no se pudieron obtener geles. Con los otros productos, se formaron geles según las concentraciones, destacando como preferente las combinaciones de 2%/0.4% y 1%/0.4% de alginato sódico/”gluconolactato cálcico” (mezcla de dos sales de calcio, gluconato cálcico y lactato cálcico). Respecto a la cocción al vacío se estudió el efecto de esta técnica culinaria combinada con las altas presiones en la microbiota de la manzana y el salmón. Las condiciones de cocción al vacío, definidas para la obtención de una manzana cocida de gran valor sensorial, son suficientes para alargar a 6 meses la vida útil de la manzana cocida, por lo que no se precisó el procesado por altas presiones en este caso. Por otro lado, en el caso del salmón cocido a baja temperatura controlada se pudo observar que a partir de 400MPa se reduce la microbiota del salmón cocido al vacío, en concreto colonias aerobias y enterobacterias, alargando la vida útil hasta por lo menos en cuatro días. No obstante, se debería seguir esta línea de estudio para intentar mejorar las características sensoriales de estos productos tratados por altas presiones ya que éstas modifican levemente su textura. En cuanto a productos para regímenes especiales, se realizaron cuatro estudios derivándose de cada uno de ellos un recetario: fenilcetonúricos, enfermos de cáncer, diabéticos y enfermos de hospitales con varios síntomas (disfagia, problemas de masticación etc.). Estos estudios permitieron establecer los productos y las texturas adecuadas para cada uno de los trastornos estudiados. En concreto, en el estudio de platos para diabéticos, se formularon recetas con sustitutivos de azúcar y de grasas junto a ingredientes con efecto saciante. En la valorización del cangrejo de río se destaca el interés del efecto de las altas presiones en el pelado de los cangrejos de río manteniendo aceptables los atributos sensoriales del producto fresco. 90 Se estudió el efecto de la presurización de ostras por altas presiones en la higienización. Este proceso permite conservar el frescor característico y facilita el desconchado. Se determinaron las presiones que minimizan los cambios sensoriales debido al proceso. En una segunda fase se realizó una valoración de la vida útil, basándose en las variaciones de las características físico-químicas y sensoriales. El líquido de conservación es un factor importante de degradación de las ostras presurizadas durante la conservación, por lo cual se realizó un estudio de la evolución de la turbidez del líquido durante la conservación de las ostras. La vida útil se estudió en un último apartado. El efecto de las altas presiones permitió la reducción de los microorganismos estudiados. El factor limitante de la conservación de las ostras presurizadas parece ser sensorial: al cabo de 11 días las ostras no eran aceptables debido a una modificación negativa del olor y del color. Conclusiones: El tratamiento mediante altas presiones: • Representa una alternativa a los tratamientos convencionales de higienización dado que respeta en mayor medida los atributos sensoriales de ostras, cangrejo de río y procesados de frutas y verduras entre otros productos, sin afectar su seguridad alimentaria. • Facilita el manejo, pelado de productos tales como el cangrejo de río, fomentando su consumo. A su vez, permite la obtención de productos convenientes. • Modifica la textura de determinados productos, concretamente gelifica soluciones de alginato sódico, gellan rígido y pectina. Estas modificaciones de textura son interesantes en la definición y elaboración de productos para grupos de población con determinados trastornos tales como enfermos de cáncer y disfágicos. • Permite un procesado mínimo garantizando la seguridad alimentaria y la conservación de las propiedades nutricionales de alimentos sólidos y preparaciones culinarias saludables y de alto interés nutricional (especialmente frutas, verduras y pescado). 91 5.3 ACTIVIDAD 3: PROCESADO DE LECHE, PRODUCTOS LÁCTEOS Y OTROS LÍQUIDOS POR TECNOLOGÍA DE ALTA PRESIÓN 5.3.1 Tarea 3.1. Estudio del tratamiento de leches fermentadas y del efecto letal y subletal en la flora microbiana y prebiótica, tratadas por alta presión isostática, y/o tratamiento térmico (Danone, S.A e IRTA). Objetivos: El objetivo principal planteado en este proyecto fue el de estudiar el tratamiento de leches fermentadas por alta presión isostática, y/o tratamiento térmico y de su efecto letal y subletal en la flora microbiana y prebiótica. Para alcanzar este objetivo se plantearon las siguientes subtareas. • Caracterización sensorial de la textura y consistencia, sabor y/u otros criterios sensoriales, de leches fermentadas procesados por alta presión y/o calor. • Caracterización microbiológica, estudio de la viabilidad y actividad residual de leches fermentadas y prebióticos, tratados por alta presión y/o calor. • Desarrollo de estudios clínicos en leches fermentadas procesadas por alta presión. Resumen ejecutivo: Después de una primera fase de acondicionamiento de los equipos térmicos en Danone, se seleccionó el tipo de envase apto para el procesado en alta presión. El envase fue el original del producto ya que se realizaron varias pruebas de estanqueidad y se comprobó que dicho envase se mantenía intacto a lo largo de todo el tratamiento de pasteurización. Posteriormente, se caracterizaron las condiciones de tratamiento por alta presión en los productos seleccionados para el estudio. Se realizaron varias pruebas de presurización, hasta obtener el rango de presión y tiempo adecuados para cada uno de estos productos. En cada uno de los ensayos, se observó la viabilidad de los microorganismos característicos de cada producto frente al tratamiento aplicado mediante análisis microbiológicos. Se comparó mediante análisis sensorial un producto tratado por alta presión y otro no tratado. Las muestras se presentaron codificadas al panel de catadores entrenados en los productos lácteos a evaluar. Éstos evaluaron varios descriptores agrupados en 4 criterios: textura en vaso, textura en boca, sabores básicos y detección de los aromas característicos de dicho producto. La evaluación de la viscosidad del producto se realizó mediante un viscosímetro. Se realizaron varios tratamientos térmicos en los que se varió la temperatura y el tiempo de tratamiento térmico. El estudio se realizó con uno de los productos estudiados previamente en el proceso de presurización. Durante estos ensayos, se determinaron los parámetros: pH, viscosidad y flora microbiana específica del producto evaluado. Se realizó un estudio preclínico con un nemátodo. Para ello se utilizó un producto presurizado y otro sin presurizar. Los nemátodos fueron alimentados con uno de los productos evaluados durante varios días y ya en estado adulto fueron sometidos a un tratamiento de estrés oxidativo por exposición a un agente oxidante durante varias horas. 92 Se determinó la variabilidad del nemátodo después de la exposición de dicho tratamiento de estrés. Los ensayos realizados fueron los siguientes: Ensayo 1: Nemátodo + E.Coli OP50 Ensayo 2: Nemátodo + E.Coli OP50 + Vitamina C Ensayo 3: Nemátodo + E.Coli OP50 + Producto Fresco Ensayo 4: Nemátodo + E.Coli OP50 + Producto Fresco + Tratamiento Térmico Ensayo 5: Nemátodo + E.Coli OP50 + Producto Fresco + Tratamiento Alta Presión (1) Ensayo 6: Nemátodo + E.Coli OP50 + Producto Fresco + Tratamiento Alta Presión (2) Resultados: Existen unos parámetros específicos de presión y tiempo, en los cuales el comportamiento de las cepas microbianas lácticas evaluadas, siguen unos patrones de letalidad o subletalidad específicos. Con estas condiciones de procesado (relación P y T) se determinó el tratamiento de alta presión óptimo para el cual se evitó la mortalidad y por lo tanto se mantuvieron vivas las cepas evaluadas dentro de los productos estudiados a lo largo de todo el proyecto. Los catadores caracterizaron los productos presurizados como menos ácidos y astringentes respecto de los no presurizados. En la Figura 5.3.1a) se observa que la intensidad de estos dos atributos es inferior en el producto tratado por alta presión. Al mismo tiempo, en la Figura 5.3.1b), se observa que para el producto tratado por alta presión aumenta la intensidad de sabor a queso y la astringencia, además mantiene el sabor amargo y la sensación grasa, y finalmente disminuye la intensidad de sabor ácido. No obstante, sería necesario aplicar un análisis de la varianza para conocer si las diferencias observadas fueron significativas. a Intensidad aromática (sabores) Espeso 2,5 2 b 1,5 Grasa Intensidad aromática (sabores) Grumos (reverso cuchara) 1 0,5 0,5 Regustos Huidizo Sabor lácteo Sabor lácteo Dulce Testigo 4ºC Dulce Sabor a queso Ácido Amargo Huidizo 0 0 Sabor a queso Espeso en boca 1,5 1 Regustos Grumos (reverso cuchara) 2 Grasa Espeso en boca Espeso 3 2,5 Ácido Amargo Astringente Testigo 4ºC Tratado 4ºC Astringente Tratado 4ºC Figura 5.3.1. a) Comparación del perfil sensorial de un producto lácteo con y sin tratamiento de presurización. b) Comparación del perfil sensorial de un producto lácteo probiótico testigo con y sin tratamiento de presurización. En el caso del producto representado en la Figura 5.3.2, se almacenó a dos temperaturas de conservación. En el caso del producto tratado por alta presión y conservado a 4ºC se mantuvo la intensidad de sabor ácido y la astringencia respecto del no tratado. En cambio, para el producto almacenado a 20ºC, estos dos atributos se puntuaron con superior 93 intensidad. Contrariamente, cuando el producto tratado se mantuvo a 20 ºC esto no ocurrió. Análogamente al caso anterior, sería necesario aplicar un análisis de la varianza para conocer si las diferencias observadas fueron significativas. Intensidad aromática (sabores) Espeso 3 Grumos (reverso cuchara) 2,5 2 Grasa Espeso en boca 1,5 1 0,5 Regustos Huidizo 0 Sabor lácteo Dulce Sabor a queso Ácido Amargo Testigo 4ºC Astringente Tratado 4ºC Tratado 20ºC Figura 5.3.2. Comparación del perfil sensorial del tercer producto lácteo probiótico evaluado con y sin tratamiento de presurización y almacenado a dos temperaturas de conservación. No se observaron diferencias de viscosidad en aquellos productos tratados y mantenidos en refrigeración. Esta viscosidad se mantuvo a lo largo de todos los días de almacenamiento del producto. En cambio hubo cambios de viscosidad en aquellas muestras que se sometieron a diferentes días de fermentación antes del tratamiento hiperbárico. El tratamiento térmico de las muestras después de la fermentación provocó una mortalidad elevada en la flora microbiana del producto evaluado, llegando a alcanzar factores de reducción superiores a 106. Debido a esta elevada mortalidad algunos ensayos presentaron una ausencia total de postacidificación. En la Figura 5.3.3 se presentan los resultados más destacados de la supervivencia del nemátodo evaluado para cada unos de los ensayos realizados. Se observa que el mayor índice de supervivencia se produjo en el ensayo 3, seguido del 4, 5 y 6. Donde menos supervivencia hubo fue en el 1. 94 Figura 5.3.3. Influencia de la adición de productos fermentados sobre el porcentaje de supervivencia observado en una población de nemátodos tras ser sometidos a un estrés oxidativo en los ensayos realizados. Aunque el % de viabilidad del ensayo 3 (sólo sobre producto fresco) fue más elevado que en el ensayo 1, no se demostró que para este tipo de cepa y en el producto estudiado (ensayo 5 y 6), se mantuvieran los niveles de capacidad funcional deseados. Es por ello que se considera que el tratamiento por alta presión no proporciona un resultado comparable al que proporciona el producto fresco. Si se demostrase lo contrario en humanos, este hecho tendría una incidencia importante para aquellos productos que se intenten exportar o distribuir con el tratamiento de presurización diseñado. Probablemente el aumentar la vida útil del producto mermaría la capacidad funcional de la cepa evaluada. En cada caso se debería hacer un estudio clínico para cada una de las cepas a evaluar. Cabe mencionar que tanto los parámetros tecnológicos como los microbiológicos obtenidos de la realización de este proyecto están en fase de evaluación para la elaboración de una patente de proceso alimentario. Se pretende patentar el proceso tecnológico obtenido para aumentar la vida útil de algunos productos y para ciertos países o casos donde los procesos convencionales de refrigeración en la distribución, comercialización y consumo no sean posibles o estén dificultados por razones estructurales. Conclusiones: • Existe una combinación de presión y temperatura que mantiene los patrones de letalidad y subletalidad de las cepas evaluadas. • Los productos tratados por alta presión, en general, presentan menos intensidad de sabor ácido y son menos astringentes que los no tratados. • La viscosidad del producto no varía con el tratamiento de alta presión aplicado. • En los estudios pre-clínicos, los productos tratados por alta presión no presentan la misma capacidad funcional que el producto fresco no tratado. 95 5.3.2 Tarea 3.2. Estudio del efecto del procesamiento de la leche por nuevas tecnologías en las propiedades sensoriales y funcionales de fórmulas lácteas infantiles, y en los sistemas y métodos de enriquecimiento de fracciones proteicas enriquecidas en determinadas proteínas (Laboratorios Ordesa, S.L e IRTA). Objetivos: La actividad investigadora en este proyecto se focalizó en el estudio y desarrollo de productos y procesos en base a la aplicación de tecnologías emergentes de procesado, en especial la alta presión isostática y las microondas, en leche y otros productos lácteos. Existen diferencias en cuanto a la desnaturalización de las proteínas lácteas en función de su naturaleza y del tipo de tratamiento aplicado. A modo de ejemplo cabe señalar que la máxima desnaturalización de la β-lactoglobulina se alcanza a los 400 MPa, con un 80 % de agregación irreversible, mientras que la precipitación de la α-lactoalbúmina en estas condiciones es mínima. No obstante, a pesar de los estudios realizados hasta ahora, no se conocen aún con suficiente detalle los efectos de la alta presión sobre las distintas proteínas lácteas ni sobre la fracción grasa, ni se ha realizado un estudio en profundidad empleando presiones superiores a 650 MPa. Así pues, el objetivo inicial de este trabajo fue el estudio de la desnaturalización de las proteínas y modificación de los lípidos de la leche tratada por alta presión isostática. Para ello se sometió la leche a distintas combinaciones de alta presión (hasta 900 MPa) y se realizó un estudio de las distintas fracciones proteicas y del perfil de ácidos grasos. En relación a las fracciones proteicas, se estudió con mayor detalle la precipitación selectiva de proteínas séricas y la solubilización de las micelas de caseínas. También se estudió el efecto de la alta presión sobre algunas proteínas minoritarias como la lactoferrina y las inmunoglobulinas. Por otra parte, se prestó atención al efecto de la aplicación de la alta presión hasta 900 MPa sobre la membrana del glóbulo graso (MFGM), por ser ésta fuente de lípidos polares y de otros compuestos bioactivos de interés industrial. También se compararon los efectos de las tecnologías emergentes con algunos de los métodos más habituales empleados en las industrias lácteas, como puede ser el tratamiento UHT (esterilización indirecta). Las altas temperaturas no sólo degradan compuestos termolábiles, algunos de ellos de interés nutricional, sino que además favorecen la aparición de reacciones de Maillard, teniendo algunos de los compuestos que se forman capacidad antioxidante. El segundo objetivo de este proyecto fue conocer el efecto de las altas frecuencias sobre las propiedades funcionales y nutricionales de distintos productos lácteos, en concreto sobre su estabilidad. En esta segunda actividad, la mayor parte del trabajo se centró en estudiar si los tratamientos por alta frecuencia modificaron la composición de los ácidos grasos mayoritarios. 96 Resumen ejecutivo: El proyecto permitió evaluar los efectos de dos tipos de nuevas tecnologías alimentarias (alta presión y alta frecuencia) sobre las materias primas con las que se elaboran las fórmulas infantiles (en especial la leche de vaca) o sobre los propios productos finales. • Alta presión isostática (AP) Se estudió el efecto de la AP sobre la fracción proteica de la leche. En especial se investigó si existían diferencias entre la presurización con equipos industriales y equipos piloto, concluyéndose que la desnaturalización selectiva de algunas de la proteínas séricas de la leche es muy similar utilizando cualquiera de los 2 equipos. La despresurización prácticamente instantánea que tenía lugar en los equipos industriales no es un factor crítico del proceso. Aunque se obtuvieron precipitaciones selectivas de algunas de las proteínas del suero, los resultados, rendimientos y costes del proceso no permitieron augurar una posible explotación comercial del proceso. Respecto a la fracción grasa de la leche, se observó que ni las altas presiones máximas utilizadas actualmente en la industria alimentaria (600 MPa), ni las altas presiones máximas alcanzables sólo con equipos Piloto (900 MPa) ocasionaron cambios significativos en los compuestos de naturaleza lipídica de la misma. Se evaluó también el efecto de la alta presión en algunos de los subproductos de la leche como alternativa a su valorización posterior, concluyendo que el historial de carga térmica de dichos subproductos fue el punto clave para poder obtener productos procesados de composición homogénea. Resultó, por tanto, crítico trabajar conjuntamente con los integrantes de la cadena de suministro para poder disponer de subproductos con composición homogénea y que respondieran de forma consistente a posibles procesos posteriores. • Alta Frecuencia: La investigación realizada en el marco del proyecto, permitió identificar la potencia y los tiempos de procesado que no provocaran oxidaciones en la fracción lipídica, ni cambios en la textura de las fórmulas infantiles tratadas mediante alta frecuencia. Resultados: Los principales resultados obtenidos en el proyecto son los siguientes: • Estudio de la desnaturalización de las proteínas y modificación de los lípidos de la leche tratada por alta presión isostática. En este proyecto se determinó el nivel de desnaturalización de las proteínas séricas en leche de vaca, en mazada (suero obtenido en la producción de mantequilla), en suero de quesería y en proteínas solubles de la leche (obtenidas en el laboratorio por ultracentrifugación de la leche a 100.000 g). El objetivo fue estudiar si en la leche o en alguno de los derivados lácteos el tratamiento por alta presión ocasionaba una desnaturalización selectiva de alguna proteína sérica que facilitara su procesado posterior. 97 Para ello, se analizaron las distintas fracciones de proteína (nitrógeno total, soluble y no proteico) y se cuantificaron por electroforesis las fracciones de caseínas y seroproteínas en leche, diferentes derivados lácteos y en sistemas modelo, comparando posteriormente los resultados obtenidos de muestras tratadas a diferentes condiciones de presión y temperatura (Figura 5.3.4). Además, se determinó el perfil de ácidos grasos (incluidos ácidos grasos minoritarios, trans e isómeros del ácido linoleico conjugado) y óxidos de colesterol por cromatografía de gases y líquidos. Figura 5.3.4. PAGE-SDS de los sobrenadantes obtenidos por ultracentrifugación (a) y por precipitación a pH 4.6 (proteínas séricas) de leche cruda de vaca y sometida a diferentes presiones (de 250 MPa a 900 MPa). Los resultados obtenidos coincidieron con los de la bibliografía existente cuando se trataron muestras a presiones inferiores a 600 MPa. El grado de desnaturalización de las proteínas séricas mayoritarias osciló entre el 30 y el 85% de las mismas, dependiendo de la presión utilizada, la temperatura y tiempo de procesado. Uno de los hechos más destacables de esta parte del proyecto fue que, hasta donde llega nuestro conocimiento, este era el primer estudio en el que se evaluó el efecto de la alta presión isostática entre 600 y 900 MPa sobre las proteínas lácteas. En paralelo se estudió como afecta a la desnaturalización de las proteínas séricas y solubilización de las caseínas, la descompresión instantánea con la que trabajan los equipos industriales de alta presión isostática (descompresión en menos de 2 segundos de 6000 bares a 1 bar), en comparación con el sistema de descompresión gradual de los equipos pilotos (cercana a 1 minuto de descompresión). Los resultados preliminares obtenidos apuntaban a que el sistema de despresurización podría influir de una manera determinante en el nivel de desnaturalización o solubilización de las proteínas lácteas. No obstante, al ampliar el número de muestras y las condiciones de ensayo, una de las conclusiones obtenidas fue que la influencia de este factor pese a ser importante, no era el más crítico. En la Figura 5.3.5, se muestran tres geles de electroforesis (SDS-PAGE) en los cuales se comparó la desnaturalización de proteínas lácteas en un equipo industrial, y en un equipo piloto. 98 Figura 5.3.5. PAGE-SDS de los sobrenadantes obtenidos por ultracentrifugación de leche presurizada en un equipo industrial y en un equipo piloto con despresurización rápida y lenta. También se observó que el historial térmico de la leche o derivado lácteo utilizado tenía una enorme influencia sobre los resultados. En todos los casos, un tratamiento térmico previo a la presurización (por ejemplo una pasteurización), estabilizó algunas de las proteínas séricas de modo que mantuvieron su solubilidad ante la centrifugación o la acidificación del medio. Por tanto, a la hora de realizarse la presurización de la leche o un producto lácteo, es importante conocer el tipo de tratamiento térmico previo al cual ha sido sometida la materia prima. Sin embargo, no siempre fue posible conocer el origen o las modificaciones antes del procesado por alta presión de las muestras utilizadas. Este hecho fue más evidente, en productos como la mazada o el suero que son subproductos de la industria láctea y en ocasiones son el resultado de distintas fabricaciones o productores. La dificultad de encontrar las materias primas adecuadas, fue uno de los mayores inconvenientes a la hora de la reproducibilidad de los experimentos y de obtener resultados satisfactorios en relación a la precipitación selectiva de proteínas lácteas. Otro inconveniente fue el coste económico de procesado que dificulta la puesta en marcha a escala industrial del sistema anteriormente descrito. También se estudió el efecto de la alta presión en proteínas minoritarias de la leche, como la lactoferrina o la inmunoglobulina A. Se estudió la desnaturalización de estas proteínas con tratamientos hasta 900 MPa. En la Figura 5.3.6 se puede observar la desnaturalización de la lactoferrina medida tanto en leche como en sobrenadantes por acidificación a pH 4,6 o por centrifugación. 99 Figura 5.3.6. Contenido en lactoferrina de leche cruda de vaca y los sobrenadantes obtenidos por precipitación a pH 4,6 y por ultracentrifugación. Una característica curiosa de la leche presurizada por alta presión fue que perdió su típico color blanco y se volvió transparente. Trabajos previos realizados por otros investigadores sugieren que la leche es transparente porque las micelas de caseínas se han disgregado en partículas más pequeñas. En este trabajo se estudió en detalle este efecto, incluyendo como novedad la aplicación de alta presión hasta 900 MPa. En las muestras analizadas se comprobó que se liberaron a la fase soluble caseínas no sedimentables, fundamentalmente β y κ-caseínas y no de α-caseínas. Los datos de tamaño de micelas de caseínas observados por microscopía electrónica de trasmisión de leche cruda desnatada y presurizada se muestran en la Figura 5.3.7. Figura 5.3.7. Representación de los tamaños de micelas de leche cruda desnatada y presurizada observados por microscopía electrónica de trasmisión. 100 También se investigó la oxidación que puede provocar el tratamiento por alta presión isostática en diferentes componentes grasos de la leche o productos lácteos. En este sentido, los resultados fueron positivos pues no se observaron modificaciones incluso con tratamientos de 900 MPa. A continuación se muestra la comparación de dos cromatogramas de ácidos grasos tanto de leche cruda de vaca como de leche tratada a 900 MPa (Figura 5.3.8) y un gráfico (Figura 5.3.9) donde se puede observar la concentración de distintos grupos de ácidos grasos en leche cruda de vaca y muestras tratadas a diferentes presiones (hasta 900 MPa). Figura 5.3.8. Comparativa de cromatograma de leche cruda de vaca (control) y leche tratada por alta presión (900 Mpa). 101 Figura 5.3.9. Gráficos del efecto de la alta presión en diferentes compuestos lipídicos. Otro ámbito de estudio fue la comparación de los efectos de la tecnología de procesado por alta presión con los tratamientos más habituales empleados en las industrias lácteas. Se cuantificó el efecto de la alta presión y la temperatura sobre diferentes componentes de la leche. Mientras que el sobretratamiento térmico de la leche y de algunos productos lácteos provocó una desnaturalización de diferentes proteínas y compuestos funcionales, las condiciones de alta presión y tiempo de proceso utilizados en los experimentos del proyecto no modificaron estos componentes. En la Figura 5.3.10 se compara el contenido 102 en lactoferrina en un producto lácteo tratado con altas presiones (650MPa) y uno tratado UHT. Figura 5.3.10. Contenido en lactoferrina de fórmula infantil control, presurizada a 650 MPa, 5 min y tratada por UHT. En los diferentes estudios realizados, en los que han participado investigadores pertenecientes a IRTA, CSIC y CENTA, se recopiló una extensa base de datos que será publicada en distintas revistas científicas. • Efecto de la alta frecuencia sobre las propiedades funcionales y nutricionales de distintos productos lácteos En este ámbito la mayor parte del trabajo se centró en estudiar el efecto de los tratamientos por alta frecuencia en la composición de los ácidos grasos mayoritarios, modificando la estabilidad de los productos lácteos. Los resultados obtenidos de muestras analizadas en el momento de finalizar el tratamiento de alta frecuencia indican que con las combinaciones tiempo/potencia utilizadas no se modificó significativamente la fracción lipídica. Conclusiones: Las principales conclusiones obtenidas en estos dos ámbitos del trabajo fueron las siguientes: • Los resultados obtenidos empleando tratamientos de altas presiones isostáticas estuvieron en concordancia con los trabajos previamente publicados por otros autores. Sin embargo, la poca reproducibilidad de los experimentos imposibilitó el escalado industrial. • No se detectaron diferencias significativas entre tratamientos de altas presiones en el rango 0,1MPa-600 MPa realizados en equipos pilotos con descompresión lenta de las muestras y equipos industriales con descompresión rápida. • Las modificaciones que ocurren a nivel de fracciones proteicas, tanto de proteínas séricas como de caseínas, entre 600 MPa y 900 MPa guardan una cierta relación con los resultados obtenidos con anterioridad entre 0,1MPa y 103 600 MPa. No se observaron cambios notables ni en la desnaturalización ni en la solubilidad de proteínas. • No se observaron modificaciones significativas en la composición de los ácidos grasos de la leche de vaca sometida a tratamientos de hasta 900 MPa, lo que sugiere la inocuidad de esta tecnología en cuanto a la fase grasa. • Mientras que los tratamientos térmicos tradicionales aumentaron la desnaturalización de proteínas minoritarias disminuyendo el valor nutricional de los productos lácteos, los tratamientos mediante altas presiones no modificaron dichos compuestos. • Los resultados obtenidos de muestras analizadas en el momento de finalizar el tratamiento de altas frecuencias indican que con las combinaciones tiempo/potencia utilizadas no se ha modificado significativamente la fracción lipídica. 5.3.3 Tarea 3.3. Estudio de la homogenización por alta presión y/o de los pulsos lumínicos en la descontaminación de la leche y productos lácteos (Tecnologia y Calidad Láctea, S.L, Llet de Catalunya, S.L e AZTI-TECNALIA). Objetivos: Los objetivos planteados en esta tarea fueron los siguientes: • • • • • • • Identificar y seleccionar los productos para ser sometidos a tratamientos de descontaminación. Evaluar y optimizar la eficacia de los tratamientos sobre la descontaminación microbiana de productos inoculados. Estudiar la eficacia de la tecnología para inactivar la flora microbiana endógena de los productos seleccionados. Conocer el impacto del proceso sobre las propiedades tecnológicas y la calidad de los productos tratados. Estudiar la eficacia de la tecnología sobre la conservación y/o estabilización de los productos seleccionados y en particular sobre la vida útil de éstos. Evaluar los parámetros críticos para el establecimiento de un pliego de condiciones para el proceso planteado. Difundir y transferir los resultados. Resumen ejecutivo: El proyecto se estructuró en las siguientes etapas: • Identificación y selección de productos para ser sometidos a tratamientos de descontaminación. Se realizaron las siguientes subtareas: 104 • • • • – Vigilancia y actualización tecnológica: Recopilación y seguimiento de la producción científica, patentes e información difundida en internet y medios científicos (bases de datos científicas y difusión en general). En la vigilancia se tuvo en cuenta el proceso, la matriz alimentaria (leche e ingredientes lácteos) y los riesgos microbiológicos asociados a los productos contemplados. – Evaluación de las necesidades de la empresa. – Identificación de los productos y tecnologías más interesantes para la empresa. – Identificación de los parámetros de proceso de la tecnología seleccionada y determinación de las condiciones de tratamiento iniciales. Evaluación y optimización de la eficacia de los tratamientos sobre la descontaminación microbiana de productos inoculados. Se realizaron los siguientes trabajos: – Caracterización del proceso y establecimiento de los límites de utilización de la tecnología para los distintos productos seleccionados. – Optimización de las condiciones de tratamiento de productos inoculados. – Estimación de la letalidad microbiana: establecimiento del efecto de las variables de proceso sobre la carga microbiana de los productos seleccionados. – Evaluación de la aptitud de la tecnología seleccionada para descontaminar los productos previamente inoculados. Eficacia de la tecnología para inactivar la flora microbiana endógena de los productos seleccionados. Se realizaron los siguientes pasos: – Determinación de la eficacia de la tecnología para la inactivación de la flora endógena. – Establecimiento de las condiciones de tratamiento para la inactivación de la flora para cumplir los criterios microbiológicos contemplados en la legislación alimentaria. Estudio del impacto del proceso sobre las propiedades tecnológicas y la calidad de los productos tratados. Se realizaron las siguientes subtareas: – Evaluación de la tecnología como proceso que permita la obtención de productos lácteos de mayor calidad. – Evaluación de la tecnología como proceso que permita la obtención de nuevos productos lácteos. – Evaluación de la tecnología que permita la obtención de productos lácteos con propiedades tecnológicas mejoradas. Eficacia de la tecnología sobre la conservación y/o estabilización de los productos seleccionados y en particular sobre la vida útil de éstos. 105 • • – Evaluación de la tecnología como proceso de conservación y estabilización de leche y productos lácteos. – Establecimiento de las condiciones de tratamiento para la obtención de leche y productos lácteos de mayor seguridad microbiológica. – Evaluación de la aptitud de la tecnología para obtener productos lácteos con mayor vida útil, teniendo en cuenta los criterios microbiológicos legislados y la evolución de las características físico-químicas y sensoriales durante el periodo de almacenamiento. Evaluación de los parámetros críticos para el establecimiento de un pliego de condiciones para el proceso planteado. – Identificación de los parámetros críticos de proceso para la obtención de productos lácteos de calidad. – Establecimiento del pliego de condiciones para el desarrollo e implementación de un prototipo semiindustrial. Difusión y transferencia de resultados. – Protección de los resultados de propiedad intelectual (en caso de obtención). – Difusión de los resultados mediante publicaciones científicas y artículos divulgativos en medios de comunicación. Resultados: • Identificación y selección de productos para ser sometidos a tratamientos de descontaminación. Mediante el análisis de las necesidades de la empresa y los resultados de vigilancia tecnológica, se identificaron 2 familias de productos: leche y una gama de preparados de fruta (como ingrediente para la elaboración de yogures con fruta). Inicialmente, las tecnologías seleccionadas fueron: alta presión dinámica (homogeneización por altas presiones) para el tratamiento de leche y alta presión estática para el tratamiento de los preparados de fruta. Debido a problemas técnicos del equipo de homogeneización, el proyecto se centró posteriormente en la tecnología de alta presión estática. Sin embargo, también se comprobó la inadecuación de la alta presión estática para ser aplicada en leche líquida (falta de homogeneización del producto). Paralelamente, la vigilancia tecnológica permitió fijar unas condiciones de tratamiento así como los agentes microbiológicos a analizar en las siguientes fases y la metodología de análisis más adecuada. • Evaluación y optimización de la eficacia de los tratamientos sobre la descontaminación microbiana de productos inoculados. En esta fase se procedió a la selección, aislamiento y cultivo de microorganismos de interés en el mantenimiento de la seguridad alimentaria para los preparados de frutas. Se establecieron diferentes condiciones de cultivo de estos microorganismos (ej. diferentes temperaturas para determinar la temperatura óptima de crecimiento), el sistema de 106 conservación de cada cepa, así como la metodología de inoculación para los productos seleccionados. La incorporación del equipo de alta presión hidrostática en la planta piloto de AZTI-Tecnalia en esta fase inicial del proyecto permitió la redacción y validación de un protocolo de trabajo con productos inoculados para dicho equipo. Posteriormente se pusieron a punto las metodologías para poder evaluar la eficacia de los tratamientos en productos inoculados, así como la selección de parámetros iniciales a tener en cuenta durante el tratamiento a partir de la vigilancia tecnológica realizada. Las pruebas con producto inoculado se realizaron con cepas de moho y levadura típicas de los productos tratados, de forma que se pudo evidenciar la validación de la tecnología para su inactivación, así como optimizar los parámetros críticos del proceso. • Eficacia de la tecnología para inactivar la flora microbiana endógena de los productos seleccionados. En esta fase se realizaron experimentos con preparados de fruta. Inicialmente no se pudieron evidenciar resultados de inactivación de la flora microbiológica endógena en preparados de fruta azucarados (productos con pH y actividad de agua inadecuados para el crecimiento bacteriano), y se optó por utilizar productos edulcorados (no azucarados), donde se evidenció la eficacia del tratamiento de alta presión estática para la inactivación de la flora endógena. Dichos tratamientos también se aplicaron en productos distintos a los contemplados inicialmente (preparados de frutas obtenidos con operaciones unitarias diferentes) debido a los resultados obtenidos. Los tratamientos evaluados fueron los considerados como óptimos en anteriores ocasiones, de forma que se redujo considerablemente el número y variedad de tratamientos ensayados. • Impacto del proceso sobre las propiedades tecnológicas y la calidad de los productos tratados. Los productos seleccionados inicialmente fueron reformulados para adaptarlos al procesado por alta presión, siendo éstos validados tanto a nivel de textura (similar a la del producto tradicional) como a nivel económico (repercusión económica del mismo en el coste final de la formulación). Se obtuvieron óptimos resultados a nivel sensorial, microbiológico y tecnológico, confirmando la adecuación de la tecnología y de los tratamientos aplicados a los productos seleccionados. • Eficacia de la tecnología sobre la conservación y/o estabilización de los productos elegidos y en particular sobre la vida útil de éstos. Se demostró el mantenimiento de la vida útil de los preparados de fruta (aquellos cuya formulación fue adaptada por motivos tecnológicos y procesados en condiciones óptimas por alta presión estática). En ambos casos se mantuvieron en un estado óptimo a lo largo de 3 meses. En ninguno de los casos evaluados se observó crecimiento microbiológico (no hubo recuentos superiores al límite de detección). Estas determinaciones se realizaron mediante un estudio con catadores expertos con el fin de medir la posible existencia de diferencias entre distintos tratamientos de alta presión (2 tratamientos considerados como óptimos) y muestras con tratamiento térmico convencional a lo largo del periodo de vida útil estimado. Se realizó un proceso de entrenamiento del panel de catadores, diseñándose 107 una ficha de cata en la que se incluyeron cinco atributos sensoriales (visuales, táctiles y olfativos), valorándose en una escala no estructurada del 0 al 10 su intensidad. • Evaluación de los parámetros críticos para el establecimiento de un pliego de condiciones para el proceso planteado. Se consideraron críticos los siguientes parámetros en caso de adaptación del proceso actual de elaboración de preparados de fruta (tecnología térmica) por la tecnología de alta presión estática: – Reformulación de los preparados de fruta. – Intensidad óptima de tratamiento. – Estimación de la producción anual / diaria (coeficiente llenado vasija, duración del ciclo productivo, tiempo diario de funcionamiento de la máquina. Atendiendo a diferentes tablas de productividad, se tuvieron en cuenta los siguientes parámetros: • – Coste de inversión del equipo. – Coste del tratamiento por kg procesado (incluido amortización del equipo, repercusión del mantenimiento del mismo y costes energéticos). – Coeficiente de llenado de la vasija. – Proceso de carga y descarga de contenedores. – Envases del producto. – Sistema de descarga de los preparados. Difusión y transferencia de resultados. Tecnolat / Llet y AZTI-Tecnalia enviaron notas de prensa divulgativas sobre el presente proyecto a numerosos medios de comunicación, siendo publicadas noticias en las webs de Navactiva, Alimentatec, AZTI, Basque Research y Food Quality (http://www.foodquality.com/details/article/982845/High_Pressure_Processing_Renders _Yogurt_Sweet_and_Safe.html) entre otras. Conclusiones: • La tecnología de alta presión estática se considera adecuada para el tratamiento de preparados de fruta para estabilización y conservación de los mismos como alternativa al proceso de tratamiento térmico. • No se pudo evidenciar reducciones de la carga microbiana en preparados de fruta azucarados, debido a que en todos se obtuvieron recuentos inferiores al límite de detección. A nivel de análisis físico-químico (pH y ºBrix), no se evidenciaron diferencias entre muestras tratadas y testigo. 108 • Los tratamientos de altas presiones hidrostáticas de preparados de fruta edulcorados, inoculados con levaduras y mohos específicos de preparados de fruta, evidenciaron una inactivación significativa por debajo de los límites de detección, así como su mantenimiento a lo largo del tiempo. Con respecto a la flora endógena, los tratamientos optimizados de altas presiones dieron como resultado recuentos microbiológicos (aerobios mesófilos) inferiores a los límites de detección a lo largo de la vida útil del producto, resultando recuentos similares a las muestras obtenidas mediante tratamiento térmico tradicional. En el análisis sensorial no se evidenciaron diferencias estadísticas entre productos tratados y no tratados para ningún atributo (p-valor > 0,05). En la evolución en el tiempo, se observaron diferencias significativas para la adhesividad e intensidad del olor. • En el caso de tratamiento por altas presiones de preparados de fruta con operaciones básicas adicionales (deshidratación, congelación…), fue necesario adaptar las formulaciones. • Con respecto al pliego de condiciones para el establecimiento de un sistema semiindustrial, se consideraron críticos los siguientes aspectos: – Estimación de la producción anual / diaria: equipo empleado, volumen de la vasija, coeficiente de llenado de la vasija, duración de los ciclos de tratamiento (incluyendo la carga, descarga y el propio ciclo), tiempo de funcionamiento diario de la máquina (producción + limpieza). – Características del equipo: Coste de inversión, coste tratamiento por kg procesado, sistema de envasado (anterior al proceso de altas presiones), material de envasado, proceso de carga y descarga de los contendores, sistema de carga de los preparados en la línea de dosificación de preparados de fruta. • Inadecuación de la tecnología de altas presiones estáticas al tratamiento de leche líquida para estabilización y conservación de la misma, como alternativa al proceso de tratamiento térmico, por no producirse homogeneización de la fase grasa. Sin embargo, sí que se ha observado una menor carga microbiana (mesófilos aerobios y enterobacterias) en los distintos tratamientos con respecto al control. En la valoración sensorial se advierte, en términos generales, que la leche tratada por esta tecnología presenta menor intensidad de olor. A nivel físico-químico, no se evidencian diferencias significativas en parámetros físico-químicos como extracto seco, proteína, grasa, pH y acidez. • En la aplicación de la tecnología de altas presiones dinámicas en leche, tan sólo se ha podido evidenciar una mayor reducción de la carga microbiana a mayor número de ciclos del proceso, así como la ausencia de diferencias significativas en parámetros como aw y pH entre muestras tratadas y no tratadas. Con respecto al estudio de barotolerancia de bacterias de interés empleadas en la elaboración de lácteos fermentados, se ha evidenciado la inactivación de mohos y levaduras así como una reducción significativa de recuentos de Lactobacillus, cepas responsables de las postacidificaciones. 109 5.3.4 Tarea 3.4. Procesado mínimo asistido por alta presión de alimentos líquidos, viscosos o pastosos, incluyendo verduras o frutas en su formulación (jugos, purés, cremas y sopas (Fundació Alícia e IRTA). Objetivos: Los principales objetivos fueron: • Definir un procesado mínimo garantizando la seguridad alimentaria y la conservación de las propiedades nutricionales y sensoriales de alimentos líquidos, viscosos o pastosos (especialmente frutas y verduras) mediante la aplicación de las altas presiones. • Desarrollar nuevas texturas para mejorar la aceptabilidad de estos alimentos líquidos, viscosos o pastosos, procesados por alta presión. • Diseñar o modificar fórmulas y técnicas culinarias para optimizar la aplicación de las altas presiones en alimentos líquidos, viscosos o pastosos • Obtener alimentos líquidos, viscosos o pastosos saludables y apetitosos que favorezcan la ingesta a enfermos y personas de la tercera edad. Resumen ejecutivo: Las investigaciones se dividieron en cinco partes: • • • • • Procesado de líquidos, viscosos o pastosos, donde se estudió el efecto de las altas presiones sobre “sféricos”, encapsulados, espesantes y emulsionantes; Estudio de concentrados de alimentos líquidos tratados con altas presiones. Se investigó en destilados y reducciones aplicando las altas presiones para su conservación. Estudio de productos para regímenes alimentarios, donde se investigaron elaboraciones culinarias para dietas específicas. Evaluación de las altas presiones para obtener alimentos que faciliten la ingesta, en la cual se estudió la obtención de productos por altas presiones para disfágicos. Investigación de los efectos de las altas presiones en ingredientes y elaboraciones, donde se estudió la preparación y conservación de salsas, de zumos y de un preparado para pan con tomate. Resultados: • Procesado por alta presión. Se descartó la aplicación de las altas presiones en aceituna porqué afectan negativamente a su estructura. En cuanto a la presurización de encapsulados de limón se demostró la inactivación del crecimiento de levaduras durante al menos 3 meses en las condiciones estudiadas. También, se estudió el efecto de la alta presión a lo largo del tiempo en la calidad microbiológica, físicoquímica y sensorial del caviar de melón (“sférico” de melón). En las condiciones de estudio se pudo alargar a 91 días la vida útil del caviar de melón presurizado en comparación con los 6 días del caviar de melón no presurizado. 110 • • • A pesar de que las altas presiones permitieron higienizar el destilado de tierra, en concreto reducen su microbiota (colonias aerobias y mohos y levaduras), la microfiltración permitió una reducción considerable e inmediata de la microbiota alcanzando hasta un año de vida útil. En este caso no será necesario recurrir a la tecnología alternativa de altas presiones dado que la microfiltración es más sencilla y económica. Ante estos resultados se consideró oportuno verificar sensorialmente el efecto de la microfiltración en otros destilados. La microfiltración no modifica el sabor de los destilados de manera que se estudió la posibilidad de adaptar la membrana microporosa al equipo de destilación (Rotaval), para conseguir un proceso integrado. En cuanto a productos para regímenes especiales, se realizaron los estudios previamente mencionados en la tarea 2.7. En el estudio de elaboración de un preparado para pan con tomate se definieron las materias primas a utilizar, fórmula y condiciones de presurización. Paralelamente se profundizó en la técnica de liofilización para compararla con la tecnología de la alta presión. Se trabajó con distintas salsas tradicionales sin observar una tendencia clara en cuanto al mantenimiento de los atributos sensoriales con ninguna de las dos técnicas. Conclusiones: • La alta presión no es apta para “sféricos” de aceituna, ya que es un producto de estructura muy débil. En cambio, sí que lo es para encapsulados y “sféricos” como el caviar de melón. • La alta presión representa una alternativa a tratamientos convencionales de higienización dado que respeta en mayor medida los atributos sensoriales de “sféricos” y de preparados de tomate. • La alta presión modifica la textura de determinados productos, concretamente gelifica soluciones de alginato sódico, gellan rígido y pectina. Estas modificaciones de textura son interesantes en la definición y elaboración de productos para grupos con determinados trastornos alimenticios tales como enfermos de cáncer y disfágicos. • La alta presión permite un procesado mínimo garantizando la seguridad alimentaria y la conservación de las propiedades nutricionales de alimentos sólidos y preparaciones culinarias saludables y de alto interés nutricional (especialmente frutas, verduras y pescado). 111 5.4 ACTIVIDAD 4: SUSTITUCIÓN DEL TRATAMIENTO TÉRMICO CONVENCIONAL (TRANSFERENCIA DE CALOR) POR EL DE ALTA FRECUENCIA (GENERACIÓN INTERNA DE CALOR) 5.4.1 Tarea 4.1. Estudio de nuevas técnicas de higienización, estabilización y cocinado de vegetales por alta frecuencia (Ultracongelados Virto, S.A, IRTA y CNTA). Objetivos: El tratamiento térmico de escaldado contribuye a estabilizar en el tiempo las características bioquímicas y sensoriales de los alimentos destinados a congelación, realizando una esterilización parcial de la superficie e inhibiendo la actividad enzimática y oxidativa. Esta fase previa a la etapa de congelación es imprescindible ya que las temperaturas máximas utilizadas en los procesos de congelación resultan insuficientes para la inactivación de los enzimas alterantes. Además, esta fase consigue eliminar el gas ocluido en los tejidos, de forma que se limitan los fenómenos de oxidación. Sin embargo, el escaldado presenta una serie de desventajas como son la pérdida de textura, color, sabor y calidad nutricional. También es importante su impacto ambiental negativo debido a las grandes cantidades de agua y energía que precisa y a las cantidades de efluentes que origina. El lavado convencional y los agentes desinfectantes habitualmente utilizados alcanzan 1-2 ciclos logarítmicos de reducción de la población microbiana en condiciones de laboratorio; estas reducciones pueden ser sustancialmente inferiores tras el lavado en la industria. Esta eficacia no es suficiente para asegurar la seguridad microbiológica del producto en caso de eliminar el escaldado y además puede provocar la reducción de la vida útil del alimento. Por lo tanto es necesario el estudio y desarrollo de nuevas tecnologías desinfectantes que inactiven los microorganismos que resisten al lavado convencional y a los métodos de higienización actuales. En este sentido, la aplicación de altas frecuencias ofrece una alternativa válida ya que se trata de un tratamiento penetrante, que puede tener un efecto adicional sobre microorganismos resistentes a los métodos “de contacto”, pero que además también puede afectar los enzimas responsables de degradaciones que afectan negativamente la calidad sensorial del alimento. Además, esta tecnología podría ser una buena alternativa a otros procesos industriales presentes en el procesado de verduras ultracongeladas como es su cocinado para la obtención de nuevos productos listos para comer. Por lo tanto, con el principal objetivo de proporcionar una alternativa a los tratamientos actuales de higienización y estabilización de productos vegetales se plantearon los siguientes objetivos parciales sobre tres productos (pimiento, patata y judía verde): – Definir un proceso de higienización adecuado que sustituya al escaldado en aquellos vegetales en los que el problema de pardeamiento enzimático no exista o sea poco acusado, pero en los que sí se detecta una disminución de calidad debido al tratamiento térmico. El producto objeto de estudio fue el pimiento. 112 – Conseguir un proceso de higienización y estabilización como alternativa al escaldado en determinados vegetales, que además de reducir la carga microbiana inactive las polifenoloxidasas. El producto objeto de estudio fue la patata. – Definir un proceso de cocinado de verduras alternativo a los actuales: cocinado por vapor, horneado, etc. El objetivo era obtener verduras listas para comer. El producto objeto de estudio fue la judía verde. Para alcanzar este objetivo global, se realizó la tarea “Estudio de nuevas técnicas de higienización, estabilización y cocinado de vegetales por altas frecuencias”, la cual se dividió en distintas subtareas con los siguientes objetivos técnicos parciales: – – – – – Caracterización de los productos modelo para tratar por altas frecuencias. Se realizaron las siguientes subtareas: Revisión bibliográfica y de patentes, caracterización de materias primas y productos congelados (pimiento, patata, judía verde), y definición de la metodología para la aplicación de los tratamientos y la evaluación de resultados. El objetivo de dichas subtareas fue conocer las características físico-químicas, nutricionales y microbiológicas de los productos congelados objeto de estudio y de las materias primas. Estos datos son la base para poder realizar un diseño experimental óptimo y contar con unos valores de control que permitan evaluar objetivamente el efecto de los tratamientos posteriores por alta frecuencia. Proceso de higienización y estabilización mediante alta frecuencia como alternativa al escaldado del pimiento. Se realizó el estudio del impacto de los parámetros, tiempo y potencia sobre el pimiento, eficacia antimicrobiana e inactivación enzimática. El objetivo fue evaluar el efecto del tratamiento de alta frecuencia frente al tratamiento actual de escaldado. Concretamente se estudió el efecto sobre la inactivación de microorganismos, tanto flora propia como contaminantes, así como el efecto sobre las degradaciones producidas por enzimas presentes en el producto. Proceso de higienización y estabilización mediante alta frecuencia como alternativa al escaldado de la patata. El objetivo fue similar al descrito anteriormente. Proceso de higienización y estabilización mediante alta frecuencia como alternativa al escaldado en judía verde. El objetivo de esta subtarea fue obtener un producto cocinado (listo para su consumo) mediante el tratamiento de alta frecuencia. Para ello se estudió la eficacia antimicrobiana de tratamientos de alta frecuencia, optimizándose el proceso en primer lugar en el equipo de laboratorio y posteriormente en el equipo semiindustrial. Estudio nutricional y sensorial del pimiento tratado por alta frecuencia y estudio de vida útil del pimiento tras la congelación. El objetivo de estas subtareas fue evaluar la eficacia de diversos tratamientos de alta frecuencia sobre la calidad sensorial y nutricional de pimiento. Además se evaluó la influencia de dicho tratamiento sobre la vida útil del producto. 113 – – – Estudio nutricional y sensorial de la patata tratada por alta frecuencia, y estudio de vida útil de la patata tras la congelación. El objetivo de esta subtarea fue evaluar la eficacia de diversos tratamientos de alta frecuencia sobre la calidad sensorial y nutricional de la patata. Además se evaluó la influencia de dicho tratamiento sobre la vida útil del producto. Estudio nutricional y sensorial de judías verdes tratadas por alta frecuencia, y estudio de vida útil de judía verde tras congelación. El objetivo fue estudiar el efecto tanto del cocinado convencional como del tratamiento de alta frecuencia en la calidad sensorial y nutricional de la judía verde ya lista para el consumo. Además se evaluó la influencia del tratamiento sobre la vida útil del producto. Optimización del proceso de alta frecuencia para definir productos con potencial comercial y estudio de su viabilidad técnico-económica. El objetivo de esta tarea fue definir los procesos óptimos para cada tipo de producto y conocer la viabilidad técnico-económica de la tecnología y más concretamente, de los procesos seleccionados. Resumen ejecutivo: En primer lugar se realizó la caracterización de los productos modelo para tratar por alta frecuencia. Para ello se puso a punto la metodología necesaria para la determinación de los siguientes parámetros que definen la calidad del producto: • Sensoriales: color, firmeza. • Microbiológicos: recuento de mesófilos aerobios, Coliformes totales, E.coli β glucoronidasa (+), investigación de S. coagulasa (+), Salmonella y detección semicuantitativa de Listeria monocytogenes. Además, el estudio se completó con la descripción de las características termodinámicas, constantes dieléctricas y geometría del producto. Se estudió la eficacia de la tecnología de escaldado por alta frecuencia en tres productos distintos: patata y pimiento cortados en cubos de 1x1 cm y judía verde cortada en tiras de 4-5 cm. Los estudios se realizaron en una primera fase mediante un microondas de laboratorio y, en una segunda fase, mediante un equipo microondas semiindustrial. En cada producto se aplicaron diversos tratamientos, variando los siguientes parámetros: potencia de microondas, tiempo de tratamiento, condiciones del entorno (vapor de agua, inmersión en agua). Después de la aplicación de cada tratamiento se evaluó en el producto: – Color y Firmeza. – Recuento de mesófilos aerobios. Además se inoculó una cantidad conocida de flora contaminante del producto (Listeria monocytógenes y Escherichia coli) y se evaluó qué efecto tendría el tratamiento si se produjera una contaminación. – Actividad polifenoloxidasa en patata. – Clorofila total en judía verde. La evaluación de los resultados permitió seleccionar los mejores tratamientos. Con ellos se realizaron los correspondientes estudios de vida útil del producto congelado, en los que se 114 estudió la evolución de la calidad a lo largo del tiempo de almacenamiento. Los parámetros de calidad evaluados fueron los siguientes: – Análisis microbiológico según el RD 3484/2000 para el GRUPO A de alimentos. – Color, firmeza. – Actividad Polifenoloxidasa en el caso de la patata. – Caracterización sensorial: se realizó un análisis sensorial con un panel de cata formado por técnicos del CNTA. Los parámetros evaluados fueron aspecto (intensidad de color, defectos), olor (intensidad de olor, defectos), sabor (intensidad de sabor, defectos), textura y valoración global. En la última fase del proyecto se realizó un estudio que permitiera conocer la viabilidad técnico-económica de la tecnología y más concretamente, de los procesos seleccionados. Para ello, se realizó el análisis de los consumos necesarios: equipamiento, potencia, agua, así como de otros parámetros de proceso que influyen en el rendimiento y por tanto, en la rentabilidad del proceso, tanto del proceso actual como del proceso por alta frecuencia. Se realizaron diversos contactos con las empresas fabricantes y comercializadoras de los equipamientos de microondas a nivel industrial. Resultados: A continuación se muestran los resultados obtenidos en el estudio de aplicación de alta frecuencia en combinación con calor para el tratamiento de vegetales. En el caso de la patata, el tratamiento más eficaz fue seleccionado en base a los resultados obtenidos en los ensayos a escala laboratorio y en la posterior adaptación a condiciones preindustriales. Este tratamiento consistió en la aplicación de 7,5 kW y 3 minutos de permanencia del producto en la cavidad del túnel. Los efectos de este tratamiento sobre el producto fueron: – Recuentos microbiológicos similares a los obtenidos en el escaldado tradicional. – Inactivación efectiva de la polifenoloxidasa. – Color y textura similares a los del escaldado tradicional. A lo largo de la vida útil del producto, la evolución de los parámetros de color (Figura 5.4.1) y firmeza fue similar en ambos tratamientos, escaldado por microondas y escaldado tradicional. En lo que respecta a la calidad sensorial, los resultados obtenidos fueron más satisfactorios en el caso del producto tratado por alta frecuencia. 115 ESCALDADO SEMANA 4 TRATADO MO SEMANA 8 SEMANA 10 Figura 5.4.1. Aspecto de la patata escaldada por microondas o por el método convencional, a lo largo de 10 semanas de almacenamiento a -5ºC. En el caso del pimiento, en función de los resultados obtenidos a escala laboratorio y la adaptación a las condiciones semiindustriales, se seleccionó el tratamiento de 9,1 kW manteniéndose el producto en la cavidad del túnel durante 2 minutos. Después de la aplicación del tratamiento se obtuvieron los siguientes resultados: – – Recuentos microbiológicos similares a los obtenidos en el escaldado tradicional. Color y textura similares a los del escaldado tradicional. A lo largo de la vida útil del producto, la evolución del color y la firmeza fue similar en ambos tratamientos (Figura 5.4.2). En la evaluación sensorial, el producto escaldado por alta frecuencia obtuvo mejores resultados que el producto escaldado por método convencional. 116 TRATADO MO SEMANA 2 ESCALDADO SEMANA 6 SEMANA 10 Figura 5.4.2. Aspecto del pimiento escaldado por microondas o por el método tradicional, a lo largo de 10 semanas de almacenamiento a -5ºC. Para la judía verde, los tiempos de tratamiento durante los ensayos a escala laboratorio fueron largos ya que el objetivo era conseguir un producto precocinado que pudiera consumirse directamente después de su calentamiento en el microondas doméstico durante 2 ó 3 minutos. En todos los tratamientos se incorporó vapor. En base a los resultados obtenidos y a la posterior adaptación a condiciones semiindustriales se seleccionó el tratamiento más eficaz. Este tratamiento constaba de 2 fases: fase de subida a 10 kW de 3-4 minutos y fase estacionaria a 6 kW durante 14 minutos con posterior mantenimiento en la cavidad del túnel durante 3 minutos. Los efectos de éste tratamiento fueron los siguientes: – – Recuentos microbiológicos similares a los obtenidos en el escaldado convencional. Color y textura similares a los del escaldado convencional. A lo largo de la vida útil del producto, la evolución de los parámetros de color (Figura 5.4.3) y firmeza fue similar en ambos tratamientos (escaldado por microondas y escaldado convencional). En lo que respecta a la calidad sensorial, los resultados obtenidos fueron más satisfactorios en el caso del producto tratado por alta frecuencia. 117 ESCALDADA SEMANA 4 TRATADA MO SEMANA 8 SEMANA 12 Figura 5.4.3. Aspecto de la judía verde escaldada por microondas o por el método tradicional, a lo largo de 12 semanas de almacenamiento a -5ºC. Después de definir los tratamientos óptimos y el flujo de proceso para cada tipo de producto se realizó el estudio de viabilidad económica. Se evaluó el rendimiento y el consumo de potencia, agua y el caudal de vapor para cada producto. Los resultados proporcionaron una aproximación del consumo energético durante los procesos optimizados para patata, pimiento y judía verde. Para el pimiento y la patata los valores de potencia consumida se situaron en el mismo rango. El tratamiento de judía verde supuso un incremento considerable en la energía consumida, debido a la generación del vapor usado durante el tratamiento. Además es un proceso discontinuo con un rendimiento bajo y con tiempos de tratamiento más elevados que no superan los tiempos de tratamiento convencionales. En el proceso de judía verde se añade también el gasto de agua de escaldado y agua de la caldera de vapor. Conclusiones: En los tres casos, el escaldado por microondas obtuvo resultados satisfactorios desde el punto de vista microbiológico y sensorial, consiguiéndose calidades similares a las obtenidas con el escaldado tradicional. 118 5.4.2 Tarea 4.2. Aplicación de la alta frecuencia en la cocción-pasteurización de platos preparados (Noel Alimentaria, SAU e IRTA). Objetivos: La participación de NOEL Alimentaria SAU en el proyecto se centró en la aplicación de la alta frecuencia como proceso alternativo a la pasteurización convencional en su línea de comida preparada. El tratamiento térmico con autoclave antepone la obtención de la seguridad microbiológica a una serie de inconvenientes que condicionan tanto la producción como la calidad sensorial y nutricional del producto final. La discontinuidad del procesado térmico en autoclave afecta a la eficiencia de la línea de producción y la duración del mismo conlleva un sobretratamiento de cocción de los componentes del producto, los cuales se ven afectados negativamente en su textura y en su valor nutricional. El objetivo del estudio fue la evaluación de la alta frecuencia como método alternativo de tratamiento térmico, dónde además de garantizar la seguridad microbiológica de los productos se pueda reducir el efecto negativo del tratamiento térmico en autoclave. Se seleccionó el tratamiento por microondas por su rapidez y su potencial de procesado en continuo, acortando los efectos negativos de la temperatura sobre los valores nutricionales y sensoriales, sin olvidar la sostenibilidad industrial aportando competitividad al producto final. Las tareas realizadas se basaron en: • Caracterizar los componentes del producto, determinando su comportamiento durante el incremento de temperatura provocado al ser sometidos a las microondas. • Optimizar el tratamiento mediante microondas para obtener un producto con mejor calidad nutricional y sensorial garantizando su seguridad alimentaria. • Evaluar el envase más adecuado para el procesado en microondas del producto, manteniendo la comodidad de uso por parte del consumidor final. • Validación del proceso y de la calidad del producto preparado a escala industrial. Resumen ejecutivo: En una primera fase del proyecto se seleccionaron por valor comercial dos productos modelo: lasaña boloñesa y lasaña vegetal. Los componentes presentes en cada producto (relleno de boloñesa o vegetal, pasta, bechamel y queso), fueron analizados individualmente en cuanto a parámetros físicoquímicos (humedad, grasa, proteínas y cenizas), termodinámicos (análisis termogravimétrico (TGA), Diferential Scanning Calorimetry, (DSC)) y dieléctricos (tangente de pérdida, distancia de penetración), con el objetivo de prever el comportamiento de cada componente durante el incremento de temperatura. Después de la caracterización de los componentes de los productos, se realizaron pruebas preliminares para evaluar el comportamiento de los dos productos al ser tratados por microondas. Se ensayaron diferentes potencias, tiempos y temperaturas de pasteurización 119 mediante un microondas doméstico con sistema de adquisición de temperatura a través de fibra óptica. El tratamiento que proporcionó mejores resultados en las pruebas preliminares se seleccionó para estudiar el envase más adecuado a este producto y al consumidor. Para ello, en un mismo tratamiento, se ensayaron varias combinaciones de materiales plásticos con diferentes características. Las lasañas boloñesas envasadas con la combinación de materiales más adecuada se evaluó microbiológicamente antes y después de ser tratadas por microondas y comparadas con muestras pasteurizadas convencionalmente. El mismo análisis fue realizado en macarrones con salsa boloñesa que se considera un plato alternativo a la lasaña. Este producto fue envasado en un envase desarrollado por NOEL, tratado por microondas de forma similar a la lasaña boloñesa y analizado microbiológicamente antes y después de la pasteurización por microondas y por el sistema convencional. En una fase final, se validó el proceso de pasteurización por microondas con tres productos actualmente comercializados con base a pasta con salsa (tortellinis al pesto, rigatonis al formaggio y raviolis al funghi). Estos productos se envasaron con el mismo envase desarrollado para los macarrones con salsa boloñesa y su pasteurización fue optimizada teniendo en cuenta el tratamiento obtenido en los estudios anteriores. Posteriormente, se seleccionó el plato de raviolis al funghi y el tratamiento respectivo para escalar el proceso al nivel industrial. Con el objetivo de validar la calidad microbiológica y sensorial del producto obtenido, se realizó un estudio de vida útil de 60 días de almacenamiento en condiciones de refrigeración. En este estudio se comparó el producto raviolis al funghi después del tratamiento a escala industrial, piloto (microondas doméstico) y convencional. Fue posible comprobar la eficiencia del proceso de pasteurización mediante microondas después de la producción de un producto de calidad comparable al obtenido mediante el proceso convencional. Resultados: • Caracterización de productos modelo Los productos modelo seleccionados, lasaña boloñesa (M1) y lasaña vegetal (M2), se pueden dividir a su vez en varios productos como son el relleno boloñesa (M3), el relleno vegetal (M4), la pasta hervida (M5), la salsa bechamel (M6) y el queso rallado (M7). Cada producto se caracterizó en cuanto a parámetros físico-químicos, termodinámicos y dieléctricos. Determinación de los parámetros físico-químicos Se determinó el contenido, en porcentaje de masa, de humedad, grasa, proteínas y de cenizas de los componentes de la lasaña boloñesa y lasaña vegetal. 120 % 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Humedad Cenizas Proteinas Grasa 45,76 75,35 78,43 75,39 85,89 81,82 62,99 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 Figura 5.4.4. Parámetros de composición de los productos lasaña boloñesa y vegetal y de cada una de las fases que los componen, sin pasteurizar. Los dos tipos de lasaña presentaron una composición química parecida aunque la lasaña boloñesa presentó porcentajes de grasa, proteínas y cenizas superiores a las de la lasaña vegetal. Parámetros Termodinámicos Se utilizaron dos técnicas de análisis termodinámico. La primera fue la termo-gravimetría o TGA que mide las pérdidas de masa (en alimentos estas pérdidas son principalmente agua) durante el calentamiento entre 25ºC y 100ºC y la termo-calorimetría de barrido o DSC que mide la evolución de los flujos de calores con respecto a la temperatura de la muestra. Con esta última técnica se puede calcular el calor específico Cp de las muestras que se relaciona con la cantidad de calor necesario para elevar la temperatura de la muestra un grado centígrado. Cp (KJ/KG/ºC) 1,4 Perdida de masa (%) 50 1 40 0,8 30 0,6 20 0,4 Perdida de masa (%) Cp (kJ/KG/ºC) 1,2 60 10 0,2 0 0 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 Figura 5.4.5. Parámetros termodinámicos de los productos lasaña boloñesa y vegetal y de cada una de las fases que los componen, sin pasteurizar. 121 Los resultados obtenidos en TGA indicaron que a partir de los 40ºC, el relleno vegetal pierde más masa, es decir agua, que el relleno de carne. De forma similar, el queso y la pasta hervida empezaron a perder masa entre 41ºC y 45ºC. Con respecto a la bechamel se obtuvo un producto estable que casi no perdió masa hasta los 95ºC. Parámetros Dieléctricos Para los productos y componentes estudiados, se calculó la tangente de pérdida (ε’’/ε’), que muestra la transparencia del material a las microondas y la distancia de penetración de las microondas en la muestra. Los resultados de la tangente de pérdida y de la distancia de penetración están inversamente relacionados, de forma que los valores más elevados registrados para la tangente de pérdida corresponden a los más bajos obtenidos para la distancia de penetración. La tangente de pérdida más elevada se registró en las muestras de queso, correspondiendo a una menor transparencia y mayor absorción de microondas. Las muestras de pasta hervida presentaron los valores más bajos de tangente de pérdida, representando la fase más transparente a las microondas. Se verificó que la tangente de pérdida aumenta considerablemente a temperaturas de ebullición en muestras de salsa boloñesa. • Definición del envase En condiciones de mercado las lasañas se presentan en un doble envase: el producto se encuentra dentro de una bandeja de aluminio y posteriormente esta bandeja se coloca dentro de otra bandeja de plástico termosellada con un film con propiedades de alta barrera. Debido a la incompatibilidad de uso del aluminio como material de envase en un tratamiento por microondas se planteó la necesidad de eliminarlo para el estudio de la tecnología de pasteurización con microondas de platos precocinados. Se evaluaron diferentes envases (bandeja, film y válvula de escape de vapores/perforación del film) con distintas propiedades (tipo de material, espesor, tipo de sellado pelable/nopelable, anti-vaho, resistencia física y espacio de cabecera) y dimensiones para evaluar el más adecuado y superar los problemas asociados al tipo de proceso y de producto en estudio. Todos los envases evaluados tenían como características los siguientes elementos: – Bandeja de plástico resistente a temperaturas superiores a 100ºC. – Film termosellado con propiedades de alta barrera para evitar el deterioro del producto y con cierta elasticidad para aguantar una parte del vapor generado. Los envases seleccionados para realizar los estudios desarrollados durante el proyecto fueron: – Envase NOEL sin bandeja de aluminio original (con o sin hoja de separación de producto, ej. pasta y salsa) – Envase para lasañas o productos similares, optimizado en cooperación con Cryovac en el ámbito de la actividad 4.5 del proyecto FUTURAL. 122 La estanqueidad de los envases fue verificada mediante el uso del sistema DOPAK, tras el almacenamiento de muestras durante 16 h a 4ºC. Todos los envases que carecían de roturas en la soldadura fueron testados positivos hasta una presión de 0,45 bares. • Optimización del proceso mediante microondas (doméstico) – Tratamiento microondas vs registro de temperaturas Muestras de lasaña boloñesa y vegetal fueron sometidas a varios tratamientos de pasteurización mediante microondas a escala piloto (tipo doméstico). Inicialmente se ensayaron 3 potencias (250 W, 440 W y 900 W) y 3 tiempos (2, 5 y 10 min). El registro de temperaturas durante cada tratamiento fue obtenido mediante sondas de fibra óptica insertadas en diferentes puntos del producto. Figura 5.4.6. Perspectiva del interior del microondas. Lasaña vegetal con sondas de fibra óptica insertadas en el producto por la parte superior justo antes del tratamiento. Los resultados obtenidos indicaron que la aplicación de una potencia media (400 W) y en particular alta (900 W), provocaron un calentamiento rápido del producto generando vapor en el interior del envase. El vapor formado provocó una extensión del film ejerciendo una presión interna capaz de romper el sellado. Este estiramiento del film provocó que las sondas de temperatura insertadas se desplazaran produciendo lecturas incorrectas durante el calentamiento del producto. La aplicación de una potencia de 250 W provocó un calentamiento más suave y mejoró la adquisición de datos de temperatura. Sin embargo, en los estudios posteriores se optó por insertar las sondas a través de las paredes laterales del envase. – Tratamiento del plato precocinado “Lasaña boloñesa” Se envasaron muestras con pesos variables entre 320-330 g de lasaña boloñesa en materiales Cryovac, aptos para microondas y autoclave, con propiedades anti-vaho y con sellado no pelable. El espacio de cabeza entre el film y el producto fue de 1,5 cm y el film fue perforado (agujero con un diámetro de 7,5 mm) antes de su tratamiento. El tratamiento aplicado se realizó en dos fases: una fase de subida de temperatura a 8085ºC seguido de una fase mantenimiento durante 6 min. El perfil del tratamiento está representado en la Figura 5.4.7. 123 100 90 80 Temperatura (ºC) 70 60 50 40 30 20 10 0 0 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 Tiempo (s) centro borde Figura 5.4.7. Perfil de temperatura promedio en el centro y en los bordes del plato. A continuación se retiró la lasaña del horno y se tapó la perforación del film con una etiqueta con propiedades barrera para evitar la contaminación. El valor de pasteurización P obtenido para este proceso (subida + mantenimiento) correspondiente a un microorganismo target con una temperatura de referencia (Tref) de 70 ºC y un valor z= 10 ºC fue de P = 92 min en el centro del producto. Se registró una velocidad de calentamiento de este producto de 0,13 ºC/s tanto en el centro como en los laterales. Para evaluar la eficiencia de este tratamiento se realizó un estudio de vida útil, en el cual se compararon las muestras resultantes del tratamiento representado en la figura 4 con muestras procesadas convencionalmente por autoclave, se incluyó una muestra control sin procesar. El estudio se realizó después de 30 y 60 días de almacenamiento en refrigeración. Los resultados obtenidos indicaron que el proceso convencional en autoclave redujo los aerobios totales 3,7 log unidades. El tratamiento alternativo en microondas fue capaz de reducir la carga microbiana inicial por un valor de 3,9 log. – Tratamiento de platos precocinados compuestos por pasta y salsa Se realizaron pruebas de optimización de la pasteurización mediante microondas de 4 platos distintos de pasta con salsa: (a) macarrones con salsa boloñesa, (b) tortellinis al pesto, (c) raviolis al formaggio y (d) rigatonis al funghi, presentados en la Figura 5.4.8. 124 a b d c Figura 5.4.8. Platos preparados por NOEL (sin pasteurizar); (a) macarrones con salsa boloñesa, (b) tortellinis al pesto, (c) rigatonis al formaggio y (d) riaviolis al fungí. Este estudio tuvo como objetivo evaluar la aptitud de las microondas en la pasteurización de platos preparados con pasta y envasados en un nuevo sistema de envasado desarrollado por NOEL. Las muestras fueron sometidas a los respectivos tratamientos sin perforación del film superior. El seguimiento del calentamiento fue registrado en 4 zonas diferentes: salsa en el centro (corazón), salsa lateral (lateral del envase), pasta y aire/pasta. • Macarrones con salsa boloñesa El plato precocinado “macarrones con salsa boloñesa” fue sometido a un tratamiento similar al establecido para lasaña boloñesa. 120 110 100 90 Temperatura (ºC) 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 Tiempo (s) Salsa centro Salsa borde Macarron espacio Macarron cavidad Figura 5.4.9. Perfil de temperatura promedio de la salsa centro, salsa borde, dentro de la cavidad de los macarrones o en el espacio entre los macarrones. El valor de pasteurización P de este proceso (subida + mantenimiento) correspondiente a un microorganismo target con una temperatura de referencia (Tref) de 70 ºC y un valor z= 10 ºC fue para la zona más fría (macarrón dentro de cavidad) de P = 7,5 min. En la salsa cerca del lateral se calculó un valor P de 116 min. 125 La velocidad de calentamiento registrada para este producto fue de 0,44 ºC/s para la salsa del centro; 0,20 ºC/s para la salsa del lateral y aproximadamente de los 0,15 ºC/s en la pasta. Al contrario de lo observado para la lasaña, este plato presentaba velocidades de calentamiento muy distintas según la fase del producto siendo la salsa del centro del envase la que presentó un mayor calentamiento. El tratamiento de macarrones con salsa boloñesa fue sometido a un estudio de vida útil, en el cual se verificó la letalidad obtenida en muestras tratadas por microondas y tratadas convencionalmente. Los aerobios totales iniciales de la muestra control fueron 5,5 log para la salsa y 4,9 log en la pasta. El proceso convencional en autoclave redujo los aerobios totales en la salsa 3,5 log. El tratamiento alternativo en microondas fue capaz de reducir la carga microbiana inicial en la salsa por un valor de 2,0 log. La reducción en cuanto a la pasta fue 3,0 log y de 2,6 log para el proceso de autoclave en comparación con el proceso por microondas. El resto de productos (tortellinis al pesto, rigatonis al formaggio y raviolis al funghi) se sometieron a diferentes tratamientos para reducir la heterogeneidad de temperaturas observada durante el calentamiento de macarrones con salsa boloñesa. Para ello, se introdujeron una o más fases de reposo durante la subida de temperatura. A continuación se representa el perfil de temperaturas obtenido para los raviolis al funghi. Tratamiento 10 ‐ 2min30 a 250 W + 8min a 0 W + 8min a 100 W + 10min reposo 110 100 90 Temperatura (ºC) 80 70 60 50 40 30 20 10 Salsa (2cm) 0 0 200 400 600 800 1000 Salsa (4cm) 1200 1400 Ravioli 1600 1800 Tiempo (s) Figura 5.4.10. Perfiles de temperatura de los diferentes componentes del plato preparado raviolis al funghi tras el procesamiento por microondas piloto. Los valores representados son medias de cómo mínimo 2 réplicas. La comparación de las figuras 5.4.9 y 5.4.10 muestra que el diferencial de temperatura entre la capa que alcanza menor temperatura y la que alcanza mayor temperatura pasó de aproximadamente 40ºC en el caso de los macarrones, a aproximadamente 20 ºC en el caso de los raviolis al funghi. Las modificaciones aplicadas permitieron reducir la heterogeneidad de temperaturas entre las distintas fases del producto y todas las fases del producto superaron la temperatura de 70 ºC durante el proceso de pasteurización. • Escalado del proceso mediante microondas semiindustrial 126 El escalado de la pasteurización de platos precocinados a escala semiindustrial fue realizado con el plato raviolis al funghi. En la figura siguiente se representa el perfil de temperaturas obtenido después del tratamiento. 2min30 a 8 kW + 8min a 0 kW + 5min a 4 kW + 10min reposo 110 100 Temperatura (ºC) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Salsa(2 cm) 0 0 200 400 600 800 1000 Salsa (4 cm) 1200 1400 Ravioli 1600 1800 Tiempo (s) Figura 5.4.11 Perfiles de temperatura de los diferentes componentes del plato preparado raviolis al funghi tras el procesado por microondas semiindustrial. Los valores representados son medias de como mínimo 2 réplicas. Contrariamente a los resultados obtenidos con el microondas piloto, donde se observó que la salsa se calentaba más rápidamente que la pasta, en el microondas semiindustrial se observó que la salsa se calentaba más lentamente que la pasta. El proceso de calentamiento era mucho más homogéneo, el diferencial de temperatura entre la capa que alcanzó menor temperatura y la capa que alcanzó mayor temperatura fue de aproximadamente 10ºC, superando en todos los casos los 90ºC. Este hecho se debió a la posición de los magnetrones dentro de la cavidad del microondas industrial respecto a un microondas doméstico. • Estudio de vida útil del plato precocinado “Raviolis al funghi” Finalmente se realizó el estudio de vida útil del plato raviolis al funghi pasteurizado según el tratamiento de la figura 8 con una perforación de 7,5 mm. Este producto se comparó con una muestra pasteurizada con métodos convencionales y una muestra control. 127 Figura 5.4.12. Estudio de vida útil del plato raviolis al funghi pasteurizado con autoclave y microondas. Los valores representados son medias de como mínimo 2 réplicas. Los resultados mostraron que la perforación del film permitió alcanzar temperaturas más elevadas en el interior del producto y por tanto aumentó la eficacia del proceso en la reducción de la carga microbiana. La calidad microbiológica del producto pasteurizado mediante microondas fue comparable a la calidad del producto pasteurizado mediante autoclave convencional. • Aplicación a la línea de producción (pasteurización y etiquetado) A la hora de aplicar la pasteurización por microondas a escala industrial se consideró necesario realizar una rigurosa planificación de la línea de producción para garantizar la correcta integración del proceso. En la planificación debían tenerse en cuenta las modificaciones que deben aplicarse al envase (perforación), los ciclos de calentamiento y mantenimiento de la temperatura durante la pasteurización, el posterior procesado del envase (sellado) y el enfriamiento final para garantizar la máxima eficiencia del trabajo en continuo. Figura 5.4.13. Posible configuración de la línea de pasteurización y etiquetado. En la figura 5.4.13 se muestra una posible configuración de la línea de pasteurización y etiquetado que permite la automatización del proceso. Debía colocarse un módulo que perforase el envase antes de que los productos pasasen por el microondas. Debían preverse los ciclos de calentamiento y mantenimiento de la temperatura a realizar durante el proceso de pasteurización. Finalizada la pasteurización debía incluirse un módulo de etiquetado que 128 cubriera el orificio con una etiqueta con propiedades barrera para evitar contaminaciones posteriores y finalmente un módulo de enfriamiento del producto. Conclusiones: • Para una correcta aplicación de la técnica de pasteurización mediante alta frecuencia a platos preparados, es imprescindible una caracterización del producto a tratar a nivel físico-químico, termodinámico y dieléctrico. • Es necesario optimizar el envase y las condiciones envasado del producto. El espacio de cabeza entre el producto y el film es un parámetro crítico. • El sistema de procesado del producto envasado incluye un sistema que realice un pequeño orificio, que permita liberar los vapores generados durante el proceso de pasteurización por alta frecuencia. El posterior procesado del envase debe tener en cuenta que dicho orificio debe ser cubierto con una etiqueta con propiedades barrera para evitar contaminaciones. • La potencia aplicada durante el tratamiento en el microondas debe ser moderada para conservar la integridad del envase. La combinación ciclo de calentamiento, ciclo de reposo, ciclo de calentamiento, ciclo de reposo final permite obtener una calidad microbiológica del producto comparable a la del tratamiento convencional, evitando deformaciones en el envase. • Se comprobó que la eficacia del tratamiento depende de la composición de cada uno de los componentes del producto y de las características del microondas. La posición de los magnetrones del microondas es un parámetro crítico a la hora de asegurar la regularidad del tratamiento como mostraron las diferencias obtenidas entre el tratamiento con microondas piloto y el tratamiento con microondas industrial. • Por lo que respecta a la calidad microbiológica del producto, el pasteurizado mediante altas frecuencias es igual de efectivo que los sistemas de pasteurización tradicionales. • La calidad sensorial de los productos obtenidos mediante el pasteurizado por alta frecuencia es aceptable y ajustable a las expectativas que genera un plato de comida preparada sin pasteurizar. • Finalmente, respecto a la viabilidad industrial del proceso, se podría concluir que el proceso es económicamente viable, pero es necesaria una gran inversión inicial que debe tener en cuenta la correcta elección del microondas y una buena configuración de la línea de producción que debe incluir un sistema de perforación del envase antes de la pasteurización y su sellado mediante una etiqueta con propiedades barrera después de la misma. Por lo que el sistema de pasteurización por microondas es menos versátil que los procesos de pasteurizado tradicionales. 129 5.4.3 Tarea 4.3. Estudio del cambio de frecuencia sobre la inactivación microbiana en productos lácteos (Danone, S.A e IRTA). Objetivos: El objetivo principal planteado en este proyecto fue el de conocer el efecto de las ondas electromagnéticas en leches fermentadas y de su efecto letal y subletal en la flora microbiana y prebiótica. Para alcanzar este objetivo se plantearon las siguientes subtareas: • Desarrollo de un equipo de altas frecuencias de barrido para tratamiento de productos alimentarios envasados o no. • Estudio de la inactivación microbiana no térmica en diferentes rangos de altas frecuencias, en leche y en leche fermentada, y elección de las frecuencias donde la inactivación microbiana sea debida en mayor medida a un efecto no térmico. • Inactivación de la flora microbiana en leche y leches fermentadas tratadas por altas frecuencias. Resumen ejecutivo: Hasta el momento, la frecuencia más utilizada para los tratamientos térmicos con ondas electromagnéticas era la de 2450 MHz. Con el presente proyecto se quiso ampliar el rango de aplicación de esta frecuencia, y se desarrolló, conjuntamente con la empresa EODISS, un equipo de frecuencia de 5800 MHz para el estudio de los tratamientos de productos lácteos y leches fermentadas. El equipo convencional de uso doméstico que fue utilizado en el proyecto, fue un equipo de la marca Panasonic modelo NNT 251W Inverte con una frecuencia de 2450MHz y con una potencia máxima real de 650W. La parte superior del equipo fue modificada para incorporar receptores de sondas de temperaturas marca Microwave Work Station. El microondas desarrollado por EODISS e IRTA tardó un año en ser fabricado y con la llegada de este último se amplió el rango de estudio (2450MHz y 5800MHz). Con estas dos frecuencias, y con un solo producto de estudio, se realizaron varios ensayos a lo largo del proyecto. La primera parte fue la calibración de los equipos siguiendo la normativa internacional IEC 60705. La segunda, fue la determinación del tipo de envase a utilizar. Para la realización de este segundo test, se eligieron 3 envases distintos en los cuales se realizaron, para cada uno de ellos, ensayos a 3 potencias y 3 tiempos de aplicación diferentes. En cada uno de los ensayos y mediante las sondas correspondientes se determinaron los incrementos de temperatura respecto al tiempo de aplicación (dT/dt). El producto base para este segundo ensayo fue una leche fermentada procedente de producto comercial. La tercera parte del proyecto fue determinar los parámetros tecnológicos del proceso a cada una de las frecuencias elegidas. Se determinaron los perfiles de temperatura con las mismas sondas de fibra óptica y se obtuvieron los incrementos de temperatura respecto a los tiempos de aplicación (dT/dt). 130 Finalmente con los parámetros tecnológicos elegidos se realizó un último estudio. Se evaluó la inactivación de determinados microorganismos con los parámetros tecnológicos definidos, para cada una de las frecuencias evaluadas (2450 MHz y 5800MHz). Resultados: El equipo obtenido mediante la colaboración de EODISS e IRTA es el presentado en la Figura 5.4.13. La potencia máxima diseñada fue de 700W, y se le modificó la parte posterior para incorporar los receptores de temperatura (Microwave Work Station). Figura 5.4.14. Microondas 5800 MHz Para el diseño del envase se utilizó el microondas 2450MHz. Se observó que en función del tipo de envase la velocidad de calentamiento del producto era diferente. En el caso de la placa de petri se utilizaron 30 ml de producto, en cambio para el resto de los envases se utilizaron 90 ml. (Figura 5.4.14). En la Figura 5.4.15, se representan los incrementos de temperatura respecto el tiempo de calentamiento del producto en función de los envases utilizados. Se observó que el frasco de plástico roscado de tapón rojo (Deltalab, ref.409703) fue el que más incremento de temperatura experimentó. a b c Figura 5.4.15. Ejemplo de los envases utilizados a) placa de petri, b) Frasco de plástico roscado (Deltalab, ref.409703 c) Frasco de plástico roscado (Serviquimia, ref.2022845). 131 Figura 5.4.16. Relación del incremento de la potencia con el incremento de la velocidad de calentamiento en función del tipo de envase utilizado en una leche fermentada. El envase seleccionado, fue el de tipo circular de 5.8 cm de altura y 9 cm de diámetro (Serviquimia ref. 202845) que se utilizó para el resto de los ensayos. Con el microondas 5800 MHz, se realizó un estudio para estudiar la velocidad de calentamiento que experimentó el producto seleccionado en un rango de varias potencias. El microondas de 5800MHz indica los segundos que debe de estar el magnetrón abierto y los que debe de estar cerrado. En la Figura 5.4.15, se indica el incremento de temperatura respecto el tiempo de aplicación y en función de los segundos en abierto (on) y en cerrado (off) en el producto seleccionado. Figura 5.4.17. Velocidad de calentamiento de la leche fermentada con un microondas de 5800MHz a diferentes tiempos de abertura del magnetrón. Existen varias combinaciones para obtener una misma potencia. Se varió el tiempo de apertura del magnetrón y por lo tanto se varió la velocidad de calentamiento del producto evaluado. En el caso de la prueba 3 y 4 (3s on y 3s off; 5s on y 5s off) se quiso obtener un 50% de potencia, pero se configuró la abertura del magnetrón del microondas con dos tiempos de aplicación. Se observó que la velocidad de calentamiento del producto era diferente. A más tiempo de abertura le correspondió más velocidad de calentamiento. 132 Para la inactivación de la flora microbiana se realizaron varios ensayos en diferentes días y temperaturas de conservación. El análisis microbiológico se realizó siguiendo los protocolos de DANONE. En la Tabla 5.4.1 se muestran los datos más relevantes obtenidos en este ensayo con las reducciones microbiológicas más destacadas y obtenidas en los distintos ensayos realizados. Tabla 5.4.1. Reducciones microbiológicas y parámetros térmicos obtenidos durante los diferentes ensayos. 2 2 2 2 3 3 3 3 Reducción Reducción Reducción Reducción Reducción Reducción Reducción Reducción pH (1 d) Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] Log[ufc/ml] 1d 30d 60d 90d 1d 30d 60d 90d 4 4 dT/dt ºC/s Potencia utilizada1 W Tiempo (s) 0,61±0,04 220±15 190 3,4 3,5 2,2 ‐0,3 ‐0,5 ‐0,2 ‐1 ‐2,6 4,31 4,33 4,345 4,27 0,66±0,04 240±14 190 ‐1,9 ‐1,5 ‐1,9 ‐1,9 ‐5 ‐4 ‐7,2 ‐7,2 4,35 4,39 4,39 4,37 1,18±0,10 428±36 60 1,8 1,4 ‐0,2 ‐2,5 ‐0,1 ‐0,6 ‐0,8 ‐2,2 4,28 4,28 4,32 4,31 1,71±0,12 622±44 50 1,4 0,5 ‐3,3 ‐4,2 ‐0,5 ‐1,5 ‐1,7 ‐2,7 4,27 4,27 4,32 4,31 1,58±0,06 572±22 60 ‐3,8 ‐1,2 ‐4,2 ‐4,3 ‐4,2 ‐5,2 ‐3,7 ‐4,6 4,32 4,3 4,33 4,34 pH (30d) pH (60 d) pH (90 d) 4 4 1. Potencia utilizada en 90 ml de producto para generar calor 2. Microorganismo 1 conservado a 4ºC 3. Microorganismo 2 conservado a 4ºC 4. pH control a 90 días para los experimentos de 5.8 GHz fue de 4,19 y de 4,00 para los experimentos a 2,45 GHz A los 90 días de almacenamiento y con la máxima potencia utilizada para calentar los 90ml de producto, hubo una reducción microbiológica para el microorganismo 1 de -4.3 log (ufc/ml) y -4.6 log (ufc/ml) para el 2. Por lo tanto donde se observó una reducción superior fue en los tratamientos de más potencia. Conclusiones: • • • • • El envase fue un factor clave para el diseño del tratamiento ya que afecta a la velocidad de calentamiento del producto. El calentamiento del producto depende de la potencia y del tiempo de aplicación de ésta. La reducción microbiológica debida al incremento de temperatura fue independiente del tipo de onda utilizada (2450 MHz ó 5800MHz). La frecuencia que proporcionó el mejor tratamiento para la inactivación microbiana térmica fue 2450 MHz con una potencia del 66% con respecto a la potencia máxima del equipo. En este trabajo se estableció y trabajó con una geometría única para los productos lácteos ya que es de elevada importancia el concepto geometría/frecuencia para un mismo producto. 133 5.4.4 Tarea 4.4. Estudio del efecto de los procesos térmicos por generación interna de calor (microondas, radiofrecuencias y ultrasonidos) sobre el valor nutricional, textura y conservación de alimentos y preparaciones culinarias (Fundació Alícia e IRTA). Objetivos: Los objetivos fueron los siguientes: • Optimizar, mediante procesos físicos de generación interna de calor, el tratamiento térmico de alimentos y preparaciones culinarias, con un mínimo impacto sobre las propiedades sensoriales y nutricionales de los alimentos. • Estudiar la influencia de los procesos físicos de generación interna de calor sobre la textura, para mejorar la aceptabilidad de los alimentos. • Obtener modificaciones de alimentos que favorezcan la ingesta a enfermos y personas de la tercera edad. • Diseñar, modificar y buscar nuevas aplicaciones para elaborar alimentos mejorados mediante el uso de hornos microondas. • Diseñar o modificar fórmulas y técnicas culinarias para optimizar el uso de procesos físicos de generación interna de calor en alimentos. Resumen ejecutivo: Las investigaciones correspondientes se dividieron en seis partes: • • • • • • Aplicaciones culinarias de la generación de energía interna mediante microondas, como por ejemplo geles. También se investigó el uso de un microondas de nueva generación con control de temperatura. Investigación para la obtención de texturas especiales obtenidas con microondas (“sféricos”, exudados y espumas). Estudio de productos para regímenes alimentarios, donde se investigaron elaboraciones culinarias para dietas específicas. Calor interno para obtener alimentos que permitan la ingesta, de manera que los esfuerzos se centraron en la obtención de purés y flanes sin huevo mediante microondas. Investigación con Ultrasonidos. Se estudiaron las posibles aplicaciones culinarias de los ultrasonidos. Estudio del proceso de descongelación de los alimentos. Se trabajó en la descongelación de merluza y langostinos mediantes distintos tipos de microondas. Resultados: La participación de la Fundació Alícia en esta tarea permitió generar nuevos conocimientos en la aplicación de las tecnologías de las altas frecuencias en sus preparaciones gastronómicas. Se destacan los resultados siguientes: Se estudiaron elaboraciones como por ejemplo el desuerado de yogur y calentamiento de espuma de chocolate. En cuanto al desuerado del yogur, no se encontraron grandes diferencias respecto a la extracción del líquido a las distintas potencias, aunque se apreció 134 un mayor rendimiento en las muestras tratadas a 432 W. La capacidad de desuerado del yogur no se vio afectada por la adición de zumo de limón en la concentración estudiada. Se verificó que la espuma de chocolate es un producto muy delicado que no se puede calentar por microondas sin perjudicar su estructura. Se desarrolló y patentó un microondas experimental que permite controlar las cocciones mediante una sonda infrarrojo y con el que se prepararon elaboraciones culinarias, definiendo las condiciones óptimas de uso. Se comparó el funcionamiento del nuevo microondas con el microondas convencional en el comportamiento de los gelificantes, descongelación de pescado y marisco y obtención de exudados de frutas. En cuanto al comportamiento de los gelificantes, se identificaron los más adecuados para un procesado por microondas a la vez que se observó que la hidratación/gelificación de los geles era más rápida con el método convencional, excepto para la metilcelulosa que alcanzó mayor velocidad de calentamiento con el microondas a 243 W. Del mismo modo, se observó que el gel carragenato iota era más deformable que los geles de gelatina cola de pez y de agar-agar y que los métodos que más se acercaban a la textura obtenida por el método convencional eran el microondas a 243 W para el agar-agar y a 900 W para la gelatina cola de pez. No se observaron diferencias de textura entre los distintos métodos utilizados para la gelificación del carragenato iota. Tampoco se observaron diferencias de textura entre los distintos métodos de calentamiento del gel formado de agar-agar. Se compararon distintos métodos de descongelación de merluza y langostinos en nevera, con el microondas convencional y con el microondas experimental de la Fundació Alícia. Para reducir notablemente el tiempo de descongelación en nevera, los dos tipos de microondas fueron muy eficientes. La pérdida de peso aumentó ligeramente con las descongelaciones con microondas. En concreto, en la descongelación de merluza el microondas experimental permitió reducir más el tiempo de descongelación sin observar una pérdida de peso superior al microondas convencional. En la descongelación del langostino se consiguió un menor tiempo de descongelación con el microondas convencional aunque por el contrario la pérdida de peso fue mayor. En cuanto a la obtención de exudados de fruta se estudió el caso de exudado de kiwi y de fresa. En la obtención de exudado de kiwi por microondas convencional se observó que el azúcar facilitaba la exudación aportando una superior intensidad de sabor dulce llegando a resultar excesivo. Contrariamente el sabor ácido no incrementó el porcentaje de exudado y aportó notas ácidas al producto. Los mejores resultados desde un punto de vista sensorial y de exudación se obtuvieron con un 5% de azúcar y con la mezcla de ácido y azúcar. En el exudado de fresas se observaron los mismos efectos descritos anteriormente para el exudado de kiwi. En este caso los mejores resultados desde un punto de vista sensorial y de exudación también se obtuvieron con la mezcla de ácido y azúcar. También se estudió la obtención de exudado de fresa y kiwi con el microondas experimental de la Fundació Alícia. Se observaron resultados similares a los obtenidos anteriormente con el microondas convencional: el azúcar puede llegar a ser excesivo pero permite aportar sabor dulce y facilita el exudado. La temperatura está directamente 135 relacionada con la cantidad de exudado. La combinación de azúcar y ácido permite equilibrar el sabor y mejorar el rendimiento del exudado de fresa pero no del de kiwi en el que se obtuvieron buenos resultados tanto con azúcar como con limón. En cuanto a productos para regímenes especiales, se realizaron los estudios referenciados en la tarea 2.7. Se investigó la formulación de flanes sin huevo por microondas destacando que la velocidad de calentamiento de los flanes fue superior con el método convencional respecto al microondas experimental. Con la gelatina cola de pez no se observaron diferencias. Con el carragenato iota sí se observaron diferencias aunque éstas deberían estudiarse con mayor detalle para poder seleccionar la mejor técnica de elaboración. El estudio realizado con ultrasonidos fue una primera aproximación para evaluar sus posibilidades culinarias. Los resultados obtenidos no fueron muy alentadores. Conclusiones: El estudio del efecto de los procesos térmicos por generación interna de calor (microondas, radiofrecuencias y ultrasonidos) sobre el valor nutricional, textura y conservación de alimentos y preparaciones culinarias y el desarrollo de tecnologías de envasado compatibles con estos procesos ha permitido: • Estudiar la elaboración mediante microondas de desuerado de yogur y el calentamiento de una espuma de chocolate. Éste último sin resultados interesantes, a diferencia del desuerado de yogur en que se han definido los parámetros para obtener el mayor rendimiento del yogur en la obtención del desuerado. • Desarrollar y patentar un microondas con control de temperatura, alcanzando así el control de la cocción. • Comparar el funcionamiento de un microondas convencional respecto de un nuevo microondas desarrollado y patentado por la Fundació Alícia. En concreto el calentamiento de productos gelificados, la descongelación de pescado y marisco y la obtención de exudado de frutas. La hidratación y gelificación de geles es más rápida con el microondas convencional. El nuevo microondas controla mejor el proceso de descongelación permitiendo según el producto reducir el tiempo de descongelación y las pérdidas de peso por descongelación. En cuanto al exudado de frutas el microondas convencional calienta de forma más agresiva por lo que el tiempo necesario de proceso es en general menor. El microondas experimental es más fácil de utilizar y más cómodo y permite tener un mayor control de la temperatura durante el proceso y del producto final evitando sobrecalentamientos. • Desarrollar una receta de flan sin huevo mediante microondas apta para intolerantes al huevo, enfermos de cáncer, y disfágicos. • Tener una primera aproximación de las posibilidades de la aplicación de los ultrasonidos en cocina, aunque ésta resultó de poco interés culinario. 136 5.4.5 Tarea 4.5. Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la sustitución del tratamiento térmico convencional por el de altas frecuencias (Sealed Air Packaging S.L.U y IRTA). Objetivos: Las tareas en las que participó Sealed Air en el marco de la actividad 2 y en el de la actividad 4 se plantearon desde el punto de vista de tecnología de envasado con un mismo objetivo: analizar los posibles cambios en las propiedades de los materiales del envase después de ser sometidos a los nuevos procesos de conservación/regeneración de alimentos, bien por pasteurización por alta presión (Tarea 2.2) bien por tratamiento por altas frecuencias (Tarea 4.5), adaptándose a las necesidades exigidas del proceso y estudiando, a su vez, las ventajas ofrecidas de los nuevos procesos tecnológicos respecto a los convencionales. En altas frecuencias se estudió el efecto del proceso en uso doméstico (regeneración por microondas) o industrial (pasteurización por microondas o descongelación por radiofrecuencias) sobre estas matrices (cárnica, de pescado y vegetal) envasadas en combinaciones adecuadas de materiales plásticos, optimizando envase y tecnología al mismo tiempo. En esta tarea y en la de la Actividad 2, el objetivo último tras la validación previa realizada con los modelos fue la de optimizar y adecuar las condiciones del proceso a la tecnología de envasado más conveniente para productos reales (cárnicos, de pescado o vegetales). A su vez, los resultados obtenidos de análisis de las propiedades mecánicas, de permeabilidad al oxígeno (OTR) y de migración global para los materiales seleccionados antes y después de su procesado por altas presiones o altas frecuencias se compararon con la finalidad de verificar la existencia o no de diferencias causadas por la tecnología aplicada. Resumen ejecutivo: las actividades realizadas por Sealed Air Cryovac e IRTA tituladas “Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la presurización ultrarrápida. Pasteurización por alta presión. Combinación de la alta presión con otras técnicas de conservación” y “Cambios en las propiedades de los materiales de envase en la sustitución del tratamiento térmico convencional (transferencia de calor) por el de altas frecuencias (generación interna del calor)” se desarrollaron siguiendo un mismo eje común y, adecuando en cada caso, los mejores sistemas y materiales de envasado a la nueva tecnología de procesado de los alimentos. Así pues, durante el período inicial del proyecto, se recopilaron los materiales plásticos de interés para ser evaluados con el tratamiento por alta presión y por procesado por alta frecuencia. Las tecnologías de envasado SimpleSteps y en Bolsa termoretráctil fueron seleccionadas para ser evaluadas en ambos procesos de conservación/regeneración. Análogamente, la tecnología Darfresh® y Bolsa VPP se seleccionaron para su uso en alta presión y el sistema Lidding y N’Oven, para el procesado por alta frecuencia. En ambas actividades, el objetivo final fue estudiar los posibles cambios en las propiedades de los materiales de envase después de la aplicación de la tecnología, el posible efecto en la matriz alimentaria contenida en el envase o del propio proceso, la adecuación entre el 137 envase y la tecnología, y las ventajas de los nuevos procesos tecnológicos respecto a los convencionales. Para ello se elaboraron modelos alimentarios estándar con base cárnica, de pescado y vegetal. A continuación, estos modelos fueron envasados mediante las tecnologías de envasado citadas anteriormente, se procesaron y se estudió el efecto envase-tecnología como paso previo a la realización de estudios de análisis sensorial y de vida útil en productos reales, pudiéndose así comparar las ventajas/inconvenientes de las nuevas tecnologías respecto a los procesos convencionales. En el procesado por alta presión se seleccionaron 7 tratamientos combinando presión (500 ó 600MPa), tiempo (6 ó 10 minutos) y temperatura (7, 15 ó 40ºC). Para la regeneración por calor en microondas piloto se establecieron 3 potencias de estudio 250W, 440W y 900W. En cuanto a la pasteurización por microondas industrial se trabajó a diferentes potencias, velocidades de proceso y de forma continua o discontínua (batch). En microondas piloto la temperatura objetivo de regeneración se situó entre 90 y 100ºC, mientras que para la pasteurización por microondas industrial el rango se estableció entre 65 y 85ºC según el producto. Para la descongelación por Radiofrecuencias el rango de temperatura se estableció entre 20ºC y -2ºC para los productos envasados. Se utilizaron dos tipos de electrodos (de polaridad doble o simple) según la altura del producto y se modificaron los parámetros de tensión, distancia entre electrodos y velocidades de cinta para optimizar y reducir el tiempo de descongelación. Se estableció este rango ya que la descongelación por radiofrecuencias alcanza hasta los -2ºC (tras este valor se da un cambio de fase) y también porque la mayoría de productos congelados están a – 20ºC. En el procesado por alta frecuencia (microondas y radiofrecuencias) los perfiles de temperatura del producto se registraron mediante sondas de fibra óptica o mediante datalogger (Picoµwave, TMI-ORION). En alta presión se identificaron varios productos cárnicos para su tratamiento: curados enteros (jamón curado deshuesado), loncheados ibéricos (salchichón, chorizo, caña de lomo, paleta ibérica), frescos (panceta con corteza), cocidos (roast beef con/sin aditivos) y productos a base de hígado de pato (foie). En cuanto a productos de la pesca se procesaron diferentes especies de pescado crudo (salmón, pescadilla, rape), cocidos con salsa (sardinas en escabeche, pulpo a la Gallega, gambas al ajillo) y platos preparados (merluza con verduras). Los productos de origen vegetal seleccionados fueron los siguientes: vegetales frescos laminados (champiñones en salmuera), platos preparados (escalibada) y salsas (triturado de tomate). Para los productos en formato industrial se utilizó la tecnología de envasado en bolsa termoretráctil o en bolsa VPP, mientras que la tecnología Darfresh y SimpleSteps fue la empleada para unidad consumidor. Los parámetros de proceso aplicados se modificaron según la tecnología, envase y producto a evaluar. En alta frecuencia, la actividad se subdividió en tres partes: regeneración por calor en microondas doméstico, pasteurización por microondas industrial y descongelación por radiofrecuencia. Los productos seleccionados para la pasteurización o regeneración por microondas fueron principalmente platos preparados: albóndigas en salsa, lasaña de carne, 138 pastel de pescado, pulpo a la Gallega, colas de langostino al ajillo, merluza con verduras, pisto de verduras y escalibada. En la descongelación por radiofrecuencias se procesaron lomos de cerdo enteros, rodajas de pez espada, albóndigas, guisantes y judías verdes. Para los productos de formato industrial se utilizó la tecnología de envasado en bolsa termoretráctil, mientras que la tecnología Lidding, N’Oven y SimpleSteps fue la seleccionada para unidad consumidor. Las condiciones de presión/temperatura/tiempo aplicadas se modificaron en función del producto a procesar. El objetivo en ambas actividades fue obtener productos envasados con la combinación más adecuada de materiales plásticos aptos para el procesado por alta presión o alta frecuencia, garantizando seguridad alimentaria, mayor vida comercial, con mejores características sensoriales y mejorando la capacidad de producción al poder reducir el tiempo de procesado respecto a las tecnologías convencionales (autoclave). Para verificar la eficacia de estas tecnologías se realizaron análisis físico-químicos, sensoriales y microbiológicos en el producto procesado y se compararon con el producto no tratado. En las aplicaciones en que se consideró necesario se realizaron los tratamientos convencionales de conservación (autoclave) para evaluar las ventajas e inconvenientes de este tratamiento frente a las nuevas tecnologías propuestas. A su vez, se realizaron diferentes ensayos para el estudio de las propiedades mecánicas, de resistencia a la apertura, de permeabilidad al oxígeno (OTR) y de migración global de los materiales plásticos procesados por alta presión en las condiciones más extremas (40ºC/10minutos/600MPa), comparándolos con los resultados obtenidos en los materiales no tratados. En altas frecuencias se realizó el análisis visual, de hermeticidad mediante el sistema de estanqueidad Dopac (Cryovac) y de migración establecido por Cryovac para platos preparados. Resultados: Se estudiaron 11 combinaciones de materiales plásticos en sistema SimpleStep, Lidding o N’Oven para estudiar los procesos de regeneración/pasteurización por microondas de los modelos cárnico, pescado y vegetal. También se seleccionaron 9 combinaciones con tecnología de envasado SimpleStep, Lidding o bolsas termoretráctiles para el estudio de la descongelación de los modelos mediante radiofrecuencia. Durante el calentamiento/pasteurización por microondas se genera vapor en el interior del envase en mayor o menor cantidad según el contenido de agua del modelo estudiado. En el sistema Lidding o N’Oven se debe permitir la salida del vapor generado en el interior del envase y, especialmente durante la pasteurización por microondas industrial, para evitar la pérdida de la hermeticidad por rotura de la zona de soldadura, pudiendo incluso provocar deformaciones del envase. Se evaluaron diferentes válvulas y sistemas para la salida de vapores. Para este sistema de envasado, la velocidad de calentamiento y el tiempo necesario para alcanzar la temperatura objetivo fue debida únicamente a la potencia de tratamiento. Por el contrario, en la tecnología SimpleSteps hubo otro factor que jugó un papel muy importante: el vapor. Éste es primordial para el buen funcionamiento de esta tecnología de envasado, ya que permite la cocción rápida al vapor del producto contenido mediante la 139 formación de una burbuja por separación física entre la base y la tapa (Figura 5.4.16). Este fenómeno se produce de forma eficaz a potencias altas, mientras que a potencias bajas se observaron tiempos demasiado largos y falta de homogeneidad en la temperatura alcanzada en diferentes puntos del producto. Las curvas de temperatura-tiempo obtenidas en el procesado de los modelos a 250W de potencia en todas las combinaciones de bandeja y film evaluados corroboraron el sistema de funcionamiento de tipo pulsado del microondas piloto. A potencias superiores este efecto se vió atenuado por la inercia termodinámica del producto. Tras ser evaluados los modelos, se procedió al estudio de la regeneración por microondas piloto de platos preparados envasados con la tecnología SimpleStep (albóndigas en salsa, pulpo a la Gallega, colas de langostino al ajillo y merluza con verduras) y la lasaña de carne en N’Oven. Los resultados obtenidos de estos estudios y el mejor conocimiento del funcionamiento de los diferentes sistemas y materiales plásticos utilizados, permitieron seleccionar los envases y productos más adecuados para pasteurización por microondas industrial para conocer los beneficios del nuevo proceso respecto a la pasteurización convencional por autoclave. Los productos y tecnologías de envasado seleccionadas fueron lasaña de carne, pisto de verduras y pastel de carne para N’Oven, y el sistema Lidding para la escalibada. Los resultados obtenidos en la pasteurización en continuo por microondas industrial de lasaña con carne en el sistema N’Oven fueron microbiológicamente similares a los obtenidos por autoclave, obteniéndose reducciones de 3 Logs respecto al producto no procesado, verificándose así la efectividad de la nueva tecnología con un tiempo de tratamiento inferior. Los ensayos de pasteurización por microondas industrial en batch del pisto confirmaron su mayor efectividad respecto al proceso en continuo, valorándose sensorialmente mejor el producto en batch en cuanto a aspecto, olor y flavor respecto a un pisto comercial. En cuanto al procesado por microondas industrial de la escalibada envasada en sistema lidding, se obtuvo un producto mejor valorado a nivel sensorial que el pasteurizado por autoclave, evitándose a la vez el crecimiento de microorganismos alterantes durante un mínimo de 60 días, con una reducción 4 veces inferior al tiempo de procesado respecto del sistema convencional. Los materiales superaron satisfactoriamente los diferentes tratamientos de pasteurización aplicados sin observarse deformaciones o roturas en la zona de soldadura. La hermeticidad fue verificada con el sistema Dopac. En cuanto a la descongelación por radiofrecuencia se verificó la efectividad del electrodo de polaridad doble para productos envasados de baja altura (bandejas) y el electrodo de polaridad simple para productos de tamaño industrial envasados en bolsas termoretráctiles, evidenciándose en ambos casos la importancia de los dos primeros electrodos mediante las curvas de temperatura obtenidas. Se observaron resultados muy similares para un mismo tipo de modelo, verificándose la repetitividad del proceso y de la metodología de trabajo aplicada. La composición del alimento, y en especial el contenido en agua, fue el factor más importante para la descongelación del alimento por radiofrecuencia. El material de envase no interfirió en el funcionamiento del proceso. Tampoco se vio afectado durante la descongelación por radiofrecuencia siempre que no estuviera compuesto de resinas con iones que produjeran descargas eléctricas en el túnel. En los diferentes ensayos realizados para la descongelación de productos comerciales, se obtuvieron reducciones en el tiempo de descongelación importantes respecto a una 140 descongelación a temperatura ambiente o de refrigeración. En los ensayos realizados para el procesado por radiofrecuencias de lomos de cerdo de peso aproximado 3 Kg se redujo entre 4.8 y 6 veces el tiempo respecto a la descongelación a 20ºC y 4ºC, respectivamente (Figura 5.4.18). Los materiales plásticos seleccionados debían ser aptos para procesar alimentos tipo “platos precocinados” por microondas industrial para su pasteurización y/o calentamiento por microondas doméstico. Los materiales evaluados por microondas superaron satisfactoriamente los ensayos de migración para un factor de reducción de 3. En cuanto a los materiales plásticos tratados por radiofrecuencia, al no haber un incremento de la temperatura crítica para el material procesado (temperaturas entre -20ºC y -2ºC±2) no fue necesario la realización de estos análisis. 1 2 3 4 Figura 5.4.18. Proceso de regeneración del pulpo envasado con la tecnología SimpleStep a potencia 900W durante 75 segundos. Detalle del producto con las sondas insertadas por la parte inferior (1), formación de la burbuja de cocción durante el procesado (2), imagen del producto al finalizar el calentamiento dentro del microondas (3) y después de 5 minutos (4). 141 Figura 5.4.19 Aspecto de la escalibada control (izquierda), autoclave (medio) y procesada por microondas industrial (derecha) con la tecnología Lidding. Figura 5.4.20. Imagen de la descongelación de lomos de cerdo envasados en bolsa termoretráctil Conclusiones: Los sistemas Simple Streps®, n’Oven® y lidding son adecuados para la regeneración de productos en microondas domésticos, habiéndose demostrado que las migraciones se mantienen dentro de los parámetros admitidos por la legislación alimentaria vigente (Reglamento10/2011; L12 de 15.01.2011). En cuanto a los procesos de pasteurización en microondas continuos, sólo los sistemas n’Oven® y lidding son capaces de soportarlo, mediante la realización de una perforación que permite el venteo del producto durante su procesado. Estos procesos de pasteurización continua reducen significativamente los tiempos de procesado actuales y mejoran las propiedades sensoriales del producto final respecto del producto tratado por autoclave ya que el producto ha sido sometido menos tiempo al tratamiento térmico. Además estos procesos permiten mejorar los flujos actuales de producto en la industria (son más discontinuos). En cuanto al tratamiento por alta frecuencia, se puede concluir que es un sistema adecuado para procesos de descongelación de piezas grandes de carne o pescado que pueden estar envasadas al vacío en bolsas termoretráctiles. Los principales beneficios que aporta esta tecnología son que permite acelerar los procesos de descongelación, minimiza las pérdidas y mejora la calidad sensorial del producto. El envase protege el producto durante todo el proceso y mantiene intactas sus propiedades de permeabilidad y mecánicas. 142 5.5 ACTIVIDAD ENVASADO 5.5.1 5. DESARROLLO DE NUEVOS SISTEMAS DE Tarea 5.1. Optimización de las condiciones de extracción de los compuestos fenólicos presentes en diferentes corrientes residuales de la industria cervecera (Grupo Mahou-San Miguel, GAIKER y USC). Objetivos: Los objetivos planteados por el Grupo Mahou-San Miguel para la correcta realización de las tareas del proyecto fueron los siguientes: • Identificar y cuantificar los compuestos fenólicos presentes en los extractos naturales obtenidos a partir de corrientes residuales del proceso cervecero. • Fraccionar los diferentes compuestos fenólicos del extracto natural. • Verificar la capacidad antioxidante y antimicrobiana del extracto natural. • Purificar el extracto con el fin de mejorar su color mediante fraccionamiento por columna LC-18 y por fluidos supercríticos (SFE). • Definir las condiciones de extracción y escalado industrial para la obtención de una cantidad suficiente de extracto para las actividades del proyecto. Resumen ejecutivo: Se optimizaron los procesos de obtención de compuestos polifenólicos a partir de dos corrientes residuales del proceso de elaboración de la cerveza. Los procesos que se desarrollaron para la obtención de los compuestos polifenólicos partieron de dos corrientes residuales distintas del proceso cervecero, una proveniente del procesado de materia prima y la segunda, obtenida del mismo proceso de elaboración de cerveza. Se identificaron y cuantificaron los polifenoles activos del extracto procedentes de la corriente residual seleccionada. Dado que el extracto obtenido a partir de la corriente residual del proceso cervecero presentaba una actividad antioxidante muy superior a la obtenida a partir del residuo obtenido en el procesado de materia prima, se seleccionó el empleo del primero para las siguientes etapas del proyecto. La actividad antioxidante de los extractos obtenidos presentaba una EC50 entre 0.23 – 0.45 g/L, siendo por tanto entre 5 y 10 veces más activo que el BHT. Los compuestos fenólicos presentes en el extracto se identificaron por HPLC-DAD. Se optimizaron los métodos cromatográficos con el fin de seleccionar las condiciones que permitieran una mejor separación de los diferentes compuestos polifenólicos. También se realizó una identificación positiva de los compuestos polifenólicos por HPLC-ESI-TOF. Finalmente, se realizó el fraccionamiento de los extractos mediante cromatografía semipreparativa, con el objeto de facilitar la identificación y cuantificación de los compuestos polifenólicos presentes en el extracto. El extracto seco presentó una elevada capacidad antioxidante y un elevado contenido fenólico que se mantuvo prácticamente constante cuando fue sometido a elevadas temperaturas. 143 La capacidad antimicrobiana en el extracto fue efectiva frente a los microorganismos evaluados. El ensayo de efectividad antimicrobiana se basó en el Standard Test method for determining the Antimicrobial Activity of Inmobilizied Antimicrobial Agents Under Dynamic Contact conditions ASTM 2149-01. Se observó que para una concentración baja de microorganismos 103 (concentración habitual en este tipo de situación cuando empieza la contaminación en el producto cárnico) el agente activo era efectivo con una reducción logarítmica de 2 a los principales microorganismos de interés: Escherichia coli (E. Coli); Listeria monocytogenes; Salmonella spp; Escherichia coli 0157:H7; Staphylococcus aureus; Aerobios totales y Clostridium botulinum. La purificación y mejora del color (menor color) del extracto se realizó mediante fraccionamiento por columna LC-18 y fluidos supercríticos (SFE). El ensayo de fraccionamiento, tanto por columna LC-18 como por SFE bajo distintas condiciones experimentales, permitió obtener distintas fracciones que fueron analizadas por HPLCDAD-UV. El fraccionamiento mediante la columna LC-18 permitió una mejor separación de los polifenoles simples que el SFE, pero en la purificación por SFE se consiguió una mejor separación de los polifenoles complejos (no identificados por HPLC), que quedaron retenidos en su mayor parte en la celda. En ambas técnicas en relación al color se consiguió separar fracciones de distintas coloraciones, pero las fracciones con una coloración más intensa presentaron la mayor actividad antioxidante. Finalmente, se realizó el escalado piloto industrial para la obtención del extracto. En este escalado industrial se observaron problemas de extracción, viendo necesario realizar extracciones sucesivas (tres extracciones) para conseguir la cantidad de aditivo necesaria para realizar las siguientes pruebas previstas en el proyecto. Resultados: Dado que los extractos polifenólicos obtenidos presentaban una actividad antioxidante muy superior a la de los obtenidos a partir de la cascarilla de cebada, se seleccionaron los primeros en las siguientes etapas del proyecto. Figura 5.5.1. Muestra de extracto obtenido a partir de una corriente residual del proceso cervecero La variable de mayor importancia en el proceso de obtención de los polifenoles, y que necesitaba ser objeto de una optimización, era la relación entre la fase orgánica y la fase acuosa, así como el número de etapas durante el proceso de extracción. Cabe destacar que el rendimiento de la extracción oscilaba entre 0,4 y 1,8 g de extracto/L de licor, observándose una gran diferencia en el rendimiento de extracción en función de esta variable. 144 La verificación de la capacidad antioxidante del extracto seco sin incorporar en el film se determinó como la concentración de extracto necesaria para conseguir un 50% de inhibición del radical DPPH (EC50). El extracto seco obtenido demostró tener una actividad antioxidante similar a la que presentaban los extractos obtenidos a escala de laboratorio, aproximadamente 10 veces superior a la que presenta el antioxidante sintético de referencia BHT (EC50 = 2,8), comúnmente utilizado en la industria alimentaria. La actividad antioxidante de los extractos obtenidos presentó una EC50 entre 0.23 – 0.45 g/L Figura 5.5.2. Relación licor/acetato de etilo obtenido en la primera extracción Se realizó un estudio para cuantificar la capacidad antimicrobiana y establecer los porcentajes exactos de muerte celular y reducción logarítmica del extracto. Se observó que para una concentración baja de microorganismos 103 (concentración más habitual en este tipo de situación cuando empieza la contaminación en el producto cárnico) el agente activo era efectivo con una reducción logarítmica de 2 sobre los principales microorganismos de interés. (Ver Tablas 5.5.1 y 5.5.2). 145 Tabla 5.5.1. Recuentos de células viables de los distintos microorganismos (ufc/ml) para la sustancia ensayada y muerte celular expresada en reducción logarítmica CON C. 0h 24H / 48H ** Red Red MUESTRA 1,20E+06 AEROBIOS LMO SALMONELLA STAPHYLOCO CCUS E. COLI H7 O157 CLOSTRIDIUM (1) 1% 3% 1% 3% 3% 3% CONTROL Log10 1,20E+06 1,30E+06 1,30E+06 2,30E+03 2,30E+03 2,30E+03 2,30E+03 2,70E+03 2,70E+03 2,50E+03 2,50E+03 4,30E+03 4,30E+03 4,10E+03 4,10E+03 1,80E+03 1,80E+03 1,80E+03 1,80E+03 3,50E+03 3,50E+03 3,40E+03 3,40E+03 4,60E+03 4,60E+03 4,50E+03 4,50E+03 3% --- --- --- --- --- --- --- 72H MUESTRA CONTROL <10 1,30E+06 <10 8,90E+05 <10 2,20E+03 <10 2,10E+03 <10 2,60E+03 <10 2,50E+03 <10 3,90E+03 <10 4,20E+03 <10 1,80E+03 <10 1,90E+03 <10 3,60E+03 <10 3,20E+03 2,30E+02 4,40E+03 5,30E+02 4,60E+03 Log10 5 2 2 2 2 2 1 Red MUESTRA CONTROL <10 1,50E+06 <10 * <10 2,20E+03 <10 * <10 2,60E+03 <10 * <10 3,80E+03 <10 * <10 1,60E+03 <10 * <10 3,70E+03 <10 * 1,70E+02 4,60E+03 3,40E+02 4,10E+03 *Sólo se hizo una réplica del control **48H Clostridium, 24H el resto de m.o. NOTA: el cálculo de la reducción logarítmica= log10 C – log10 M , siendo C: Control (valor medio) y M: Muestra (valor medio). (1) Los ensayos de Clostridium se prolongaron hasta los día 6 y 7 pero no se observó una mayor muerte celular, la reducción log10 se mantuvo en 1. 146 Log10 5 2 2 2 2 2 1 Tabla 5.5.2. Recuentos de células viables de los distintos microorganismos (ufc/ml) para la sustancia ensayada y muerte celular expresada en porcentaje CON C. 0h MUESTRA 1,20E+06 CONTROL 24H / 48H ** %M Celular 1,20E+06 MUESTRA CONTROL <10 1,30E+06 --AEROBIOS 1% 1,30E+06 1,30E+06 2,30E+03 2,30E+03 3% 2,30E+03 2,30E+03 2,70E+03 2,70E+03 <10 8,90E+05 <10 2,20E+03 STAPHYLOCO CCUS 1% 2,50E+03 2,50E+03 4,30E+03 4,30E+03 <10 2,10E+03 <10 2,60E+03 4,10E+03 4,10E+03 1,80E+03 1,80E+03 <10 2,50E+03 <10 3,90E+03 3% 1,80E+03 1,80E+03 3,50E+03 3,50E+03 <10 4,20E+03 <10 1,80E+03 CLOSTRIDIUM (1) 3% <10 1,90E+03 <10 3,60E+03 <10 * <10 2,20E+03 <10 * <10 2,60E+03 <10 * <10 3,80E+03 <10 * <10 1,60E+03 <10 * <10 3,70E+03 3,40E+03 <10 3,20E+03 <10 * 4,60E+03 4,60E+03 2,30E+02 4,40E+03 4,50E+03 4,50E+03 5,30E+02 4,60E+03 99,54 99,61 99,74 99,38 99,73 1,70E+02 4,60E+03 3,40E+02 4,10E+03 91,55 --- %M Celular 99,99 99,71 3,40E+03 3% 1,50E+06 99,46 --H7 O157 <10 99,75 --E. COLI CONTROL 99,61 --3% MUESTRA 99,53 --SALMONELLA %M Celular 99,99 --LMO 72H 86,44 *Sólo se hace una réplica del control **48H Clostridium, 24H el resto de m.o. NOTA: el cálculo de la % de muerte celular= [ (C-M)/C] x 100, siendo C: Control (media de número de células viables a 0h) y M: muestra (media de número de células viables a 24h, 48h ,72h) Dada la elevada capacidad antioxidante que presentaban los extractos naturales, no era rentable económicamente realizar una posterior etapa de fraccionamiento y purificación a nivel industrial, ya que se encarecería considerablemente el proceso de obtención del extracto, sin un claro aumento en la capacidad antioxidante de los mismos. Los análisis por HPLC-DAD-UV de los extractos obtenidos en los ensayos de fraccionamiento por extracción supercrítica SFE bajo distintas condiciones experimentales, demostró que no se separaron de compuestos antioxidantes de la misma forma que en el ensayo de fraccionamiento en columna LC-18 realizado por la USC. Sin embargo, el grado de purificación de las fracciones obtenidas por fluidos supercríticos (SFE) era mayor que el obtenido en las fracciones obtenidas en el ensayo de fraccionamiento en columna LC-18. En lo que se refiere a las actividades antioxidantes presentadas por las fracciones obtenidas en los ensayos de SFE, de una manera general se observó que las fracciones que poseían 147 mayor cantidad de compuestos polifenólicos, que eran precisamente las que presentaban más color (naranja-rojo-marrón), eran las que presentaron una mayor actividad antioxidante. Figura 5.5.3.Extractos obtenidos por fluidos supercríticos (SFE) Se realizó el escalado industrial del extracto para conseguir la cantidad necesaria de aditivo para realizar las siguientes pruebas previstas en las tareas de la actividad 5. Se produjeron problemas de extracción y se tuvieron que realizar extracciones sucesivas (tres escalados). Se preparó el primer escalado con la extracción de los 1000 litros divididos en siete lotes. Durante el primer lote se reprodujeron los problemas de “rotura” de la emulsión, pero finalmente se solucionaron mediante ajustes en los parámetros de extracción. A partir del segundo escalado se precedió a realizar las extracciones sin ningún tipo de problema. Dado que se requirió gran cantidad de extracto activo para obtener film activo suficiente para hacer las pruebas de envasado de las otras tareas, se procedió a realizar las acciones necesarias para un segundo y tercer escalado. Conclusiones: Las principales conclusiones obtenidas en el proyecto fueron: • El extracto seco obtenido a partir de una corriente residual del proceso de elaboración de cerveza presenta una elevada capacidad antioxidante y antimicrobiana que se mantiene prácticamente constante cuando se somete a elevadas temperaturas. • Los compuestos fenólicos presentes en el extracto fueron identificados por HPLCDAD y confirmados por HPLC-ESI-TOF. • La actividad antioxidante de los extractos obtenidos presentó una EC50 entre 0.23 – 0.45 g/L, siendo por tanto entre 5 y 10 veces más activo que la que presenta el antioxidante sintético de referencia BHT (EC50 = 2,8) comúnmente utilizado en la industria alimentaria. El análisis cualitativo y cuantitativo de la efectividad antimicrobiana en el extracto activo desarrollado demostró que es efectivo contra los microorganismos de interés propuestos por los usuarios finales: Escherichia coli (E. Coli); Listeria monocytogenes; • 148 Salmonella spp; Escherichia coli 0157:H7; Staphylococcus aureus; .Aerobios totales y Clostridium botulinum. • Se consiguió separar fracciones de distintas coloraciones del extracto activo pero las fracciones con una coloración más intensa fueron las que presentaron una mayor actividad antioxidante. • En el escalado industrial se observaron problemas de extracción realizándose extracciones sucesivas para conseguir la cantidad de aditivo necesaria para realizar las pruebas finales. • La actividad antioxidante del extracto obtenido en el escalado industrial era un poco más baja que la actividad presentada por el extracto obtenido a escala de laboratorio, pero sigue siendo muy elevada. 5.5.2. Tarea 5.2. Desarrollo y caracterización de nanoaditivos activos (Nanobiomatters, S.L e IATA-CSIC). Objetivos: Los objetivos planteados en esta tarea fueron los siguientes: • Sintetizar, purificar y activar superficialmente los nanoaditivos obtenidos a partir de filosilicatos y sustratos laminares permitidos para contacto alimentario. • Desarrollar formulaciones base masterbach de plásticos y bioplásticos enriquecidos con nanoaditivos activos. En algunos casos fue necesario como parte del proceso de fabricación de los nanoaditivos y para evitar su aglomeración, incorporarlos durante el procesado en una matriz plástica para generar enriquecidos de los nanoaditivos que posteriormente serían diluidos en el material final. • Caracterizar las propiedades físico-químicas y del grado de modificación de los nanoaditivos y sus masterbaches, y estudiar la liberación controlada de los componentes activos en el tiempo. Para tal fin se estudiaron la densidad y el grado de modificación química de los nanoaditivos mediante técnicas de espectroscopia vibracional, grado de dispersión mediante Scanning Electron Microscopy (SEM) y Transmission Electron Microscopy (TEM) y se caracterizaron la distancia interlaminar mediante WAXS, la estructura química mediante espectroscopía FTIR y la resistencia térmica mediante Termogravimetría (TGA). • Verificar la capacidad antimicrobiana/antioxidante de los nanoaditivos. Resumen ejecutivo: Para alcanzar los objetivos planteados anteriormente se dividieron los trabajos en cuatro subtareas. Los trabajos realizados fueron los siguientes: • Modificación de la superficie con surfactantes, modificadores y sustancias activas antimicrobianas/antioxidantes. Se seleccionaron varios sistemas laminares basados en filosilicatos (arcillas) Nanobioter® del tipo montmorillonita. Estos sistemas laminares permiten su 149 modificación superficial con tecnología propia adecuada para uso alimentario. A continuación, se incorporó la sustancia activa antimicrobiana/antioxidante con y sin modificación previa de las nanoarcillas según el protocolo interno de obtención de grados activos de la empresa. El antimicrobiano/antioxidante empleado fue incorporado en la arcilla a una concentración del 10-20% tras previa disolución en etanol/agua. Además, para las arcillas premodificadas orgánicamente también se evaluó una mezcla de etanol y acetato de etilo como solvente. • Desarrollo de formulaciones base masterbatch de plásticos y bioplásticos enriquecidos en los nanoaditivos activos – Incorporación de los nanoaditivos en barnices nitrocelulósico y vinílico Se realizaron recubrimientos sobre PE/PET de 50 µm de barniz nitrocelulósico (BE-71430, SunChemical) con un 1% de cada uno de los nanoaditivos obtenidos. En estas muestras se evaluó su efectividad antioxidante por contacto directo mediante el método del DPPH (método de captura de radicales libres que utiliza el radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazilo (DPPH)). Para ello se introdujeron 30 mg de film (sólo recubrimiento) en 1mL de disolución de DPPH y se dejó incubar durante 24 h a 25ºC en oscuridad. Se midió la absorbancia a 517 nm de cada una de las muestras. Seguidamente, se obtuvieron recubrimientos con el barniz vinílico (BG-00020, SunChemical) a los que se había adicionado 1% de nanoaditivo y se midió su efectividad antioxidante, también mediante el método del DPPH. Además se midió la efectividad antimicrobiana de los recubrimientos mediante la metodología ASTM E2149-01. Las condiciones de ensayo empleadas fueron: inóculo bacteriano en fase exponencial media a una concentración de aproximadamente 1*105 UFC/mL en 1 mL de agua de peptona tamponada donde previamente se había introducido el recubrimiento. Las muestras se dejaron incubar en agitación a 25ºC durante aproximadamente 24 h. A continuación se realizó un recuento de células viables mediante diluciones seriadas. – Incorporación de los nanoaditivos en las matrices poliméricas seleccionadas Se incorporaron los nanoaditivos obtenidos en matrices poliméricas EVA (etileno vinil acetato), PCL (policaprolactona) y LDPE (polietileno de baja densidad) por mezcladora interna. En estas muestras se midió su capacidad antioxidante mediante el método del DPPH y su efectividad antimicrobiana mediante el estándar ASTM E2149-01. • Caracterización de las propiedades físico-químicas y del grado de modificación de los nanoaditivos y sus masterbatches El grado de incremento en el espacio basal de las nanoarcillas, asociado al grado de intercalación alcanzado se evaluó mediante ensayos de difracción de Rayos X (WAXS). Además, se realizaron estudios de espectroscopía de infrarrojo (ATRFTIR) y termogravimetría (TGA). 150 • Verificación de la capacidad antimicrobiana/antioxidante de los nanoaditivos. – Nanoaditivos con capacidad biocida de acción inmediata en contacto con el alimento De los nanoaditivos obtenidos se evaluó su efectividad antimicrobiana frente al crecimiento de S. aureus (CECT86) utilizando el estándar ASTM E2149-01 (metodología desarrollada en el trabajo anterior). – Nanoaditivos con capacidad antioxidante de acción inmediata en contacto con el alimento De los nanoaditivos obtenidos se midió además su efectividad antioxidante por contacto directo mediante el método del DPPH. Para ello se introdujeron 3 mg de nanoaditivo en 1 mL de disolución de DPPH y se dejó incubar durante 24 h a 25ºC en oscuridad. Se midió la absorbancia a 517 nm de cada una de las muestras. Previamente, las muestras se centrifugaron a 500 rpm durante 2 min. Resultados: • Modificación de la superficie con surfactantes, modificadores y sustancias activas antioxidantes/antimicrobianas Se obtuvieron nanoaditivos que mostraron una notable sorción física del agente activo obtenido en la tarea anterior sobre la arcilla (ver ejemplo en Figura 5.5.4), así como una intercalación del compuesto entre las láminas de arcilla (ver ejemplo Figura 5.5.5). Figura 5.5.4. Muestra de arcillas pertenecientes al estudio. La muestra de la izquierda no presenta agente activo. La muestra de la derecha está modificada con un 20% de agente activo. 151 5000 d=27,37960 4000 Lin (Counts) d=13,74256 Nanobioter 202 A1.41+20%PVPP 3000 d=19,86657 2000 1000 Nanobioter 202 A1.41 0 2.1 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 2-Theta - Scale Figura 5.5.5. Patrones de difracción de rayos X de las arcillas estudiadas Además se estudió su efectividad antimicrobiana y antioxidante (Tablas 5.5.3 y 5.5.4). Tabla 5.5.3. Efectividad antimicrobiana de los nanoaditivos sobre el crecimiento de S. aureus % Muestras PESO (g) UFC/mL UFC/mL Media Control Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO - 5,40E+06 1 1 1 1 1 1 2,40E+04 1,00E+06 1.27E+06 1 1 1 1 1 1 7,30E+04 7,70E+05 5,40E+06 1 1 1 1 1 1 4,85E+04 8,85E+05 Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO Nanobioter ® 202 A1.49 - 10% AO Nanobioter ® 404 C1 - 20% AO 0,10 0,01 0,10 0,01 0,10 0,01 0,10 0,01 Reducción * 0,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 51,5 0,0 * % reducción: 100 * (UFC/mL control – UFC/mL problema)/(UFC/mL control) La Tabla 5.5.3 muestra que los nanoaditivos obtenidos Nanobioter® presentaron un efecto bactericida muy importante ya que se produjo una reducción del 100% del crecimiento microbiano en la mayoría de los casos. 152 Tabla 5.5.4. Efectividad antioxidante de los nanoaditivos por el método del DPPH % Muestras (0,003 g) Abs 517 nm Reducción* DPPH 1,034 (0,023)** A Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO 0,198 (0,004) C 80,8 Nanobioter ® 202 A1.41 - 10% AO 0,167 (0,026) CD 83,9 Nanobioter ® 202 A1.49 - 10% AO 0,290 (0,025) B 73,0 Nanobioter ® 404 C1 - 20% AO 0,120 (0,010) D 88,4 - *% reducción: (Abs control – Abs problema)/(Abs control)*100 ** Desviación estándar Diferentes letras indican diferencias significativas entre las muestras mediante el test de Fisher (σ ≤ 0.05) Los resultados obtenidos en cuanto a actividad antioxidante indican que las nanoarcillas redujeron significativamente la absorbancia de la disolución de DPPH en al menos un 70%. Uno de los nanoaditivos obtenidos (concretamente, Nanobioter 404 C1 + 20% agente activo) con elevada efectividad antioxidante demostrada en laboratorio (88.4% de reducción del compuesto DPPH) se envió a la universidad de Santiago de Compostela para el estudio de su efectividad antioxidante en contacto directo con carne. Según los resultados obtenidos el nanoaditivo enviado (evaluado al 3%, lo que corresponde a un 0.6% de agente activo) presentó una capacidad antioxidante superior a las muestras con un 10% de agente activo durante los primeros 13 días de vida útil. Probablemente, al incorporar el compuesto activo en la nanoarcilla se consiguió una mejor dispersión del mismo a lo largo del producto y, por tanto, una mayor homogeneidad y efectividad. De esta manera, al poder disminuir el contenido en agente activo en más de un 90%, se reducirían considerablemente los costes de la producción del propio envase, así como la coloración del mismo. • Desarrollo de formulaciones base masterbatch de plásticos y bioplásticos enriquecidos con los nanoaditivos activos Incorporación de los nanoaditivos en barnices nitrocelulósico y vinílico Se incorporaron las nanoarcillas obtenidas en barnices vinílico y nitrocelulósico. La mayoría de las películas obtenidas presentaron una elevada efectividad antioxidante mediante el método del DPPH. Los resultados obtenidos se presentan en las tablas 5.5.5 y 5.5.6: 153 Tabla 5.5.5. Efectividad antioxidante de los barnices aditivados por el método del DPPH % Muestra (0,03 g) Abs 517 nm Reducción* Control nitro sin arcilla 0,584 (0,067)** AB - Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.49 - 10% AO 0,440 (0,025) AB Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 10% AO 0,572 (0,001) A 2,05 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO 0,261 (0,033) B 55,39 Nitro + 1% Nanobioter ® 404 C1 - 20% AO 0,666 (0,099) A -14,04 24,66 *% reducción: (Abs control – Abs problema)/(Abs control)*100 ** Desviación estándar Diferentes letras indican diferencias significativas entre las muestras mediante el test de Fisher (σ ≤ 0.05) Control DPPH presentó una Abs517 de aproximadamente 0,85 Figura 5.5.6. Fotografía de barnices nitrocelulósicos con 1% de nanoaditivo. De izquierda a derecha, en el mismo orden en el que se indican en la tabla 5.5.5. Tabla 5.5.6. Efectividad antioxidante de los barnices aditivados por el método del DPPH % Muestra (0,03 g) Abs 517 nm Reducción Control nitro sin arcilla 0,482 (0,012) A - Vinílico + 1% Nanobioter ® 202 A1.49 - 10% AO 0,141 (0,079) B 70,82 Vinílico + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 10% AO 0,231 (0,037) B 52,02 Vinílico + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO 0,169 (0,006) B 65,01 Vinílico + 1% Nanobioter ® 404 C1 - 20% AO 0,427 (0,426) A 11,42 *% reducción: (Abs control – Abs problema)/(Abs control)*100 ** Desviación estándar Diferentes letras indican diferencias significativas entre las muestras mediante el test de Fisher (α ≤ 0.05) Control DPPH presentó una Abs517 de aproximadamente 0,85 Según los resultados obtenidos, el nanoaditivo fue más eficaz incorporando al barniz vinílico en comparación al barniz nitro. Además se midió la efectividad antimicrobiana de los recubrimientos de nitro mediante la metodología ASTM E2149-01(empleando 1 mL de agua de peptona con una concentración bacteriana de aproximadamente 1*105 UFC/mL). Los resultados se presentan en la tabla 5.5.7. 154 Tabla 5.5.7. Efectividad antimicrobiana de los barnices aditivados sobre el crecimiento de S. aureus % Muestra Peso (g) UFC/mL UFC/mL Media Control - Reducción 2,12E+07 1,25E+07 1,69E+07 - Control film nitro sin nanoaditivo 0,1 188 666 4,27E+02 100,0 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.49 - 10% AO 0,1 38 71 5,45E+01 100,0 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 10% AO 0,1 377 666 5,22E+02 100,0 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO 0,1 300 233 2,67E+02 100,0 Nitro + 1% Nanobioter ® 404 C1 - 20% AO 0,1 1 190 9,55E+01 100,0 Los resultados muestran que los controles sin nanoaditivo fueron en sí mismos bactericidas debido probablemente al disolvente residual que quedó atrapado en las muestras. Por ello, se realizó a cabo un curado a 60ºC a vacío durante 24 h y posteriormente a 90ºC durante 2 horas. Los resultados de capacidad antimicrobiana obtenidos se muestran en la tabla 5.5.8: Tabla 5.5.8. Efectividad antimicrobiana de barnices aditivados sobre el crecimiento de S. aureus % Muestra Control Peso (g) UFC/mL UFC/mL Media Reducción - 1,22E+07 6,10E+06 9,15E+06 - Control nitro sin arcilla 0.1 3,36E+07 1,44E+07 2,40E+07 0 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.49 - 10% AO 0.1 1,79E+07 1,79E+07 2,68E+07 0 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 10% AO 0.1 2,26E+07 3,10E+07 2,56E+07 0 Nitro + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 - 20% AO 0.1 2,52E+07 2,59E+07 1,76E+07 0 Nitro + 1% Nanobioter ® 404 C1 - 20% AO 0.1 1,43E+07 2,09E+07 1,76E+07 0 En este caso (Tabla 5.5.8) las muestras con nanoaditivo no presentaron efectividad antimicrobiana. La razón puede hallarse en la poca cantidad de nanoaditivo (0.001 g en una muestra de 0.1g) o que éste se inactivó con la temperatura de curado del material. Incorporación de los nanoaditivos en matrices poliméricas seleccionadas A continuación se incorporaron los nanoaditivos obtenidos en matrices poliméricas EVA, PCL y LDPE por mezcladora interna. De estas nuevas muestras también se midió su capacidad antioxidante mediante el método del DPPH, por duplicado. Los resultados obtenidos se indican en las tablas 5.5.9, 5.5.10 y 5.5.11: 155 Tabla 5.5.9. Efectividad antioxidante del PCL aditivado mediante el método del DPPH % Muestra Abs 517 nm Reducción DPPH PCL virgen 0,363 (0,126) A - PCL + 7% Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% AO 0,096 (0,004) C 73.55 PCL + 3% Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% AO 0,107 (0,038) C 70.52 PCL + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 + 10% AO 0,198 (0,013) BC 45.45 PCL+ 1% Nanobioter ® 202 A1.49 + 10% AO 0,287 (0,030) AB 20.94 *% reducción: (Abs control – Abs problema)/(Abs control)*100 ** Desviación estándar Diferentes letras indican diferencias significativas entre las muestras mediante el test de Fisher (σ ≤ 0.05) Control DPPH presentó una Abs517 de aproximadamente 0,8 Tabla 5.5.10. Efectividad antioxidante del EVA aditivado mediante el método del DPPH % Muestra Abs 517 nm Reducción DPPH EVA virgen 0,337 (0,039) A - EVA + 7% Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% AO 0,091 (0,008) C 73.00 EVA + 3% Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% AO 0,108 (0,009) C 67.95 EVA + 1% Nanobioter ® 202 A1.41 + 10% AO 0,237 (0,016) B 29.67 EVA+ 1% Nanobioter ® 202 A1.49 + 10% AO 0,220 (0,016) B 34.72 *% reducción: (Abs control – Abs problema)/(Abs control)*100 ** Desviación estándar Diferentes letras indican diferencias significativas entre las muestras mediante el test de Fisher (σ ≤ 0.05) Control DPPH presentó una Abs517 de aproximadamente 0,8 Tabla 5.5.11. Efectividad antioxidante del LDPE aditivado mediante el método del DPPH % Muestra Abs 517 nm Reducción DPPH LDPE virgen 0,780 (0,007) A - LDPE + 7% Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% AO 0,274 (0,018) C 64.87 LDPE + 3% Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% AO 0,503 (0,075) B 35.51 LDPE+ 1% Nanobioter ® 202 A1.41 + 10% AO 0,740 (0,006) A 5.13 LDPE + 1% Nanobioter ® 202 A1.49 + 10% AO 0,732 (0,015) A 6.15 *% reducción: (Abs control – Abs problema)/(Abs control)*100 ** Desviación estándar Diferentes letras indican diferencias significativas entre las muestras mediante el test de Fisher (σ ≤ 0.05) Control DPPH presentó una Abs517 de aproximadamente 0,8 Según los resultados obtenidos, las muestras con un 3% o un 7% de Nanobioter ® 202 A1.41 + 20% agente activo presentaron un efecto antioxidante significativo para las 3 matrices estudiadas. 156 Dado que se observó una mayor eficacia antioxidante en EVA, se enviaron a Gaiker varias películas de este material aditivado con un 3% de Nanobioter ® 202 A1.41-20% PVPP para la evaluación de su efectividad antimicrobiana sobre el crecimiento de S. aureus y E.coli y a la Universidad de Santiago para el estudio de su efectividad antioxidante en carne. Dado que los resultados sobre capacidad antimicrobiana y antioxidante no fueron estadísticamente significativos en esta matriz, se trabajó en la mejora de la dispersión de la arcilla en el polímero con el fin de obtener composites con un 6% y un 9% de nanoaditivo. Todas las matrices obtenidas presentaron una buena dispersión de la arcilla en el polímero. Los films aditivados obtenidos se enviaron a Gaiker y a la Universidad de Santiago con el fin de evaluar su efectividad antimicrobiana y antioxidante, respectivamente. Los resultados obtenidos se muestran en la Figura 5.5.7. 5.00 Log UFC/mL 4.00 3.00 control EVA + 6% PVPP 2.00 EVA + 6% Nanoaditivo EVA + 9% Nanoaditivo 1.00 0.00 0 24 48 144 Tiempo de incubacion (h) Figura 5.5.7. Efectividad antimicrobiana de 0.5 gr de película en 25 ml de solución Ringer sobre el crecimiento de S. aureus (CECT 239). Nanoaditivo empleado: Nanobioter ® 101 A1.41-20% agente activo Estudio realizado en Gaiker. En la Figura 5.5.7 se observa una elevada eficacia antimicrobiana de las matrices evaluadas sobre el crecimiento de S. aureus, la cual aumenta con el tiempo de incubación de la muestra. Según lo esperado, las matrices con nanoaditivo alcanzaron una efectividad similar a la muestra con agente activo incorporado directamente pero empleando dosis de agente activo mucho menor. Concretamente, después de 48 horas de incubación se consiguió una reducción aproximada de 3 logaritmos en las matrices de EVA con 6% de agente activo y EVA con 9% de nanoaditivo (lo que corresponde a 1.8% de agente activo). Así, mediante el empleo de nanoarcillas se consigue reducir un 70% la cantidad de agente activo necesaria para obtener el mismo efecto antimicrobiano. 157 Figura 5.5.8. Efectividad antioxidante de films de EVA aditivados con nanoarcilla por contacto directo sobre carne. Nanoaditivo empleado: Nanobioter ® 101 A1.41-20% agente activo. Estudio realizado en la USC. En la Figura 5.5.8 se observa una importante eficacia antioxidante de las muestras con nanoaditivo incorporado. Concretamente, después de 9 días de incubación se alcanzó una reducción de los niveles de TBARS de aproximadamente un 30% y un 70% en matrices de EVA con un 6% y un 9% de nanoarcilla, respectivamente. Sería necesario comparar estos resultados con muestras en las que el agente activo se hubiera incorporado directamente, con el fin de comprobar las ventajas que ofrece el empleo de nanoaditivos en la reducción de la dosis necesaria de agente activo y la disminución del impacto sobre el color del envase. En la siguiente fase del proyecto se optimizó el desarrollo de un masterbatch (8 Kg de masterbatch de EVA al 10% de Nanobioter en el que se incorporó un 17% de agente activo (Figura 5.5.9)). La dispersión de la arcilla en la matriz fue óptima. A su vez, este material fue enviado a AIMPLAS para pruebas de escalado del film. Estas pruebas se realizaron con éxito (Figura 5.5.10). Figura 5.5.9. Fotografía del concentrado de EVA + 10% Nanobioter ® 101 A1.41-20% agente activo enviado a AIMPLAS. 158 Figura 5.5.10. Fotografías de los films obtenidos en AIMPLAS. A la izquierda, film virgen procesado sin aditivo. A la derecha, film aditivado con 10% de Nanbioter-17% agente activo Sin embargo, debido a la presencia de cierta cantidad residual de ácido acético, el material aparentemente normal presentó gran cantidad de microporos. Conclusiones: Las conclusiones de efectividad antimicrobiana/antioxidante del nanoaditivo con el agente activo obtenido en la tarea anterior fueron: • Respecto a la capacidad biocida, los nanoaditivos obtenidos (Nanobioter®) presentan un efecto bactericida muy importante ya que se reduce totalmente el crecimiento microbiano en la mayoría de los casos. • En relación a la capacidad antioxidante, según los resultados obtenidos las nanoarcillas reducieron la absorbancia de la disolución de DPPH en al menos un 70%. Respecto a los resultados de la incorporación del nanoaditivo en el material de envase se obtuvieron las siguientes conclusiones: • Según los resultados obtenidos, las muestras con un 3% o un 7% de Nanobioter ® 202 A1.41 presentaron un efecto antioxidante significativo para las 3 matrices estudiadas (LDPE, EVA y PCL). • Dado que las muestras de EVA con un 3% de nanoaditivo no mostraron un efecto antioxidante significativo cuando fueron evaluadas frente a carnes. Se optimizó la dispersión de nuevas matrices con cargas mayores (concretamente del 6 y 9%). En estas muestras se obtuvieron efectos antimicrobianos y antioxidantes satisfactorios. • De esta manera, se logró fabricar y enviar 8 Kg de masterbacht de EVA al 10% de Nanobioter (en el que incorporamos un 17% de agente activo) a AIMPLAS, el cual funcionó con éxito durante el escalado. No obstante, el material presentó numerosos microporos debido a la presencia de un exceso de ácido acético residual. 159 5.5.3 Tareas 5.3 y 5.4. Incorporación de agentes activos en sistemas de envases y diseño e implantación en un sistema de fabricación industrial que permita incorporar los agentes activos en materiales de envase para su comercialización (Grupo Amcor Flexibles y GAIKER). Objetivos: Los objetivos planteados en estas tareas fueron los siguientes: • Analizar la estabilidad térmica del agente activo obtenido a partir del proceso cervecero descrito en la tarea 5.1. • Identificar los materiales de envase en los cuales se incorporarán los principios activos. Se realiza una incorporación en el material de envase. • Definir y optimizar las condiciones de formación de los envases activos. Se plantean dos líneas de trabajo para incorporar los agentes activos en el material de envase: a) Introducción mediante extrusión/coextrusion y b) Adición al barniz base aplicado a los laminados actuales. • Verificar la capacidad antioxidante y antimicrobiana del material de envase. • Estudiar la liberación del agente activo. • Evaluar la viabilidad industrial de los sistemas de envase activo desarrollados. • Mantener en los envases activos los requerimientos técnicos exigidos a los materiales de envase convencionales. Resumen ejecutivo: Se optimizaron los procesos de incorporación del agente activo en el material de envase mediante dos vías de trabajo: • Agregación del agente activo al barniz base aplicado a los laminados actuales mediante un recubrimiento. El film mostraba una buena efectividad antioxidante y antimicrobiana a partir de una concentración de agente activo del 3 % en la resina base. Asimismo, se dio una solución técnica a los problemas de pérdida de adhesión en el film soporte mediante promotores de la adhesión que facilitaban la aplicación del recubrimiento cuando se incorporaba el agente activo. • Introducción en el material de envase mediante extrusión/coextrusion. Los resultados obtenidos permitieron concluir que los copolímeros de etileno y vinil acetato (EVA) mejoraban la solubilidad del agente activo en la matriz polimérica respecto al PEBD, lo cual se apreciaba en los resultados preliminares de efectividad antioxidante y antimicrobiana obtenidos. En la evaluación de la efectividad antioxidante de films activos recubiertos “coating” con el agente activo, se comprobó la excelente actividad antioxidante de este agente cuando el material de envase estaba en contacto directo con el alimento. Sin embargo, cuando no lo estuvo presentó una escasa actividad antioxidante. Por lo tanto, por acuerdo entre los participantes en la Actividad 5 se eligió la opción de introducir el agente activo en el material de envase más próximo al alimento mediante extrusión/coextrusión. 160 La determinación de la capacidad antioxidante se realizó por el método de captación del radical DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl) que establece la capacidad de donación de hidrógeno del extracto. En las pruebas de efectividad antioxidante realizadas en los films activos procesados mediante extrusión, se observó que a partir de un 3 % de agente activo en EVA la efectividad antioxidante es satisfactoria mientras que la efectividad en polietileno de baja densidad (PEBD) era muy baja o nula. La efectividad antimicrobiana se determinó de forma cuantitativa para establecer los porcentajes exactos de reducción del principio activo frente a los microorganismos seleccionados. El ensayo de efectividad antimicrobiana se basa en el Standard Test method for determining the Antimicrobial Activity of Inmobilizied Antimicrobial Agents under Dynamic Contact conditions (ASTM 2149-01). Los microorganismos estudiados fueron: Escherichia coli; Listeria monocytogenes; Salmonella spp; Staphylococcus aureus; y Aerobios totales. Las pruebas de efectividad antimicrobiana permitieron determinar la efectividad frente a S. aureus a partir del 3 % de agente activo y nanoarcillas incorporadas en el material de envase (EVA) en un 3 %. En concentraciones superiores se observó también efectividad frente a E. coli. En el escalado del film activo final se plantearon tres estructuras de 100 µm aproximadamente. Las estructuras coextruidas procesadas fueron: – – – EVA/EVOH/EVA (Control); EVA (6% agente activo)/EVOH/EVA (6% agente activo) y EVA +10 % nanoarcilla activa/EVOH/EVA+10 % nanoarcilla activa. El EVA sin el agente activo se utilizó como control. Las tres estructuras procesadas por coextrusión se laminaron a poliamida (PA) para darle cuerpo y posteriormente se termoformó/selló la bandeja para el envasado de carne. Para conseguir una bandeja final de calidad desde el punto de vista industrial, es necesario mejorar el proceso de obtención del agente activo y mejorar la aditivación del principio activo al EVA, con la finalidad de conseguir estructuras más homogéneas y sin microagujeros. Resultados: Se realizó el ensayo de termogravimetría (TGA) con el objetivo de determinar la estabilidad térmica del agente activo procedente de la corriente residual del proceso cervecero. Asimismo, se utilizó el método de Folin-Denis para la determinación de compuestos fenólicos totales. Este método se basa en la determinación colorimétrica mediante lectura de la absorbancia a 760 nm de los extractos resuspendidos en metanol tratados con el reactivo Folin-Denis. Ambos métodos demostraron que hasta 200 ºC, el agente activo era térmicamente estable presentando una actividad antioxidante similar y el mismo porcentaje de compuestos fenólicos. Inicialmente, se aplicó el barniz con el agente activo incorporado en la resina base utilizada habitualmente por la empresa. Los recubrimientos se aplicaron con una varilla (TR40) y a la velocidad adecuada para conseguir un gramaje similar al aplicado industrialmente (3,2 g/m2). El agente activo se aplicó en diferentes porcentajes en el film de tapa observándose buena efectividad antioxidante y antimicrobiana a partir de un 3 % en la resina base. 161 Asimismo, se aportó una solución técnica a los problemas de pérdida de adhesión en el film soporte mediante promotores de la adhesión que facilitan la aplicación del recubrimiento cuando se incorpora el agente activo. Figura 5.5.11. Film con recubrimiento activo Seguidamente, se realizaron mezclas a escala de laboratorio mediante “compounding” en un Minilab Haake Microcompounder con extrusión de doble husillo co-rotante para determinar la naturaleza del material polimérico más próximo en contacto con el alimento que permita una mejor compatibilidad con el agente activo. Los resultados obtenidos permitieron concluir que los copolímeros de etileno y vinil acetato (EVA) mejoraron la solubilidad del agente activo en la matriz polimérica, lo cual se apreció en los resultados preliminares de efectividad antioxidante y antimicrobiana obtenidos. En las mezclas con PEBD tanto las pruebas de extracción como los ensayos de la capacidad antioxidante y antimicrobiana indicaron que el agente activo quedó ocluido en la estructura del PEBD impidiendo su liberación y perdiendo su efectividad antioxidante y antimicrobiana. Figura 5.5.12. Izquierda: film con al aditivo activo Derecha: film control, sin aditivo En la evaluación de la efectividad antioxidante de films activos recubiertos “coating” con agente activo antioxidante obtenido en la tarea 5.1, se comprobó la excelente actividad antioxidante de este agente cuando el material de envase estaba en contacto directo con el alimento. Sin embargo, cuando no lo estaba presentó una escasa actividad antioxidante. Por lo tanto, por acuerdo entre los participantes en la Actividad 5 se optó por la opción de introducir el agente activo en el material de envase más próximo al alimento mediante extrusión/coextrusión. 162 La determinación de la capacidad antioxidante se realizó por el método de captación del radical DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl) que establece la capacidad de donación de hidrógeno del extracto. En las pruebas de efectividad antioxidante realizadas en los films activos procesados mediante extrusión se observó que a partir de un 3 % de agente activo en EVA la efectividad antioxidante era buena mientras la efectividad en polietileno de baja densidad (PEBD) era muy baja o nula. La efectividad antimicrobiana se determinó de forma cuantitativa para establecer los porcentajes exactos de reducción del principio activo frente a los microorganismos seleccionados. El ensayo de efectividad antimicrobiana se basó en el Standard Test method for determining the Antimicrobial Activity of Inmobilizied Antimicrobial Agents under Dynamic Contact conditions (ASTM 2149-01). Los microorganismos estudiados fueron: Escherichia coli; Listeria monocytogenes; Salmonella spp; Staphylococcus aureus y Aerobios totales. Los resultados de efectividad antimicrobiana permitieron determinar efectividad a S. aureus a partir del 3 % de agente activo y nanoarcillas incorporadas en el material de envase (EVA) en un 3 %. A concentraciones superiores se observó también efectividad frente a E. coli. (Tablas 5.5.12 y 5.5.13). Posteriormente, se realizó un escalado semi-industrial del film activo mediante coextrusión antes de proceder a la laminación con poliamida para darle cuerpo al envase. Se procesaron tres coextruidos: – Estructura 1: EVA/EVOH/EVA (Control); – Estructura 2: EVA (6%agente activo)/EVOH/EVA (6% agente activo) y – Estructura 3: EVA +10 % nanoarcilla activa/EVOH/EVA+10 % nanoarcilla activa. En las estructuras coextruidas se incorporaron los principios activos en la matriz polimérica de EVA. Figura 5.5.13. Izda: Estructura 1; Centro: Estructura 2; Decha: Estructura 3 Para conseguir una bandeja final de calidad desde el punto de vista industrial será necesario mejorar el proceso de obtención de los extractos polifenólicos obtenidos a partir de los licores de lavado del proceso cervecero y mejorar la aditivación del principio activo al EVA con el objetivo de conseguir estructuras más homogéneas y sin microagujeros. 163 Tabla 5.5.12. Capacidad antimicrobiana del film activo a diferentes microorganismos EVA +3% agente activo MUETRA 0h 24h 48h 6 días Salmonella 1,50E+04 1,20E+04 1,40E+04 1,60E+04 Salmonella 1,50E+04 1,30E+04 1,40E+04 1,50E+04 Staphylococcus 1,70E+04 1,20E+04 4,20E+03 1,40E+02 Staphylococcus 1,70E+04 1,30E+04 5,10E+03 1,30E+02 Lmo 1,10E+04 1,20E+04 1,70E+04 1,90E+04 Lmo 1,10E+04 1,50E+04 1,60E+04 1,70E+04 E. Coli 3,60E+04 3,40E+04 3,50E+04 3,70E+04 E. Coli 3,60E+04 3,20E+04 3,60E+04 3,80E+04 Aerobios 1,40E+05 1,80E+05 2,20E+05 3,40E+05 Aerobios 1,40E+05 1,90E+05 2,40E+05 3,30E+05 Muestra % muerte celular 48h reducción logarítmica 48h % muerte celular 6d reducción logarítmica 6d --- --- --- --- 66% 0,46 99% 2 --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- --- EVA CONTROL Salmonella 1,50E+04 1,30E+04 1,40E+04 1,50E+04 Salmonella 1,50E+04 1,20E+04 1,60E+04 1,50E+04 Staphylococcus 1,70E+04 1,50E+04 1,40E+04 1,50E+04 Staphylococcus 1,70E+04 1,50E+04 1,30E+04 1,40E+04 Lmo 1,10E+04 1,30E+04 1,60E+04 1,80E+04 Lmo 1,10E+04 1,20E+04 1,60E+04 1,70E+04 E. Coli 3,60E+04 3,50E+04 3,40E+04 3,50E+04 E. Coli 3,60E+04 3,00E+04 3,60E+04 3,60E+04 Aerobios 1,40E+05 1,50E+05 2,00E+05 3,30E+05 Aerobios 1,40E+05 1,70E+05 2,20E+05 3,30E+05 Salmonella 1,50E+04 1,50E+04 1,60E+04 1,50E+04 Aerobios 1,40E+05 1,70E+05 2,20E+05 3,30E+05 164 Tabla 5.5.13. Capacidad antimicrobiana del film activo en concentraciones superiores de principio activo. EVA +6% agente activo MUESTRA 0h 24h 48h 6 días E.Coli 2,60E+04 2,40E+04 …. <20 E.Coli Staphylococcus 2,60E+04 3,10E+04 2,30E+04 4,50E+03 …. 2,50E+03 <20 <20 STAPHYLOCOCCUS 3,10E+04 7,60E+03 2,80E+03 <20 % muerte celular 24h reducción logarítmica 24h % muerte celular 48h reducción logarítmica 48h % muerte celular 6d reducción logarítmica 6d ___ ___ ___ ___ 99,94 >3 78,77 <1(0,67) 91,45 1 99,94 >3 MUESTRA EVA CONTROL E.COLI 3,70E+04 3,60E+04 3,40E+04 3,20E+04 E.COLI 3,70E+04 3,60E+04 3,40E+04 3,30E+04 STAPHYLOCOCCUS 3,10E+04 3,10E+04 3,20E+04 3,20E+04 STAPHYLOCOCCUS 3,10E+04 2,60E+04 3,00E+04 3,10E+04 MUESTRA ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ EVA+NANO 3% agente activo E.COLI 3,70E+04 3,40E+04 3,20E+04 2,50E+04 E.COLI 3,70E+04 3,60E+04 3,00E+04 2,20E+04 STAPHYLOCOCCUS 3,10E+04 1,50E+04 2,60E+03 <20 ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ 90,96 1 99,94 >3 165 Conclusiones: • El extracto obtenido a partir de las corrientes residuales del proceso cervecero es térmicamente estable hasta 200 ºC. • En la evaluación de la efectividad antioxidante de films recubiertos con agente activo antioxidante, se comprobó la excelente actividad antioxidante de este agente cuando el material de envase (coating) estaba en contacto directo con el alimento. Sin embargo, cuando no estaba en contacto directo con el alimento, presentó una escasa actividad antioxidante y antimicrobiana. • La efectividad antioxidante de films extruidos con agente activo antioxidante mantiene su capacidad antioxidante sólo en films de EVA. • Se observó efectividad frente a S. aureus cuando el contenido de agente activo y nanoarcillas incorporadas en el material de envase (EVA) ≥ 3% y frente a E.coli cuando fue igual al 6%. En concentraciones superiores se observó también efectividad frente a E. coli. • En el escalado del film activo mediante una coextrusión, la lámina salió microagujereada del cabezal, por lo que fue necesario optimizar el proceso de obtención del material con el objetivo de obtener un film más homogéneo antes de proceder a la laminación. 5.5.4 Tarea 5.5. Evaluación del grado de conservación de productos cárnicos (Eroski, S. Coop., Covap, GAIKER y USC). Objetivos: El objetivo general planteado para la correcta realización de las tareas del proyecto consistió en evaluar el aumento del tiempo de vida útil de productos cárnicos frescos con los sistemas de envasado activo desarrollados. Para lograr el objetivo propuesto se plantearon los siguientes objetivos parciales: • Definición, control y estudio preliminar del producto inicial. EROSKI centró la investigación en carne de vacuno (entrecot Natur) mientras que COVAP se centró en carne de porcino (lomo de cerdo ibérico). • Evaluación de los parámetros físico-químicos. Se realizaron estudios comparativos con los envases convencionales (control) y los envases activos desarrollados. Los parámetros a analizar fueron: color/olor y líquido de sinéresis. El color se evaluó mediante inspección visual y mediante colorimetría (coordenadas CIE* LAB.) Se determinó el pH y la modificación de la atmósfera de envasado (MAP). • Evaluación del grado de oxidación en productos cárnicos mediante las sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS). • Evaluación del grado de contaminación microbiana. En los productos frescos (carne de vacuno y porcino) se determinaron Aerobios mesófilos y enterobacterias. 166 Resumen ejecutivo: Inicialmente se realizó un estudio preliminar para conocer la situación de conservación del producto cárnico fresco de vacuno y porcino con el agente activo incorporado en el alimento. Para ello, se utilizaron los sistemas de envasado y conservación habituales. Como control se utilizaron los sistemas sin el aditivo activo. Posteriormente, se realizó la evaluación de la efectividad antioxidante de los films activos (con el agente incorporado) procesados mediante recubrimiento “coating”, en contacto y sin contacto directo con el alimento cárnico. En los films recubiertos con el agente activo, se pudo comprobar que en contacto directo con la carne se reducía la oxidación a la mitad con respecto al ensayo control. Sin embargo, cuando no estaba en contacto directo con la carne no presentó actividad antioxidante, ya que la carne se oxidó al mismo nivel que el ensayo control. Debido a que la coloración introducida por el agente activo en el film base no era la más indicada para aplicaciones de film de tapa superior en bandeja y, teniendo en cuenta que actúa por contacto directo y que tiene un color pardo se planteó incorporarlo en el material de envase mediante extrusión/coextrusion dado que mediante recubrimiento iría en la tapa del envase y las limitaciones existentes no lo harían viable comercialmente. En este estudio de evaluación de la efectividad antioxidante de films preparados por extrusión con LPDE, se comprobó que no hay una buena accesibilidad de los compuestos antioxidantes al alimento para ejercer su efectividad antioxidante. En el caso de los films EVA preparados por extrusión el que tenía mayor concentración de extracto era el que presentaba una mayor efectividad antioxidante, comparable con los films preparados por “coating”. Las pruebas de efectividad antimicrobiana observadas en los films preparados por extrusión permitieron determinar su efectividad frente a S. aureus a partir del 3 % de agente activo y nanoarcillas incorporadas en el material de envase en un 3 %. En concentraciones superiores se observó también efectividad frente a E. coli. La evaluación del tiempo de vida útil de la carne de porcino y vacuno y la validación antioxidante /antimicrobiana se realizó mediante un control en el tiempo de los siguientes parámetros: – – – – – Evaluación visual de las muestras: La evaluación de la carne se realizó por ambos lados, anotando cambios de color, olor y exudado. Determinación del pH de la carne. Evaluación de la efectividad antioxidante mediante el método de TBARS. Evaluación de la efectividad antimicrobiana (Aerobios Mesófilos Totales y Enterobacterias). Determinación de los cambios de color mediante coordenadas CIElab. La validación se determinó con lomo de cerdo ibérico y entrecot en las tres estructuras finales obtenidas. – – Estructura 1: EVA/adh/EVOH/adh/EVA (Control) Estructura 2: EVA (6% agente activo)/ adh/EVOH/ adh/EVA (6% agente activo) 167 – Estructura 3: EVA (10%Nano)/ adh/EVOH/ adh/EVA (10%Nano) La carne de porcino es una matriz muy heterogénea con diferente grado de grasa intramuscular y mucha variabilidad entre bandejas debido a los filetes envasados. La variabilidad en la carne se consideró que era la principal razón para la existencia de valores dispares en el tiempo de envasado. En el ensayo de la oxidación lipídica de la carne de porcino por el método de TBARS no se observaron diferencias significativas entre las tres estructuras. En los últimos días se observó una ligera reducción de la oxidación de las estructuras que contenían compuestos antioxidantes (E2 y E3) respecto a la estructura control (E1). Sin embargo es importante destacar que las diferencias no fueron significativas. En el ensayo de oxidación lipídica de la carne de vacuno por el método de TBARS, se observó efectividad antioxidante por parte de la estructura E3. Al final de la vida útil (día 7), las diferencias no fueron significativas porque el proceso de oxidación es reducido. Sin embargo a partir del día 8 las diferencias fueron importantes (en torno al 50% de inhibición del proceso de oxidación). Analizando la curva correspondiente a la estructura E2, los resultados mostraron que no ejerce función antioxidante con respecto al ensayo control (E1). No se observó efectividad antimicrobiana en las estructuras 2 y 3 ya que no mostraron una reducción significativa de aerobios totales y enterobacterias respecto a la estructura 1 (control) en las muestras de carne de porcino y vacuno. Resultados: Se realizó un estudio preliminar para conocer la situación de conservación del producto cárnico fresco de vacuno y porcino con el principio activo incorporado en el alimento. Para ello, se utilizaron los sistemas de envasado y conservación utilizados habitualmente. El envasado se realizó en las instalaciones de ULMA PACKAGING con una máquina termoselladora SMART 500. La atmósfera de MAP utilizada en ambos casos fue 70 % oxígeno/ 30 % anhídrido carbónico. Después del envasado las muestras se almacenaron y distribuyeron en condiciones de refrigeración (< 5 º C). Tabla 5.5.14. Grado de oxidación lipídica de la carne de cerdo mediante el método TBARS (Thiobarbituric acid reactive substances) mgMDA/kg de carne Muestra Tempo (días) Control Antiox 1' y 2' 0 0,5010 0,5010 3', 4', 5' y 6' 11 2,3112 1,4027 7' y 9' 14 1,0063 0,5167 8' y 10' 17 2,9443 3,1487 168 Figura 5.5.14. Grado de oxidación lipídica de la carne de cerdo mediante el método TBARS En carne de cerdo, se observó una disminución en el grado de oxidación lipídica menor que en la carne de vacuno. A los 11 días de almacenamiento en refrigeración se observó una reducción del valor de TBARs en las muestras con antioxidante del 27.6% respecto a las muestras control, que fue del 48% a los 14 días. Tabla. 5.5.15. Grado de oxidación lipídica de la carne de vacuno mediante el método TBARS (Thiobarbituric acid reactive substances) mgMDA/kg de carne Muestra Tiempo (días) Control Antiox 1' y 2' 0 1,239183 1,239183 3' y 5' 8 6,279337 4,854492 4' y 6' 10 8,636635 6,036324 7' y 9' 13 9,739895 7,166562 8' y 10' 15 10,31662 5,656548 Figura 5.5.15. Grado de oxidación lipídica de la carne de vacuno mediante el método TBARS En carne de vacuno, se observó una disminución en el grado de oxidación lipídica de un 22 % a los 8 días, de un 30 % a los 10 días y de un 46 % a los 15 días respecto al control (Figura 5.5.15). Posteriormente, se realizó la evaluación de la efectividad antioxidante de los films activos con agente activo procesados mediante recubrimiento “coating”, en contacto y sin contacto 169 directo con la carne. En los films recubiertos con el agente, se pudo comprobar que en contacto directo con la carne se redujo la oxidación a la mitad con respecto al ensayo control. Sin embargo, cuando no estuvo en contacto directo con la carne no presentó actividad antioxidante, ya que la carne se oxidó al mismo nivel que el ensayo control. Figura 5.5.16. Efectividad antioxidante de todos los films con el agente activo en diferentes concentraciones En la Figura 5.5.16 se presentan los resultados de la efectividad antioxidante de todos los films conteniendo el agente activo, aplicados en diferentes concentraciones de extracto en contacto y sin contacto (línea color naranja en la gráfica) directo con la carne. Debido a que la coloración introducida por el agente activo en el film base no era la más adecuada para aplicaciones de film de tapa superior en bandeja y teniendo en cuenta que actúa por contacto directo se decidió incorporarlo en el material de envase mediante extrusión/coextrusion. En el caso de los films preparados por extrusión el que presentó mayor concentración de extracto fue el que presenta una mayor efectividad antioxidante/antimicrobiana, comparable a la de los films preparados por “coating”. Las pruebas de efectividad antimicrobiana observadas en los films preparados por extrusión permitieron determinar la efectividad frente a S. aureus con el principio activo incorporado directamente en la matriz plástica y con nanoarcillas activas incorporadas en el material de envase. En concentraciones superiores se observó también efectividad frente a E. coli. 170 Figura 5.5.17 Estudio para la evaluación de la efectividad antioxidante de los films incorporados con el extracto de agente activo, en contacto directo con el alimento cárnico por el método de TBARS. Figura 5.5.18. Estudio para la evaluación de la efectividad antioxidante de los films incorporados con el extracto de agente activo en forma de Nanoaditivo, en contacto directo con el alimento cárnico por el método de TBARS Finalmente, se realizó la evaluación del tiempo de vida útil de la carne de porcino y vacuno y la validación antioxidante/antimicrobiana mediante un control en el tiempo de los siguientes parámetros: – – – – – Evaluación visual de las muestras. pH de la carne. Evaluación de la efectividad antioxidante mediante el método de TBARS. Evaluación de la efectividad antimicrobiana (Aerobios Mesófilos Totales y Enterobacterias). Determinación de cambios de color mediante coordenadas CIElab. La validación se determinó con lomo de cerdo ibérico y entrecot en las tres estructuras finales obtenidas: − − − Estructura 1: EVA/adh/EVOH/adh/EVA (Control) Estructura 2: EVA (6% agente activo)/ adh/EVOH/ adh/EVA (6% agente activo) Estructura 3: EVA (10%Nano)/ adh/EVOH/ adh/EVA (10%Nano) 171 Tabla 5.5.16. Capacidad antimicrobiana del film activo MUESTRA E.COLI E.COLI STAPHYLOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS MUESTRA E.COLI E.COLI STAPHYLOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS MUESTRA E. COLI E. COLI STAPHYLOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS MUESTRA E.COLI E.COLI STAPHYLOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS 0h 24h 48h 6 días 3,70E+04 3,60E+04 3,40E+04 3,20E+04 3,70E+04 3,10E+04 3,10E+04 3,60E+04 3,10E+04 2,60E+04 3,40E+04 3,20E+04 3,00E+04 3,30E+04 3,20E+04 3,10E+04 3,70E+04 3,70E+04 3,10E+04 3,10E+04 3,40E+04 3,60E+04 1,50E+04 1,80E+04 3,20E+04 3,00E+04 2,60E+03 3,00E+03 2,50E+04 2,20E+04 <20 <20 3,60E+04 3,60E+04 1,70E+04 1,70E+04 3,40E+04 3,20E+04 1,20E+04 1,30E+04 3,50E+04 3,60E+04 4,20E+03 5,10E+03 3,70E+04 3,80E+04 1,40E+02 1,30E+02 2,60E+04 2,40E+04 …. <20 2,60E+04 3,10E+04 3,10E+04 2,30E+04 4,50E+03 7,60E+03 …. 2,50E+03 2,80E+03 <20 <20 <20 reducción logarítmica 24h EVA CONTROL % muerte celular 24h % muerte celular 48h reducción logarítmica 48h % muerte celular 6d reducción logarítmica 6d ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ EVA+NANO 3% agente activo ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ ___ 90,96 1 99,94 >3 ___ ___ ___ ___ 66 0,46 99 2 EVA+ 3% agente activo ___ ___ EVA +6% agente activo ___ ___ ___ ___ 99,94 >3 78,77 <1(0,67) 91,45 1 99,94 >3 172 En el ensayo de la oxidación lipídica de la carne de porcino por el método de TBARS no se observaron diferencias significativas entre las tres estructuras. En los últimos días se observó una ligera reducción (P>0.05) de la oxidación de las estructuras que contienen compuestos antioxidantes (E2 y E3) respecto a la estructura control (E1). Figura 5.5.19. Ensayo de oxidación lipídica en carne de porcino. En el ensayo de oxidación lipídica de la carne de vacuno por el método de TBARS se observa efectividad antioxidante por parte de la estructura E3. En el tiempo de vida útil (día 7) las diferencias no fueron significativas porque el proceso de oxidación fue ligero. Sin embargo, a partir del día 8 las diferencias fueron importantes (en torno al 50% de inhibición del proceso de oxidación). Analizando la curva correspondiente a la estructura E2, los resultados muestran que no ejerce función antioxidante con respecto al ensayo control (E1). Figura 5.5.20 Ensayo de oxidación lipídica en carne de vacuno. No se observó efectividad antimicrobiana en las estructuras 2 y 3 ya que no mostraron una reducción significativa de aerobios totales y enterobacterias respecto a la estructura 1 (control) en las muestras de porcino y vacuno. 173 En general: • No se observaron variaciones de pH a lo largo del tiempo en las diferentes estructuras del ensayo. • El líquido de sinéresis fue menor que el existente en la carne de porcino y se atribuye a la condensación existente en las bandejas. • En la estructura 2 la carne de vacuno fue ligeramente más roja, especialmente en la parte inferior de la carne. • No se observaron diferencias significativas en el color amarillo (b*). Conclusiones: • Los films con extracto activo actúan mediante contacto directo con la carne reduciéndose la oxidación a la mitad con respecto al ensayo control. Sin embargo, cuando no está en contacto directo no presenta actividad antioxidante. • Se observó efectividad antimicrobiana contra Staphylococcus aureus con el principio activo incorporado directamente en la matriz plástica y con nanoarcillas activas incorporadas en el material de envase (dosis ≥ 3%) y frente a Escherichia coli (dosis = 6%).. 174 • En el ensayo de oxidación lipídica de la carne de vacuno por el método de TBARS se observa efectividad antioxidante en la estructura con nanoarcillas con el principio activo incorporado en el material de envase más próximo al alimento. A partir del día 8 las diferencias son importantes (en torno al 50% de inhibición del proceso de oxidación). Sin embargo, en la carne de porcino no se observan diferencias significativas en el tiempo de vida útil. • No se observa una reducción antimicrobiana significativa en las muestras de porcino y vacuno en cuanto a aerobios totales y enterobacterias. 5.5.5 Tarea 5.6. Desarrollo de una máquina de envasado higienizable adaptada a los nuevos sistemas de envasado activo desarrollados (Ulma P.T.C. S. Coop., GAIKER y AINIA). Objetivos: Los objetivos planteados fueron los siguientes: • Mantener la higiene en el proceso de envasado para asegurar la calidad del alimento hasta su consumo. Las máquinas se diseñaron de forma que su limpieza fuera fácil e integrara materiales inoxidables. • Desarrollo de una máquina de envasado que permita adaptar los sistemas de envase activo. Se desarrolló una máquina que permita gestionar 2 ó 4 formatos diferentes con 3 alturas de producto por formato en una misma línea de producción. • Desarrollo de sistemas de soldadura novedosos aplicables a los envases activos. Se prestó especial atención a posibles problemas de sellado que puedan surgir con la incorporación de agentes activos en el material de envase. Para ello, se desarrollaron sistemas de sellado adecuados que permitan evitar la formación de microfisuras en el envase final. Se planteó el estudio de las tecnologías de sellado laser, radiofrecuencia, vibración, impulsos eléctricos, etc. Resumen ejecutivo: Para alcanzar los objetivos planteados se realizaron las siguientes subtareas: • Desarrollo de una máquina de envasado activo higienizable Se decidió iniciar las actividades relativas al desarrollo de una máquina de envasado activo higienizable con máquinas termoselladoras debido a su mayor simplicidad de diseño, lo que favoreció la implantación posterior de los requisitos para la obtención de la máquina de envasado activo higienizable. Las actividades realizadas se centraron en la identificación de puntos de mejora del diseño de la máquina desde un punto de vista higiénico. Para ello, se realizó una evaluación “in situ” de cada una de las partes constituyentes de las máquinas con el objeto de identificar zonas cuyo diseño higiénico fuera mejorable. Durante esta evaluación se consideró la posibilidad de que el equipo incorporase peligros de tipo químico, físico y/o microbiológico al producto envasado. Entre estos se destacan: 175 − − − Peligros físicos: incorporación de tornillos, tuercas o arandelas, restos de suciedad acumulada en ranuras o huecos. Peligros químicos: restos de lubricantes, de productos de limpieza y desinfección que pueden acumularse durante las tareas de limpieza y cuyo aclarado resulte difícil debido a la geometría del equipo y a la utilización de materiales no inertes. Peligros microbiológicos: contaminación microbiana debido fundamentalmente a que el equipo por su diseño facilite la acumulación de producto o humedad en algunas zonas (ranuras, huecos,…) de difícil acceso para la limpieza, lo que facilita el crecimiento de microorganismos en estas zonas con la posibilidad de su incorporación posterior al producto que se va a envasar. La evaluación de diseño higiénico de las máquinas termoselladora y termoformadora, se abordó según la siguiente pauta: a) Evaluación previa b) Evaluación “in situ” c) Valoración del riesgo asociado al incumplimiento del requisito de higiene detectado d) Validación de los resultados Tomando como referencia la definición previa del sistema de evaluación del diseño y de limpieza se realizó el estudio teórico del método de validación del diseño higiénico en las líneas de envasado activo obteniéndose una preselección de alternativas para cada una de las etapas que componen el método (suciedad, indicador, limpieza, etc.). En esencia, el método se basaría en ensuciar de forma controlada con la adición de un indicador a la solución, en aplicar una limpieza controlada del equipo a evaluar y finalmente en una cuantificación y localización de los posibles restos de indicador que pudieran quedar sobre el equipo que permitiera proceder a la evaluación de la limpieza del mismo. Como criterio general se buscó que la solución combinara una distribución homogénea en unas condiciones operativas viables, es decir, debe presentar una buena adherencia a las superficies del equipo, ser de fácil preparación y presentar un coste razonable. • Adaptación de la máquina de envasado a los sistemas de envase activo desarrollados Se iniciaron las actividades relativas a la adaptación de la máquina de envasado a los sistemas de envase activo desarrollados con un estudio del estado del arte de posibles activos ya existentes y analizando las diversas formas de aplicación de los mismos. Posteriormente, se realizó un estudio de maquinabilidad sobre el material de envase activo desarrollado. Considerando que inicialmente los procesos de incorporación del principio activo en el material de envase seguían dos vías de trabajo, dada la estabilidad térmica del agente activo obtenido en la tarea 5.1, se analizó la maquinabilidad a) agregando el extracto activo al barniz base aplicado a los laminados actuales mediante un recubrimiento y b) incorporando el principio activo en el material de envase más próximo al alimento mediante extrusión/coextrusión. 176 Para la “homologación” del film se establecieron diferentes requisitos a cumplir. Siempre teniendo como objetivo obtener un envase hermético apto para envolver productos perecederos. – – – – Hermeticidad del envase (Ulma Test ≥ 0.4 bar TS y 0.6 bar FP). Maquinabilidad del film (eliminar roturas, microfisuras en film…) Residual de O2 < 0.5 % Aspecto del envase final (distorsión mínima de la bandeja, calidad en la soldadura y en el corte, ausencia de pliegues …) Para el caso de termosellado el desarrollo de un sistema de perfiles especiales para el sellado (placas de soldadura, cuchillas de corte…) permitió mejorar los resultados obtenidos, siendo finalmente satisfactorios y casi equiparables a un film estándar ya existente en el mercado. Resultados: • Desarrollo de una máquina de envasado activo higienizable. – Estudio de los sistemas de envasado activo desde una perspectiva higiénica. La evaluación de diseño higiénico de las máquinas termoselladora y termoformadora, se abordó según la siguiente pauta: a) Evaluación previa b) Evaluación “in situ” c) Valoración del riesgo asociado al incumplimiento del requisito de higiene detectado d) Validación de los resultados a) Evaluación previa Se realizó una evaluación previa del grado de cumplimiento de requisitos higiénicos. Para ello se preparó un “check list” basado en los requisitos de diseño higiénicos establecidos en los diferentes documentos existentes aplicables al tipo de maquinaria objeto de estudio (Doc. 8, 13,11, 29, 32 de EHEDG; NSF/ANSI2-2002-e; 3A 27, 3A 23; UNE EN 1672, UNE-EN ISO 14159). Utilizando este “check list” como herramienta de apoyo se realizó la evaluación previa del equipo abordando cada uno de los subconjuntos identificados por ULMA y considerando los cuatro niveles de peligro identificados con anterioridad: Zona A: transporte de producto Zona B: zona de entrada inferior a porta bobinas y zona de sellado Zona C: zona inferior a transporte Zona D: zona de salida de producto envasado 177 Como resultado de esta evaluación se identificaron áreas que cumplen o incumplen los requisitos de diseño higiénico y áreas en las que fue necesaria la evaluación posterior visual “in situ” para poder determinar con exactitud el grado de cumplimiento de los requisitos de diseño higiénico. b) Evaluación in situ El objetivo fundamental fue confirmar la detección de las áreas fuertes y las susceptibles de mejora del diseño higiénico realizado en la evaluación previa y proceder a la evaluación de aquellas que precisan de una inspección visual y/o desmantelamiento más profundo. Además, se identificaron y agruparon los diferentes subconjuntos que conforman la totalidad del equipo en las cuatro zonas establecidas en función del peligro que pueden suponer para el producto. El equipo se evaluó con la máquina envasadora parada y utilizando como herramienta de apoyo el “check list” parcialmente cumplimentado. Como resultado de esta etapa se identificaron las áreas o partes del equipo en las que era necesario incorporar mejoras en el diseño para garantizar unas condiciones higiénicas óptimas para el envasado de productos cárnicos. c) Valoración del riesgo asociado al incumplimiento del requisito de higiene detectado La familia de “productos cárnicos” susceptibles de ser envasados en la envasadora objeto de estudio, era muy amplio e incluía carne fresca y productos cárnicos listos para el consumo. Se identificaron algunas partes del equipo en las que en función del producto a envasar se podía ser más o menos estricto en el cumplimiento de los requisitos de higiene. d) Validación de los resultados Se visitaron dos empresas, una de productos cárnicos en la Comunidad Valenciana y otra de platos preparados en el País Vasco. En ambos casos se observaron detalladamente las máquinas en funcionamiento lo cual permitió la validación y, en algún caso, la incorporación de algunos aspectos adicionales a las evaluaciones realizadas con anterioridad. Como conclusión final se elaboraron sendos documentos en los que se reflejó el resultado de las evaluaciones del diseñó higiénico de ambas máquinas envasadoras. – Método de validación del diseño higiénico en las líneas de envasado activo desde una perspectiva higiénica Se comenzó por la definición de alternativas de indicador y formas de detección. Para ello se valoraron agentes de naturaleza microbiológica y química. También se tuvieron en cuenta otros mecanismos indirectos para valorar la presencia de posibles peligros después de las operaciones de limpieza y desinfección (p.e. carbono orgánico total (COT), análisis de proteína, etc.). Dicha valoración se realizó teniendo en cuenta y buscando un equilibrio entre los siguientes factores: 178 o o Nivel de precisión que ofrece el indicador. Viabilidad práctica del método. La técnica seleccionada deberá poder realizarse en la empresa y ser óptima para el tipo de equipos diseñados y construidos por ésta. A continuación se definieron las condiciones de ensuciado del equipo. La solución debía presentar una buena adherencia a las superficies del equipo, similar a la que el producto cárnico genera en la línea de envasado, ser de fácil preparación en la empresa y presentar un coste razonable. Se procedió a la determinación de las condiciones de limpieza del equipo. – Validación de una línea de envasado activo (termoformado/termosellado) para productos cárnicos. Es fundamental a la hora de seleccionar los puntos críticos, diferenciar entre las partes de la máquina que se encuentran en contacto con el producto y las que no. Para ello, es necesario entender perfectamente qué se considera zona en contacto con el producto. Portabobinas inferior Portabobinas superior Horma Precalentamiento + formado Encimeras zona de carga + guardas superiores antes de soldadura Figura 5.5.21. Muestra de las zonas de una máquina de envasado Una vez seleccionados los subconjuntos del equipo a evaluar los pasos siguientes fueron: o Aplicación de la solución sucia. o Definición del método de limpieza adecuado. o Toma de muestras para comprobar el grado de limpieza alcanzado. 179 o Evaluación de resultados. o Elaboración del protocolo de evaluación: repetibilidad. Las pruebas se realizaron en la planta piloto de higiene sobre uno de los subconjuntos de la termoformadora: Figura 5.5.22. Realización de pruebas en planta piloto Las variables analizadas fueron: o Indicador: Riboflavina, B-caroteno y fluoresceína. o Concentración del indicador. o Matriz de la solución ensuciadora (agua, leche entera). El empleo de tacos de carne o carne picada fue descartada debido a su dificultad de ensuciar todas las partes del equipo. o Tiempo de secado. A continuación se procedió a la definición de la fase de limpieza del método. A partir de la preselección de soluciones de limpieza y mecanismos de aplicación realizada en la anualidad anterior, se realizaron las aplicaciones prácticas necesarias de las distintas combinaciones propuestas para seleccionar la opción más adecuada. Las variables analizadas fueron: – o Empleo de detergente y, en su caso, concentración. o Tiempo. o Presión de aplicación. o Temperatura. Recomendaciones para la limpieza y desinfección de las máquinas envasadoras termoformadoras higienizables Se redactó un documento estableciendo las principales directrices a considerar en las operaciones de limpieza y desinfección de las máquinas termoformadoras higienizables de ULMA Packaging. 180 Las indicaciones que se recogen en el documento deben seguirse independientemente del protocolo final que se aplique sobre la máquina de manera que se garantice en todo momento la eficacia de la operación y se salvaguarde la integridad del equipo. Figura 5.5.23. Realización de pruebas para la definición de recomendaciones para la limpieza y desinfección de termoformadoras higienizables • Adaptación de la máquina de envasado a los sistemas de envase activo desarrollados – Estudio de maquinabilidad sobre material de envase activo. Teniendo en cuenta que inicialmente los procesos de incorporación del agente activo en el material de envase seguían dos vías de trabajo según la estabilidad térmica, se analizó la maquinabilidad a) agregando el extracto activo al barniz base aplicado a los laminados actuales mediante un recubrimiento y b) incorporando el principio activo en el material de envase más próximo al alimento mediante extrusión/coextrusión. Las actividades realizadas relativas al estudio de maquinabilidad se han realizado en diferentes conceptos de envuelta (Flow-Pack y Termoformado). Se evaluó la soldabilidad del film dejando para una fase posterior lo que sería el formado. Una vez conseguido un buen sellado, se modificaron las características mecánicas para evitar marcas durante el mismo. Para la “homologación” del film se establecieron diferentes requisitos a cumplir, teniendo como objetivo un envase hermético apto para la envuelta de productos perecederos. o Hermeticidad del envase (Ulma Test ≥ 0.4 bar TS y 0.6 bar FP). o Maquinabilidad del film (eliminar roturas, microfisuras en film…) o Residual de O2 < 0.5 % o Apariencia del envase final (distorsión mínima de la bandeja, calidad en la soldadura y en el corte, ausencia de pliegues …) En el caso del termosellado el desarrollo de un sistema de perfiles especiales para el sellado (placas de soldadura, cuchillas de corte…) permitió mejorar los resultados obtenidos, siendo finalmente satisfactorios y casi equiparables a un film existente en el mercado. 181 En flow pack se realizaron pruebas de soldadura con diferentes mordazas y rodillos (planos, estriados, teflonados, diferentes anchuras…). El acabado de la soldadura fue bastante satisfactorio, aunque los resultados de hermeticidad demostraron que la soldadura no era tan fuerte como debiera de ser. Se diseñaron y validaron nuevas mordazas y rodillos con un perfil más agresivo para mejorar la adhesión entre films (ver figura 5.5.24). Figura 5.5.24. Pruebas de adhesión entre films. Las pruebas iniciales mostraron que era viable el sellado, aunque las características mecánicas del material complicaron su manipulación. Fue necesario obtener material en lámina de un modo semiindustrial para determinar el comportamiento definitivo del film. El resultado vía recubrimiento fue bastante satisfactorio. Sin embargo debido a la coloración introducida por el agente activo en film base no fue el más indicado para aplicaciones de flow-pack o film de tapa superior en bandeja. Por lo tanto, considerando que el principio activo actúa por contacto directo y tiene un color pardo se planteó la investigación incorporándolo al material de envase mediante extrusión/coextrusion dado que mediante recubrimiento iría en la tapa del envase y las limitaciones existentes no lo hacen comercialmente viable. – Pruebas de soldabilidad del film con el agente activo incorporado mediante extrusión/coextrusión: Se realizaron pruebas de sellado sobre las estructuras diseñadas para la experimentación con producto debido a la falta de material para evaluar diferentes combinaciones. En la coextrusión se obtuvieron tres estructuras: o o o Estructura 1: EVA/adh/EVOH/adh/EVA (Control) Estructura 2: EVA (6% agente activo)/ adh/EVOH/ adh/EVA (6% agente activo) Estructura 3: EVA (10%Nano)/ adh/EVOH/ adh/EVA (10%Nano) Se realizó un estudio comparativo entre las estructuras desarrolladas tomando como control la estructura 1 con EVA y sin el aditivo activo, ya que éste indica cual es la variación de las propiedades de la lámina una vez adicionado el activo, ya sea debido al proceso de adición o al activo en sí mismo. 182 Las pruebas se realizaron en las instalaciones de ULMA PTC sobre diferentes sistemas de soldadura, pero siempre con un sistema de corte por cuchilla ya que es el más adecuado para aplicaciones de termosellado. Las pruebas realizadas sobre el material de control (E1) indicaron que la temperatura de sellado se encuentra alrededor de los 150º C para tiempos cercanos a los 0,5 segundos. Sobre esta orientación se trabajó con diferentes presiones y temperaturas para determinar la soldabilidad de las estructuras E2 y E3. En la Figura 5.5.25 pueden observarse los resultados para los materiales E1, E2 y E3. Figura 5.5.25. Resultados de los diferentes materiales (E1, E2 y E3) El comportamiento del material fue similar en todos los casos, aunque cabe destacar que la temperatura de soldadura se redujo gradualmente durante las pruebas hasta un punto óptimo cercano a los 130ºC. La plasticidad del material en zonas cercanas al punto de fusión facilitaron una buena soldadura e incluso con varias capas de material el resultado fue positivo cuando se aumentó el tiempo de aplicación de calor y se aumentó la presión de sellado. Es necesario un sistema de perfiles especiales para el sellado (placas de soldadura, cuchillas de corte, etc.), ya que los sistemas estándares presentan problemas en el proceso de corte. Fue necesario diseñar y adaptar una solución de soldadura y corte más agresivas debido a la ductilidad del material. Finalmente, los resultados fueron muy satisfactorios y casi equiparables a un film comercial ya existente en el mercado. Para pruebas de sellado sobre envase se seleccionó la bandeja rígida 230 x 147 x 45: L12 con una cara sellante de PE (polietileno) y se adaptó la máquina según los criterios establecidos durante la prueba de soldadura. En la Figura 5.5.26 se puede observar los resultados finales para los materiales E1, E2 y E3: 183 Figura 5.5.26. Resultados obtenidos en las pruebas de sellado entre una bandeja y los films evaluados. Finalmente, se planteó la posibilidad de avaluar las estructuras E2 y E3 simulando el proceso sobre lo que será el “producto” definitivo, en el cual el material se laminará y se termoconformará para producir una bandeja. Para ello se experimentó sobre la capacidad sellante del combinado compuesto por una bandeja comercial (L12) con capa sellante de PE (polietileno), las estructuras E2 o E3 y finalmente un film de tapa como el Poliskin XL metalocénico 12/50 micras de AMCOR. En la Figura 5.5.27se pueden observar los resultados para la estructura E2 + Poliskin XL: Figura 5.5.27. Resultados obtenidos para la estructura EVA (6% agente activo)/ adh/EVOH/ adh/EVA (6% agente activo) Y en la Figura 5.5.28 los resultados para la estructura E3 + Poliskin XL: Figura 5.5.28. Resultados obtenidos para la estructura EVA (10%Nano)/ adh/EVOH/ adh/EVA (10%Nano) Se puede concluir que es viable sellar en las diferentes variantes planteadas, aunque las características mecánicas del material complican su manipulación. Incluso se ha demostrado que las variaciones de concentración de ácido acético pueden ser admitidas sin cambios mayores de diseño, lo cual es imprescindible al plantear un diseño industrial. 184 Conclusiones: • Las variables analizadas han permitido localizar los puntos críticos a rediseñar desde el punto de vista higiénico en el equipo de envasado activo. • Se desarrolló un sistema de perfiles especiales para el sellado (placas de soldadura, cuchillas de corte…) que ha permitido mejorar los resultados obtenidos con el film activo, siendo satisfactorios y equiparables a un film existente en el mercado. 185 5.6 ACTIVIDAD 6. NUEVAS APLICACIONES DE LOS FLUIDOS SUPERCRÍTICOS EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA 5.6.1 Tarea 6.1. Esterilización por extracción supercrítica (Biosearchlife, S.A – AINIA). Objetivos: El objetivo principal de esta tarea fue la definición de un proceso basado en la aplicación de CO2 a presión como vía para la reducción de la carga microbiológica en ingredientes sólido pulverulentos sometidos a extracción, previa evaluación del papel de las variables principales del proceso. Se plantearon los siguientes objetivos parciales agrupados en varias subtareas: • Seleccionar las materias primas concretas, identificar las condiciones de conservación y realización del aprovisionamiento de distintos lotes sobre los que se centró el estudio de desarrollo de proceso. • Definir las metodologías a aplicar en las pruebas experimentales de reducción de la carga microbiológica mediante dióxido de carbono a presión y en las caracterizaciones microbiológicas y químico-físicas, de las materias primas antes y después de los tratamientos; todo ello previa actualización del estado de la tecnología sobre procesos de eliminación de carga microbiológica mediante CO2 aplicables a los ingredientes alimentarios seleccionados y otros aspectos afines. • Estudiar experimentalmente a nivel de laboratorio la influencia de las distintas variables de operación en la efectividad desinfectante del proceso a presión y seleccionar las condiciones de operación de referencia a escala de laboratorio. • Proceder al escalado y validación de las condiciones de operación a escala piloto más efectivas a nivel de laboratorio, analizando la influencia de las distintas variables sobre el escalado del proceso de reducción de carga microbiológica. • Validar los algoritmos de escalado aplicados y evaluar la efectividad del tratamiento de reducción de carga microbiológica en las pruebas realizadas a escala piloto, para identificar el proceso más idóneo. El trabajo se realizó con la colaboración de AINIA, que cuenta con una experiencia de casi veinte años en el estudio y aplicación de la tecnología de fluidos supercríticos incluyendo tanto el desarrollo de procesos como instalaciones a medida, pasando por la formación especializada en este ámbito a nivel teórico y práctico. Estas actividades se realizaron en las instalaciones que AINIA dispone y que incluyen una planta piloto con cinco equipos de diferentes características con las que se han realizado las investigaciones requeridas para dar respuesta a los objetivos planteados en el proyecto FUTURAL. Resumen ejecutivo: A lo largo del proyecto, se efectuaron actividades documentales, experimentales, analíticas, etc. que llevaron a señalar la naturaleza de la materia prima entre las variables clave y a definir las bases del proceso de referencia que constituiría el punto de partida para futuros desarrollos. 186 La primera identificación de los principales factores con influencia en la eficacia del proceso y de los intervalos de valores para cada uno de estos factores se efectuó a través de la revisión de artículos científico-tecnológicos sobre el proceso de reducción de la carga microbiológica con CO2 a presión, cuya actualización se llevó a cabo a lo largo de todo el proyecto. Sobre esta información también se sustentó la definición de las metodologías de operación y los procedimientos de evaluación, así como su puesta a punto. En relación con las metodologías de tipo microbiológico, se establecieron los microorganismos indicadores de calidad (Aerobios totales, Enterobacterias, Escherichia coli, Salmonella, Hongos, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, etc.) y sus límites. Para las actividades experimentales, inicialmente se seleccionaron dos extractos de origen vegetal y tras su preparación y aprovisionamiento, se efectuaron baterías de pruebas en las instalaciones de AINIA bajo un diseño experimental a dos niveles de presión y temperatura. A la vista de los resultados y considerando las propiedades como disolvente del CO2 en estado supercrítico, se planteó como objetivo complementario la extracción de la fracción más lipofílica al tiempo que se redujo o eliminó la carga microbiológica en las matrices. Con los resultados obtenidos, se decidió focalizar el estudio en la esterilización directa de materias primas originales, en lugar de hacerlo sobre materias primas ya procesadas (extractos). Se seleccionaron cinco materias primas como productos modelo de varias tipologías de producto, diferenciadas en características tales como: presencia de cubierta, dureza, tamaño de partícula, humedad, nivel de aceite, etc. Las materias primas seleccionadas fueron: un material pulverulento de origen vegetal (“PUL”), semillas (“SEM”), frutos secos troceados (“FSEC”), harina de un fruto seco (“HAR”) y hojas de árbol perenne (“HOJ”). De este modo, se estudió mediante pruebas experimentales a escala de laboratorio la influencia de estos factores sobre la eficacia del tratamiento con CO2 a presión para la esterilización y la obtención de extractos de interés como representación de otras materias primas de similares características. Entre las variables de proceso consideradas en el diseño experimental se incluyeron la temperatura de CO2, la presión, el tiempo de proceso, el caudal de CO2, o la posibilidad de empleo de codisolventes. Además se estudió la influencia de estrategias como la aplicación de ciclos de presurización-descompresión. En el caso de semillas duras y con bajo contenido en agua, se verificó la eliminación completa de los hongos y reducciones de aerobios hasta un 80%, obteniéndose los mejores resultados cuando la presión era mayor. Con materias primas de elevado contenido lipídico se verificó la posibilidad de inactivación de mohos y de aerobios mesófilos al reducir el contenido en lípidos. Respecto a las hojas de árbol perenne, se obtuvo la eliminación completa de los hongos, y en alguna de las pruebas se inactivaron microorganismos aerobios hasta niveles inferiores al límite de detección. A partir de los resultados obtenidos a nivel de laboratorio, se definieron los parámetros de referencia y se realizaron pruebas a escala piloto para analizar el efecto del cambio de escala. La realización de pruebas a escala piloto incluyó también el estudio de la influencia de otra estrategia innovadora, la aplicación de ultrasonidos en el interior de la cámara de 187 tratamiento haciendo uso de una tecnología patentada por AINIA junto con la UPVA y el CSIC. El análisis de los resultados obtenidos permitió identificar los procesos más efectivos, acotando las variables de proceso más adecuadas, para cada tipología de materia prima estudiada. Resultados: A continuación se resumen los resultados más relevantes obtenidos en las diferentes subtareas realizadas: • Selección y aprovisionamiento de ingredientes alimentarios para el estudio de tratamientos de esterilización mediante la aplicación de CO2 a presión. La selección de los ingredientes alimentarios para el estudio experimental del tratamiento se efectuó considerando la revisión bibliográfica que avaló el carácter innovador de las investigaciones planteadas. La mayoría de trabajos publicados sobre esterilización con CO2 a presión se centraban en alimentos líquidos, mientras que el tratamiento de alimentos sólidos es más complejo y tan sólo existen algunos artículos (García, et al., 2007). Por lo tanto, el hecho de centrar la investigación sobre materias primas sólidas representó un alto grado de innovación que encaja con el interés por obtener ingredientes alimentarios esterilizados de valor añadido. Durante las primeras etapas de proyecto se trabajó con extractos de desarrollo propio, que se prepararon y acondicionaron convenientemente para realizar los ensayos. Posteriormente se planteó el objetivo complementario de aprovechar las propiedades del CO2 en estado supercrítico como disolvente para, al tiempo que se reduce o elimina la carga microbiológica de las materias primas, extraer de forma complementaria los principios activos más lipofílicos (ácidos grasos, aceites esenciales, etc.). Este planteamiento se alinea con las investigaciones de vanguardia en este campo (Calvo et al., 2007; Norulaini et al., 2008). Para analizar la influencia que algunos parámetros propios de materias primas vegetales sólidas tienen en el proceso, se decidió abordar las actividades experimentales con diferentes tipologías de matrices sólidas. Las materias primas seleccionadas correspondieron a 5 tipologías diferentes, atendiendo a su tamaño de partícula, a su dureza, a la presencia de protecciones físicas externas, o a su contenido graso. A la vista de los resultados obtenidos con cada tipo de materia prima, se decidió centrar los esfuerzos en el estudio del proceso de inactivación de materias primas de elevado contenido lipídico. Para ello, se seleccionaron diferentes matrices sólidas como modelos de distintos tipos de materias primas (frutos secos y partes de cereales). • Determinación de métodos de operación y análisis para la evaluación de la efectividad de tratamientos a presión: producción y caracterización de muestras A través de la información técnica de partida sobre esterilización mediante CO2 a presión y métodos de caracterización se corroboró que el tratamiento de alimentos sólidos con CO2 a presión es más complejo por sus atributos de calidad físicos, nutricionales y de higiene microbiológica comparado con la aplicación de CO2 a presión sobre alimentos líquidos. Esta complejidad se debe al elevado número de factores que 188 influyen en la eficacia del proceso: presión y temperatura, estado físico del CO2, agitación, contenido en agua, velocidad de despresurización, microorganismos presentes, concentración microbiana inicial, propiedades físicas y químicas del medio, pH del medio, condiciones de cultivo y etapa de crecimiento de las células, aditivos, combinación de tratamientos, etc. En general, el tratamiento de alimentos sólidos con CO2 a presión requiere tiempos de tratamiento mayores para conseguir una inactivación microbiológica significativa como resultado de las interacciones entre los ingredientes alimentarios y factores intrínsecos, y también, por la propia limitación del CO2 para difundirse en matrices sólidas y células dada la dificultad para agitar la muestra (García et al., 2007). Tras el análisis de la información extraído de la revisión bibliográfica, se desarrollaron los procedimientos experimentales para la identificación del efecto de las principales variables del proceso sobre las características de las materias primas sólidas. También, se concretaron los parámetros indicadores de calidad microbiológica y se definieron las metodologías analíticas de caracterización de materias primas y muestras tratadas. Los análisis microbiológicos se realizaron siguiendo procedimientos contrastados, basados en los ensayos para microorganismos específicos de la Real Farmacopea Española, 2005 3ª Edición (monografía 2.6.13.). Los límites microbiológicos se establecieron de acuerdo con las especificaciones determinadas en la misma. El estudio experimental se centró en analizar las principales variables del proceso, según diseños experimentales considerando distintos niveles de temperatura (preservando los compuestos termolábiles), de presión, de tiempo, de tratamiento y de relaciones másicas CO2/materia prima. Además se estudió la influencia de la aplicación de ciclos de presurización-despresurización para favorecer la rotura mecánica de las paredes celulares. Por otra parte, también se contempló el estudio del efecto de la aplicación de ultrasonidos de potencia para incrementar la penetrabilidad del CO2 en las células microbianas. En cada prueba, a través de la materia prima se hizo circular CO2 en las condiciones de presión, temperatura y flujo seleccionadas durante el tiempo de proceso establecido. Durante el proceso, se efectuó la recogida periódica de las sustancias extraídas y precipitadas al cambiar las condiciones de presión y temperatura. Después del tratamiento se acondicionó para su conservación y posterior caracterización. A partir de los resultados de las caracterizaciones, se calculó la eficacia del proceso de reducción de la carga microbiológica. • Estudio experimental a nivel de laboratorio de la influencia de las principales variables de tratamientos de esterilización: Para evaluar la viabilidad del proceso para cada tipología de producto y la influencia de sus variables, se realizaron pruebas experimentales empleando las cinco tipologías de materias primas seleccionadas. La realización de pruebas a escala de laboratorio sirvió para conseguir elevadas relaciones másicas CO2/materia prima y para acotar los intervalos más adecuados de las principales variables de proceso. En líneas generales, se observó una influencia positiva de la presión (más acusada en el caso de materias duras o pulverulentas con elevado contenido graso) sobre el 189 rendimiento de extracción y en la cinética del proceso. También se observó un efecto favorable de la temperatura. Por otro lado, un elevado contenido graso de las materias primas conllevó un mayor rendimiento en la cantidad de materia extraída. Con materias primas de alto perfil lipídico se alcanzaron rendimientos superiores al 15%, mientras que en otros procesos los rendimientos fueron claramente inferiores. Las caracterizaciones realizadas sobre los extractos obtenidos revelaron actividad antioxidante. La aplicación de ciclos de presurización y despresurización sobre las semillas, para tratar de favorecer la rotura mecánica de las paredes celulares condujo a escala de laboratorio a un mayor nivel de extracción (un 20% más) aún empleando menor cantidad de CO2 en el proceso. Además, con esta materia prima se evidenció la doble finalidad perseguida (esterilización + obtención de extractos de interés), al obtenerse extractos con una concentración hasta 3 veces superior, en dos principios activos de interés seleccionados, que la obtenida en procesos de extracción convencionales. En lo que se refiere a la esterilización, los resultados alcanzados han llevado a constatar la viabilidad de la tecnología, remarcando la elevada influencia de las características de la materia prima sobre los resultados de inactivación alcanzados. Concretamente, el tratamiento aplicado sobre hojas de árbol perenne consiguió la eliminación total de hongos, e inactivaciones hasta niveles inferiores al límite de detección en algún caso de microoganismos aerobios. Por otro lado, se observaron menores niveles de esterilización en materias de elevado perfil graso, barajándose como hipótesis un posible efecto protector de estos compuestos lipídicos, que puede limitar la accesibilidad del CO2 al entorno de los microorganismos y con ello dificultar su contacto y/o destrucción. Asimismo, se observó cierto efecto favorable derivado del aumento de la presión, y en el caso de determinadas materias primas, se observó que el empleo de codisolventes mejoró los resultados de inactivación. • Validación y escalado experimentales de las condiciones más efectivas del proceso a presión: El estudio del proceso de escalado es necesario para el posterior desarrollo de los procesos a nivel industrial y comprendió tres etapas: recopilación de datos y definición de las bases del proceso; análisis de los resultados a escala de laboratorio e investigación experimental a escala piloto. A nivel de laboratorio se observaron menores rendimientos de esterilización con materias primas con elevado perfil graso, apuntando un posible efecto protector de estos compuestos lipídicos. Por este motivo, se decidió centrar los esfuerzos en materias primas de elevado perfil graso, planteando diferentes pruebas para determinar la influencia del tiempo de proceso y del grado de agotamiento de los compuestos grasos en el nivel de esterilización alcanzado. Las pruebas experimentales a escala piloto se realizaron en el equipo PFS20 de AINIA (Figura 5.6.1) aplicando las condiciones de proceso intensivas (presión de extracción, temperatura de extracción, presión de separación, temperatura de separación, etc.) seleccionadas a partir de los resultados obtenidos a nivel de laboratorio. Los valores de las variables de proceso extensivas se calcularon a partir de reglas de escalado, si bien 190 para su selección final se tuvo también en consideración su impacto para plantear la viabilidad técnico-económica del proceso en una potencial aplicación a nivel industrial. Figura 5.6.1. Planta piloto de procesado con fluidos supercríticos PFS20 (AINIA) La realización de pruebas experimentales a escala piloto, incluyó el estudio de la influencia de otra estrategia innovadora: la aplicación de ultrasonidos combinada con el tratamiento con CO2 a presión. Para ello, se empleó la metodología y equipamientos descritos en una patente sobre extracción con fluidos supercríticos asistidos por ultrasonidos de alta intensidad. Además, el equipo empleado es adecuado para la realización de estudios de escalado de este tipo, pues posee una función de control automático, tal y como se requeriría en aplicaciones industriales. La aplicación de ultrasonidos sobre materias primas de elevado contenido graso aumentó el rendimiento de extracción en más de un 10% y redujo el tiempo de proceso para alcanzar un mismo rendimiento. La comparación de resultados a escala de laboratorio y a escala piloto evidenció que los resultados dependían de la tipología de materia prima empleada. Las cinéticas de ensayos con diferentes materias primas mostraron variaciones positivas respecto a algunas de las relaciones de escalado (relación extracto obtenido/disolvente empleado). En el procesado de la materia prima dura, granulada y de bajo contenido de humedad, los rendimientos y características del extracto confirmaron la escalabilidad del proceso, requiriéndose menores relaciones másicas CO2/materia prima para conseguir un mismo rendimiento de extracción, por lo que el proceso a nivel piloto se podría considerar más eficiente. Esta mejora en la eficiencia a escala piloto se observó también con materias primas de elevado contenido lipídico. Además, dado el mayor desgrasado alcanzado en las pruebas realizadas a nivel piloto, se alcanzaron niveles de inactivación superiores a los alcanzados a nivel de laboratorio, avalando las posibilidades de futuros escalados. • Especificación del proceso más efectivo para la reducción de la carga microbiana mediante CO2 a presión: Con los resultados obtenidos, se estableció que cada tipo de materia prima presenta unas particularidades concretas. En líneas generales, se observó una relación positiva entre la severidad de las condiciones de proceso (presión y temperatura de tratamiento) y el nivel de esterilización alcanzado. Diferentes publicaciones indican un efecto positivo en la inactivación, asociado al empleo de codisolventes o a la cantidad de humedad de la 191 materia de partida, si bien puede no ser conveniente actuar sobre estas variables dependiendo de las especificaciones de cada materia prima. Los resultados obtenidos muestran que éstos dependen de la tipología de la materia prima. En general se alcanzaron mayores inactivaciones en las materias primas que presentan un bajo contenido lipídico siendo una posible hipótesis el efecto protector de estos compuestos lipídicos, dada la mayor afinidad del CO2 supercrítico con las sustancias lipofílicas. Esta hipótesis se correspondería con la bibliografía (GarcíaGonzález et al., 2008) y con los resultados obtenidos con otras matrices con contenidos inferiores en lípidos. Así se explicaría que en las pruebas realizadas sobre semillas con un contenido lipídico intermedio, se inactivaran hongos, pero no completamente los microoganismos aerobios, y que en las pruebas realizadas sobre hojas de árbol de bajo contenido lipídico se consiguiera esterilizar tanto los hongos como los microorganismos aerobios. Esta línea de estudio se profundizó realizando pruebas a escala piloto con materias primas de elevado contenido lipídico, llegándose a observar ausencia de mohos y levaduras, y reducciones de aerobios hasta el 80%. Las mayores reducciones de aerobios se observaron en tratamientos en los que se alcanzaron importantes niveles de desgrasado. Respecto a otras variables de proceso, cada tipo de materia prima presenta particularidades. En el caso de semillas duras y con bajo contenido en agua se verificó la eliminación completa de los hongos y reducciones de microorganismos aerobios hasta un 80%, obteniéndose los mejores resultados en el proceso realizado a mayor presión. En los tratamientos de materias primas de elevado contenido lipídico se verificó la posibilidad de inactivación en los procesos y además se consiguió la extracción casi total de sus compuestos lipídicos. Se observó una influencia positiva de la temperatura en la inactivación de mohos y una influencia positiva del nivel de agotamiento de compuestos lipídicos en la materia prima en la inactivación de aerobios mesófilos. Respecto a las hojas de árbol perenne (“HOJ”), se alcanzó la eliminación completa de los hongos, y en alguna de las pruebas inactivaciones de microorganismos aerobios hasta niveles inferiores al límite de detección. El empleo de codisolvente mejoró los rendimientos de inactivación. Respecto a la extracción, los resultados mostraron también una importante influencia de la tipología de materia prima. Por ejemplo, en el caso de las semillas, muy duras y con bajo contenido en agua, se evidenció la doble finalidad perseguida (esterilización + obtención de extractos de interés), al obtenerse extractos con una concentración en los principios activos de interés hasta 3 veces superior a la obtenida mediante métodos convencionales. La aplicación de ultrasonidos y de ciclos de compresión-descompresión resultó favorable en los rendimientos del proceso. Por otro lado, trabajando con frutos secos y fracciones de cereal de elevado contenido lipídico, los rendimientos de extracción se situaron entre el 15 y el 60%, observándose un efecto favorable de la presión y de la aplicación de ultrasonidos en la cinética del proceso y en el nivel de desgrasado alcanzado. Además, se verificó la viabilidad de la tecnología para fraccionar los extractos obtenidos, trabajando con dos cámaras de separación a diferentes condiciones de presión y temperatura. De este modo, se 192 consiguió obtener una fracción acuosa con bajo contenido en aceite, y una fracción oleosa, prácticamente exenta de agua. Finalmente, la aplicación de CO2 supercrítico sobre hojas de árbol llevó a identificar claras mejoras de cara a su posterior procesado mediante otras técnicas. En resumen, el grado de inactivación alcanzado dependió de la tipología de materia prima. El análisis realizado sugiere que en determinadas materias primas, un elevado contenido lipídico ejerce un efecto protector dificultando que el tratamiento consiga la inactivación. La tecnología presentó resultados muy positivos (esterilización completa) cuando se aplicó a hojas de árbol perenne. Cuando se aplicó sobre materias primas con elevado contenido graso, los mejores resultados se obtuvieron aplicando altas presiones (superiores a 250 bar), temperaturas moderadas (inferiores a 70ºC), partiendo de materia prima molturada y empleando relación CO2/materia prima suficiente para obtener un alto nivel de desgrasado del producto inicial. g extracto / 100 producto 40,0 0,0 0 150 300 kg C O2/kg producto P2 P1 Figura 5.6.2. Cinéticas de extracción en pruebas con materia prima de elevado contenido lipídico. Efecto favorable de la presión (P2 > P1) sobre la cinética y rendimiento del proceso 193 g extracto / 100 producto 10,0 0,0 0 75 kg C O2/kg producto con US sin US g extracto / 100 producto 40 0 0 50 k g CO2 / k g pr oduc t o sin US c on US Figuras 5.6.3 y 5.6.4. Cinéticas de extracción en pruebas realizadas con dos tipologías de materias primas. Influencia favorable de la aplicación de ultrasonidos (US) sobre la cinética y rendimiento del proceso A continuación se incluyen algunos ejemplos para mostrar la tipología de extractos obtenidos. Figura 5.6.5. Ejemplo de extractos obtenidos a partir de una materia prima de elevado contenido lipídico 194 Figura 5.6.6. Ejemplo de extractos obtenidos en el separador 1 (S.1) y en el separador 2 (S.2) a partir de una materia prima de elevado contenido lipídico. Se puede apreciar el fraccionamiento realizado. La práctica totalidad de agua se recogió en el separador 2, mientras que la fracción obtenida en el separador 1, apenas contuvo agua en su composición. Conclusiones: • Se ha observado que el grado de inactivación alcanzable depende en gran medida de la tipología de materia prima. • El análisis de los resultados sugiere que un elevado contenido lipídico ejerce un efecto protector dificultando la inactivación. • La tecnología presentó resultados muy positivos (esterilización completa) cuando fue aplicada a hojas de un árbol perenne. • Cuando se aplicó sobre materias primas con elevado contenido graso, los mejores resultados (esterilización completa en cuanto a mohos y levaduras, y reducciones de aerobios y mesófilos hasta un 80%) se obtuvieron aplicando altas presiones, temperaturas moderadas, partiendo de materia prima molturada y empleando una relación CO2/materia prima suficiente para conseguir un desgrasado prácticamente completo del producto inicial. En relación con el doble objetivo perseguido, se verificó la viabilidad de la tecnología para la extracción simultánea de sustancias de interés, al tiempo que transcurrieron los procesos de esterilización para determinadas materias primas. Con las conclusiones de las investigaciones realizadas en este proyecto se ha definido un proceso de referencia y escalable. 5.6.2 Tarea 6.2. Efecto de las principales variables de operación y de las interacciones entre componentes mayoritarios y minoritarios para la definición del proceso de extracción supercrítica (Soria Natural, S.A – AINIA). Objetivos: La tecnología basada en fluidos supercríticos presenta importantes ventajas desde el punto de vista tecnológico, ya que evita el empleo de disolventes orgánicos tóxicos para la salud de los consumidores y para el medio ambiente, y permite la extracción de componentes susceptibles de oxidaciones. El objetivo principal planteado en esta tarea fue desarrollar procesos basados en la aplicación de CO2 a presión para la obtención de ingredientes alimentarios de alto valor añadido mediante el seguimiento de la influencia de las variables principales del proceso 195 sobre el rendimiento y la calidad de los productos modelo antes y después del tratamiento, así como los posibles efectos sinérgicos entre estas variables y las características propias de cada matriz. En relación con la consecución del objetivo principal descrito se plantearon los siguientes objetivos científico-tecnológicos: • Valoración de la influencia de presencia de distintos niveles de sustancias mayoritarias en cuanto al comportamiento de la extracción con CO2 supercrítico. • Definición de metodologías detalladas de obtención de extractos optimizadas teniendo en cuenta los perfiles globales de las materias primas y extractos. • Evaluación y comparación de los productos obtenidos por extracción supercrítica frente a los obtenidos por técnicas convencionales. Estos objetivos se abordaron con la colaboración de AINIA. Resumen ejecutivo: En esta tarea se identificaron procesos diferenciados para dos tipos de materias primas, siendo uno de ellos especialmente interesante por las características y propiedades de los extractos conseguidos. El objetivo de desarrollar protocolos optimizados escalables a la industria en la extracción de componentes nutricionales de alto valor añadido se sustentó en una serie de hitos: • Una revisión bibliográfica en cuanto a los aspectos relacionados con las materias primas seleccionadas, la tecnología de extracción supercrítica y los métodos de evaluación de los resultados respecto al proceso y las características de las muestras obtenidas. Esta revisión confirmó la novedad de las investigaciones planteadas. • Selección de dos materias primas de alto interés estratégico para la empresa y estudio de sus potencialidades en la extracción con fluidos supercríticos. Una de las especies fue Eucaliptus globulus y la otra una brassicacea rica en componentes con reconocidas propiedades preventivas del cáncer. • Realización de múltiples baterías de extracción para localizar los parámetros críticos de extracción y optimizar los valores a emplear en los procesos extractivos. • Análisis de la riqueza de los diferentes extractos obtenidos, así como de su rendimiento y posibilidades de escalado a nivel industrial. Comparación con procesos convencionales de extracción y concentrado. • Estudio “in vitro” de las propiedades preventivas y nutricionales de los extractos obtenidos, así como estudios de toxicidad para garantizar la aplicación de los productos obtenidos en la cadena alimentaria. Los resultados obtenidos permitieron establecer una serie de parámetros para lograr la optimización del proceso a escala industrial así como contrastar su reproducibilidad. Se obtuvieron componentes diferentes a los que se obtienen mediante procesos convencionales. 196 Como resultado final del proyecto, se definió un proceso integrado en el que se incluye la etapa de extracción supercrítica (ESC). El proceso final parte de la materia prima fresca, la cual se estabiliza mediante un proceso de secado y para propiciar los mejores resultados en cuanto a la obtención de las fracciones bioactivas de interés, se somete a molienda y cribado como pretratamientos físicos. Los pretratamientos se complementan con un proceso químico tras el cual se aplica la extracción supercrítica. Mediante la ESC en las condiciones seleccionadas y según procedimientos avanzados, se obtienen las fracciones bioactivas empleando condiciones adecuadas de separación y la materia prima extraída, que debe ser gestionada adecuadamente. De este modo, los extractos obtenidos presentan una elevada bioactividad in vitro en cuanto a apoptosis, parámetro empleado para medir la actividad preventiva frente al cáncer. Las conclusiones obtenidas son: – – La aplicación de la tecnología a nivel industrial es sólo recomendable en el caso de la brassicacea, no así en el eucalipto, el cual desde el punto de vista económico es mucho más rentable su extracción por métodos convencionales. La tecnología ESC es altamente recomendable en productos con especial sensibilidad a la oxidación y a las alteraciones enzimáticas. Resultados: A continuación se resumen los resultados más relevantes obtenidos: • Identificación y selección de materias primas para el estudio de la influencia de sus características de partida en los procesos de extracción supercrítica En esta subtarea se realizó la identificación y selección de las materias primas considerando la actualización del estado de la tecnología y las propias líneas de actividad futura. En este sentido se realizó una revisión bibliográfica para actualizar el estado de la tecnología de extracción supercrítica en general en cuanto a la obtención de micronutrientes y la información disponible relativa a ciertas materias primas. Aunque son numerosos los estudios que se centran en algún compuesto en particular que podría clasificarse dentro de la calificación de micronutrientes (por ejemplo, tocoferoles, tococromanioles, fitoesteroles, etc.), son mucho más escasos los que hacen mención expresa a este término (Bachalandran et al, 2008; Demirbas, 2010). La primera de las materias primas seleccionadas fue Eucaliptus globulus, especie vegetal con propiedades conocidas y que por sus características, puede emplearse como material modelo para poder extrapolar las conclusiones de proceso derivadas de la investigación a otros tipos de matrices similares. Concretamente, sus hojas contienen un aceite esencial de característico olor balsámico que es un poderoso desinfectante natural y que también se emplea en aromaterapia. Se encontraron referencias de la solubilidad de algunos de los componentes en medio supercrítico, así como de variaciones en las características de las materias primas en función de factores climáticos u de otra índole, pero no se identificaron trabajos que estudien el efecto del conjunto de las variables de proceso y las relaciones entre macro y micronutrientes para maximizar la extracción de estos últimos. 197 En cuanto a la segunda materia prima seleccionada, se trata de una especie concreta de un género dentro de la familia de las Brassicaceae y a la especie seleccionada se le atribuyen bioactividades positivas sobre diversas áreas de la salud, destacando por su potencial interés su acción citotóxica, lo cual le confiere actividad preventiva frente al cáncer así como protectora frente a agentes carcinógenos. La revisión bibliográfica ha corroborado la escasa y reciente información publicada acerca de procesos de extracción supercrítica realizados empleando este género de plantas como materia prima (Borissova et al., 2010, Mohn et al., 2007). Por tanto, las investigaciones planteadas en el presente proyecto constituyen una clara novedad respecto al estado de la tecnología de extracción con fluidos supercríticos. • Desarrollo de metodologías de trabajo para la evaluación de resultados de extracción supercrítica: obtención de extractos supercríticos y caracterización de muestras Para conseguir resultados evaluables a lo largo del proyecto se definieron procedimientos, protocolos y metodologías para la obtención de extractos supercríticos y para la caracterización de las muestras obtenidas. En cuanto a la extracción supercrítica, se desarrolló un protocolo con dióxido de carbono en semicontinuo con recirculación en función de los ensayos realizados en las instalaciones propias así como en AINIA. En cada caso, las metodologías se adaptaron en función de las características particulares del equipo a emplear (tamaño y geometría de las cámaras de extracción, especificaciones de los separadores, etc.). En cuanto a condiciones operativas, se consideraron presiones de hasta 330 bar y temperaturas de hasta 70 ºC y a lo largo del proyecto, se orientaron estos procedimientos hacia la optimización del proceso de extracción para maximizar la recuperación de las fracciones de mayor interés, teniendo en cuenta los resultados obtenidos y los efectos sinérgicos entre macro y microcomponentes. En cuanto a la evaluación de las muestras se definieron métodos analíticos para la evaluación de las características de las materias primas y las fracciones experimentales. Para ello, se analizaron inicialmente los parámetros e indicadores necesarios para la discusión e interpretación de resultados. Especialmente, se revisó la tipología de métodos empleados por los autores que realizaron investigaciones con plantas de las mismas familias y/o estudios con objetivos parcialmente similares a los planteados en el presente proyecto. En muchos casos, los estudios emplean técnicas cromatográficas, como HPLC (El-Ghorab AH. et al, 2003,) pero especialmente, GC-MS (Marongui et al, 2005; Rozzi et al, 2002; Da Cruz Francisco, et al., 2002, etc.) combinadas con otras de tipo físico-químico o según el tipo de aplicación que se persiga, con métodos de detección de bioactividad (por ejemplo, Padma et al, 2007). De este modo, conforme a los parámetros seleccionados, se evaluó la granulometría, humedad, contenido en principios activos, etc. Además, junto a la aplicación de métodos previamente establecidos, se optó por el desarrollo de métodos cromatográficos, especialmente dentro del tipo de cromatografía de gases (GC-MS) a tenor de la experiencia previa, las informaciones bibliográficas relacionadas con las materias primas seleccionadas y los primeros resultados experimentales. 198 • Estudio a escala laboratorio de los efectos individuales y combinados de las principales variables de proceso de la extracción supercrítica Se planificaron y realizaron pruebas experimentales en las instalaciones de Soria Natural y AINIA. En cuanto al eucalipto, se obtuvieron conclusiones sobre las variables intensivas, presión y temperatura, así como otras como el flujo, el tiempo o los ratios. Los datos señalaron un claro efecto de la presión sobre el rendimiento de extracción, favoreciéndose a presiones más elevadas en concordancia con los datos de solubilidad de parte de los componentes mayoritarios de los aceites esenciales presentes (Da Cruz Francisco y Sivik, 2002) pero no se correspondería con el comportamiento observado para otras variedades estudiadas por los mismos autores que indicarían un máximo de la solubilidad del pseudocomponente global en la banda de 110-180 bar, probablemente por la influencia de los microcomponentes. En cuanto a la temperatura, se observó una disminución del rendimiento al aumentar la temperatura al aplicarse presiones bajas, pero resultados similares a presiones más elevadas. Estos resultados indicarían la existencia de un punto o zona de cruce, como se ha descrito en otras extracciones supercríticas (Bhupesh et al, 2006; Gokhan et al., 2005; Shamsupur et al, 2002; etc.). Además, se valoró de forma cualitativa la composición/textura de los extractos obtenidos, así como la incorporación de operaciones básicas adicionales para su manipulación. La comparativa con métodos convencionales de extracción, inclinó la eficacia de éstos desde el punto de vista económico, ya que se obtenían extractos de características muy similares o incluso mejores con tecnologías convencionales con un menor coste de explotación. En el caso de la segunda materia prima, se realizaron pruebas según un diseño experimental que tomó como variables principales la granulometría de la muestra, la presión de extracción, la temperatura de extracción, el flujo de CO2 y la masa de CO2 circulada, considerando tres niveles de presión, dos niveles de temperatura, dos flujos distintos y dos tamaños de partícula. Los resultados señalaron una clara influencia de la presión de extracción en el rendimiento, obteniéndose las cinéticas más favorables a presiones más elevadas y un efecto de la temperatura menos marcado y aparentemente dependiente de la presión (a bajas presiones el aumento de la temperatura hizo crecer el rendimiento y a altas presiones, los rendimientos se aproximaron y/o invirtieron). • Estudio a escala de laboratorio de los efectos sinérgicos de la presencia de componentes objetivo sobre la extracción supercrítica La revisión bibliográfica efectuada señaló la novedad tecnológica del estudio de los efectos sinérgicos entre macro y micronutrientes, habiéndose encontrado una única referencia muy reciente en la que se aborde específicamente la discusión de la composición mayoritaria y los micronutrientes en un residuo derivado del procesado de arroz (Bachalandran et al, 2008; Demirbas, 2010). Se estudiaron los efectos sinérgicos de la presencia de componentes objetivo sobre la extracción supercrítica. Las pruebas se realizaron considerando el tamaño de partícula de las materias primas, dado su potencial impacto en el perfil químico de los extractos 199 al afectar a la estructura de las materias primas y la accesibilidad a los macro y micronutrientes presentes en dichas matrices. Para ello, se procedió a realizar un pretratamiento de molturación y posterior tamizado, obteniéndose distintas fracciones de materia prima por tamaños. Se consideraron tres fracciones de tamaños con la primera de las materias primas seleccionadas y se constató una clara influencia del tamaño de partícula sobre el rendimiento de extracción global, dando lugar a diferencias notables. Además, estas investigaciones llevaron a detectar la interferencia de la presencia de sustancias mayoritarias en la recuperación de las sustancias menos abundantes, estableciéndose una influencia negativa clara de la presencia de una de las familias de sustancias mayoritarias en la recuperación de las sustancias minoritarias objetivo. Por la naturaleza de estas sustancias y las características de los procesos de extracción supercrítica, se decidió concentrar los esfuerzos en la segunda especie vegetal. En cuanto a esta brassicacea, la molturación de la materia prima no condujo a resultados muy claros en los primeros ensayos y dada la bioactividad que presentaron algunos de los extractos y las cantidades que representan respecto a la materia prima inicial, se prestó especial atención al estudio de las estrategias para minimizar los efectos negativos de la presencia de algunas sustancias y optimizar las ventajas que la presencia de algunos macrocomponentes junto a los microcomponentes objetivo puede conllevar. En este sentido, se procedió a la incorporación y puesta a punto de un elemento adicional auxiliar así como un pretratamiento físico-químico para facilitar la separación de las fracciones mayoritarias y minoritarias y así favorecer el enriquecimiento en sustancias activas minoritarias. De este modo, se ha identificado una mejora en los rendimientos de extracción conseguidos en cuanto a los micronutrientes objetivo y una bioactividad de los extractos acorde al interés perseguido. Se han obtenido resultados muy interesantes en cuanto a la optimización del procedimiento de pretratamiento a niveles físico, químico y enzimático, reduciendo las proporciones de materia prima inicial necesarios para conseguir resultados similares y la intensificación del proceso de extracción supercrítica, maximizándose la recuperación de la fracción de compuestos minoritarios bioactivos. La caracterización química ha llevado a determinar las concentraciones de un conjunto de compuestos minoritarios testigos y la caracterización “in vitro”, la respuesta en cuanto a apoptosis, consiguiéndose niveles de inhibición muy elevados. Los resultados han mostrado correspondencia entre ambos parámetros, validándose la hipótesis inicial de conseguir extractos con una bioactividad específica en función del contenido en compuestos minoritarios clave. • Identificación del proceso más idóneo para recuperación de sustancias de interés de matrices complejas mediante extracción supercrítica: validación del proceso Se analizaron las informaciones anteriores desde una óptica más amplia y considerando las posteriores necesidades de validación y/o cambio de escala del proceso. De este modo, se evaluó el conjunto de variables consustanciales a cualquier proceso 200 productivo y que condicionan su posterior viabilidad técnico-económica, así como factores más ligados a la implementación del proceso a una escala superior. Para la definición del proceso se tuvieron en consideración los siguientes aspectos: tiempo de preparación de la materia prima, modo de carga de la materia prima, tiempo de presurización, tiempo de despresurización, metodología de post-acondicionamiento de la instalación entre pruebas, etc. Asimismo, se revisaron los factores operativos susceptibles de actuación para la mejora de fenómenos de transferencia energética en cuanto a intercambio de calor. Bajo estas premisas, se definió un proceso de referencia, aplicable a una instalación distinta o de mayor escala que la empleada para el desarrollo, que incluía distintas etapas de tratamiento entre las que se incluía la extracción supercrítica (ESC). El proceso parte de la materia prima fresca, la cual se estabilizó mediante un proceso de secado y para propiciar los mejores resultados en cuanto a la obtención de las fracciones bioactivas de interés, se sometió a molienda y cribado como pretratamientos físicos. Los pretratamientos se complementaron con un proceso químico tras el cual se aplicó la extracción supercrítica previa preparación de la cesta de extracción con la materia prima. Mediante la ESC en las condiciones seleccionadas y de acuerdo a procedimientos avanzados, se obtuvieron las fracciones bioactivas objetivo. Conclusiones: Las investigaciones experimentales realizadas en cuanto al efecto de las variables principales del proceso en la obtención de extractos confirman una notable influencia tanto de la presión como del tamaño de partícula, así como la posible aparición de una zona o punto de cruce en cuanto al efecto de la temperatura. Se ha observado que la ESC es muy ventajosa en la brassicaea, no así en el eucalipto, ya que debido a las interferencias de macrocomponentes arrastrados en la extracción y al coste económico de trabajar con dicha técnica, hacen más rentable un sistema de extracción convencional. En el caso de la brasicácea, el estudio del proceso de extracción y de la interacción macromicrocomponente en la segunda materia prima seleccionada ha llevado a constatar la factibilidad de obtener extractos muy atractivos por sus propiedades bioactivas controlando adecuadamente la preparación de la materia prima y las condiciones de operación en las distintas etapas de proceso. La caracterización de las fracciones experimentales ha permitido relacionar su comportamiento funcional frente apoptosis celular con la concentración en componentes minoritarios testigo presente en los extractos. Ha quedado patente la importancia de los pretratamientos de la materia prima, que se complementan con un proceso químico tras el cual se aplica la extracción supercrítica previa preparación de la cesta de extracción con la materia prima. Mediante la ESC en las condiciones seleccionadas y de acuerdo a procedimientos avanzados, se obtienen las fracciones bioactivas empleando condiciones adecuadas de separación. Por último, como consecuencia de las actividades realizadas, se han identificado nuevas posibilidades de mejora para aprovechar al máximo las posibilidades y ventajas de la tecnología de fluidos supercríticos, que podrán ser la base de nuevos desarrollos. 201 6. CONCLUSIONES GENERALES El éxito que ha representado la ejecución de un proyecto del volumen, ambición científica, innovación y repercusión económica en la competitividad de las empresas del sector alimentario no habría sido posible sin la aprobación del proyecto CENIT Futural. A pesar de las dificultades económicas sobrevenidas de forma generalizada durante su ejecución, las empresas han demostrado un firme compromiso con los objetivos de los proyectos que lideraban y han continuado la ejecución de cada tarea con motivación y entusiasmo. Las preferencias del consumidor han evolucionado hacia un aumento de la demanda de alimentos más cómodos. La mayoría de los consumidores destinan poco tiempo a cocinar, y demandan simplicidad y rapidez en la preparación de los alimentos. El desarrollo de productos listos para su consumo responde a esta demanda. Éstos, además de prácticos, deben mantener sus características sensoriales y nutricionales. Teniendo en cuenta estos factores, la industria agroalimentaria se enfrenta al reto de poner a disposición de los consumidores alimentos con una vida útil larga y con facilidad de uso, y en los que estén limitados los procesos de degradación. Este hecho ha motivado el creciente interés por la aplicación de nuevas tecnologías de tratamiento para preparar productos listos para el consumo. Entre las nuevas tecnologías aplicadas, el procesado por alta presión (AP) ha recibido gran atención por parte de muchas empresas agroalimentarias, de ahí que 3 de las 6 actividades se hayan focalizado en estudiar la posibilidad de aplicar esta tecnología. La alta presión permite la inactivación a temperatura ambiente de microorganismos y enzimas, alterando mínimamente las características sensoriales, nutricionales y funcionales de los productos alimenticios en comparación con las tecnologías convencionales. Las esporas bacterianas son muy resistentes a la alta presión que se aplica actualmente en condiciones industriales. La germinación y crecimiento de esporas puede causar deterioro de los alimentos (por ejemplo, Bacillus y Clostridium sp.) toxiinfección (por ejemplo, Clostridium perfringens, Bacillus cereus) o incluso la formación de neurotoxina (por ejemplo, Clostridium botulinum) que puede causar intoxicaciones graves. Para superar este problema, se planteó la combinación de la alta presión con otras tecnologías de proceso. A este respecto el procesado de alta presión en combinación con temperatura ha demostrado, en diferentes estudios, ser la alternativa más eficaz para inactivar las endosporas bacterianas. Los resultados de los estudios realizados por las empresas participantes (Conservas Cuca, S.A y Grupo Riberebro) en la Actividad 1 en colaboración con el CNTA y ANFACOCECOPESCA han evidenciado el potencial de la alta presión, sola o en combinación con calor, para productos de la pesca y el marisqueo y para productos vegetales. En el caso de la pasteurización por alta presión de productos del mar, no se ha conseguido, en los productos estudiados (atún y berberechos), un valor añadido con la aplicación de esta tecnología, comparándola con la pasteurización térmica en autoclave. Por el contrario, en el caso de la esterilización fruto de la combinación de alta presión y calor en productos vegetales, sí que se consigue mejorar significativamente la calidad de los productos obtenidos. Se abre por tanto una importante vía de desarrollo de nuevos productos utilizando esta tecnología. Sin embargo, para su implantación industrial, todavía es necesario cubrir dos vacíos importantes, que serán objeto de futuros estudios y desarrollos: 202 • La falta de conocimiento sobre los mecanismos de inactivación de las esporas baroresistentes, lo que es un importante obstáculo para el desarrollo de modelos de predicción y herramientas de toma de decisiones, necesarios para que la industria de alimentos aplique los tratamientos adecuados. • La falta de disponibilidad de equipos industriales adecuados. Hasta el momento, sólo existen equipos industriales con volúmenes de hasta 50 L, 700 MPa de presión máxima de trabajo y temperaturas iniciales de hasta 95 ° C. Los resultados de la Actividad 1 permitirán avanzar y dar un empuje para la resolución de estos vacíos. La Actividad 2 constituye en sí misma un buen ejemplo de proyecto colaborativo, que va más allá de la colaboración dentro del sector alimentario, ya que además llega a acercarse al concepto de “cluster”, al incluir la participación de empresas elaboradoras de alimentos, algunas de ellas con producción propia de materias primas, industrias de producción de equipos líderes mundiales en su campo y pioneras de nuevas tecnologías (NCHyperbaric, Metalquimia), una industria de creación y producción de materiales y sistemas de envasado (Sealed Air), organismos públicos y privados de generación y transferencia de conocimiento (centros de investigación, centros tecnológicos, universidades) y una Fundació al servicio de la promoción de una gran industria del país con proyección internacional: la gastronomía. La contribución de la Fundació Alícia ha sido de elevada importancia para conseguir que las nuevas tecnologías aporten aspectos sociales de soporte a grupos con enfermedades o discapacidades físicas, que como consumidores tienen unas necesidades alimentarias especiales. El diálogo entre empresarios, cocineros e investigadores ha permitido aportaciones mutuas en materia de seguridad alimentaria, calidad sensorial, tecnología de los procesos culinarios y de los industriales, procesado mínimo, sistemas de envasado y utilización inteligente de las nuevas tecnologías alimentarias. En esta Actividad han participado dos empresas líderes mundiales en dos nuevas tecnologías alimentarias, hecho que demuestra que los criterios de estas empresas se dirigen hacia una innovación radical orientada a mercado, hacia el establecimiento de alianzas con empresarios innovadores y con generadores de conocimiento, para colaborar en la búsqueda de soluciones para mejorar la competitividad de todos los socios en el entorno de proyectos colaborativos. Las empresas elaboradoras se han preparado para el reto de la exportación de productos de alto valor añadido y alta calidad sensorial. La alta presión ha de representar una ventaja muy importante para acceder a nuevos mercados, exigentes en calidad y en seguridad alimentaria. Por ejemplo, la exportación de jamón curado español a Estados Unidos o de embutidos crudos curados está empezando a ser una realidad con notable impacto económico gracias al concepto de “pasteurización en frio” por alta presión, el único proceso tecnológico de higienización post-envasado disponible en la actualidad que es aceptado por el consumidor. La Actividad pionera de las empresas cárnicas españolas en este ámbito se traducirá en una iniciativa privada que, con el asesoramiento científico de IRTA-CENTA, se ha establecido en la Zona Franca de Barcelona, para proveer servicios de procesado por alta presión a partir de mediados de 2012 a todas aquellas empresas que precisen usar esta tecnología. Estas actividades de servicios a terceros han sido las que han impulsado la aplicación de la 203 alta presión en alimentos en Estados Unidos, abaratando los costes de acceso a esta tecnología y poniéndola también al alcance de las PYMES alimentarias. En una situación en que la seguridad alimentaria será cada vez más un factor de competitividad empresarial, en que el consumidor aprecia el “clean label” y el sabor fresco (“fresh-like”), las altas presiones ocupan un lugar importante, y nuestras industrias están ahora más preparadas para obtener beneficios empresariales fruto de una actitud innovadora que se materializó en su decisión de participar en este proyecto hace cuatro años. La Actividad 3 dedicada a la “pasteurización de alimentos líquidos por alta presión, o en combinación con la alta presión”, se ha centrado en el estudio de las nuevas posibilidades que las tecnologías emergentes de procesado brindan para el desarrollo de nuevos productos alimentarios y en la mejora de la seguridad alimentaria, que otras tecnologías no pueden dar sin comprometer la calidad sensorial y nutricional de los alimentos. El alimento base de la mayor parte de los trabajos realizados por las diferentes empresas y centros de investigación ha sido la leche (y derivados lácteos), aunque también se han estudiado diferentes alimentos líquidos de origen vegetal, como los triturados de tomate o zumos y leches de diferentes orígenes. Tres empresas del consorcio (Danone, Laboratorios Ordesa y Tecnolat), han realizado estudios en diferentes matrices lácteas (leche, leches fermentadas, fórmulas infantiles líquidas y en polvo). En general, los resultados de los trabajos han sido positivos y la tecnología de las altas presiones permite higienizar los alimentos estudiados con una mínima afectación de sus características sensoriales y nutricionales. Sin embargo, en el ámbito de la leche y productos lácteos, las aplicaciones son difíciles de ejecutar por los costes de la tecnología, y si se realiza una valoración coste/ventajas aportadas, entonces es difícil visibilizar su aplicación industrial. En el ámbito de los zumos, leches y preparados tipo gazpacho en base a vegetales, la aplicación de las altas presiones es muy prometedora, y fácilmente aplicable al sistema industrial. Estos trabajos se han realizado principalmente a cargo de la Fundació Alícia. Así en los próximos años, no se tardará en encontrar muchos ejemplos de productos presurizados, especialmente si se popularizan los equipos de altas presiones compartidos o en los que se pueda alquilar una parte de la producción, como ocurrirá próximamente en la Zona Franca de Barcelona. La colaboración entre empresas y centros de investigación (CSIC, IRTA, CENTA, AZTI), ha permitido estudiar en profundidad determinados ámbitos que no pueden ser tratados por separado por parte de las empresas o por parte de los centros de investigación, por la dedicación y los recursos necesarios para su desarrollo. El proyecto no sólo ha facilitado la relación personal y profesional entre diferentes empresas del sector que en muchos casos compiten con los mismos productos en el mercado, sino que también ha permitido el trabajo conjunto entre centros de investigación y tecnológicos que normalmente tienen ámbitos separados y por tanto con una colaboración muy limitada. En la Actividad 4 las empresas participantes han podido comprobar y validar la aplicación de las altas frecuencias (microondas y radiofrecuencias). El uso de las microondas como mecanismo de calentamiento y/o cocción es habitual a nivel doméstico, pero el uso 204 industrial de dicha tecnología es aún escaso. La actividad ha reunido a varias empresas del sector agroalimentario: tres empresas productoras de platos precocinados (Noel Alimentaria, SAU), una de congelados (Ultracongelados Virto, S.A), una de producto esterilizado (Conservas Hijos de Manuel Sánchez Basarte, S.A), una industria de creación y producción de materiales y sistemas de envasado (Sealed Air Packaging. S.L), una Fundació al servicio de la gastronomía (Fundació Alícia), y una empresa del sector lácteo (Danone, S.A.). En esta actividad se ha evaluado la aplicación de las altas frecuencias como alternativa a procesos convencionales, como por ejemplo el escaldado o la pasteurización. Un prototipo ha sido particularmente valorado y patentado por la Fundació Alícia. En este caso concreto se ha reemplazado la combinación potencia vs tiempo de proceso, por temperatura vs tiempo de proceso. Este hecho aporta otro concepto en los hornos microondas abriéndose nuevas perspectivas. Finalmente la participación de un productor de materiales de envases ha permitido validar nuevos materiales con varios alimentos modelo. La aprobación de este Cenit-Futural ha permitido desarrollar una actividad científica intensa con una visión aplicada que permite orientar objetivamente las empresas a las nuevas tecnologías. Todas las empresas han mantenido su compromiso de cumplir con los objetivos establecidos en el proyecto. Se han realizado intercambios constantes con las OPIs involucradas (IRTA y CNTA en esta actividad) acercando aún más la ciencia y la empresa con el fin de fomentar la innovación en este sector industrial. La alta frecuencia supone una ruptura dentro de los procesos industriales térmicos que permite mejorar la sostenibilidad y productividad sin olvidar una mejora, en algunas aplicaciones, de las propiedades sensoriales y nutricionales de los productos tratados. La Actividad 5 es un ejemplo de proyecto colaborativo horizontal, involucrando a toda la cadena de producción en la formación del envase activo. La colaboración va desde la empresa que aporta los agentes o principios activos pasando por el fabricante y transformador del envase hasta su utilización por parte de las empresas cárnicas. La empresa, Grupo Mahou-San Miguel, aporta un subproducto de origen natural para revalorizarlo e incorporarlo en el film y posteriormente en el envase activo. Nanobiomaters transforma el subproducto de origen natural del Grupo Mahou-San Miguel en nanoarcilla activa para envasado, con lo cual se consiguen dos principios activos para el material de envase. El grupo AMCOR, industria dedicada a la creación de sistemas de envasado, ha trabajado incorporando ambos principios activos primero en el film y después en el envase final con el objetivo de aumentar el tiempo de vida útil del alimento en el mercado. ULMA Packaging ha trabajado en el desarrollo de una máquina higiénica para la formación del envase activo y en la transformación del envase hasta que llega al consumidor con el alimento seleccionado. Ha sido importante la contribución del Grupo EROSKI y COVAP tanto en el análisis del producto inicial, como en el envasado y análisis final del alimento para estimar la mejora en el tiempo de vida del producto con los nuevos sistemas de envase activo desarrollados. Finalmente, todo el trabajo se ha podido realizar gracias a la colaboración con organismos públicos y privados y a la transferencia de conocimiento de centros de investigación, centros tecnológicos y universidades. 205 El CENIT Futural permitió abordar un tema innovador y con gran repercusión económica en la competitividad de empresas, tanto por el aprovechamiento de un subproducto de origen natural como por el aumento de vida útil de productos alimenticios en el mercado. Los cambios en el modo en que los alimentos se producen, distribuyen y almacenan reflejan la demanda creciente de una mejora de la calidad y de una ampliación de la duración para alimentos envasados. Los consumidores quieren garantías de que el envase realice su función de proteger la integridad, la calidad, la frescura y la seguridad de los alimentos. Para proporcionar estas garantías se han desarrollado sistemas de envasado activo. Según el Reglamento 1935/2004, los nuevos tipos de materiales y objetos diseñados para mantener o mejorar activamente las condiciones de los alimentos (materiales y objetos activos en contacto con alimentos) no son inertes por su diseño, al contrario que los materiales y objetos tradicionales destinados a entrar en contacto con alimentos. Los materiales y objetos activos en contacto con alimentos están diseñados para incorporar deliberadamente componentes activos destinados a pasar a los alimentos o a absorber sustancias de los mismos. Los materiales y objetos activos en contacto con alimentos pueden modificar la composición o las propiedades organolépticas de los alimentos, pero únicamente si estas modificaciones cumplen las disposiciones comunitarias aplicables a los alimentos, tales como la Directiva 89/107/CEE. En un ambiente en que la seguridad alimentaria será cada vez más un factor de competitividad empresarial, en que el consumidor aprecia la disminución y/o eliminación de conservantes, el envase activo ocupa un lugar importante y nuestras industrias están ahora más preparadas para obtener beneficios empresariales. En la Actividad 6, las tareas realizadas por Biosearchlife, S.L y Soria Natural, S.A respectivamente en colaboración con AINIA han mostrado la viabilidad de la tecnología de fluidos supercríticos para las aplicaciones estudiadas: • Esterilización de matrices alimentarias. A la par se ha verificado la posibilidad de coextracción simultánea de sustancias de interés. Dada la importante influencia de la materia prima, cada tipología de matriz a tratar requeriría de unas condiciones de proceso particulares, por lo que precisaría de un desarrollo en detalle para concretar sus posibilidades y condiciones. • Obtención de extractos con potencial bioactivo de interés. Además se ha verificado como determinados micronutrientes son clave en la bioactividad de los extractos, y por tanto, como procesos orientados a maximizar su presencia, reduciendo las interferencias de otros macrocompuestos, pueden derivar en la obtención de extractos con un mayor potencial. A la vista de las viabilidades indicadas, las posibilidades de mejora abiertas en cada una de estas aplicaciones son amplias, siendo necesario profundizar de manera particular para cada tipología de proceso, y resultando de interés el estudio de aspectos como el aprovechamiento energético o la incorporación de etapas convencionales sinérgicas con la extracción supercrítica. 206 A nivel general, la relación con el resto de las actividades del proyecto en las asambleas y reuniones del comité científico ha llevado a identificar potenciales sinergias a pesar de la aparente distancia temática de esta Actividad 6 con otras más conectadas entre sí. De este modo, a lo largo del proyecto se han identificado aspectos relacionados con procesos extractivos en el contexto de la Actividad 5 sobre los cuales tanto las empresas participantes como el centro tecnológico han ofrecido su experiencia y capacidades para la propuesta de soluciones técnicas. Asimismo, la posibilidad de compartir experiencias y resultados con el resto de las actividades integradas en el proyecto durante las asambleas se ha valorado muy positivamente. Estos encuentros han favorecido los aspectos relacionales tanto entre empresas como entre centros, afianzando lazos previos y propiciando la generación de nuevas oportunidades. 207