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B
Biosaia (revista de
d los másteres de Biiotecnología Sanitaria
a y Biotecnología Am
mbiental, Industrial y A
Alimentaria de la UPO
O)
nºº4 (marzo de 2015)
Póster
Modifica
ación de
e cepas de E. co
oli B parra su uso
o
como he
erramien
nta en experime
e
entos de
e RNA
interfere
ente
Daniell Díaz, Mannuel J Muññoz, Andréss Garzón
Áreaa de Genética. Departamentoo de Biología Molecular e Inngeniería Bioqquímica
Centro Anddaluz de Bioloogía del Desarrrollo (CABD)), Carretera dee Utrera Km 1 41013 Sevillaa
Palabras clavve: OP50, BL21(DE3), HT115(DE3), C. ele
egans, dsRNA
A
R
RESUMEN
M
Motivación: L
Los experimen
ntos de RNA in
nterferente (RNAi) suponen una herramie
enta muy poten
nte para analizzar la función de
llos genes en el nematodo C
Caenorhabditiss elegans. Se
e basa en el siilenciamiento de genes de m
manera selecttiva al incorpo
orar
C
C. elegans R
RNA de doble
e cadena (dssRNA) produccido por la ba
acteria de la que se alim
menta. Mientra
as que para los
e
experimentos de RNAi la b
bacteria emple
eada es la cep
pa de Escherichia coli K HT
T115(DE3), pa
ara el resto de
e técnicas en C.
e
elegans la baccteria emplead
da como fuen
nte de alimento
o es la cepa d
de E. coli B OP50.
O
Las cep
pas de E. coli K y B presenttan
d
diferencias sig
gnificativas en
n su genoma q
que repercuten
n tanto a nivel proteómico ((Yoon et al., 2012)
2
como en
n la composición
d
de metabolitoss (Reinke et al.,
a 2012). Esta
as diferencias pueden verse
e reflejadas en
n el fenotipo d
de C. elegans (Pang y Curra
an,
2
2014), lo que supone un pro
oblema a la ho
ora de comparrar los datos o
obtenidos de e
experimentos e
en los que se hayan emplea
ado
ccepas de E. ccoli distintas co
omo fuente de
e alimento. El diseño de una
a cepa de E. ccoli B con cap
pacidad de pro
oducir dsRNA se
p
postula como una alternativva al uso de HT
T115(DE3).
M
Métodos: Lass cepas de E
E. coli B emp
pleadas como
o base para la construcció
ón de la cep
pa productora de dsRNA sson
B
BL21(DE3) y O
OP50. Se inco
orporará una m
mutación de la
a RNAsa III (degrada dsRNA
A) tanto en BL
L21(DE3) com
mo en OP50, y se
iinactivará el sistema de resttricción EcoB en OP50 med
diante transduccción por fago
o P1 (Thomaso
on et al., 2007
7), y la técnica de
rrecombinación
n mediada porr la recombina
asa de lambda
a red (Datsenkko y Wanner, 2
2000). Todos los
l experimentos se realizarrán
p
paralelamente
e sobre la cepa
a de E. coli K1
12wt como con
ntrol.
R
Resultados: Se ha constru
uido una cepa
a derivada de
e BL21(DE3) con
c
los mismos componen
ntes que le pe
ermiten a HT1
115
((DE3) sintetiza
ar dsRNA. La
a construcción de la cepa de
erivada de OP5
50 se encuenttra en su fase final.
C
Conclusiones
s: La cepa co
onstruida a parrtir de BL21(D
DE3) consta, en
e teoría, de la
a capacidad de
d producir dssRNA, por lo q
que
ffuturos ensayo
os incluirán experimentos d
de RNAi en C
C. elegans com
mparando su uso con el de
e HT115(DE3)). Estos ensayyos
ttambién se rea
alizarán con la
a cepa derivad
da de OP50 una vez que fin
nalice su consttrucción. Los e
experimentos realizados sob
bre
O
OP50 tienen una menor e
eficiencia que
e cuando se realizan sobrre K12wt, y las cepas obttenidas prese
entan diferenccias
ssignificativas e
en la velocidad
d de crecimien
nto, lo cual susstenta el hecho de que las cepas
c
son distintas (Yoon ett al., 2012).
B
BIBLIOGRA
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http://www.bioinfocabd.upo.es/biosa
aia/
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