peptidos natriureticos

PEPTIDOS
NATRIURETICOS
DRA. BIBIANA FABRE
Docente de Bioquímica Clínica I, Área Endocrinología. FFyB. UBA.
Especialista en Bioquímica Clínica, Área Endocrinología. FFyB. UBA
Especialista en Bioquímica Clínica, Área Gestión de Calidad y Auditoria. FFyB. UBA
[email protected]
Antecedentes

1954 Gauer y col. presencia de gránulos densos en células miocárdicas de
aurículas.

1961 Wardener y col postulan la existencia de una hormona natriurética,
inhibidora de la Na-K-ATPasa renal.

1964 se demostró que los gránulos almacenaban una mezcla de
polipéptidos de carácter básico.

1974 Linden y col. efecto diurético por distensión de la aurícula derecha era
debido a la inhibición refleja vagal de nervios renales.

1976 Marie y Guillemot cambios en la ingesta de sodio y agua modificaban
el numero de gránulos en los cardiocitos.

1980 Bold y col. separan las aurículas de un grupo de ratas. Extrajeron el
contenido de los gránulos inyectando el extracto a un segundo grupo de
ratas causando una brusca natriuresis y diuresis. No se produce el mismo
efecto al inyectar extractos ventriculares.

Extractos auriculares contenían un factor
responsable
de
estos
efectos
al
que
denominaron FACTOR NATRIURETICO ATRIAL
(FNA)
Clasificación

ANP (factor natriurético atrial)

BNP (péptido natriurético tipo B)

CNP (péptido natriurético tipo C)
Cardionatrina, atripeptina, auriculina, péptido natriuretico auricular
TNP
Urodilatina
Saldarriaga Giraldo y col. Medicina & Laboratorio 2011; 17:127-144
ORIGEN
Saldarriaga Giraldo y col. Medicina & Laboratorio 2011; 17:127-144
PROHORMONA
ANP
URODILATINA
BNP
CNP
DNP
TNP
Forssmann et al, Histochem
Cell Biol, 1998.
Estructura y Composición química
Saldarriaga Giraldo y col. Medicina & Laboratorio 2011; 17:127-144
PRODUCCIÓN DE ANP
AD
VD
Venugopal J., J Clin Pharm Ther, 2001.
AI
VI
BNP
ANP
Prohormona 108 aa
Prohormona 126 aa
Serino proteasa
COOH 99-126aa ANP
endoproteasa
NH2 1-98aa proANP
ACTIVO
COOH 77-108aa BNP
ACTIVO
VM=2-5 min
1-30aa
PNLD
31-67
79-98
PV
PK
NH2 1-76aa proBNP
SINTESIS
Potter LR et al, Handb Exp Pharmacol, 2009
ANP
BNP
CNP
AURICULAS
VENTRICULOS
HUESO
VENTRICULOS
AURICULAS
CEREBRO
RIÑON
CEREBRO
ENDOTELIO
TEJ ADIPOSO
CEREBRO
(HIPOTALAMO,
SEPTUM)
CORAZON
BNP
glicosilacion
RECEPTORES DE PÉPTIDOS NATRIURÉTICOS
G-protein-gated
inwardly rectifying
KC (GIRK)
channels
Ahluwalia and Hobbs, Trends in Pharmacological Science, 2005.
DEGRADACIÓN DE PÉPTIDOS NATRIURÉTICOS
Potter LR, FEBS J, 2011.
NEP= neprilysin
IDE= insulin degrading enzyme
MECANISMOS QUE REGULAN LA SÍNTESIS
Y LIBERACIÓN DE ANP Y BNP CARDÍACOS
Estímulo mecánico
Estiramiento de la
pared auricular
Hipoxia
Estímulos neuro-endócrinos
noradrenalina
adrenalina
angiotensina II (AT1)
endotelina I
vasopresina
citoquinas
PN centrales
EFECTOS FISIOLÓGICOS DE ANP Y BNP
Carga
Sanchez Sanchez y col. Quimica Clinica 2004; 23 (6) 410-416
FACTORES DERIVADOS DEL ENDOTELIO
EDHF: FACTOR
HIPERPOLARIZANTE
DEL ENDOTELIO
Ahluwalia and Hobbs, Trends in Pharmacological Science, 2005.
CNP y crecimiento (condrocitos)
ANP Y BNP EN INSUFICIENCIA CARDÍACA
CONTROLES,
NYHA CLASS I-IV
E IR PRE Y POST
DIÁLISIS
Clerico et al, Horm Metab Res, 1999.
´LVEF vs. ANF Y BNP
PLASMÁTICOS
INFARTO AGUDO DE
MIOCARDIO
HTA E HIPERTROFIA VENTRICULAR
IZQ,
HT PULMONAR
ANP
BNP (12-14 HS)
ANP y BNP
BNP > HVI concéntrica
BNP
ANP
INSUFICIENCIA CARDÍACA
Nishikimi T. et al, Heart, 2010
proBNP-108/BNP-32
ACCIÓN DE LOS PÉPTIDOS NATRIURÉTICOS EN TEJIDO
ADIPOSO
PERILIPINA
Langin D., Pharmacol Res, 2006.
Schlueter N., Pharm Ther, 2014
ANF EN PATOLOGÍAS ENDÓCRINAS
Hipertiroidismo
ANP y BNP
(Kato et al, 2009)
Hipotiroidismo
ANP y BNP
(Polak et al, 2007)
Aldosteronismo 1º
ANP y BNP
(Kato et al, 2005; Jakubik et al, 2006)
Tumores carcinoides
Embarazo
Mujeres vs Hombres
Nt-proBNP
(Zuetenhorst et al, 2004;
Bhattacharyya, 2008)
Nt-proBNP
(Franz et al, 2009)
ANF EN PATOLOGÍAS ENDÓCRINAS
Diabetes mellitus y síndrome
metabólico
ANP y BNP
(Magnusson et al, 2012)
Acromegalia
Nt-proBNP
(Verhelst J. et al, 2013)
SIADH
ANP y BNP
(Costa K et al, 2009)
Testosterona
Correlación inversa con BNP y NtproBNP
(Chang et al, 2007)
LABORATORIO: PREANALITICA FN
OBTENCION DE LA MUESTRA: VENAS, ARTERIAS, CAPILARES. EN
CUALQUIER MOMENTO DEL DIA.
POSTURA: EXTRACCION EN CUALQUIER POSICION.
TIPO DE ESPECIMEN: SUERO O PLASMA (EDTA, HEPARINA)
CALIDAD DE MUESTRA: HEMOLISIS Y LIPOLISIS PUEDEN CAUSAR ERRORES
EN SU MEDIDA.
ESTABILIDAD: DEGRADADOS IN VIVO EN INVITRO POR PROTEASAS. TRAS
LA CENTRIFUGACION DEBE SER PROCESADO E INMEDIATAMENTE
ALMACENADO A -20°c. BNP, NT-proBNP Y NT-proANP, SON ESTABLES A
TEMPERATURA AMBIENTE.
FACTORES QUE AFECTAN SU CONCENTRACION
-INGESTA RICA EN SODIO (DUPLICAR LA CONCENTRACION)
-EJERCICIO INTENSO
-EDAD 3-5 VECES MAS ALTA EN MAYORES DE 75 AÑOS,
-SEXO FEMENINO VALORES SUPERIORES
METODOLOGIAS



proANP (1-126)
(gránulos)
corina
(serina proteasa)
Nt proANP (1-30) = LANP
EIA
Nt proANP (31-67)=VDP
EIA
Nt proANP (79-98)= KP
Nt proANP (1-98)
ELISA, IRMA
proBNP (1-108)
(ventrículos)
Ruskoaho H., Endocrine Rev, 2003.
Ichiki T., Adv Clin Chem 2013
Nt proANP (1-98)
ELISA, IRMA
ANP 28 (99-126, 2-5 min)
furina
(endoproteasa)
Nt proBNP (1-76)
RIA, EIA, ECLIA
BNP 32 (77-108, 22 min.)
IRMA, RIA, MEIA,Triage®
RIA ANP y BNP
Preparación de la muestra
Depuración de la muestra
(filtro químico)
 Enriquecimiento de trazas
(concentración de la muestra)
 Fraccionamiento de componentes
(gradientes)


Cartuchos SEP-PAK

Liofilización del extracto

Reconstitución con buffer RIA
Sarda et al, Clin Biochem, 1989.
Togashi et al, FEBS Lett, 1989
ELISA proANP (1-98), BNP (8-29), Nt-proCNP
Ac antiFc de oveja
adsorbido en wells
+
Ac de captura (específico)
anti proANP, BNP o Nt-proCNP
(cantidad limitada)
Lavado
+
streptavidina
conjugada con
peroxidasa
18-24 horas, 4ºC
20 min. T amb
5 horas
T amb.
Reacción de color
Biomedica Gruppe, 2009. Website: www.bmgrp.com
Péptido ? de
Standards o
muestras
+
Trazador
biotinilado
(cl)
1 hora, 37ºC
Unión del
conjugado
a biotina
+
Lavado
+
sustrato (TMB)
Triage® BNP Test
Sangre en “sample port”
con filtro que separa GR
de plasma.
Incubación
15 min.
Biosite Diagnostics, 2001. Website: www.biosite.com
En cámara de reacción
plasma + Ac murino
anti-BNP marcado con
colorante fluorescente
unido a fase sólida
[BNP] proporcional a fluorescencia
detectada en Triage® Meter
¡¡MUCHAS GRACIAS!!
REGULACION DE LA SECRECION
Liberados en condiciones basales por el corazón (ANP y BNP), pero estímulos
neuroendocrinos aumentan su liberación.
Uno de los mecanismos fisiológicos que promueven la liberación ANP, tanto in
vivo como in vitro, es el estiramiento del músculo atrial.
Glucocorticoides, acetilcolina, vasopresina, adrenalina, endotelina, oxido
nítrico, estimulan su secreción.
Péptido natriurético atrial (ANP)

Es un péptido de 28 aminoácidos producido en los miocitos auriculares.

Se deriva de un precursor de 151 aminoácidos, el pre-proANP.

Se almacena en gránulos en las aurículas como una pro-hormona, el proANP, de 126
aminoácidos, que al ser liberado es fraccionado por una proteasa de serina, la corina,
produciéndose así los fragmentos N-terminal y el C-terminal, el péptido natriurético atrial o
ANP, que es el biológicamente Activo.

Se expresa y almacena principalmente en gránulos en las aurículas; sin embargo, también se
encuentra en bajas concentraciones en los ventrículos y riñones.

El principal estímulo para la liberación del péptido natriurético atrial es el estiramiento que se
da como resultado del aumento del volumen intravascular.
Péptido natriurético atrial (ANP)

Se comporta como un antagonista del Sistema Renina-Angiotensina. Produce efectos
vasodilatadores, diuréticos y natriureticos al disminuir la absorción renal de sodio inducida
por angiotensina II.

En forma indirecta inhibe la neurotransmisión de noradrenalina, inhibe la secreción de
vasopresina, aldosterona, CRF y PRL.

El ANP controla el equilibrio hidroelectrolítico, regulando el intercambio de agua y electrolitos
a nivel de bilis, saliva, páncreas, riñon e intestino, donde modifica la reabsorción de agua y
sodio.

Actúa como un factor de inhibición del crecimiento, inhibe los procesos de mitosis y
apoptosis e inhibe oncogenes como C-fos y C-jun

Inhibe la actividad simpática regulando el metabolismo de las catecolaminas a nivel de la
terminal presinaptica. Modula el metabolismo de NA a nivel periférico y central (disminuye la
actividad de MAO sin afectar a COMT)
Péptido natriurético cerebral (BNP)

Su nombre deriva por el descubrimiento del mismo a partir de cerebro porcino, que
posteriormente se encontró en altas concentraciones, unas 200 a 300 veces mayor,
en los ventrículos de pacientes y animales sometidos a estrés cardiaco, como ocurre
en la falla cardiaca congestiva o en el infarto de miocardio.

En su forma activa es un péptido de 32 aminoácidos, estructuralmente similar al
péptido natriurético atrial).

Producido principalmente en los miocitos ventriculares, y no se encuentra
almacenado sino que su producción comienza desde el principio con la expresión
de los genes. El precursor pre-proBNP consta de 134 aminoácidos, el cual es
fraccionado para convertirse en proBNP de 108 aminoácidos, el cual posteriormente
fraccionado por una proteasa de serina, la furina, produciéndose dos polipéptidos de
importancia clínica, el residuo inactivo N-terminal de 76 aminoácidos, el Nterminalpropéptido natriurético cerebral o NT-proBNP, y la forma biológicamente
activa de 32 aminoácidos, el BNP o péptido natriurético cerebral.
Péptido natriurético cerebral (BNP)
-EL BNP actúa como regulador del agua, balance electrolítico y de la homeostasis
cardiovascular.
-Su función mas importante intervención en los procesos de regulación de la
expresión génica y de síntesis enzimática y/o proteica relacionados con la
diferenciación (su concentración ventricular es mayor en etapas fetales) y
fundamentalmente con la hipertrofia cardiaca asociada a procesos patológicos y
de sobrecarga.
Péptido natriurético tipo C (CNP)

Secreción constitutiva, se libera a medida que se procesa el propeptido sin
ser almacenado ni exocitado.

Es un péptido vasoactivo que puede funcionar en forma paracrina y
autocrina en el control del tono vascular.

Carece de acción natriuretica y produce potente vasorelajacion en ileo y
recto
CARACTERISITCAS BIOQUIMICAS
MECANISMOS DE ACCION