1476963 - Instituto Politécnico Nacional

V Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica
XVI Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica
VI Jornadas Científicas de Biomedicina y
Biotecnología Molecular
Clave: 1476963
ANÁLISIS SOBRE LOS EFECTOS DE MOVILIDAD ESPERMÁTICA INDUCIDA
POR EL ACEITE DE LA SEMILLA DE AGUACATE Persea americana EN RATON
María Elena, Pahua-Ramos; Alicia, Ortiz-Moreno; Germán, Chamorro-Cevallos; Leticia,
Garduño-Siciliano, M. Marcela, Hernández-Ortega
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional. Prolongación de
Carpio y Plan de Ayala s/n. Col. Plutarco Elías Calles. Delegación Miguel Hidalgo. C. P.
11340. México, D. F.
[email protected]
Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F.
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INTRODUCCIÓN
El aguacate Persea americana, es el fruto del árbol del mismo nombre, perteneciente a la
familia de las Lauráceas originario de Mesoamérica, que abarca las regiones de México y
Guatemala (Barrientos y García, 1996)
El termino ahuacatl, más comúnmente escrito aguacate, es usado desde México hasta Costa
Rica y en las Antillas de habla hispana. La palabra original ahuacatl suele emplearse en
aquellas zonas de México donde el náhuatl predomina sobre el idioma español. Entre sus
muchas variedades se tiene la Hass, que es la de mayor producción en el ámbito mundial y
en México. Su sabor, textura y propiedades alimenticias han cautivado a innumerables
países que con gusto lo han adoptado, como Francia y Japón.
Los principales productores hoy día son: México, Indonesia, Brasil, Estados Unidos,
Australia, Israel, China, Kenia, Sudáfrica y España.
Este fruto es de suma importancia comercial para México por los beneficios económicos
que proporciona, pues en el 2006 ocupó el primer lugar de la producción a nivel mundial
con más de 1072363.1 toneladas anuales (SAGARPA, 2006).
Aproximadamente del 3% de la producción de aguacate es industrializado para su
exportación; la semilla representa aproximadamente del 15 al 16% en peso del fruto
(Ramos, 1999), de su industrialización actual resultan más de 483,000 toneladas de semilla,
mismas que son desechadas sin aprovechamiento alguno.
La semilla de aguacate tiene un contenido de aceite entre el 2.4 al 2.8 % aproximadamente,
el cual es utilizado en la industria cosmética por sus cualidades en contenidos de ácidos
grasos para elaborar cremas, shampoo y tratamientos capilares (Bora et al., 1991). En 1997
Carriles describió algunas características de este aceite y lo comparó con el aceite obtenido
de la semilla de mamey concluyendo que este aceite puede ser utilizado de la misma forma.
El aguacate ha sido utilizado desde épocas precolombinas por sus efectos benéficos a la
salud, se dice que la energía proteínica del fruto y la combinación con las sales minerales le
dan propiedades afrodisíacas, esta propiedad se describió en 1576 por el médico Francisco
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Hernández ya que los indígenas denominaban a este fruto “ahuacatl” que significa
“testículo” en alusión a la morfología que adopta este fruto cuando pende del árbol y en la
actualidad se sigue utilizando con este fin y se dice que este efecto es mayor en su semilla
de la cual no se ha realizado ninguna investigación científica donde se apoye esta creencia.
(Alonso, 2004)
La espermatogénesis, es un proceso eficiente e importante para la continuación de las
especies, una de sus características es que tiene una gran resistencia al daño. Este evento
tiene lugar en los túbulos seminíferos, que miden aproximadamente 200 mm de diámetro en
ratón y se estima que existen de 15 a 20 túbulos seminíferos en cada testículo, con una
longitud total de 2 metros. Dentro de los túbulos seminíferos las células germinales están
asociadas en una arquitectura altamente organizada y preestablecida. Existen tres
principales fases en la espermatogénesis: En la primera, fase mitótica, la espermatogonia
prolifera para incrementar en número y genera espermatocitos primarios. La segunda fase
es la meiosis en la que los espermatocitos primarios experimentan la recombinación de la
información genética y genera espermátides. La tercera fase es conocida como
espermiogénesis, donde complicados procesos de diferenciación resultan en la morfología
característica especie-específico (Monesi, 1982). Estas células en conjunto son llamadas
células de la línea espermatogénica. En ratones, un ciclo espermático completo dura 35 días
(Franca et al., 1998). El proceso de espermatogénesis es muy productivo, teóricamente una
espermatogonia es capaz de producir 4096 espermatozoides maduros en ratas (Russel et al.,
1990). Durante el proceso de desarrollo, las células de la línea espermatogénica son
mantenidas por las células de Sertoli, que responden a muchos factores como la hormona
folículo estimulante (FSH), luteinizante (LH) y andrógenos (Monesi, 1982).
Con la finalidad de determinar si el aceite de la semilla de aguacate tiene propiedades sobre
los parámetros espermáticos, se realizó un estudio en ratones, a los cuales se les administró
con aceite de semilla de aguacate durante 35 días; posteriormente se les evaluó la
concentración, movilidad e inmovilidad espermática. El porcentaje de movilidad
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espermática, mostró una diferencia significativa de 19.8 % a dosis de 62.5 mg/kg con
respecto al grupo testigo. Sin embargo el porcentaje de espermatozoides inmóviles y en la
concentración no hay diferencias significativas con respecto al grupo testigo. Podemos
concluir que el aceite de la semilla de aguacate disminuye la movilidad espermática a una
dosis de 62.5 mg/Kg, Sin afectar aparentemente la espermatogénesis.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Se emplearon semillas de aguacate de la variedad Persea americana, las cuales se
deshidrataron a una temperatura de 40 °C durante 48 horas; posteriormente se redujeron de
tamaño en un molino de martillos, hasta obtener un polvo fino (tamiz 20).
Extracción del aceite
La extracción de aceite se realizó por el método Rochwood descrito por Gómez (1978), el
cual consistió en la inmersión de la muestra en cloroformo durante 6 horas con agitación
constante, se filtró y posteriormente el aceite se recuperó por evaporación en un rotavapor.
Estudio con aceite de semilla de aguacate
El vehículo que se utilizó fue aceite mineral NF55. Para la preparación de las diferentes
dosis de aceite de semilla de aguacate se realizó de la siguiente manera: se coloco en un
matraz aforado de 10 mL el peso correspondiente de la dosis a administrar (31.3 mg, 62.5
mg y 125 mg) y se aforó con aceite mineral.
Material biológico
Se utilizaron ratones machos CD-1 de aproximadamente 8 semanas de edad de un peso
aproximado de 25-35 g, procedentes del bioterio del CINVESTAV SUR, los cuales se
acondicionaron en jaulas metálicas a temperatura de 23 ± 1° C, ciclos de luz oscuridad de
12 horas y humedad relativa de 60%; los animales recibieron alimento Lab Rodent 5001 y
agua ad libitum, durante el transcurso del tratamiento.
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Viabilidad de espermatozoides
Para este estudio se administraron a ratones machos de la cepa CD-1 por vía oral durante 35
días; los cuales fueron divididos en 4 grupos de 8 animales cada uno. Los grupos se
dividieron de la siguiente manera:
Aceite de semilla de aguacate:
™ Grupo 1: Testigo: placebo constituido por aceite mineral
™ Grupo 2: administrados con una dosis de 31.3mg/ Kg de peso de aceite de semilla
de aguacate
™ Grupo 3: administrados con una dosis de 62.5mg/ Kg de peso de aceite semilla de
aguacate
™ Grupo 4: administrados con una dosis de 125 mg/ Kg de peso de aceite de semilla
de aguacate
Al término del tratamiento los ratones fueron sacrificados y se disectaron los órganos
sexuales (testículo, epidídimo y vesícula seminal). Se separó el conducto deferente (lugar
de almacenamiento de los espermatozoides maduros) y la cola de la cabeza del epidídimo;
el conducto deferente y la cola del epidídimo se limpiaron
para evitar que la grasa
interfiera con la lectura y la obtención de la suspensión de espermatozoides. Posteriormente
se retiró el tejido conectivo que recubre la cola del epidídimo y se exprimió el contenido
espermático de la cola junto con el del conducto deferente en un tubo eppendorf, se le
adicionó 500 µl de solución salina isotónica para obtener la suspensión de espermatozoides.
Posteriormente, se homogeneizó la suspensión, tomándose una alícuota, que se depositó en
un porta objetos para ser observada en el equipo TOX-IVOS en donde se evaluaron los
siguientes parámetros: Concentración espermática, movilidad y viabilidad (Peñuelas et al.
1997). Los resultados obtenidos fueron analizados por una prueba de análisis de varianza
(ANOVA).
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RESULTADOS
Los resultados de la administración del aceite de la semilla de aguacate sobre el porcentaje
de movilidad espermática se muestran en la Figura 1.
70
60
% de células
50
TESTIGO
40
31.3 mg/kg
30
62.5 mg/kg
125 mg/kg
20
10
0
MOVILES
INMOVILES
Figura 1. Efecto del aceite de semilla de aguacate sobre la movilidad espermática en
ratón
Diferencia significativa con respecto al grupo testigo p<0.05 n=8 ANOVA
En esta figura se observa una disminución en el porcentaje de espermatozoides móviles
(19.8 %) a una dosis administrada de 62.5 mg/Kg de aceite de semilla de aguacate con
respecto al grupo testigo.
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.
Por otro lado, en la Figura 2 donde esta representada la concentración espermática, no se
observa una diferencia estadísticamente significativa de los ratones administrados con
aceite de semilla de aguacate con respecto al grupo testigo, esto indica que el total de
espermatozoides no se ven afectado por la administración del aceite de la semilla del
aguacate durante el ciclo de la espetogénesis del ratón.
8
7
6
TESTIGO
M/ml
5
31.3 mg/kg
4
62.5 mg/kg
3
125 mg/kg
2
1
0
CONCENTRACION
Figura 2. Efecto en la concentración espermática de ratones administrados con aceite
de semilla de aguacate.
n=8 ANOVA
En esta figura se ilustra la concentración espermática de ratones administrados con aceite
de semilla de aguacate durante 35 días en la cual no muestra diferencia significativa con
respecto al grupo testigo.
En la Figura 3 observamos que el peso relativo de los órganos sexuales del ratón no se ven
afectados por la administración del aceite de semilla de aguacate, ya que los pesos al final
del estudio no muestran diferencia significativa con respecto al grupo testigo, por lo que
podemos asumir que no se ven afectados por la administración de esta sustancia.
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P eso relativo (% )
1
0.8
TESTIGO
0.6
31.3 mg/kg
0.4
62.5mg/kg
125 mg/kg
0.2
0
EPD
TEST
VES
Figura 3. Efecto del aceite de semilla de aguacate sobre los pesos relativos de los
órganos reproductores en ratón.
n=8 ANOVA
EPD = Epidídimo
TEST= Testículo
VES= Vesícula seminal
En la Figura 3 se observa que no hay diferencia significativa con respecto al grupo testigo
en ninguno de los pesos relativos de los órganos sexuales de los ratones administrados con
aceite de semilla de aguacate
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DISCUSIÓN
Las funciones sexuales del aparato reproductor masculino en ratón se pueden ver alteradas
por la acción toxica de alguna sustancia, como es sabido cuando la espermatogénseis (que
consiste en la diferenciación morfológica de las espermátides en espermatozoides) a
finalizado; los espermatozoides son liberados hacia el lúmen de los tubos seminiferos para
ser arrastrados por lúmen tubular hacia el epidídimo y conforme el espermatozoide alcanza
la cola del epidídimo, adquiere la capacidad de moverse en una dirección progresiva,
gracias a la formación de puentes disulfuro de la parte media del espermatozoide. Durante
la administración del aceite de semilla de aguacate el porcentaje de movilidad espermática
es disminuida a una dosis de 62.5 mg/Kg, lo cual nos indica que se esta afectando al
epidídimo que es donde el espermatozoide adquiere la motilidad.
En lo que se refiere a la concentración espermática, no se observa una diferencia
estadísticamente significativa de los ratones administrados con aceite de semilla de
aguacate con respecto al grupo testigo, esto indica que el total de espermatozoides no se
ven afectado por la administración del aceite de la semilla del aguacate durante el ciclo de
la espetogénesis del ratón. Por lo tanto la creencia de que aumenta la potencia viril no es
totalmente cierta, sin embargo se necesita realizar más estudios de los componentes de la
semilla de aguacate para abarcar más estudios y validar esta afirmación.
En lo referente al peso relativo de testículo, epidídimo y vesícula se puede notar que no
hubo cambios significativos en ninguna de las dosis administradas con aceite de semilla de
aguacate con respecto al grupo testigo, por lo que se puede concluir que este aceite no tiene
influencia sobre estos parámetros.
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CONCLUSIONES
* La administración del aceite de la semilla de aguacate a la dosis de 62.5 mg/Kg.,
disminuyó significativamente la movilidad espermática.
* La concertación espermática no se ve afectada por la administración del aceite de la
semilla de aguacate en las dosis probadas, durante el ciclo de la espermatogénesis.
* La administración del aceite de la semilla de aguacate no afecta el peso de los órganos
sexuales en ninguna de las dosis probadas en los ratones.
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REFERENCIAS INFORMÁTICAS
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