17.1. Introducción 17.2. Principios básicos de la seguridad biológica

Normas de seguridad
Núria Borrell
Xavier Mesquida
Pedro Alomar
©2001 Revista Iberoamericana de Micología - ISBN: 84-607-3050-6
17.1. Introducción
El nivel de bioseguridad laboral sigue siendo
una área de especial interés para el personal que trabaja en un laboratorio de Microbiología clínica.
El manejo y procesado de las muestras clínicas
implica el aislamiento de un gran número de agentes
infecciosos, muchos de los cuales, sobre todo los
hongos, tienen gran facilidad para formar una suspensión aérea a partir del medio de cultivo. En la
naturaleza, la mayoría de los hongos filamentosos
desarrollan estructuras que se dispersan en el aire
(conidios, cuerpos fructíferos aéreos o artroconidias) y pueden permanecer en el ambiente durante
períodos prolongados de tiempo, resistiendo a la
desecación.
Entre las infecciones adquiridas en el laboratorio la infección fúngica representa el 9%, en su
mayoría debida a hongos dimórficos [1]. Porcentaje
no despreciable teniendo en cuenta la baja frecuencia de aislamiento de estos microorganismos.
Además de estas, otras muchas infecciones fúngicas
pueden ser adquiridas en el laboratorio, constituyendo un riesgo ocupacional bien reconocido para los
micólogos [2].
Sin embargo, el riesgo de adquisición de
infección en los laboratorios puede verse minimizado con el empleo de un conjunto de normas de seguridad, basadas tanto en el método de procesamiento
de la muestra como en el uso de un equipamiento de
protección personal.
La ruta de transmisión es uno de los elementos más fáciles de considerar a la hora de establecer
unas normas de bioseguridad. La vía respiratoria y
el contacto directo con piel y mucosas son las vías
más comunes para la infección fúngica en el laboratorio.
17.2. Principios básicos de
la seguridad biológica
17.2.1. Clasificación de los agentes
biológicos por su grupo de riesgo
El determinante más importante en el riesgo
biológico es la patogenicidad del microorganismo.
Cada agente infeccioso tiene asignado un grupo de
riesgo en función de su virulencia (historia de infección adquirida en la comunidad), su potencial epidémico, la dosis requerida para iniciar la infección
(dosis infectiva), la ruta de infección o de transmisión (tanto en el laboratorio como en la comunidad),
el espectro de huéspedes susceptibles incluyendo los
reservorios animales y sus vectores, la viabilidad del
agente infeccioso en el entorno del laboratorio y la
existencia de tratamiento [3].
Se define como agente biológico de:
Grupo 1: Aquel que resulta poco probable que
cause una enfermedad en el hombre.
Grupo 2: Aquel que puede causar una enfermedad
en el hombre y puede suponer un peligro
para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y
existiendo generalmente profilaxis y tratamiento eficaz.
Grupo 3: Aquel que puede causar una enfermedad
en el hombre y puede suponer un peligro
para los trabajadores, con riesgo de que
se propague a la colectividad y existiendo
generalmente profilaxis y tratamiento eficaz.
Grupo 4: Aquel que causando enfermedad grave en
el hombre supone un serio peligro para
los trabajadores, con muchas probabilidades que se propague a la comunidad y sin
que exista generalmente una profilaxis y
un tratamiento eficaz.
En la Tabla 17.1 se presenta una lista de distintos hongos, clasificados en función de su riesgo
de infección y su capacidad alérgica, según la normativa española vigente, descrita en el Real Decreto
664/1997 [4].
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Normas de seguridad
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Tabla 17.1. Clasificación de los hongos en grupos de riesgo según el Real Decreto 664/1997 [4].
Hongo
Grupo
2a
3
2a
3
2
3a
2a
2a
2
2
2a
2
2
3
3
2
2
2a
2
3
2a
2
2
2
2
2
a: Posibles efectos alérgicos
17.2.2. Niveles de contención
La seguridad biológica se fundamenta en tres
elementos: las técnicas de laboratorio, el equipo de
seguridad o barreras primarias y el diseño de la instalación o barreras secundarias [3].
El término “contención” se emplea para describir los métodos que hacen seguro el manejo de
materiales infecciosos en el laboratorio, para reducir
al mínimo la exposición del personal. Se suelen describir cuatro niveles de contención o seguridad biológica, que consiste en la combinación, en menor y
mayor grado, de los tres elementos de seguridad
biológica descritos (técnicas de laboratorio, barreras
primarias y barreras secundarias). En el caso concreto del área de Micología las medidas descritas
para nivel de contención 2 son las adecuadas, a
excepción de aquellos casos en que se conozca la
identidad de la cepa fúngica y se corresponda con
un hongo dimórfico (Blastomyces dermatitidis,
Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum,
Paracoccidioides brasiliensis) o con Cladophialophora bantiana que requerirían nivel de contención
3 (Tabla 17.1). Todas ellas son las que se describen
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Aspergillus fumigatus
Blastomyces dermatitidis (Ajellomyces dermatitidis)
Candida albicans
Cladophialophora bantiana (Xylohypha bantiana, Cladosporium bantianum o trichoides)
Candida tropicalis
Coccidioides immitis
Cryptococcus neoformans var. neoformans (Filobasidiella neoformans var. neoformans)
Cryptococcus neoformans var. gattii (Filobasidiella bacillispora)
Emmonsia parva var. parva
Emmonsia parva var. crescens
Epydermophyton floccosum
Fonsecaea compacta
Fonsecaea pedrosoi
Histoplasma capsulatum var. capsulatum (Ajellomyces capsulatus)
Histoplasma capsulatum var. duboisii
Madurella grisea
Madurella mycetomatis
Microsporum spp.
Neotestudina rosatii
Paracoccidioides brasiliensis
Penicillium marneffei
Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boidii)
Scedosporium prolificans (inflatum)
Sporothrix schenckii
Trichophyton rubrum
Trichophyton spp.
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en los siguientes Apartados.
17.3. Normas generales de seguridad
biológica
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En nuestro país, la protección de los trabajadores frente a los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos está regulada por el Real
Decreto (RD) 664/97 y la adaptación contenida en
la Orden de 25 de marzo de 1998 [4]. Según este
decreto el responsable inmediato de la Seguridad y
las Condiciones de Trabajo en el Laboratorio es el
jefe del laboratorio. Debe supervisar y mantener
actualizado el Manual de Seguridad propio que
debe ser entregado a todos los trabajadores del laboratorio.
Las normas generales son comunes para las
distintas áreas del laboratorio con nivel de contención 2 y de obligado cumplimiento en cualquiera de
ellas [3].
Figura 17.1. Señal de peligro biológico.
ordenada.
• La Unidad deberá disponer de un lavabo para el
•
17.3.1. Medidas generales
• El acceso al laboratorio está limitado a personal
autorizado.
• El personal del laboratorio debe implicarse en el
cumplimiento de las normas de seguridad.
• Las puertas de acceso al laboratorio y al área de
•
•
•
•
•
Micología debe estar debidamente marcada con
la señalización internacional de riesgo biológico
(Figura 17.1) y su nivel de contención biológica,
que en el caso del área de Micología se corresponde con el nivel 2 (NST2). También se señalizarán los congeladores y refrigeradores
utilizados para guardar microorganismos de riesgo de tipo 2.
Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas para mantener la adecuada contención biológica.
El laboratorio estará separado del pasillo de circulación por un vestíbulo.
El laboratorio debe ser aireado regularmente.
El aporte de aire nuevo será como mínimo de
60 m3 por persona y hora.
Todas las superficies de trabajo se limpiarán y
desinfectarán diariamente y siempre que se produzca un derrame. Los residuos y muestras peligrosas que van a ser incinerados fuera del
laboratorio deben ser transportados en contenedores cerrados, resistentes e impermeables,
siguiendo las normas específicas para cada tipo
de residuo (ver más adelante).
El área del laboratorio debe permanecer limpia y
•
•
•
•
•
•
•
•
lavado de las manos que funcionará presionando
con el codo o con el pie.
El transporte de muestras dentro o entre laboratorios se realizará de tal manera, que en caso de
caída, no se produzcan salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo en cajas herméticas o neveras transportables. Estas deberán ser rígidas y
resistentes a los golpes, disponer de materiales
absorbentes en su interior y de fácil desinfección. Deberán estar rotuladas de forma oportuna
y no podrán utilizarse para otros fines. Bajo ningún concepto se transportarán muestras en
mano.
Todo el personal debe poner especial cuidado en
evitar el contacto de la piel con materiales
potencialmente infecciosos. Para ello deben
usarse guantes cuando se manipulen muestras o
cultivos que contengan posibles patógenos fúngicos. Los guantes siempre serán desechados
antes de salir del área de trabajo. Jamás se saldrá
de la misma con los guantes puestos, ni se cogerá con ellos el teléfono, las peticiones, etc.
Inmediatamente después de quitarse los guantes,
se realizará un lavado de manos.
Se usarán gafas protectoras y mascarillas faciales si existe riesgo de salpicaduras o aerosoles.
Los derrames y accidentes serán informados
inmediatamente al supervisor o jefe del laboratorio y se harán constar por escrito.
Está rigurosamente prohibido pipetear con la
boca.
En la zona de trabajo no debe colocarse material
de escritorio ni libros ya que el papel contaminado es de muy difícil esterilización.
Es necesario disponer de autoclave.
Las centrífugas deben ser de cierre hermético
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Normas de seguridad
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(sistema aerosol free) y con tubos de seguridad.
• En ambos casos su apertura sólo deberá hacerse
en cabina de bioseguridad de clase II.
• En el caso de trabajar con aislamientos fúngicos
17.3.2. Higiene
• El personal con el cabello largo debe llevarlo
recogido.
• Comer, beber, fumar y aplicarse cosméticos está
17.3.3. Objetos punzantes y cortantes
• Las agujas, jeringas y bisturíes, deben ser dese-
chados exclusivamente en contenedores especiales diseñados para este propósito.
17.4. Técnicas de laboratorio
en el área de Micología
• Todos los cultivos de hongos (especialmente los
hongos con micelio aéreo) y muestras clínicas
serán manejadas en una cabina de bioseguridad
de clase II, para evitar la contaminación del
laboratorio y del personal. Es permisible el
manejo de cultivos de levaduras en la mesa de
trabajo del laboratorio aunque siempre tratados
como material infeccioso.
• Las placas con medios de cultivo para hongos
deben ser selladas, para evitar su apertura accidental mediante cinta adhesiva permeable al oxígeno que no pierda esta propiedad en una estufa
de incubación con ambiente húmedo (Scotch
Nº 483).
• En caso de utilización de medios de cultivo en
tubo, estos deberán disponer de tapón de rosca
de seguridad.
a)Cualquier medio de cultivo que deba incubarse más de tres días debe ser sellado y no abierto sin antes inspeccionar la presencia de
formas miceliares.
b)Ante la apertura de forma accidental de cualquier placa con la presencia de un hongo filamentoso, esta debe ser rápidamente cerrada y
manipulada en una campana de bioseguridad
para su examen microscópico. La presencia o
ausencia de estructuras conidiales en el
momento de la exposición debe ser tenida en
cuenta para poder tomar medidas médicas
sobre el incidente.
El transporte de este tipo de hongos dimórficos sistémicos debe realizarse bajo las condiciones
estrictas descritas para los mismos (ver más adelante), ya que los conidios infecciosos pueden formarse
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formalmente prohibido en el área de trabajo del
laboratorio, así como el almacenamiento de
comida o bebida.
• El personal debe lavarse las manos frecuentemente durante las actividades rutinarias, tras
acabar la jornada laboral y siempre antes de
abandonar el laboratorio. Se utilizará jabón antiséptico y el secado se realizará con papel.
• Las heridas y cortes en las manos, si se producen
el laboratorio, se comunicarán al responsable de
la Sección así como al supervisor, que lo registrará haciendo constar todas las circunstancias.
Las heridas serán convenientemente vendadas
antes de ponerse los guantes.
dimórficos conocidos, las precauciones a seguir
son sencillas si se dispone de condiciones de
nivel de contención 3. En su defecto, sellar las
placas con cinta adhesiva y reservar su apertura
sólo en cabina de bioseguridad de clase II. No
hacer preparaciones con cinta adhesiva para su
observación microscópica, ni cultivos en porta.
Lo aconsejable en este caso es separar una porción de la colonia, para su montaje en porta, en
la cabina de bioseguridad de clase II.
• En ningún caso debe descartarse la posibilidad
que se trate de un hongo dimórfico sistémico.
Por ejemplo, Coccidioides immitis es a menudo
considerado hongo de crecimiento rápido no
productor de una masa micelial pigmentada; sin
embargo, en algunos casos puede producir una
pigmentación rosada o verdosa. Sus artroconidias pueden estar ausentes en su crecimiento en
ciertos medios de cultivo, como en aquellos que
contienen cicloheximida, pero sí están presentes
en otro tipo de medios de cultivo.
Por otro lado, la ausencia de macroconidias
características de Histoplasma capsulatum, tampoco debe descartar la posibilidad que se trate de
este tipo de hongo, dado que pueden ser de aparición tardía (además, se cree que probablemente
son las microconidias las responsables de la
infección por transmisión aérea). Todo crecimiento de hongo filamentoso en medio con
cicloheximida con hifas estériles, especialmente
si son cortas, debe ser considerado con alta capacidad infectiva hasta que no se demuestre lo
contrario.
• El mayor problema de seguridad en el laboratorio al trabajar con hongos dimórficos no lo
constituye el área de Micología, donde probablemente se trabaja siguiendo una pautas de bioseguridad adecuadas, sino las otras áreas del
laboratorio donde se procesará la misma muestra
para estudio bacteriológico. En este caso pueden
seguirse dos tipos de conductas:
Normas de seguridad
durante su transporte y constituir un riesgo para
quien lo transporta o recibe el aislamiento.
17.5. Medidas de barrera primaria
• Existen microorganismos que, a pesar de ser
dimórficos, no suelen constituir un riesgo infeccioso por medio de aerosoles como es el caso de
Sporothrix schenckii; sin embargo, es un patógeno potencial tras inoculación subcutánea o en
contacto con mucosa ocular. En este caso concreto, al no constituir un riesgo infeccioso por
vía aérea, podría ser procesado en un nivel de
contención 2.
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También se ha sugerido que los hongos
dematiáceos pueden constituir riesgo de infección
por vía respiratoria en su forma micelial, dada su
capacidad infectiva, en pacientes inmunodeprimidos
tras contacto con los mismos en la naturaleza.
A pesar de que la mayoría de los restantes
hongos oportunistas y saprofitos, no parecen constituir un riesgo de infección para el personal de laboratorio inmunocompetente, la dispersión de las
conidias en el laboratorio puede producir reacciones
de tipo alérgico, así como contaminación de los
medios de cultivo. Por tanto para proteger al trabajador como al resto del trabajo del laboratorio,
deben evitarse grandes exposiciones al ambiente,
abriendo tan sólo los medios de cultivo positivos en
cabinas de bioseguridad clase II.
• El vertido de todo material infeccioso debe reali-
zarse en recipientes identificados como contenedores de material infeccioso, para que puedan
ser decontaminados apropiadamente.
Están constituidas por los equipos de protección personal y las cabinas de seguridad biológica
[3].
17.5.1. Equipos o prendas
de protección personal
A todo el personal que trabaje en una Unidad
de Micología se aconseja respete las siguientes
recomendaciones:
17.5.2. Cabinas de seguridad biológica
Son cámaras de circulación forzada que,
según sus especificaciones y diseño, proporcionan
diferentes niveles de protección. Es necesario distinguir entre las campanas de extracción de gases, las
cabinas de flujo laminar y las cabinas de seguridad
biológica.
La campana de gases o vitrina extractora de
gases es un recinto ventilado que captura los humos
y vapores procedentes de las manipulaciones de los
productos químicos empleados en el laboratorio.
Si bien constituye un equipo muy útil en la contención de riesgo químico, no ofrece protección alguna
frente a riesgos biológicos.
Las cabinas de flujo laminar son recintos
que emplean un ventilador para forzar el paso de
aire a través de un filtro HEPA (High Efficiency
Particulate Air) barriendo la superficie de trabajo.
El flujo de aire puede ser vertical u horizontal. Estas
cabinas ofrecen protección únicamente al material
que se maneja en su interior, pero nunca al operador
por lo que no son recomendables para el trabajo con
material biológico. Sin embargo, es un instrumento
Recomendaciones para la protección del personal de laboratorio:
• No se recomienda el uso de lentillas durante el trabajo en el laboratorio.
• Los guantes constituyen la medida de barrera más empleada para la protección de manos:
- Las manos deben lavarse obligatoriamente al quitarse los guantes.
- Sólo deben emplearse para protección contra riesgos biológicos y físicos (calor o frío), pero no para otras tareas
(manejar volantes, teléfono, abrir puertas, etc.).
• La mascarilla sólo tiene utilidad para protección frente a polvo (partículas), aerosoles, gases y vapores químicos.
• La bata o pijama como vestuario de protección personal:
- No debe salir fuera de su lugar de uso (cafetería, calle, etc.).
- Nunca deben ser lavados fuera del recinto hospitalario.
- No es aconsejable el empleo de ropa de calle que aumente la superficie corporal expuesta (pantalones cortos, sandalias, etc.).
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Normas de seguridad
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útil en las denominadas “zonas limpias” como pueden ser las destinadas a vertido de medios de cultivo,
preparación de reactivos que deban ser estériles, etc.
Las cabinas de seguridad biológica (CSB)
son recintos ventilados diseñados para limitar al
máximo el riesgo del personal del laboratorio
expuesto a agentes infecciosos. Especialmente porque muchas de las actividades realizadas en el laboratorio implican la formación de aerosoles.
Estos equipos tiene como objetivo principal proporcionar una zona de trabajo que minimice la probabilidad que una partícula transportada por el aire
tienda a escapar hacia el exterior de la cabina
pudiendo contaminar al operario y la zona que le
rodea. Además, algunas de ellas, ofrecen protección
al material que se manipula.
CSB Clase I
Son cámaras cerradas con una abertura al
frente para permitir el acceso de los brazos del operador. El aire penetra por este frontal, atraviesa la
zona de trabajo y todo él sale al exterior a través de
un filtro HEPA. La velocidad de flujo del aire es de
unos 4,4 m/s. Son apropiadas para manipular agentes biológicos de los grupos 1, 2 y 3. La mayor desventaja que presentan es que no proporcionan
protección al material con el que se trabaja, no evitando que este se pueda contaminar. Por lo tanto se
desaconseja su uso para el trabajo en el área de
Micología.
CSB Clase II
Se diferencian de las anteriores porque,
además de ofrecer protección al operario y a su
entorno, ofrecen protección al producto frente a la
contaminación. La superficie de trabajo está bañada
por aire limpio que ha atravesado un filtro HEPA
(Figura 17.2). La salida de aire se produce a través
de otro filtro HEPA. Son válidas para el manejo de
agentes biológicos de los grupos 1, 2 y 3, entre los
que incluyen los hongos y por tanto las recomendadas para el laboratorio de Micología. Existen varios
tipos de cabinas de Clase II según sus características
Figura 17.2. Cabina de seguridad biológica de clase II A.
de construcción, flujo de aire y sistema de extracción.
Clase II-A: Expulsa el aire filtrado al laboratorio o
puede ser conducido fuera de él y recircula en un 70%.
Clase II-B1: Expulsa el aire filtrado al exterior del
laboratorio y recircula el 30%.
Instalación de la CSB:
1. Debe situarse lo más lejos posible de las rejillas de
aire acondicionado, campanas de gases, puertas y
zonas de mucho tránsito de personal, que puedan
interferir en el flujo laminar.
2. Las ventanas del laboratorio deben permanecer
siempre cerradas.
3. Debe existir al menos 0,3 m entre la salida de aire
de la cabina y el techo del laboratorio.
4. Se instalará sobre una superficie sólida y nunca
móvil. Si es posible, en un recinto cerrado de
acceso restringido.
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Las CSB disponen de dos sistemas que impiden la salida de contaminación: las barreras de aire
y los filtros. La barrera de aire se crea permitiendo
que este fluya en una sola dirección y a una velocidad constante dando lugar a una verdadera “cortina”
de aire, sin turbulencias, que se conoce como flujo
de aire laminar. Los filtros tienen como finalidad
atrapar las partículas contenidas en este flujo de
aire. Los que se emplean habitualmente son los filtros HEPA, que retiene con una eficacia del 99,9%
partículas de hasta 0,3 micras de diámetro. Existen
tres tipos de CSB: Clase I, Clase II y Clase III.
A continuación se describen sus principales características, a excepción de las de Clase III, ya que estas
no son necesarias en el área de Micología.
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Al iniciar el trabajo:
Al finalizar el trabajo:
1. Poner en marcha la cabina durante 15-30 min.
2. Comprobar que el manómetro situado en la parte
superior del frontal se estabilice e indique la
presión adecuada.
3. Encender la luz fluorescente.
4. Limpiar la superficie de trabajo con un compuesto
yodado como la povidona yodada (Betadine‚
Topionic‚ etc.) y enjuagar posteriormente para
retirar los restos de yodo.
5. Antes y después de trabajar en una CSB debe
realizarse lavado de manos y brazos.
6. Se aconseja emplear bata de manga larga y
guantes de látex para minimizar el desplazamiento de la flora bacteriana cutánea hacia el interior
del área de trabajo y proteger las manos y los
brazos del operario de toda contaminación.
1. Limpiar el exterior del material que se haya contaminado.
2. Vaciar la CSB por completo de cualquier material.
3. Limpiar y decontaminar la superficie de trabajo
con un jabón desinfectante y después con un
compuesto yodado (povidona yodada). La limpieza tiene por objeto eliminar la suciedad que se
halle adherida a la superficie (que sirve de soporte a los microorganismos) y la materia orgánica,
contribuyendo de forma decisiva a la eficacia de
la decontaminación posterior con el yodóforo.
A fin de evitar la coloración residual de los compuestos yodóforos en las superficies, estas deben
enjuagarse con agua.
4. Dejar en marcha la CSB durante un tiempo prudencial (10-15 min).
5. Cerrar la apertura frontal.
6. La luz ultravioleta, presente en algunas CSB,
tiene poco poder de penetración por lo que su
capacidad decontaminante es muy limitada, además de constituir una fuente de accidentes por
exposición, por lo que debería evitarse su
empleo.
7. Nunca se debe utilizar la CBS como almacén
transitorio de equipo o material de laboratorio
para evitar el acúmulo de polvo.
8. Evitar introducir en la CSB materiales que emitan
partículas con facilidad, como algodón, papel,
madera, cartón, lápices, etc.
Durante la manipulación:
1. Colocar todo el material a utilizar en la zona de
trabajo antes de empezar, situando el material
contaminado en un extremo de la superficie de
trabajo y el no contaminado en el extremo opuesto de la misma.
2. Se recomienda trabajar a unos 5-10 cm por encima de la superficie y alejado de los bordes de la
misma, procurando no obstruir las rejillas de aire
con materiales o residuos.
3. Una vez el trabajo haya comenzado y sea
imprescindible la introducción de un nuevo material, se recomienda esperar de 5 a 10 min antes
de reiniciar la tarea. Ello permite la estabilización
del flujo del aire. Debe recordarse que cuanto
más material se introduzca en la CSB, la probabilidad de provocar turbulencias de aire se incrementa.
4. Evitar al máximo las corrientes de aire ambientales provenientes de puertas o ventanas abiertas,
movimientos de personas, sistemas de ventilación del laboratorio, etc. que perturben el flujo
establecido en el interior de la CSB. Así mismo,
deberían evitarse movimientos bruscos dentro de
la CSB, con movimientos de brazos y manos lentos para impedir la formación de corrientes de
aire que alteren el flujo laminar.
5. Debe evitarse el empleo de mecheros Bunsen,
cuya llama crea turbulencias en el flujo, además
de dañar potencialmente el filtro HEPA. Cuando
se precise el empleo de asas o espátula micológica de nícrom o platino es aconsejable el incinerador eléctrico o bien el empleo de asas
desechables.
6. Si se produce un vertido accidental de material
biológico se recogerá inmediatamente, decontaminando la superficie de trabajo y todo el material
que en ese momento exista dentro de la CSB.
7. No se empleará nunca una CSB cuando esté
sonando alguna de sus alarmas.
Mantenimiento:
1. Semanalmente conviene levantar la superficie de
trabajo para limpiar y decontaminar por debajo de
ella.
2. Semanalmente, con un paño mojado, se limpiarán todas las superficies exteriores con objeto de
eliminar el polvo acumulado.
3. Mensualmente se revisará el estado de las válvulas interiores con que vaya equipada.
4. Anualmente se certificará por una entidad cualificada.
5. Se llevará a cabo una desinfección completa en
las siguientes situaciones:
a. En caso de que se haya producido un vertido
importante
b. Antes de cualquier reparación
c. Antes de iniciar los controles periódicos
d. Siempre que se cambie el programa de trabajo
e. Cuando se substituyan los filtros HEPA
f. Cuando se cambie de lugar, incluso si el cambio
es dentro del mismo laboratorio.
6. La desinfección completa se realizará con vapores de formaldehído por personal debidamente
entrenado y equipado con prendas de protección
adecuadas.
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Normas de seguridad
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Clase II-B2: Expulsa el aire filtrado al exterior del
laboratorio y no recircula.
Clase II-B3: Expulsa el aire filtrado al exterior del
laboratorio y recircula el 70%.
Hasta el momento, no existe en España ninguna legislación relativa a los requisitos que deban
cumplir las CSB. La práctica más habitual consiste
en exigir a los proveedores correspondientes la
declaración de conformidad, bien con la norma británica BS 3928 o con la estadounidense NSF 49.
Las recomendaciones generales son las
siguientes:
Tabla 17.2. Propiedades de algunos desinfectantes
sobre microorganismos fúngicos [5].
Tipo de desinfectante
Grado de acción
desinfectante
Fenólicos
Hipocloritos
Alcoholes
Formaldehídos
Glutaraldehídos
Yodóforos
Amonios cuaternarios
+++
+
+++
+++
+++
+
+++ buena; ++ media; + débil; - ninguna
Mesa de trabajo o poyata de laboratorio:
La limpieza debe ser diaria al finalizar el trabajo o cuando se produzca un derramamiento.
Para ello puede emplearse hipoclorito al 0,5%, que se consigue diluyendo la lejía estándar al 1% con agua.
Cabina de bioseguridad:
•
•
Debe procederse a su limpieza con compuesto detergente líquido y papel para realizar el arrastre de materia orgánica que pueda existir.
A continuación puede emplearse compuestos de yodo de alta eficacia frente a los elementos fúngicos. Dada su
acción colorante y corrosiva sobre los metales, es preferible usar los derivados yodóforos como la povidona yodada
(polivinil-pirrolidona) diluida al 2%, que es de acción inmediata. A los pocos minutos es recomendable enjuagar con
agua para eliminar la coloración residual. Es preferible no utilizar etanol al 70% para eliminar los restos de yodo
dado que en las CSB en las que recircule el aire se desaconseja su uso por su volatilidad.
Estufas:
•
•
Se procederá a su limpieza y desinfección mediante detergente líquido y posterior aplicación de povidona yodada al
2%. En este caso, para eliminar la coloración residual del yodóforo puede emplearse etanol al 70%.
En aquellos casos en que se observe un incremento de las contaminaciones en los medios de cultivo por hongos
ambientales, especialmente Aspergillus spp., puede procederse, tras la limpieza y desinfección ya comentada, a la
aplicación de un compuesto fenólico en dilución acuosa a niveles de entre 400 y 1300 ppm (fenol en una dilución
1:1000). A diferencia de los compuestos yodados, este compuesto tiene un efecto residual prolongado.
Derrame accidental:
•
•
•
•
Cubrir con un papel de filtro la zona afecta. Ello permite delimitar con claridad la extensión de superficie afecta por
el derrame.
Verter encima del área afecta, con cuidado, hipoclorito a una concentración superior que la empleada para limpieza
(lejía casera diluida al 1:10). Dejar actuar 20 min. También puede emplearse compuestos de yodo.
Con guantes retirar los desechos en un contenedor para material infeccioso.
Enjuagar para evitar coloración residual.
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•
•
Normas de seguridad
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17.6. Agentes desinfectantes
En la Tabla 17.2 se describen las propiedades
de algunos desinfectantes frente a los microorganismos fúngicos [5,6].
Basándose en ello, los de mayor utilidad en
el área de Micología son los siguientes:
Hipoclorito sódico
Los desinfectantes que contienen hipoclorito
sódico (lejía) son potentes agentes oxidantes que
liberan Cl2 (gas cloro). La exposición al cloro produce irritación de mucosas incluida la del tracto respiratorio superior y piel. Debe emplearse bata y
guantes resistentes.
Compuestos cuaternarios
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17.7. Normas de protección frente a
productos químicos
Una forma rápida y fiable para identificar el
riesgo de una sustancia o preparado químico es su
etiqueta. En ella, el fabricante o proveedor, de
acuerdo con la legislación existente, debe identificar
las sustancias peligrosas que lo componen e informar de los riesgos (frases R) y los consejos de prudencia (frases S). Además, junto al producto, debe
adjuntarse la ficha de datos de seguridad en la que
se amplía la información y se detallan los riesgos de
su utilización y las medidas de seguridad a adoptar
[7].
La exposición a los compuestos químicos
puede producir efectos agudos o crónicos y la aparición de enfermedades. Estos efectos son función
directa de la toxicidad del agente químico, la dosis
absorbida y la vía de entrada al organismo: por
inhalación, dérmica (mucosas y piel intacta), digestiva o percutánea.
El correcto almacenamiento de los compuestos químicos constituye la primera medida de actuación, separando aquellas familias de productos
incompatibles. Se separarán ácidos de bases, oxidantes de inflamables, sustancias cancerígenas, etc.
Los envases más pesados así como los ácidos y las
bases fuertes se colocarán en los estantes inferiores.
Los productos peroxidables (éter etílico, éter isopropílico, etc.) pueden provocar detonaciones por contacto con el aire o incluso por choque o fricción, por
ello no es aconsejable almacenarlos una vez abiertos
más de 6 meses, a no ser que contengan un inhibidor eficaz.
Entre los compuestos más empleados en el
área de Micología figuran:
17.7.1. Agentes desinfectantes
Incorporados a múltiples soluciones desinfectantes, son generalmente menos cáusticos que
otros desinfectantes. Sin embargo, debe tenerse cuidado con su manipulación ya que es conocida su
capacidad para irritar la piel y producir alergias.
Formaldehído y glutaraldehído
Son compuestos altamente tóxicos. El formaldehído puede estar presente en el laboratorio en
forma gaseosa, líquida (solución de formalina) o
sólida (paraformaldehído). Puede producir, tras
exposición aguda, irritaciones oculares y del tracto
respiratorio superior; y tras exposición crónica, dermatitis, alergias cutáneas y respiratorias. Se sospecha además de su poder carcinogénico en humanos.
Ambos compuestos deben ser sólo manipulados en
campana de gases y con protectores de ojos impermeables.
17.7.2. Colorantes
Son utilizados en la mayoría de casos en cantidades muy pequeñas. Sin embargo, deben tomarse
precauciones para evitar su exposición especialmente a los derivados de la acridina, como el naranja de
acridina, que son carcinogénicos. El bromuro de etidio es un poderoso mutágeno de efecto acumulativo
utilizado en técnicas de biología molecular. Debe
evitarse estrictamente el contacto con estas sustancias mediante el empleo de guantes.
17.8. Gestión de residuos
17.8.1. Gestión de residuos infecciosos
Asociación Española de Micología
Normas de seguridad
17-10
Residuos líquidos
La mayoría de laboratorios someten a los
residuos líquidos a un tratamiento de esterilización
por autoclave.
Residuos sólidos
Objetos punzantes y cortantes
Dado que constituyen un claro riesgo de inoculación accidental deben depositarse en recipientes
específicos que sean resistentes a la punción y con
cierre seguro. Una vez llenos, se depositan en los
recipientes rígidos utilizados para los residuos sólidos.
17.8.2. Gestión de residuos químicos
Ante todo se debería disponer de una lista
que identificara todos aquellos residuos peligrosos
que sean susceptibles de atención, incluidos aquellos que formen parte de reactivos comerciales.
En general pueden eliminarse después de un sencillo tratamiento en el propio laboratorio. Cuando no
es posible debe consultarse a las autoridades locales
para su vertido controlado. Se recomienda disponer
de material absorbente inerte específico para productos químicos. En algunos casos concretos se procederá de la manera siguiente:
Ácidos inorgánicos
Salvo roturas accidentales, no suele ser frecuente tener que eliminar ácidos concentrados (HCl,
Bases inorgánicas, sales básicas y
diluciones básicas
Su gestión es parecida a la aplicada en los
ácidos. Las bases y sales básicas se neutralizan con
ácido sulfúrico diluido. Si son muy concentradas, se
diluyen previamente en agua al 1:5. Una vez neutralizadas, se vuelven a diluir en agua (1:10) y se eliminan.
Fenoles
El fenol y sus derivados son irritantes y tóxicos. No deben eliminarse a través de los desagües,
ni tan siquiera diluidos. El procesamiento de destrucción química no está al alcance de la mayoría de
laboratorios. Lo más aconsejable es separarlos en
recipientes específicos y transferirlos a un gestor
autorizado de residuos.
Azida sódica
Está presente en muchos reactivos comerciales como conservante. Nunca debe eliminarse directamente por desagües de plomo dado que forma
derivados altamente explosivos. Es un tóxico muy
potente y agente mutágeno. Es conveniente contactar con las autoridades locales autorizadas para
conocer las normas específicas, ya que la destrucción química con nitrito sódico no resulta práctica
en la mayoría de laboratorios.
Aldehídos, cetonas y disolventes orgánicos
El formaldehído es el residuo generado en el
laboratorio más común dentro de este grupo. No
debe ser eliminado directamente por el desagüe.
Conviene almacenarlo en recipientes seguros para
poderlo eliminar de manera controlada. La destrucción con permanganato potásico es compleja. La eliminación controlada también es aconsejable para los
diversos disolventes orgánicos (acetona, cloroformo, xileno y otros derivados bencénicos, etc.).
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Sus formas más frecuentes de tratamiento
son la incineración y la esterilización por autoclave.
En el primer caso deben depositarse en recipientes
rígidos que serán transportados de forma regulada
por empresas autorizadas para su incineración. Sin
embargo, la esterilización por autoclave es la manera más común de tratar este tipo de residuos en el
propio laboratorio. Debe tenerse en cuenta que los
programas para materiales limpios no sirven para
los desechos, siendo recomendable prolongar el
tiempo y aumentar la presión del proceso de autoclavado en estos casos. La utilización de indicadores
químicos y biológicos (suspensiones de esporas de
Bacillus) no es suficiente para el control de la eficacia del proceso. Algunos autores recomiendan no
utilizarlas para evitar una falsa seguridad.
Alternativamente, consideran más apropiado el control riguroso sistemático de cada proceso (registro
de presión y temperatura) y un mantenimiento apropiado del autoclave.
HNO3, H2SO4, etc.), aunque sí soluciones diluidas de
los mismos. Como norma general no debe eliminarse directamente aquellas soluciones cuya concentración sea superior a 1N. Los ácidos más
concentrados se diluyen en agua al 1:5 (especial
precaución con el ácido sulfúrico), se neutralizan a
pH 6,8 con soluciones de hidróxido sódico y se
vuelven a diluir al 1:10 en agua para poder ser eliminados por el desagüe. Las soluciones más diluidas se neutralizan con sosa y se diluyen en agua
antes de eliminarse.
Normas de seguridad
Bromuro de etidio
©2001 Revista Iberoamericana de Micología - ISBN: 84-607-3050-6
Es un mutágeno poderoso de efecto acumulativo utilizado en técnicas de biología molecular.
Deben seguirse de forma estricta los procedimientos
de manipulación que eviten su contacto (guantes,
etc.). Los geles teñidos con bromuro de etidio no
deben eliminarse como una basura convencional,
sino a través de los sistemas de eliminación de
mutágenos y citostáticos propios del centro hospitalario. Las soluciones tampón de electroforesis que
contienen bromuro de etidio tampoco deben eliminarse por los desagües. Deberían tratarse con carbón
activo (100 mg por cada 100 ml de solución), filtrar
la solución formada a través de un filtro de papel y
depositarlo todo en el cubo de eliminación de citostáticos. Las superficies pueden decontaminarse aplicando una papilla de carbón activo que se dejará
actuar durante un tiempo, depositándose posteriormente en el cubo de eliminación de citostáticos.
los desagües. Se recomienda efectuar las tinciones
en cubetas que drenen sobre botellas o bidones que
se entregarán, una vez llenos, al gestor de residuos
autorizado. Estas medidas deben ser seguidas de
manera rigurosa en el caso de la tinción de auramina. El naranja de acridina es también un compuesto
mutágeno, por lo que se recomienda almacenarlo en
recipientes separados.
Metales pesados, mercurio y compuestos
organomercuriales
La rotura de termómetros y manómetros
puede ser una causa de exposición al mercurio. Se
recomienda recoger los restos más visibles y depositarlos en un recipiente cerrado. Los menos visibles
pueden recogerse con ayuda de polvo absorbente o
azufre y guardar el conjunto en otro envase. Los
residuos deben ser almacenados y eliminados de
forma controlada.
Colorantes
Recomendaciones para la manipulación de
residuos:
•
•
•
•
Los recipientes para desechar los residuos de
riesgo en el área de trabajo deben ser rígidos, de
volumen inferior a 60 l, impermeables y resistentes a ácidos y álcalis, de cierre hermético y homologados para ser incinerados.
El almacenamiento y transporte deberá hacerse
en condiciones seguras. Deben existir zonas acotadas para su almacenamiento intermedio especialmente si los residuos son de riesgo, no
superando en ningún caso las 24 h una vez se ha
cerrado.
Para los residuos no específicos se utilizarán bolsas de color diferenciadas.
En el caso de objetos cortantes o punzantes
deberán utilizarse recipientes rígidos resistentes a
la perforación cuyo volumen no supere los 2 l.
No deberían ser eliminados directamente por
17.9. Normas de seguridad en el almacenamiento, transporte y envío de
material biológico
17.9.1. Almacenamiento
El material infeccioso debe almacenarse en
zonas de acceso restringido para minimizar la posibilidad de contaminación del personal y del ambiente.
El sistema básico de embalaje estará compuesto
por:
1. Recipiente primario a prueba de filtraciones, etiquetado, que contenga la muestra. El recipiente
debe envolverse con material absorbente.
2. Recipiente secundario a prueba de filtraciones,
que encierra y protege el recipiente primario. En él
se pueden colocar varios recipientes primarios,
colocando suficiente material absorbente para evitar choques entre ellos. Los formularios, cartas y
otras informaciones de identificación de la muestra deben colocarse pegados con cinta adhesiva
en el exterior de este recipiente.
3. Recipiente externo de envío donde se coloca el
recipiente secundario para protegerlo de elementos externos como daño físico y agua.
Asociación Española de Micología
17-11
17-12
Normas de seguridad
17.9.2. Transporte y envío
No existen regulaciones ni recomendaciones
específicas para el transporte seguro de microorganismos patógenos. Sin embargo, si ampliamos la
definición y los consideramos como “sustancias
infecciosas”, hay varios documentos internacionales
relacionados con el tema, como los de la Unión
Postal Universal (UPU), la Organización
Internacional de Aviación (OIAC) y la Asociación
Internacional de Transporte Aéreo (IATA).
Estas directivas y, en general, todos los
documentos internacionales relacionados están
basados en texto único común: Recomendaciones
del Comité de Expertos de las Naciones Unidas para
el transporte de artículos peligrosos.
Figura 17.3. Sistema de embalaje para transporte aéreo de material biológico.
17.10. Normas de seguridad en
caso de accidente
17.10.1. Riesgos no biológicos
Químicos
Figura 17.4. Sistema de embalaje para transporte terrestre de
material biológico.
Pueden deberse a inhalación accidental por
no usar cámara de gases, a deglución por pipetear
indebidamente o por contacto (salpicaduras de ácidos, álcalis, sustancias tóxicas o cancerígenas).
En este último caso la ducha de seguridad puede ser
de ayuda y, en cualquier caso, se debe acudir al
Servicio de Urgencias. Resulta de gran utilidad consultar la ficha de seguridad del producto causante
del accidente y las notas técnicas que se encuentran
disponibles en las páginas web del Ministerio de
Trabajo y Asuntos Sociales [7,8].
Físicos, eléctricos y fuego
Los accidentes físicos más frecuentes son las
heridas causadas por objetos punzantes o cortantes y
las quemaduras por vapor de autoclave. En los casos
que no puedan solucionarse con las medidas de primeros auxilios se acudirá al Servicio de Urgencias.
En los accidentes eléctricos jamás se intentará apartar al afectado de la fuente eléctrica con
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Estas recomendaciones clasifican las mercancías infecciosas en varias clases, dos de las cuales están relacionadas con los microorganismos
patógenos: clase 6.2 (sustancias infecciosas) y clase
9 (sustancias peligrosas misceláneas y artículos).
Los embalajes para transporte aéreo
(Figura 17.3) presentan algunas diferencias respecto
a los transportados por vía terrestre (Figura 17.4), ya
que deben asegurar la protección frente a presiones
muy altas (Carburos Metálicos, Embalajes y
Mercancias Peligrosas, Esdesla, Sarstedt). En los
vuelos internacionales está estrictamente prohibido
que los pasajeros transporten sustancias infecciosas.
Normas de seguridad
17-13
las manos, sino a través de un objeto no conductor,
procediendo previamente al corte del suministro
eléctrico.
su sofocación sin extintor, dado que la salida de CO2
a alta presión puede producir salpicaduras del líquido inflamable que está ardiendo.
En caso de fuego su extinción se llevará
acabo mediante extintores de CO2. Si se tratara de
líquidos que ardieran en su superficie, se procurará
17.10.2. Riesgos biológicos
Tabla 17.3. Infecciones fúngicas adquiridas en el laboratorio [9].
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Hongo
Blastomyces dermatidis
Coccidioides immitis
Cryptococcus neoformans
Histoplasma capsulatum
Penicillium marneffei
Sporothrix schenckii
Dermatofitos
Inhalación
Inoculación
transcutánea
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Piel
Conjuntiva
X
X
Contacto con
animal infectado
X
Referencias
1.
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Asuntos Sociales:
http://www.mtas.es/insht/ipcsnspn/spanish.htm
Notas técnicas del Ministerio de Trabajo y Asuntos
Sociales:
http://www.mtas.es/insht/information/Ind_temntp.htm
Sewell DL. Laboratory-associated infections and biosafety.
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Asociación Española de Micología