guia 3-célula (1)

 LABORATORIO DE BIOLOGÍA GUÍA # 2 CÉLULA 1. OBEJTIVOS 1. Identificar diferencias entre células procariotas y eucariotas. 2. Conocer métodos de tinción sencillos para la observación de células en el microscopio. 3. Reconocer características básicas de células eucariotas vegetales y animales. 4. Aprender a realizar observaciones, descripciones y comparaciones entre células procariotas y eucariotas (vegetales y animales). 2. MATERIALES Y REACTIVOS Materiales Reactivos Equipos -­‐ Laminas y laminillas. -­‐ Azul de metileno. -­‐ Microscopio. -­‐ Bisturí (Mango y cuchillas). -­‐ Lugol. -­‐ Mecheros. -­‐ Pinzas. -­‐ Etanol 70%. -­‐ Hisopos. -­‐ Giemsa. -­‐ Pipetas de plástico. -­‐ Cultivo de bacterias. -­‐ Asas. -­‐ Aceite de inmersión. -­‐ Agujas estériles. -­‐ Agua destilada. -­‐ Toallas de papel. -­‐ DE LOS ESTUDIANTES: -­‐ Micropreparados. -­‐ Cebolla cabezona, papa o -­‐ Algodón. tomate. 3. FUNDAMENTO TEÓRICO La palabra "célula" fue usada por primera vez en sentido biológico por el científico inglés Robert Hooke (1635-­‐1701). Con un microscopio que él mismo fabricó, notó que el corcho y otros tejidos vegetales están constituidos por pequeñas cavidades separadas por paredes. Llamó a estas cavidades "células", que significa "habitaciones pequeñas". La célula se entiende como la unidad mínima de un organismo capaz de actuar de manera autónoma en su funcionamiento y reproducción. Una vez desarrollado el microscopio los Biólogos comenzaron a estudiar las células. Descubrieron dos tipos básicos de ellas: procariotas y eucariotas, esto dependiendo de su estructura interna. Los organismos que están conformados por estos tipos de células se llaman procariotes y eucariotes (procariote y eucariote significan antes y después del núcleo, respectivamente). Los procariotas son organismos cuyas estructuras celulares internas carecen de membranas que las rodeen, son células más pequeñas y sencillas con respecto a las eucariotas. La mayoría de estos organismos son unicelulares, como las bacterias. Los eucariotes, son organismos cuyas células tienen estructuras internas membranosas. Estas estructuras reciben el nombre de organelos. El organelo más grande que se conoce es el núcleo, el cual contiene el material genético (ADN y ARN), controlando así todas las funciones celulares. Las células procariotas a diferencia de las eucariotas, no tienen el material genético contenido en un núcleo. En vez de esto, se encuentra en una región determinada, conocida como nucleoide, que no esta encerrado por membranas. Las células eucarióticas se localizan en animales, plantas, protistas y hongos, así que, como podrás imaginar, estas células son extremadamente diversas. Tabla1: Funciones y distribución de las estructuras celulares. Fuente: Audesirk, et al. 2008. Biología la vida en la tierra. Pearson. Prentice Hall. Edi.8 4. PROCEDIMIENTO a. OBSERVACIÓN DE CÉULAS PROCARIOTAS. 1. Prender el mechero y esterilizar un asa bacteriológica. Ubicándola en la llama hasta que se ponga al rojo vivo. Dejar enfriar cerca al mechero, sin que toque alguna otra superficie, usar inmediatamente. 2. Con el asa estéril tome una muestra de bacterias (suministrada por el profesor). Haga un raspado leve del crecimiento bacteriano. 3. Realice un frotis sobre una lámina portaobjetos. Donde previamente ha ubicado una pequeña gota de agua en el centro de la misma. Trate de homogenizar la muestra con el asa. 4. Pase ligeramente el portaobjetos sobre la flama del mechero. (NOTA: SI SE MANTIENE MUCHO TIEMPO ES POSIBLE QUEMARSE O GENERAR EL ROMPIMIENTO DE LA LÁMINA). 5. Disponga una gota de Azul de metileno sobre el frotis y deje actuar durante 1 minuto. 6. Quite el exceso de colorante con agua corriente y agregue una gota de alcohol para fijar. 7. Deje secar al aire. 8. Observe al microscopio, empezando con el objetivo de menor aumento. b. OBSERVACIÓN CE CÉLULAS EUCARIOTAS. • CÉLULAS ANIMALES (Células epiteliales) 1. Coloque en un portaobjetos una gota de lugol. 2. Con ayuda de un hisopo tome una muestra de células epiteliales. Frotando con el hisopo la parte interior de las mejillas y haciendo inmediatamente un frotis sobre la lámina portaobjetos. 3. Sumerja el hisopo en la solución de lugol. 4. Cubra con una laminilla, cuidando que no queden burbujas entre la lámina y la laminilla. 5. Observe en el microscopio, empezando con el objetivo de menor aumento. 6. Cuando ubique un buen grupo de células empiece a hacer observaciones con mayores aumentos, incluso 100X (No olvide utilizar aceite de inmersión en este caso). • CÉLULAS ANIMALES (Frotis de sangre) 1. Lávese y séquese bien las manos. Limpie la punta de su dedo meñique con un algodón remojado en alcohol. 2. Realice una punción con una aguja estéril en la punta del dedo, coloque una gota de sangre en un extremo del portaobjetos. Con un segundo portaobjetos, deslice la gota sobre la lámina, como indica la figura. Con la intención de obtener una fina capa de sangre. El portaobjetos absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca por encima de ella para no dañar los hematíes. 3.
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Deje secar 3 minutos. Ponga la lámina en alcohol por 30 segundos. Permita que el alcohol se evapore durante unos minutos. Cubra la preparación con unas gotas de Giemsa y deje actuar por 12 minutos. Lavar la preparación hasta que no queden restos de colorante. Dejen secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. Observar al microscopio, empezando con el objetivo de menor aumento. • CÉLULAS VEGETALES ( Epidermis de cebolla). 1. Separar con una pinza una de las capas internas de la cebolla y desprender la tenue membrana que está adherida por su cara interior cóncava. 2. Deposite un fragmento de membrana en un portaobjetos con unas gotas de agua. 3. Si es necesario, estire el trozo de epidermis. 4. Agregue unas gotas de Azul de metileno y deje actuar por 5 minutos, cuidando que no se seque la preparación. 5.
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Lavar hasta que no salga colorante. Cubrir la muestra con una laminilla. Observar al microscopio. CÉLULAS VEGETALES (Células de papa) Con la ayuda de la hoja de afeitar obtener láminas muy finas del tubérculo de papa. Colocar una lámina fina de papa sobre una lámina portaobjetos (realice por duplicado). Agregar una gota de agua sobre una de las láminas con la muestra y en otra lámina añadir una gota de lugol y cubrir a ambas laminillas cubre objetos. 4. Utilizando objetivo de menor y mediano aumento, observar la presencia de células pentagonales conteniendo granos de almidón en su interior. 5. CUESTIONARIO 1. ¿Qué diferencias observó (en ésta práctica) entre células procariotas y células eucariotas? 2. ¿Qué diferencias observó (en ésta práctica) entre células animales y vegetales? 3. Haga un cuadro comparativo entre las células procariotas y eucariotas (vegetales y animales). Indicando estructura, organelos y funciones de los mismos. 4. Indique tres semejanzas entre células procariotas y eucariotas. 5. Cuál es la función de los colorantes empleados, qué tiñe cada uno? (Azul de metileno, Lugol y Giemsa). 6. Qué ventajas y desventajas tiene el uso de colorantes. 6. BIBLIOGRAFÍA -­‐ Thompson, R & Thompson, B. Ilustrated guide to home Biology experiments, All lab, no Lecture. Published by Make:Books, an imprint of Maker Media, a division of O’Reilly Media, Inc. 2012. -­‐ Chagoya, H, et al. Manual de prácticas de la materia de biología general. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Facultad de Bilogía. (2011). Recuperado el 20 de Agosto de 2012 de: bios.biologia.umich.mx/files/manualbiologiageneral.pdf -­‐ http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39590.pdf. Revisado el 3 de Octubre de 2012. -­‐ http://www.netmexico.com/practicas/BIO14CPE.pdf Recuperado el 3 de Octubre de 2012.