C-338-docu

La curcumina y la metil β-ciclodextrina desestabilizan microdominios de membrana
de trofozoitos de Giardia lamblia alterando la distribución de ClC-2 y Kv1.3.
Cortés-Zárate R1, Mendoza-Magaña ML1, Dobrovinskaya O2, Bonales-Alatorre
EO1, Pottosin I2, Sandoval-Avila S1, Cortés-Esquivel JT1, Ramírez-Herrera MA1.
1 CUCS Universidad de Guadalajara. 2 CUIB Universidad de Colima.
El estudio de los canales iónicos presentes en la membrana del trofozoito de
Giardia lamblia es importante ya que podrían funcionar como blanco terapéutico.
La curcumina (CUR) es un compuesto difenólico natural que ejerce efecto antigiardiosico in vitro. En trabajos previos hemos mostrado que la curcumina afecta
las corrientes iónicas del parásito y que éstas son predominantemente de cloro. La
metil-β ciclodextrina (CDX) es un depletor de colesterol que provoca desarreglo de
los microdominios de membrana en los cuales se ensamblan diversos tipos de
canales iónicos. En el presente trabajo estudiamos por inmunocitoquímica la
distribución de los canales ClC-2 y Kv 1.3 en trofozoitos expuestos o no a CUR o a
CDX, así como el efecto de ambos compuestos sobre microdominios. Se realizó
inmunofluorescencia de doble marcaje utilizando anti-ClC-2 o anti- Kv1.3 y se
visualizaron con anticuerpos secundarios marcados con Alexa 594, de igual
manera se llevó a cabo la colocalización de microdominios utilizando la subunidad
beta de la toxina colérica marcada con fluoresceína. También se realizó la
obtención de microdominios de membrana por separación en gradientes y se
analizó el efecto de la CDX y de CUR sobre la integridad de los microdominios y
se realizó la detección de ClC-2 y Kv 1.3 en cada fracción por Western blot. El
ClC-2 presentó un patrón de distribución homogénea en la superficie del trofozoito
y colocalizó parcialmente en microdominios de membrana. El Kv 1.3 presentó una
localización predominantemente caudal en el trofozoito y se encuentra en
microdominios. Tanto la CUR como la CDX provocaron una marcada disminución
de la inmunoreactividad tanto para ClC-2 como para Kv1.3, así mismo ocurrió
disminución de la localización en microdominios. La separación de microdominios
permitió la identificación de los canales en las fracciones por medio de Western
blot y reveló que la mayor parte del ClC-2 se encuentra en microdominios y una
población menor del canal se encuentra fuera. Por su parte el Kv 1.3 se localizó
exclusivamente en microdominios de membrana. Tanto la CDX como la CUR
provocaron desensamble de los microdominios lo cual provocó disminución de
corrientes iónicas. Financiado por CONACYT 56766