Praticas_Diluciones

Biol 4207 – Ejercicios de Practica
JAC
1. Usted tiene una solución pura de HCl. Usted toma 10 ml de esta y le añade 110ml d
agua. Cuando determina la molaridad de esta ultima mezcla esta es 1.
- Cual es el factor de dilución?
- Cuantas veces mas concentrado estaban los 10 ml originales que la solución final?
- A que molaridad estaban los 10 ml originales?
2. De una solución al 5% de normal salina (NaCl) se toman 2 ml y se diluyen 1:5. De esta
solución se toma 5 ml y se diluyen 1:10. De esta ultima solución se hace una dilución
2:100.
- Cuantas veces menos concentrada esta la 2da dilución que la original.
- Cual es el factor de dilución en cada paso de la serie.
- Cual es el volumen final de cada dilución?
- Cuantos gramos de NaCl habrá en 1 ml de la ultima solución.
3. Las enzimas de restricción vienen en concentración de U/ml, y se recomiendan que se
usen 1U por cada ug de DNA a digerir. Si una enzima que usted quiere usar viene a
22,000U/ml, y usted quiere digerir 5 ug de DNA. Cuanto volumen usted tendrá que usar
para la reacción y como le hará para poder medirlo con las pipetas que tenemos en el lab?
4. La enzima Alu 1 viene a una concentración de 5,000 U/ ml. Su buffer viene 10X. EL
DNA esta a una concentración de 4 µg/µl. A usted le ordenan hacer una reacción de
digestión de 12 µg de DNA en un volumen total de 25 µl.
Usted deberá usar 1 U/ µg de DNA.
- En que volumen las obtendrá?
- Como los dispensara?
- Prepare la siguiente tabla con los reactivos de la reacción:
Buffer
______µl
DNA
________ug ______µl
Enzima
________U ______µl
Agua
______µl
TOTAL
5. La enzima BamH1 viene a una concentración de 100,000 U/ml. A usted le piden que
digiera 20 ug de DNA con esta enzima.
- Cuantas unidades necesitará?
- Como los dispensará
6. Una enzima para ligación (Cip) viene a una concentración de 16000 unidades/ml. Cuantas
unidades habrá en 10 ul?
7. Prepare la siguiente reacción enzimática, preséntela en forma tabulada.
En un volumen final de 30 µl, donde use el buffer 4 (10X), se tratan digerir 10 µg de DNA (su
concentración es 1.0µg/µl) y usando 20 unidades de la enzima JplG III (su concentración es
22,000 U/ml). Cuanto volumen serviría de cada reactivo? Y de agua? Algún problema?
Explique y muestre su trabajo.
8. La enzima DNA pol 1 viene a una concentración de 50,000 U/ml. Usted tiene que preparar
una reacción de 50 µl de PCR donde debe usar 0.05U/ul de reacción. Usted añade 10 µl de
buffer de PCR, 2ng de DNA templado que esta a una concentración de 0.5ng/µl, primers (que
estan a 200 mM) para que cada uno quede a una concentración de 200µM, Mg+2 que esta
5mM (10X), enzima y agua. Presente la tabla de todos los reactivos que incluye en la
reacción, los volúmenes de cada uno en µl. Presente donde aplique la concentración inicial y
final de cada reactivo. Asuma que tiene micropipetas para todos los valores.
9. La Enzima Nde1 viene a una concentración de 40U/ul. Según el fabricante el envase tiene
suficiente para 10,000 reacciones de 2 µg de DNA, contando con que se recomienda 1U/µg
de DNA. Cuantas unidades en total trae el envase? A que concentración en U/ml viene la
enzima? Si yo tuviera que usar 10U para una reacción de 10 ugs de DNA como haría para
servirlo?
10. Una solución de fagos de una dilución en serie es usada para inocular una placa de E coli
en el ensayo de plaque de doble capa. A las 24 horas usted cuenta 148 plaques. Contando
que el stock original era 0.1, y con que usted uso la sexta dilución de la serie, Cuanto es el
PFU para ese fago en esta cepa de E coli? Cual es el factor de dilución para esta placa?