control de cepas

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
CAHUASQUI JIMENA
NOVENO ALIMENTOS
28-mar-11
CONTROL DE CEPAS
La conservación de microorganismos permite disponer de cepas inmediatamente para su
uso, éstos microorganismos deben ser considerados confiables cuando sean solicitados para
cualquier trabajo de investigación, por este motivo se deben manejar técnicas adecuadas para su
preservación a más de tener un control de calidad sobre ellos.
La mayoría de los procedimientos en Microbiología, dependen de que los microorganismos
viables en el cultivo sean capaces de mantener sus características morfológicas, fisiológicas y que
sean típicas y reproducibles.
Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas domésticas, es
necesario tener un historial del organismo que incluye nombre, área de aislamiento, reacciones
bioquímicas y patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de almacenaje, fecha de último
transplante, etc
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos específicos:
Características típicas.
Características estables.
Reproducibilidad
Cultivos de referencia
Este cultivo se refiere a cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo.
Son células microbianas capaces de crecer.
Se debe tratar de un cultivo puro.
Genéticamente estables.
Cepas de reserva; Las cepas de reserva son una serie de alícuotas de cultivos idénticos obtenidas
en el laboratorio por subcultivo de la cepa de referencia.
Para la correcta conservación de las cepas se deben cumplir tres objetivos fundamentales que, en
primer lugar que el cultivo a conservar esté puro, en segundo que se logre una supervivencia de al
menos el 70-80% de las células, o sea que sean viables y en tercero que sean genéticamente
estables.
RECONSTITUCION
Las cepas almacenadas se reconstituyen y siembran usando el medio de cultivo y condiciones de
incubación de acuerdo al microorganismo.
En paralelo se realiza un control de calidad de pureza y viabilidad, no se debe olvidar que los
crioviales que han sido descongelados no se deben volver a congelar nuevamente.
Control de calidad pureza y viabilidad
Se realiza a diferentes niveles del proceso para asegurarse que las cepas conservan su viabilidad y
caracteres bioquímicos. La frecuencia de realización de este control para las cepas
almacenadas en el laboratorio la establecerá en cada caso.
Registro De Control De Calidad
1.
2.
3.
Fecha del control.
Identificación de la cepa. Género y especie del microorganismo. TIPO y Nº de colección.
Tipo de cepa (Cepa de referencia, reserva o trabajo).
Pruebas a realizar (depende del microorganismo):
Coloración de Gram
Características de las colonias en medios selectivos
Pruebas bioquímicas y serológicas.
Pureza
Se determina aislando colonias en medios nutricios selectivos y procediendo después a su cultivo.
Repitiendo esto varias veces puede asegurarse que el microorganismo está en cultivo puro.
Viabilidad
Se evalúa mediante la enumeración o cuenta indirecta de las colonias que aparecen sobre el
medio, después de sembrar una serie de diluciones sucesivas de la suspensión original e
incubándolas, durante el tiempo necesario.
El porcentaje de viabilidad, se determina mediante la relación del número de bacterias viables
determinadas al tiempo del muestreo, con respecto a aquellas determinadas al inicio del período
de conservación.
Identificación
Es la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas
características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características a
determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se sigue en la
identificación.
TÉCNICAS DE DESARROLLO
PUREZA
La cepa congelada se reactiva en un medio de baja selectividad, se incuba a 37ºC durante
24 horas.
Se realiza siembras por técnica de vertido con diferentes diluciones en medios de baja
selectividad (TSA, PCA) y AS.
Se elige aquellos grados de dilución con los cuales sea posible aislar colonias
independientes.
La toma y siembra de la colonia aislada desde la placa original se lleva a cabo con ayuda
de un asa.
Se utiliza la técnica de estriado en medios no selectivos (agar nutritivo, TSA, PCA).
Con colonias bien aisladas se realiza una tinción gram para comprobar su purificación.
VIABILIDAD
Cuando esta la cepa pura se procede a congelar en crioviales, previo a esto se cuantifica
los microorganismos.
Se realiza un inóculo de la cepa en BHI durante 24 horas, se siembra por vertido con
diferentes diluciones (10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6), se incuba las cajas 24 horas a 37ºC.
Se realiza un contaje de las cajas que tengan colonias en un rango de 30 – 300, y se
multiplica por el factor de dilución, este es el valor de referencia.
Realizar el mismo procedimiento de las cepas cada mes para comprobar la viabilidad.
Viabilidad =
número de colonias al tiempo de muestreo
x 100
Número de colonias al inicio de la conservación
IDENTIFICACION
Se parte de un cultivo puro
Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración Gram. Se
determina así la forma y el Gram del microorganismo en estudio. También es importante
determinar la agrupación y la presencia de esporas y otras características morfológicas de
interés.
Determinar las características nutricionales (en general se desprenden de los métodos
empleados en el aislamiento y cultivo anteriores); fotoautótrofos, fotoheterótrofos,
quimioautótrofos, quimioheterótrofos.
Realización de pruebas primarias:
Gram.,
morfología,
catalasa, oxidasa,
OF,
fermentación de glucosa,
esporas,
crecimiento en aerobiosis anaerobiosis
movilidad.
Realización de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. Estas
dependerán del género o familia determinado.
BIBLIOGRAFÍA
http://www.monografias.com/trabajos73/manual-control-calidad-microbiologia/manualcontrol-calidad-microbiologia3.shtml
http://www.rlc.fao.org/es/inocuidad/codex/rla3013/pdf/aseg4.pdf
www.pfizer.net.ve/cvcm/colecc.htm
PROCEDIMIENTO CONTROL DE CALIDAD DE CEPAS PUREZA, VIABILIDAD,
IDENTIFICACION, Laboratorio De Microbiologia, UCE, Facultad De Ciencias
Químicas