DNA polimerasas en E. coli Pol I Pol II pol III gen pol A polB polC PM (kDa) 103 90 130 mol/cél. 400 100 10 Vmax 20 nt/s 3 nt/s 750 nt/s 3' exonucl. + + + 5' exonucl + no no 10000 500000 procesiv. 3-200 DNA polimerasa I La DNA pol I rellena los espacios entre fragmentos de Okazaki Utiliza actividad exonucleasa 5’3’ para eliminar cebador de RNA DNA ligasa La replicación causa superenrollamiento La topoisomerasa Girasa alivia la tensión Terminación de la replicación Topoisomerasa IV participa en la terminación de la replicación de moléculas circulares. Cómo se asegura la célula que su DNA se replica solo una vez? Patrones de metilación del DNA Las enzimas Dam metilasas regulan el inicio en el origen de replicación ADN polimerasas en células eucariontes Replicativas Reparativas Los cromosomas eucariontes tienen múltiples origenes de replicación Replicación del ADN: E. coli vs. células humanas Cantidad de DNA, pb/ cél. E. coli 4.2 106 Cél humanas 109 Velocidad avance horquilla mm/min 30 3 Velocidad de replicación, nt / seg 750 60-90 Número de orígenes de replicación / célula 1 103-104 Tiempo 1 replicación genómica (hs) 0.27 8 Tiempo 1 división celular (hs) 0.33 24 Activación de los orígenes de replicación en eucariontes 1. Formación de un complejo pre-replicativo (comienza a finales de la fase M) 2. Activación de pre-RC en el punto de control G1/S CycA/Cdk Horquilla de replicación en eucariontes Hebra Retrasada DNA pol : elonga cebadores de ARN DNA pol : elonga la cadena continua DNA pol : elonga la cadena discontinua Topoisomerasa DNA ligasa I Rnasa HEN 1 DNA pol Primasa Cebador ARN CDC 45 DNA pol MCM 2 Helicasa RFC PCNA RPA (SSB) DNA pol RFC PCNA Hebra Guía Topoisomerasa Re-formación de cromatina durante la replicación Hay complejos encargados de posicionar los nucleosomas en las cadenas hijas Consultar el Artículo3 en el AMYD La modificación de histonas en los nucleosomas se hereda a las cadenas hijas (herencia epigenética) Existen varios modelos propuestos para la transmisión de marcas epigenéticas en la cromatina Se heredan patrones de acetilación y metilación de las histonas Se heredan patrones de metilación de citosinas en el ADN CMC= Chromatin Modifying Complex Planta de A. thaliana defectuosa en metilación del DNA (Zhang lab, University of Georgia) ¿Cómo completar la replicación de genomas lineales? Cada uno de los dos extremos 5’ en cada cromosoma queda incompleto al remover el último cebador de RNA Solución: Elongar los telómeros 5’ 3’ Telomerasa Las células controlan el tamaño de su telómero