PRACTICAS DE BIOLOGÍA
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Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA PRIMERA SEMANA PRACTICA Nº1 Clase inaugural. Introducción de la Biología como ciencia y su importancia en la Indicación de Medidas de Bioseguridad en el laboratorio. profesión. Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA SEGUNDA SEMANA PRACTICA Nº 2 MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Y MANEJO DEL MICROSCOPIO Y ESTUDIO DE SUS PARTE El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar. El grado de seguridad dependerá de las precauciones que se toman para tomar accidentes. II. OBJETIVOS Entender los tipos de riesgos Aprender las principales medidas de seguridad Conocer símbolos de seguridad III. NORMAS DE SEGURIDAD 1. Es imprescindible el uso de bata, gorra durante el desarrollo de la práctica; las mascarillas, los guantes y lentes en ciertos casos. 2. Usar pantalones y zapatos cerrados 3. Antes de iniciar la práctica leer cuidadosamente la guía. 4. No ingerir alimentos, ni bebidas dentro del laboratorio. 5. No fumar 6. Estar atento a las instrucciones de los profesores 7. No jugar, empujarse o correr dentro del laboratorio 8. No probar, ni oler sustancia laguna 9. Revisar las indicaciones que están en los frascos de las sustancias 10. No dejar destapados los frascos donde se encuentren los reactivos 11. Lavarse las manos antes y después de manipular los equipos, los químicos o material biológico. 12. Nunca trabajar solo sin supervisión 13. Conocer la ubicación del equipo de emergencia, salida de emergencia y de cualquier otra medida de seguridad con que cuente el laboratorio. 14. Si percibe un olor extraño, avisar inmediatamente a los profesores. 15. Al terminar la práctica recoger el material y limpiar. IV. Símbolos de bioseguridad Desechos con riesgos biológicos Adopción código de colores una eficiente disposición de los desechos hospitalarios. Color verde: Desechos desechables ordinarios no Color rojo: Desechos que implique riesgos biológicos, desechos anatomo – patológicos La OMS a normalizado un código de colores universales para la selección, disposición y almacenamiento, Para hacer Color gris: Papel cartón y similares Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Símbolos de riesgo de los reactivos Explosivo Extramadamente Inflamable Irritante V. I. II. Altamente Inflamable Tóxico y muy tóxico Peligroso para el medioambiente Dañina Corrosiva Radiactivo Cuestionario ¿a qué se denominan medidas de seguridad? ¿cuáles son los símbolos más usados en un laboratorio, consultorio y en un hospital? Segunda Parte MANEJO DEL MICROSCOPIO Y ESTUDIO DE SUS PARTE El microscopio compuesto es un instrumento óptico que se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas: a. El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. El sistema de ajuste: comprende el macrométrico, micrométrico y cremallera. Sistema de soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revolver y la platina b. El sistema óptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas. Sistema de aumento: comprende el ocular generalmente 10X, 15X y los objetivos de 4x, 10x, 40x y 100x. c. El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio. Comprende el foco, condensador y diafragma. El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio es un instrumento muy utilizado en muchas especialidades de la Medicina desde principios del siglo XX, siendo hoy impensable llevar a cabo, en dichas especialidades, técnicas sin la ayuda de este equipo de alta tecnología. La estomatología no podía ser menos en cuanto al uso del microscopio ya que no encarece los tratamientos y facilita el trabajo del profesional, reportando un gran beneficio en cuanto a ergonomía, calidad y precisión se refiere. Poder de resolución Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Se llama poder de resolución de un sistema óptico a la capacidad de separar detalles y es expresado por el límite de resolución que es la menor distancia que existe entre dos puntos para que estos aparezcan individualizados Reconocimiento de las partes del microscopio II. a) Parte mecánica Pie Brazo Tubo Platina Revolver Sistema de ajuste: Tornillo macrométrico y Tornillo micrométrico b) Parte óptica Lentes del condensador Fuente de iluminación Condensador Diafragma Lentes: oculares (10x y 12x) y objetivos (4x, 10x, 40x y 100x). OBJETIVOS Reconocer las partes mecánicas y ópticas del microscopio Aprender el correcto uso del microscopio III. MATERIALES Material biológico Cabello Lana Pelo de alguna especie animal Material de vidrio Láminas (portaobjetos) Laminillas (cubreobjetos) Pipetas Pasteur Reactivos Agua destilada Equipos Microscopios Otros Materiales Papel lente Papel periódico Pinzas de madera Pizeta Plumón indeleble Tijeras Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA IV. Protocolo de trabajo Colorantes OBSERVACIONES observaciones Muestras V. Cabello 4x, 10x, 40x y 100x larvas 4x, 10x, 40x y 100x Lana 4x, 10x, 40x y 100x Pelo de alguna especie animal 4x, 10x, 40x y 100x Recorte de periódico 4x, 10x, 40x y 100x Cuestionario 1. ¿Qué es imagen real y virtual? 2. ¿Qué tipos de microscopio se utilizan en el campo de la ciencia? 3. ¿Qué tipo y Cuáles son las características del microscopio utilizado en estomatología? Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA TERCERA SEMANA PRACTICA Nº3 COLORANTES USADOS EN BIOLOGÍA Y RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS Los colorantes Los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares, son sustancias capaces de transmitir color a otros cuerpos. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes o también llamados colorantes básicos) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones o colorantes ácidos) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Colorantes neutros, en este caso el anión como el catión son coloreados y se disocian en le momento de la coloración. Ejemplos: Giemsa. Leishman, Wright Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de las gotículas o depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán. Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánico. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante. II. OBJETIVOS Conocer las propiedades químicas, iónicas y tintoriales de los colorantes simples y compuestos, utilizados para visualizar diferentes estructuras biológicas III. MATERIALES Material Material de vidrio biológico Yogurt casero Láminas (portaobjetos) Laminillas (cubreobjetos) Pipetas Pasteur Reactivos IV. Agua destilada Azul de lactofenol Azul de metileno Coloración vago ( mercurio de cromo y violeta de genciana Suero fisiológico Tinta china Equipos Microscopios Otros Materiales Asa de siembra Papel lente Papel periódico Pinzas de madera Pizeta Plumón indeleble Tijeras PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Coloración Simple: Son aquellos que utilizan un solo colorante. Ejemplo: azul de metileno, azul de lactofenol y tinta china 1. Colocar una muestra en una lámina portaobjeto 2. Incorporar una gota del colorante 3. Observarlo al microscopio con los lentes objetivos de 4x,10x, 40x y 100x Coloración compuesta o diferencial: aquellos que utilizan más de un colorante Ejemplo: Coloración Gram, Tinción de Ziehl Nielsen. Coloraciones especiales: permiten la observación de de determinados compuestos celulares. Ejemplos: Coloración vago V. Protocolo de trabajo Especialidad de Estomatología Coloración vago Azul de lactofenol Muestras Azul de metileno Colorantes Tinta china PRACTICAS DE BIOLOGÍA observaciones Cabello 4x, 10x, 40x y 100x Bacterias del yogurt 4x, 10x, 40x y 100x larvas 4x, 10x, 40x y 100x Lana 4x, 10x, 40x y 100x Pelo de alguna especie animal 4x, 10x, 40x y 100x Recorte de periódico 4x, 10x, 40x y 100x VI. Cuestionario 1. ¿Por qué se usan los colorantes en ciencias de la salud? 2. Explique con ejemplos la utilidad de 4 colorantes, no explicados en práctica RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS Los carbohidratos o los azúcares contienen carbono, hidrógeno y oxígeno. Estos existen en una gran diversidad de complejidad estructural. Los carbohidratos están distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participación estructural, funcional y metabólica. Los carbohidratos se clasifican dependiendo del numero de átomos de carbono que posee y la función aldehídica o cetonia, estas a su vez le confiere la base para la mayoría de las reacciones usadas para su identificación y cuantificación. Cuando el carbohidrato esta formado por una sola molécula de carbohidrato, se denomina monosacárido, por dos, disacárido y por mas de dos, polisacárido. II. OBJETIVOS Reconocer cualitativamente los carbohidratos como componentes de todos los seres vivos Observar algunas de sus propiedades Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA III. IV. MATERIALES Material biológico Orina de diabético Material de vidrio Bagueta Beaker (vaso precipitado de 250ml) Pipetas graduadas de 5 ml Tubos de prueba de 16x150 y de 13x100 Reactivos Acido sulfúrico concentrado Lugol Reactivo de Benedict (sulfato de cobre 1% e hidróxido de Sodio 40% Reactivo de Molish(alfa naftol) Solución de almidón Solución de fructuosa Solución de glucosa Solución de lactosa Solución de maltosa Solución de sacarosa Otros Materiales Gradilla Mechero Pinza de madera Rejilla de asbesto Trípode PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Reconocimiento de carbohidratos Los carbohidratos por acción deshidratante del ácido sulfúrico originan compuestos derivados del furfural, los que en presencia del alfa- naftol presente en el reactivo de Molish, formaran un compuesto coloreado. Es una reacción general para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono, la reacción se muestra en la siguiente figura 1. Rotular 7 tubos de prueba ( A, B, C, D, E, F y G) 2. Colocar 1ml de cada solución de carbohidrato al “tubo A” agregar 1ml de glucosa, al “tubo B” 1ml de fructuosa, al “tubo C” 1ml de sacarosa….. 3. Incorporar a cada tubo 1 ml del reactivo de Molish 4. Agregar lentamente 1ml de ácido sulfúrico concentrado 5. Observar los resultados 6. La aparición de un anillo violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos líquidos, indica que la muestra contiene carbohidratos. Reconocimiento de azúcares reductores Es una prueba específica para las sustancias reductoras con grupos carboxilos libres.Un carbohidrato al presentar grupos aldehído (-CHO) es capas de reducir el Cu+2 (presente en el sulfato de cobre CuSO4, a Cu+1 en un medio alcalino dado por el reactivo de Benedict y en presencia del calor, originará un precipitado Cu2O. El principio de esta reacción implica fenómenos de enolización por acción de los grupos OH- y de la temperatura. Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA 1. 2. 3. 4. Colocar los tubos (A,B,C, D,E,F y G) 2 ml de cada azúcar, según corresponda Adicionar 1ml de reactivo de Benedict Someter los tubos a ebullición en baño maría por 5 min Observar los cambios de color e interpretar 5. La aparición de un precipitado rojo indica la presencia de un azúcar reductor Reconocimiento del almidón Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidón. El color azul, se debe, posiblemente a la formación de un complejo: Ioduro de almidón, el cual puede formar un compuesto de absorción con los enlaces glucosídicos 1,4 presentes en los polisacáridos como el almidón, celulosa y el glucógeno. La aparición de una coloración azul indica la presencia del almidón y una coloración roja, indica el glucógeno o eritrodextrina. Si el color no cambia, el carbohidrato es un monosacárido o un disacárido. 1. 2. 3. 4. Solución de fructuosa Solución de sacarosa Solución de maltosa Solución de Lactosa Solución de almidón Orina de diabético 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor Reacción de Molish Solución de glucosa Pruebas 1 de molish:1ml solución: 1ml de ácido sulfúrico Protocolo de trabajo 2ml de solución: 1ml de reactivo Benedict +calor V. Colocar 1ml de solución de almidón en un tubo de prueba Adicionar 2 gotas de lugol Agitar fuertemente Observar la formación del color observaciones Reacción de Benedict observaciones Reacción de Lugol Especialidad de Estomatología 1ml de solución+2 gotas de lugol PRACTICAS DE BIOLOGÍA observaciones VI. Cuestionario 1. ¿Cuáles son las funciones de los carbohidratos en los seres vivos? 2. ¿Cuál es el carbohidrato más abundante de todos y cuál es el más abundante en nuestro cuerpo? 3. ¿Qué productos se obtiene de la hidrólisis de la maltosa, sacarosa y lactosa? 4. Diga cuál es la función del glucógeno en el organismo Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Cuarta semana PRACTICA Nº4 RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS Los lípidos representan una amplia variedad de compuestos orgánicos terciarios (C,H,O); son un grupo heterogéneo que se encuentra en las células vegetales y animales. Los tipos de lípidos van desde los más simples a los más complejos, de ahí su denominación lípidos simples como las ceras (cera de la fruta y verduras), los esteroides (hormonas sexuales y colesterol), esteres de ácidos grasos de glicerol (aceites vegetales y grasas animales), donde los ácidos grasos derivado de los vegetales tienen más uniones dobles o triples. Entre los lípidos complejos tenemos a los fosfolípidos y esfingolípidos, los cuales son localizados en diferentes tejidos. La grasa se almacena en el cuerpo, en los tejidos adiposos, y pueden servir como recubrimiento protector de ciertas partes del organismo. La grasa también sirve como fuente de energía en el cuerpo, aislante térmico y regulador del metabolismo. II. OBJETIVOS Reconocer cualitativamente los lípidos, presentes en células animales y vegetales Observar algunas de sus propiedades III. MATERIALES IV. Material biológico Aceite Frutos secos Mantequilla Material de vidrio Bagueta Beaker (vaso precipitado de 250ml) Pipetas graduadas Tubos de prueba de 16x150 y de 13x100 Tubos de ensayo Reactivos Agua destilada Alcohol etílico al 70% Bicarbonato de sodio Cloroformo o Eter KOH al 15% KOH al 40% NaOH al 1% NaOH al 20% Solución alcohólica de fenolftaleína Otros Materiales Gradilla Mechero Papel blanco Papel metálico Pinza de madera Rejilla Trípode PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Mancha translucida 1. Colocar una pequeña cantidad de muestra sobre el papel 2. Incorporar una gota de agua como control 3. Esperar a que se sequen las manchas 4. Observar los resultados a trasluz Solubilidad 1. Colocar en un tubo 2 ml de aceite y 3ml el disolvente orgánico (benceno) 2. Tapar y agitar fuertemente 3. Dejar que repose unos minutos 4. Repetir este proceso con (éter, cloroformo y alcohol etílico) Solubilidad en Sudan III 1. Colocar 1ml de aceite en un tubo 2. Adicionar 1 ml de sudan III 3. Observar la coloración formada Insolubilidad en agua 1. Colocar 1ml de aceite y añadir 5 ml de agua destilada 2. Agitar fuertemente Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA 3. Observar 4. Agregar 1ml de NaOH ó bicarbonato de sodio al 1% 5. Agitar fuertemente y observar Determinación de Ácidos libres (ácidos grasos) 1. Rotular dos tubos de prueba ( A y B ) 2. Agregar al tubo A ml de agua destilada y 1 ml de aceite 3. Al tubo B colocar 5ml de agua destilada 4. Añadir luego a ambos 3 gotas de fenolftaleína y 3 gotas de hidróxido de potasio (KOH) al 15% 5. Agitar fuertemente 6. Observar Saponificación La saponificación es una reacción de los ácidos grasos, en el cual reaccionan con álcalis o bases dan lugar una sal de ácido graso, el cual se denomina jabón. 1. Agregar en un beaker 3ml de aceite 2. Luego 2 ml de agua destilada 3. 5 gotas de KOH al 40% 4. Calentar y agitar la muestra con la ayuda del profesor 5. Observar (la presencia de espuma indica la presencia del jabón) Calentar - Observaciones Si - Agitar Si Si Si Si - Sudan III - 1ml fenolftaleína 3 gotas - - NaOH 1% o bicarbonato de sodio 1ml - - KOH 40% 5 gotas - KOH 15% - - disolventes orgánicos - VI. - 5ml Saponificación 2ml - 3ml Agua destilada 1ml - Determinación de ácidos libres 3ml Insolubilidad en agua 5ml Solubilidad en Sudan III 2ml Solubilidad 1ml Pruebas Aceite Protocolo de trabajo 1ml V. Cuestionario 1. 2. 3. 4. ¿Cuáles son las funciones de los lípidos en los seres vivos? Explique que se produce durante la saponificación. ¿Cuáles son los productos de esta reacción? ¿Por qué los lípidos no se disuelven en el agua y si en los disolventes orgánicos? Hacer un cuadro con la clasificación de los lípidos e indicar donde se localizan en los seres vivos. Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Quinta Semana PRIMER PARCIAL DE PRÁCTICA Se evaluarán todos los temas realizados desde la primera semana Dicho examen de práctica será evaluado solo ese día, no se tomará fuera de fecha. Sexta Semana Seminarios IMPORTANCIA BIOLÓGICA, EFECTOS Y APLICACIÓN DE LAS MACROMOLÉCULAS EN LOS SERES VIVOS Las macromoléculas tienen una gran importancia para la vida de los diversos seres vivos del planeta. Nuestro cuerpo complejo y organizado, necesita de estás macromoléculas para mantenerse, pero la ausencia o exceso de los mismos generan muchas alteraciones. Para explicar su importancia de cada uno de ellos, cada grupo responsable preparará su tema con anticipación y lo expondrá: Cada grupo deberá buscar trabajos de investigación de revistas (mínimo 2), los cuales serán entregados ese día Presentar trípticos. Sétima Semana PRACTICA 5 RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS Las proteínas son materiales poliméricos de aminoácidos, que se encuentran en los organismos vivos. Sirven como materiales estructurales del cuerpo y son fundamentales para muchos procesos vitales. Las proteínas se producen en plantas y en animales, los cuales se sintetizan a partir de aminoácidos de las células. Las proteínas de animales y de vegetales constituyen un alimento importante, ya que proporcionan aminoácidos esenciales del cuerpo, para la producción de proteínas necesarias. II. OBJETIVOS Reconocer la presencia de proteínas en los alimentos Observar algunas de sus propiedades Reconocer la presencia de aminoácidos III. MATERIALES Material biológico Harina de soja Queso Material de vidrio Bagueta Beaker (vaso precipitado de 250ml) Pipetas graduadas de 5 ml Tubos de prueba de 16x150 y de 13x100 Reactivos Acetato de plomo al 10% Ácido nítrico concentrado Albúmina de huevo al 1% NaCl al 20% Otros Materiales Gradilla Mechero de alcohol Mechero de Bunsen Pinza de madera Rejilla de asbesto Trípode Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA IV. NaOH al 10% Sulfato de cobre al 1% PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Desnaturalización de Proteínas 1. Rotular 4 tubos de prueba (A, B,C,D) y agregar a cada uno de ellos 2ml de albúmina 2. Al tubo A colocarlo a baño maría 3. Al tubo B añadir 1ml de ácido nítrico concentrado 4. Al tubo C agregar 2 ml de cloruro de sodio (NaCl) al 20% 5. El tubo D es el control 6. Anotar las observaciones Reacción de Biuret Los compuestos que contienen dos o más enlaces peptídicos forman un complejo con las sales de cobre en un medio fuertemente alcalino, dando un color púrpura o violeta 1. 2. 3. 4. 5. Colocar 2ml de la solución de albúmina de huevo al 1% (queso o harina de soja) Incorporar 1 ml de hidróxido de sodio al 10% Mezclar Añadir 2 gotas de sulfato de cobre al 1% Observar los resultados Reacción de cisteína Indica la presencia de aminoácidos azufrados debido a la formación de sulfuro de plomo. 1. 2. 3. 4. Colocar en un tubo 1 ml de albúmina Agregar 5 gotas de acetato de plomo la 10% y observar la observación del precipitado Añadir NaOH al 10% en cantidad suficiente hasta disolver el precipitado Hervir por 3 min y observar la coloración (color pardo oscuro) Reacción Xantoproteica Indica la presencia de aminoácidos con anillos bencénicos los que en presencia del ácido nítrico dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo. Agregar en un tubo de prueba 1 ml de albúmina Luego adicionar 1 ml de ácido nítrico concentrado Observar la formación de un precipitado blanco Hervir por 3 min y observar la coloración producida Agitar Baño maría Hervir - Si - 2ml Acetato de plomo 10% Cloruro de sodio al 20% 1ml - Acido nítrico concentrado 2ml Sulfato de cobre 1% Leche de soja o queso Desnaturalización de proteínas - Pruebas Albumina Protocolo de trabajo 2ml VII. NaOH 10% 1. 2. 3. 4. Observaciones Especialidad de Estomatología VIII. 3 min 3 min- Si - - 5 gotas - 2 gotas - 1ml xml - - 1ml Reacción Xantoproteíca 1ml Reacción de cisteína 1ml Reacción de Biuret 2ml PRACTICAS DE BIOLOGÍA Cuestionario 1. 2. 3. 4. ¿Qué son los aminoácidos esenciales? ¿Cuáles son las fuentes de proteínas de las dietas? ¿Cómo esta conformada una proteína? ¿cómo se produce la desnaturalización de las proteínas? Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Octava Semana PRACTICA 6 OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS DE CÉLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS PROCARIÓTICAS. Son células muy simples y primitivas. Apenas tienen estructuras en su interior. Se caracterizan por no tener un núcleo propiamente dicho; esto es, no tienen el material genético envuelto en una membrana y separado del resto del citoplasma. Además, su ADN no está asociado a ciertas proteínas como las histonas y está formando un único cromosoma. EUCARIÓTICAS. Células características del resto de los organismos unicelulares y pluricelulares, animales y vegetales. Su estructura es más evolucionada y compleja que la de los procariotas. Tienen orgánulos celulares y un núcleo verdadero separado del citoplasma por una envoltura nuclear. Su ADN está asociado a proteínas (histonas y otras) y estructurado en numerosos cromosomas. II. OBJETIVOS Observar y reconocer las características de las células procariotas y eucariotas III. MATERIALES Material biológico Epitelio bucal Papa en agua Material de vidrio Goteros Láminas Laminillas Placa petri Reactivos Aceite de inmersión Alcohol acetona Alcohol yodado Azul de metileno Colorante fucsina básica Colorante Ziehl Nielsen Otros Materiales o fucsina fenicada lugol Solución mercurio de cromo Violeta de genciana IV. Asa de siembra Gradilla Mechero de alcohol Mechero de Bunsen Pinza de madera Rejilla de asbesto Trípode PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Observación de la cubierta externa (glucocalix) de célula epitelial humana 1. Obtener una muestra del raspado bucal y colocarlo sobre una lámina 2. Secar la muestra al medio ambiente o con calor moderado 3. Agregar unas gotas de azul de metileno por 5min. 4. Cubrir la lámina con una laminilla 5. Observar al microscopio Observación de la célula vegetal (pared celular) 1. Colocar sobre una lámina una porción del catafilo de cebolla 2. Agregar una gota de lugol 3. Cubrir con una laminilla 4. Observar al microscopio Observación de las espiroquetas: Coloración vago 1. Colocar la muestra en una lámina portaobjeto 2. Adicionar sobre la muestra mercurio de cromo, dejar actuar por 5 min 3. Decantar el colorante y agregar violeta de genciana por 3min 4. Decantar el colorante y lavar suavemente con agua de caño 5. Observar al microscopio con objetivo de 100x Observación de bacterias: tinción Gram Equipo microscopio Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Sacar un poco de sarro dental con la ayuda de un palito de dientes o mondadientes Extender la muestra sobre la lamina Flamear la muestra Cubrir la muestra con cristal violeta por 1min Añadir lugol por 3 min. Decolorar usando una solución alcohol acetona por 30s. Agregar fucsina fenicada de 1 a 2 min Eliminar el exceso, lavar y secar Observarla con el objetivo 100x Protocolo de trabajo Células procariotas Células eucariotas Tinción Vago Tinción Gram lugol Muestra Azul de metileno coloraciones Epitelio bucal (célula animal) Cebolla (célula vegetal) Otras bacterias de la boca espiroquetas 10. Cuestionario 1. 2. 3. 4. ¿cuáles son las diferencias entre las células procariotas y eucariotas? Explique los efectos de las bacterias Mencione tres enfermedades que pueden producir las bacterias ¿Qué colorantes se uso en la práctica? Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Novena Semana PRACTICA 7 OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS de MEMBRANA y PARED CELULAR: HONGOS. La membrana y pared celular La membrana plasmática constituye el límite entre el citoplasma y el medio en el que se encuentra la célula y entre los orgánulos celulares y el citosol (hialoplasma), de manera que las biomembranas dividen al interior de la célula en numerosos compartimentos. Posee un espesor de 75 Ǻ (ángstrom). Al microscopio electrónico se presenta como una triple capa. Dos bandas oscuras externas de 20 Ǻ separadas por una interna de color claro de 35 Ǻ. La pared celular es una forma especializada de matriz extracelular (segregada por la célula y excretada al exterior de la membrana plasmática), que se encuentra adosada a la membrana plasmática de las células vegetales, y que se caracteriza por su alto contenido en celulosa, lo que la hace ser gruesa, rígida y organizada. Los Hongos Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito aproximadamente 500.000, pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones de especies) que presentan una amplia distribución en la naturaleza, contribuyendo a la descomposición de la materia orgánica y participando en los ciclos biológicos. Un pequeño número son patógenos de animales y plantas. Inicialmente, los hongos fueron clasificados dentro del Reino Plantae ya que fueron considerados organismos inmóviles presentando estructuras que se asientan firmemente en el sustrato sobre el que crecían. Sin embargo, cuando se ha aplicado la biología molecular en los estudios taxonómicos se ha observado que los hongos están más próximos al Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificación de los seres vivos en cinco reinos, los hongos se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que se divide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el más extenso que comprende el 50% de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos patógenos, Basidiomycota, Zygomycota y Chytridiomycota, encontrándose en los tres primeros los hongos patógenos humanos. Los hongos en los que no se conoce su reproducción sexual, constituyen un grupo heterogéneo denominado Deuteromicetos, hongos imperfectos o mitospóricos, que representa el segundo grupo más numeroso y que también incluye patógenos humanos. II. OBJETIVOS III. Diferenciar al microscopio las características de la membrana de una célula animal y la pared celular de la célula vegetal Identificar las características generales de un hongo MATERIALES Material biológico IV. Material de vidrio Células epidérmicas del catafilo de la 15 Laminas cebolla 15 Cultivo de Rhizopus, Penicillium, Laminillas Aspergillus y Saccharomyces 2 Goteros Tejido epitelial de la mucosa bucal 3Placas petri Reactivos Equipos Azul de lactofenol Azul de metileno Lugol Solución salina Microscopio Otros Materiales Bisturi Papel lente Pinza punta fina Pizeta PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Observación de la membrana de las células del epitelio (raspado de la mucosa bucal) 1. Obtener una muestra del raspado bucal y colocarlo sobre una lámina 2. Secar la muestra al medio ambiente o con calor moderado 3. Agregar unas gotas de azul de metileno por 5min. Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA 4. Cubrir la lámina con una laminilla 5. Observar al microscopio Observación de la célula vegetal (pared celular) 1. Colocar con la ayuda de una pinza un trozo pequeño del catafilo de la cebolla 2. Colóquelo sobre la lámina portaobjeto y agregar una gota de lugol 3. Cubrirla con la laminilla 4. Observarla al microscopio Observación de los hongos 1. Colocar una gota de azul de lactofenol 2. Con la ayuda de el asa Kohle en ángulo sacar la muestra y colocarla sobre la lamina 3. Cubrir con una laminilla 4. Observarla al microscopio V. Protocolo de trabajo Azul de lactofenol lugol Muestra Azul de metileno coloraciones Células eucariotas Membrana Epitelio bucal (célula animal) Pared celular Catafilo de la Cebolla (célula vegetal) Hongos y su pared celular VI. Cuestionario 1. ¿Cuáles osn la diferencias entre la pared de una célula vegetal y una bacteria? 2. ¿Cuál es la composición de la pared bacteriana? 3. ¿Cuál es la importancia biológica de los hongos? Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Décima semana SEGUNDO PARCIAL DE PRÁCTICAS Se evaluarán todos los temas realizados desde la Sétima semana Dicho examen de práctica será evaluado solo ese día, no se tomará fuera de fecha Décima Primera semana PRACTICA 8 OBSERVACIÓN DE LA PERMEABILIDAD CELULAR. Las membranas biológicas son selectivamente permeables, pues permiten el pasaje de algunas sustancias, mientras que bloquean el de otras. El movimiento de las moléculas de agua a través de este tipo de membranas semipermeables reviste un caso especial de difusión que se conoce como Ósmosis. El movimiento de agua, en este proceso, se realizará desde una región de menor concentración de soluto a una región de mayor concentración de soluto. Con respecto a las células, estas pueden encontrase inmersas tres tipos principales de medios, en cuanto a la concentración de soluto que estos presenten. Si la célula se encuentra rodeada de un medio que contenga mayor concentración de soluto, diremos que el medio es Hipertónico. Al contrario, si la concentración de soluto extracelular es menor que la intracelular, dicho medio será Hipotónico. Finalmente, si las concentraciones de soluto, a ambos lados de la membrana son iguales, nos referiremos a un medio Isotónico. En base a lo considerado, una célula eucariota como cualquiera de nuestros glóbulos rojos, que sea inmersa en un medio Hipertónico tenderá a perder agua, a deshidratarse. Este proceso se denomina plasmólisis. Al contrario, si el mismo tipo de célula fuese incluido en un medio Hipotónico, se produciría la entrada excesiva del agua, por lo cual el eritrocito terminaría reventando como un globo al cual inflamos de sobremanera. Este tipo de proceso se denomina Turgencia. Ahora bien, en nuestro organismo las células se encuentran en un medio Isotónico, por lo cual no se producen ninguno de los casos prescriptos. II. OBJETIVOS III. Observar los fenómenos de difusión y osmosis Demostrar la importancia que tienen las concentraciones de distintas soluciones en el mantenimiento de la integridad de las células vegetales y animales MATERIALES Material biológico Catafilo de cebolla Elodea Sangre Material de vidrio Reactivos Lamina portaobjeto Laminilla cubreobjeto Pipetas de 1ml Tubos de prueba de 16x150 Pipetas Pasteur Varillas de vidrio IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Agua destilada Alcohol yodado Azul de metileno Lugol Solución de NaCl al 0.4% Solución de NaCl al 0.9% Solución de NaCl al 2% Otros Materiales Algodón estéril gradillas guantes Lancetas hematológicas Equipo Microscopio Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Difusión intramolecular 1. En un tubo de prueba colocar 5ml de agua destilada 2. Con un gotero dejar caer en el tubo dos gotas de colorante 3. Observar como se difunde el colorante dentro del tubo Osmosis en eritrocitos 1. Rotular 3 tubos de prueba 2. Al primer tubo agregar solución isotónica Solución de NaCl al 0.9% 3. Al segundo tubo agregar solución hipotónica Solución de NaCl al 0.4% 4. Al tercer tubo agregar solución hipertónica Solución de NaCl al 2% 5. Desinfectar el dedo cordial y con la ayuda de una lanceta hematológica dejar caer dos gotas de sangre en cada uno de los tubos 6. Con una pipeta Pasteur colocar una gota en una lámina 7. Observar al microscopio Osmosis en vegetales 1. Agregar en tres láminas una pequeño trozo de catafilo de cebolla 2. Luego adicionar 2 gotas de la soluciones de NaCl (a la primera solución isotónica, a la segunda lamina la solución hipotónica y a la tercera solución hipertónica) 3. Cubrirlas con una laminilla 4. Observarlas al microscopio 5. De la misma manera proceder con las hojas de elodea VI. elodea - Medio hipertónico - 1ml 2ml Catafilo de la cebolla Medio isotónico 1ml Medio hipotónico 2ml Pruebas eritrocitos Protocolo de trabajo 2ml V. Cuestionario 1. 2. 3. 4. ¿Qué efecto tiene la temperatura sobre la velocidad de difusión? ¿Cuál es el efecto de la concentración sobre la velocidad de difusión? ¿Cual es la diferencia entre ósmosis y diálisis? ¿Como regula el organismo humano el mantenimiento de la concentración de sales en la sangre? Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA 5. Defina que es turgencia y plasmólisis. Décima Segunda Semana SALIDA DE PROYECCION SOCIAL Cada grupo expondrá los temas asignados para la salida de proyección social. Está actividad se realizará fuera de la Universidad. Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Décima Tercera Semana PRACTICA Nº9 OBSERVACIÓN DE ORGANELOS CELULARES: LAS MITOCONDRIA Y PLASTIDIOS CELULARES Mitocondria orgánulo de las células eucariotas. Lugar principal donde se genera el ATP (fuente de energía). La mitocondria está compuesta por una membrana externa y por una extensa membrana interna plegada. Mitocondrias: son cápsulas con diámetro de 0.5 micras, una longitud de 7-8 micras, cuyo número varia según el tipo de células. Presenta dos membranas: una externa que consta de tres extractos, y otra interna que forma unas crestas de variable altura. En las células vegetales se puede distinguir los organelos y estructuras características de una célula vegetal, que pueden ser observados con el microscopio óptico Plastidios Son orgánulos característicos de las células eucarióticas vegetales, ausentes en bacterias y cianofíceas procarióticas fotosintéticas y también en hongos. Presentan forma y tamaño variados. Están envueltos por una doble membrana y tienen ribosomas de tipo procarionte. A menudo están coloreados por pigmentos de carácter liposoluble. Los plastidios se clasifican de diferentes maneras. Los adultos, de células diferenciadas pueden ser: - Cromatóforos fotosintéticamente activos: como los cloroplastos (verdes), los feoplastos (pardos) y los rodoplastos (rojos). - Cromatóforos fotosintéticamente inactivos o cromoplastos (generalmente rojos y amarillos - Leucoplastos: fotosintéticamente inactivos e incoloros . II. OBJETIVOS III. Observar en las células eucariotas la presencia de las mitocondrias Identificar los cloroplastos y otros plastidios presentes en las células vegetales MATERIALES Material biológico IV. Ají amarillo Beterraga Células de la mucosa bucal Hojas de elodea Papa Zanahoria Material de vidrio Láminas Laminillas Pinzas punta fina Placas petri Reactivos Aceite de inmersión Agua destilada Lugol Suero fisiológico Verde de janus Equipos Otros Materiales Microscopio Hojas bisturí pizetas PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Observación de mitocondrias 1. Colocar sobre una lámina una muestra del epitelio bucal 2. Dejar secar 3. Agregar unas gotas del colorante verde de Janus y dejar por 5min 4. Eliminar el exceso y dejar secar la lámina 5. Observar al microscopio Observación de cloroplastos 1. Colocar una hoja de elodea sobre la lámina 2. Agregar una gota de agua destilada 3. Cubrir con una laminilla 4. Observar al microscopio Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Observación de plastidios 1. Realizar cortes finos de zanahoria, ají amarillo, betarraga 2. Colocar una gota sobre las muestras 3. Observar al microscopio Epitelio bucal Elodea Ají amarillo Zanahoria Beterraga Papa VI. Cuestionario 1. ¿Cuáles son las funciones e importancia de los plastidos? 2. ¿Qué función realizan las mitocondrias? 3. ¿Por qué las mitocondrias fijan el verde de Janus? Lugol Muestras Suero fisiológico Protocolo de trabajo verde de Janus V. Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Décima cuarta Semana PRACTICA Nº10 OBSERVACIÓN NUCLEAR EN CÉLULAS SANGUÍNEAS y GRUPO SANGUÍNEO Los grupos sanguíneo son una forma de clasificar la sangre, dependiendo de ciertas características que pose, estas dependen de los antígenos que los glóbulos rojos presentan en su superficie y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los antígenos y el factor RH. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte. Karl Landsteiner definió este sistema que permite distinguir a cuatro grupos de sangre en la población humana (A, B, O y AB) dependiendo de variaciones específicas que cada uno delos grupos presenta sobre los glicanos de las proteínas y lípidos de sus glóbulos rojos, plaquetas y otros tejidos. Sus antígenos no sólo se encuentran sobre los glóbulos rojos o eritrocitos, sino que también en la mayor parte de nuestros tejidos corporales, por lo que se clasifica como antígenos de histocompatibilidad, lo que hay que tener en cuenta a la hora de hacer trasplantes o injertos. Células sanguíneas Glóbulos rojos. También llamados eritrocitos o hematíes. Son células anucleadas (sin núcleo), en forma de disco bicóncavo y de aproximadamente 7 micras de diámetro . Glóbulos blancos. Sus valores oscilan entre 4000 y 11000 mm3. Su vida media es muy variada: desde horas a años (linfocitos T). Tienen núcleo. Dentro de los leucocitos distinguimos: Leucocitos con granulaciones en el interior de su citoplasma. Se denominan leucocitos granulados o polimorfos nucleares. No tienen forma específica. Entre estos destacamos: Basófilos: 0%-4%. Liberan a la sangre heparina, histamina intervienen en procesos de curación de la inflamación y a veces en la inflamación crónica. Neutrófilos: son más abundantes, suponen del 50% al 70% de los leucocitos. Intervienen en la inmunidad congénita. En procesos de infección aguda se dirigen a zonas de inflamación intensa. Tienen la capacidad de fagocitar y actúan como sustancias quimiotácticas (los tejidos infectados liberan sustancias químicas que atraen a los neutrofilos). Eosinófilos: 1%-3%. Están implicados en los fenómenos de alergias produciendo sustancias “alérgenas” como la histamina. Leucocitos agranulados: no presentan gránulos intracitoplasmáticos y tienen forma esférica. Linfocitos T: implicados en mecanismos de inmunidad celular. Linfocitos B: implicados principalmente en la inmunidad humoral Plaquetas. Se producen en la médula ósea, y tienen una forma de células grandes que reciben el nombre de megacariocitos. Estos megacariocitos sufren unas particiones (se dividen en fragmentos) y son llevados al sistema circulatorio (sangre) y allí se llaman plaquetas. Las plaquetas son anucleares y van a tener una vida media de entre 5 a 8 días. Están implicados en procesos de coagulación sanguínea, la cual es activada con una lesión vascular. I. II. OBJETIVOS Conocer la importancia de los grupo sanguíneo en la terapia transfusional Determinar el grupo sanguíneo ABO y Rh del alumno Observar as características de las células sanguíneas MATERIALES Material biológico Sangre Material de vidrio Láminas excavadas Laminas y laminillas Reactivos Agua destilada Alcohol yodado Otros Materiales Algodón Lancetas Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA III. Placas de grupo sanguíneo o porta objetos Puentes de coloración Colorante Wright o Giemsa hematológicas Set de reactivos para determinar el grupo sanguíneo y Rh (Sueros: Anti – A, Anti – B y Anti – D) PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Determinar el grupo sanguíneo 1. Limpie con un algodón embebido de alcohol la yema del dedo anular 2. Realizar la punción con la lanceta hematológica estéril 3. Colocar dos gotas de sangre sobre la lámina excavada 4. Agregar a cada muestra de sangre una gota de Sueros: Anti – A, Anti – B y Anti – D 5. Observar e identificar los resultados Observación de las células sanguíneas 1. Desinfectar el dedo anular con un algodón con alcohol yodado 2. Punzar con la lanceta estéril 3. Con la ayuda de otra lámina portaobjeto formar un ángulo de 45º y realizar el frotis 4. Dejar secar la muestra Coloración 1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 min 2. Eliminar exceso y agregarle agua destilada y dejar actuar por 10 min. 3. Eliminar el exceso y lavar suavemente en el caño 4. Dejar la secar la muestra 5. Observarla al microscopio a 100x IV. Cuestionario 1. Dibuje los distinto tipo de leucocitos 2. Anotar los resultados de las láminas excavadas Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA Décima Quinta Semana PRACTICA Nº 11 FASES DE LA MITOSIS. El núcleo contiene la mayor parte de la información hereditaria de la célula, es decir, las instrucciones necesarias para el desarrollo y el metabolismo de las especies. Este organelo es el encargado de duplicar su información genética para transmitirla a las nuevas generaciones cuando la célula se reproduzca. La Mitosis es el proceso mediante el cual el material genético de una célula, duplicado previamente en la interfase, se reparte equitativamente entre dos núcleos hijos, como consecuencia de cambios estructurales de excepcional importancia que se producen en el núcleo de la célula en división. La mitosis, en sus aspectos básicos, es similar para células vegetales y animales, pudiéndose distinguir en ella cinco fases: Profase, Prometafase, Metafase, Anafase y Telofase. La mitosis va precedida por un periodo de larga duración que recibe el nombre de interfase. II. OBJETIVOS III. Observar los cromosomas Diferenciar las fases de la mitosis en células vegetales MATERIALES Material biológico Material de vidrio Reactivos Raicillas de 1 luna de reloj Orceína cebolla 2 Placas petri acética IV. Equipo Microscopio óptico compuesto Otros Materiales Bísturi Mechero de alcohol Papel filtro Papel lente Pinza de acero Pinza de madera PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL Mitosis en raíces de cebolla 1. Realizar cortes delgados en la parte terminal de las raíces de cebolla 2. Colocar los cortes en un placa petri o en una luna de reloj 3. Agregar orceína (cantidad suficiente que cubra completamente las raíces) 4. Flamear hasta observar la emisión de un vapor blanco (por tres veces) 5. Retirar los cortes de la raíz con la ayuda de una pinza 6. Colocarlas sobre una placa petri 7. Adicionar orceína acética fría 8. Retirar los cortes y colocarlos sobre la lamina portaobjeto 9. Agregar una gota de orceína 10. Cubrirla la muestra con un laminilla y con el papel absorbente 11. realizar el squash. 12. Observar al microscopio y dibujar sus observaciones 13. Reconocer las fases de la mitosis V. ---------------------Cuestionario --------------------- --------------------- 1. ¿Cuáles son las diferencias entre la mitosis y la meiosis? -------------------- Especialidad de Estomatología PRACTICAS DE BIOLOGÍA 2. ¿Cuál es la importancia de cada una de ellas? 3. ¿En qué tipo de células se dan? 4. ¿En que fase de la mitosis, los cromosomas llegan a su máxima condensación? 5. ¿Una mala disyunción da lugar a qué tipo de alteraciones? Décima Sexta Semana SEGUNDO SEMINARIO Cada grupo deberá buscar trabajos de investigación de revistas (mínimo 2), los cuales serán entregados ese día Presentar trípticos. Décima Sétima Semana EVALUACION FINAL TERCERA EVALUACION DE PRÁCTICAS
