Colecta y Preservación de macroalgas marinas
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Colecta y Preservación de macroalgas marinas Cindy FernándezFernández Brian Wysor 1 Pasos 1- Colecta 2-Transporte de muestras 3- Identificación 4- Preservación de organismos A- Muestras húmedas A B- Silica gel C- Secas C Secas- Colecciones de herbario 2 Antes de salir al campo • Se requieren de permisos de colecta e investigación para la colecta de cualquier organismo marino, que se obtienen bti en los l Mi i t i Ministerios d Ambiente de A bi t de d cada d país: í ANAM (Panama), MINAE (Costa Rica), MAERN (El Salvador), MARENA (Nicaragua) • La exportación de organismos requiere un permiso aparte • La colecta debe tomar en cuenta dejar duplicados en los herbarios locales para incrementar el conocimiento. 3 1- COLECTA 4 Materiales • • • • • • • • • Valde B l Bolsas previamente i t numeradas d Cámara Cincel Martillo Cuchillo Tabla acrílica Lápiz GPS 5 Colecta de Muestras • A la hora de colectar algas hay que tomar en cuenta diferentes factores ambientales. • Una buena colección debe buscar amplia combinación de sitios: 1 Sustrato: Fondos rocosos, 1rocosos arenosos, arenosos coralino coralino, raíces de mangles, madera, flotando 2- Profundidad: Zona intermareal, Submareal 6 Colecta de Muestras: Tips • No sobrecolectar ! : Gasto de tiempo + algas olorosas • Colectar suficiente material para preservar apropiadamente • Muestrear uest ea a varias a as profundidades y diferentes sustratos 7 2- TRANSPORTE • Transportar las algas con suficiente agua de mar • Evitar exposición al sol • Mantener muestras con aireación si se procesan después • Si el laboratorio esta largo fijar las muestras en formalina al 4% en agua de mar con un buffer (bicarbonato de calcio 8 cda/litro) • Nota: El material en formalina no sirve para análisis genéticos 3-IDENTIFICACIÓN Obtener guías de identificación según el sitio de estudio 9 Materiales • Cámara • Computadora C t d para ingresar datos-Libreta • Pinzas • Tijeras • Bandejas • PortaobjetosCubreobjetos • Microscopio (micrométrico) • Regla g • Lápiz 10 En el laboratorio… • Separar muestras por especie • Tomar en cuenta los duplicados por espécimen: - 1 formalina, - 1 silica g gel ((Si hayy interés en análisis molecular)) - 2-4 secas 11 La identificación requiere de múltiples estrategias: g - Tinciones - Cortes: longitudinales y transversales Azul de anilina - Descalcificación con HCl al 10% - Hidratación: muestras secas - Corte transversal 12 Examinación bajo microscopio Descalcificación Corte longitudinal Identificación • Examinar el material fresco siempre es lo mejor, sin embargo una buena preservación en formalina funciona Base de Datos • Elaborar una base de datos • Elegir un código para cada muestra • Colocar números consecutivo a los especimenes • Fotografiar ! 13 4- PRESERVACIÓN 14 A-Húmedas • Formalina 4% • Alcohol 90% - Se ven mejor los tejidos - Conservan color - Tóxico - Se pueden utilizar para análisis moleculares - Disuelve pigmentos: algas quedan blancas q - No tóxico 15 Materiales • • • • • • Frascos-Viales Etiquetas Lapiz Formalina 4% Alcohol 90% Guantes 16 B- Silica gel • Trabajo Molecular: - La extracción de ADN es mejor si se utiliza material fresco - La integridad del ADN se conserva al secar rápidamente la muestra - El silica gel promueve un secado rápido - Especímenes fijados en fomalina no pueden ser utilizados para este tipo de análisis 17 Materiales • Silica gel • Marcador M d negro indeleble • Bolsas pequeñas • Papel toalla • Etiqueta 18 Pasos para preservación en silica gel 1- Tomar un trozo del alga 2 Secarlo en papel toalla 23- Envolverlo en papel toalla seco 4- Colocarlo dentro de una bolsa (Colocar código) 5- Agregarle el silica gel 19 C- Muestras Secas • Requisitos: Paciencia y Estilo 20 Materiales • Cámara • Computadora para ingresar datos-Libreta • Pinzas • Tijeras • Portaobjetos-Cubreobjetos • Microscopio (micrométrico) • Regla • • • • • Lápiz Bandejas Papel fabriano Cartón Prensa Herbario 21 Montaje de muestras Hay varias técnicas para colocar un alga sobre el papel. Un té U técnica i es colocar l ell alga l en una bandeja con agua de mar y con un pincel o aguja ir extendiendo el talo. Desventaja: D t j El secado d ell muy lento 22 Otra técnica… • Colocar el alga en el papel, agregar unas gotas de agua • Extender el alga con un pincel o aguja p g j • Eliminar el exceso de agua con un gotero. 23 Montaje de las muestras Montaje básico para secar las muestras incluye: cartón periódico muestra periódico cartón 1- Colocar muestra en papel fabriano 2- Colocar papel encerado (para que no se pegue la muestra 3- Capa de papel periódico a ambos lados 4 Capa 4C d de C Cartón tó a ambos b lados * Nota: Se pueden colocar otras capas de papel o telas secantes 24 Prensado • Apilar varias muestras seguidas • Prensar • La Prensa se puede colocar cerca de una fuente de calor o de aire para un secado más rápido 25 Etiqueta Debe Contener: - Nombre Especie con Autor - Localidad de colecta (Nombre, coordenadas) - Hábito del alga: sustrato, profundidad, epífita - Nombre N b d de quien i colecta l t - Nombre de quien identifica la especie - Fecha de colecta - Nombre del Herbario - Número del Herbario - Preservación: P ió ffresca, formalina, alcohol Etiqueta de herbario 26 Ejemplos 27 Metas de una Colección • Referencia de los especímenes • Historia de la investigación • Poner a disposición de la comunidad científica la información para comparaciones morfológicasgenéticas futuras • Cuantificación de la biodiversidad • Información de la distribución y ecológia de las especies • El rastreo de la información de los especímenes debe ser ágil. 28 Al Final Base de Datos Muestras Genética Fotografías: Campo-Morfología Colección de referencia (húmeda-seca) para futuro 29 Agradecimientos Fotografías de: • Tropical Phycology Course 2008: http://striweb.si.edu/taxonomy_training/past_courses/ 2008/2008_phycology.html • Cindy Cind Fernánde Fernández G G. • Lennert Tyberghein • Juan José Alvarado 30
