NOTAS IMPORTANTES: El equipo está encendido siempre, excepto

GPC
NOTAS IMPORTANTES:
El equipo está encendido siempre, excepto en vacaciones. La bomba queda
funcionando a un caudal mínimo (0.2 ml/min) y el solvente recircula.
Cuando se termina el trabajo diario se debe bajar gradualmente el caudal hasta
0.2 ml/min.
Ante cualquier duda o en caso de observar que algo no funciona correctamente
(variación en los tiempos de elución, fluctuaciones en el lector de presión ,
taponamiento del inyector, picos extraños, etc) suspender el trabajo y consultar
A pesar de que las condiciones del laboratorio no son las máxima limpieza,
tratar de trabajar con la mayor prolijidad posible: tubos limpios, mesada limpia y
ordenada; recordar que todas las impurezas pasan al equipo y pueden causar
obstrucciones.
Preparación de las muestras.
•
Usar sólo solvente destilado con estabilizante
•
10-20 mg cada 5 ml de THF (aprox). Se recomienda hacer ensayos de prueba
previamente al inicio de un trabajo prolongado, de modo de conocer la
concentración óptima de las muestras para obtener cromatogramas “útiles” (picos
con una intensidad adecuada para análisis cuantitativos, picos que no estén
saturados).
•
Se recomienda agregar a la solución a ensayar entre 5 y 10 µl de tolueno, el cual se
usa como referencia en los tiempos de elución (se puede calcular un tiempo de
elución reducido: tpico/ttolueno) NO ES OBLIGATORIO
•
la solución de THF se mide con pipeta de doble aforo de 5 ml.
•
Una vez disuelta la muestra la solución se filtra con el kit de purificación (Jeringa
+ soporte con filtro).
Filtrado de las soluciones:
•
Cargar la solución en la jeringa
•
Colocar el soporte con el filtro
•
“inyectar” la solución en un tubo limpio
•
repetir el procedimiento con solvente para enjuagar tanto la jeringa como el filtro
•
Volumen de inyección: 100 µl. Se requiere eliminar cuidadosamente las burbujas de
aire antes de inyectar.
Comienzo de la rutina
Subir el caudal gradualmente (tiempo de espera entre cada paso: aprox. 30'') de a 0.1
ml/min hasta 1.1 ml/min (No es el caudal real sino el caudal de rutina).
Dejar estabilizar las columnas al menos 35 min antes de comenzar a pasar las
muestras.
Se recomienda correr una línea de base antes de pasar muestras para asegurarse
que el equipo funciona correctamente.
Secuencia de trabajo
•
Subir el caudal como se indicó más arriba
•
Luego de estabilizado el sistema (al menos 35 minutos si las columnas en uso
son HR0.5,HR1 y HR3): controlar el detector:
1- si el detector en uso es el
detector UV: fijar la longitud de onda de trabajo
y seleccionar el rango de medición teniendo en cuenta la concentración de las
soluciones); una vez estabilizado el set de columnas hacer un autocero (botón AZ) y
registrar una línea de base . Se recomienda apagar el detector UV al final del día, y
prenderlo al mismo tiempo que se sube el caudal, requiere 30 minutos de
estabilización.
2- si el detector en uso es el
refractómetro:
requiere 24 hs de estabilización
antes de ser usado, a continuación: purgar a proximadamente 2 minutos, hacer un
autocero, registrar una línea de base, condiciones standard: sensibilidad 4, factor 20
a- para fijar temperatura interna teclear: 2nd func 4 (= setºC) 35 enter
b- para purgar : 2nd func 9 (= purge) , dejar 2 minutos y repetir 2nd func 9 , para
terminar el purgado, dejar estabilizar la lectura , luego hacer un autocero.
c- para hacer autocero: 2nd func 6 (= autozero)
d- registrar una línea de base sin inyectar nada
•
Preparar y filtrar la solución (enjuagar la jeringa y el filtro antes de filtrar la
muestra siguiente).
•
Programar la adquisición de datos en la PC
Software en uso: GPC2K
ENTER-gpc.exe-ENTER
Nombre del archivo:..... (8 caracteres)
Confirmar.......
Inyectar (enjuagar la jeringa de inyección antes de cargar la muestra siguiente).
ENTER: Inmediatamente después de la inyección, para iniciar la adquisición (la
adquisición no es automática).
NOTA 1: El solvente recircula cuando no se inyectan muestras. Luego de inyectar
desconectar el tubo del recipiente con solvente e insertarlo en la botella para
solvente desechable.
NOTA 2: El programa de adquisición corta automáticamente a los 50 minutos, se
puede hacer manualmente con ESC. Si las columnas que están conectadas son HR0.5,
HR1 y HR3 el tiempo total de un ensayo es de aproximadamente 35 minutos.
Se
recomienda respetarlo
NOTA 3: El solvente recién destilado y filtrado se carga en el botellón y se deben
enjuagar las columnas usando un caudal de 0.3-0.5 ml/min. Una vez reestabilizadas las
columnas es conveniente registrar una línea de base.