UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA UNAN-LEÓN FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre asociados al cultivo de plátano variedad Hartón enano (AAB) en tres fincas productoras de León y Telica, Nicaragua Elaborado por: Indira Raquel Martínez, Br. Requisito previo para optar al grado de Licenciada en biología Tutor: Juan Castellón, M.Sc. Asesores: Miriam Corrales, M.Sc. David Alberto Cerda, M.Sc León, Nicaragua, 2013 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 DEDICATORIA Dedico esta monografía a: Dios, por permitirme ser una de sus princesas y guiarme en cada paso que doy, por todos esos ángeles que ha puesto en mi camino para no desfallecer permitiéndome conocer la grandeza de su amor y bondad. Mi hijo Dorian Said Martínez, por ser esa fuente de inspiración del día a día y por alegrar mi vida con su tierno amor. Mi madre Rosa Elizabeth Martínez, por ser una madre incondicional, por motivarme a seguir adelante y ayudarme a superar las dificultades, estando en cada momento de mi vida. Dra. Johana Tercero, por ser una persona muy especial en mi vida, por tantos consejos, creer en mí y apoyarme de manera incondicional en el transcurso de mi carrera, por las atenciones que ha tenido con mi hijo y conmigo, enseñándome a ser una mejor madre. A mis hermanos Dina, Daniel, Grethel y Francisco por tenerme siempre en sus pensamientos y darme palabras de aliento. II Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 AGRADECIMIENTO Quiero agradecer a: Dios, el señor todo poderoso que ha hecho posible la culminación de esta etapa de mi vida, dotándome de sabiduría y perseverancia. Ing. Janet Flores Navarrete por su disposición al apoyarme en todo momento, por ser amiga y maestra compartiendo sus conocimientos, despertando en mí el interés por la fitopatología, dándole dirección a mi tesis. Los señores Mariano Chévez y Gustavo Mendoza por su amabilidad al permitir que se llevara a cabo el desarrollo de esta investigación en sus fincas. A M.Sc. Juan Castellón por darme la oportunidad de trabajar con él y dedicar su tiempo para mi preparación en el transcurso de esta investigación. M.Sc. David Alberto Cerda por haberme brindado su apoyo con dedicación y esmero en los momentos difíciles. M.Sc. Ana Zavala por tanta amabilidad al brindarme sus conocimientos en SIG y colaborar en la elaboración de los distintos mapas del área de estudio. M.Sc. Miriam Corrales por ser una excelente persona y maestra, permitiéndome conocer el hermoso mundo de la biología, a través de sus enseñanzas. A Ph.D. Ana Cristina Rostrán por apoyarme en la realización de algunos análisis estadísticos requeridos en este estudio. A la familia Ruíz Gutiérrez, por haberme acogido en su familia, siendo muy amorosos con mi hijo, cuidándolo para que yo pueda estudiar. A mis amigos Alberto Dávila, Arelys Luna, Cristel López y Maricela Luna, por tener siempre las palabras necesarias para subirme el ánimo, apoyándome en diferentes circunstancias a lo largo de la carrera. A mi prima Wendy Figueroa, por haberme apoyado durante el transcurso de esta investigación, impulsándome a seguir adelante. A mis familiares y vecinos, que a pesar de la distancia me tienen en sus pensamientos y siempre piden a Dios por mí. III Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 CONTENIDO 1 INTRODUCCIÓN ............................................................................. 3 2 OBJETIVOS ....................................................................................... 5 2.1 OBJETIVO GENERAL .............................................................................................................................................5 2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS .......................................................................................................................................5 3 HIPOTESIS ........................................................................................ 6 4 MARCO TEORICO .......................................................................... 7 4.1 EL GÉNERO MUSA ................................................................................................................................................7 4.1.1 Generalidades ..........................................................................................................................................7 4.1.2 Requerimientos edafoclimáticos del género Musa ..................................................................................9 4.1.3 Importancia económica del cultivo de plátano ...................................................................................... 10 4.2 NEMATODOS ...................................................................................................................................................... 11 4.2.1 Nematodos de vida libre ........................................................................................................................ 12 4.2.2 Fitonemátodos ....................................................................................................................................... 14 5 MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................... 19 5.1 ÁREA DEL ESTUDIO ............................................................................................................................................ 19 5.2 PREDIAGNÓSTICO ............................................................................................................................................... 20 5.3 MÉTODO DE MUESTREO...................................................................................................................................... 20 5.3.1 Toma de muestra para el diagnóstico de nematodos de vida libre ........................................................ 21 5.3.2 Toma de muestra para el diagnóstico de fitonemátodos........................................................................ 21 5.4 MÉTODOS DE ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS EN EL LABORATORIO........................................................................ 21 5.4.1 Análisis del sistema radicular a nivel de laboratorio ............................................................................ 21 5.4.2 Extracción de nematodos de vida libre (NVL) ....................................................................................... 22 5.4.3 Extracción de fitonemátodos (FN) ......................................................................................................... 22 5.5 ANÁLISIS DE DATOS ........................................................................................................................................... 23 5.5.1 Nematodos de vida libre ........................................................................................................................ 23 5.5.2 Fitonemátodos ....................................................................................................................................... 24 6 RESULTADOS Y DISCUSION ..................................................... 25 6.1 PREDIAGNÓSTICO ............................................................................................................................................... 25 6.2 PORCENTAJE DE NECROSIS ................................................................................................................................. 26 6.3NEMATODOS TOTALES, NEMATODOS DE VIDA LIBRE (NVL) Y FITONEMÁTODOS (FN) EN 100G DE SUELO .......... 27 IV Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 6.3.1 Nematodos de vida libre (NVL) en 100g de suelo.................................................................................. 28 6.3.2 Fitonemátodos (FN) en 100g de suelo ................................................................................................... 29 6.3.3 Distribución porcentual de grupos tróficos en 100g de suelo en las tres localidades ........................... 30 6.3.4 Índices calculados para las poblaciones de nematodos en 100g de suelo ............................................ 34 6.4 POBLACIONES DE FITONEMÁTODOS EN 100G DE RAÍZ DE PLÁTANO .................................................................... 34 6.5 RELACIÓN ENTRE EL PESO DE LA RAÍZ Y LOS GÉNEROS DE FITONEMÁTODOS...................................................... 38 7 CONCLUSIONES ........................................................................... 39 8. RECOMENDACIONES ................................................................... 40 8 BIBLIOGRAFIA ............................................................................. 41 9 ANEXOS ........................................................................................... 47 ANEXO 1. MAPA DE LA PARCELA MUESTREADA EN LA FINCA EL PEGÓN EN LEÓN .................................................. 47 ANEXO 2. MAPA DE LAS DOS FINCAS MUESTREADAS EN TELICA. .......................................................................... 48 ANEXO 3. FORMATO DE ENCUESTA PARA EL PREDIAGNÓSTICO DE LAS FINCAS MUESTREADAS ............................. 49 ANEXO 4. COMPARACIÓN MÚLTIPLE DE LOS GÉNEROS DE FITONEMÁTODOS POR FINCA EN LA CIUDAD DE LEÓN Y TELICA……………………………………………………………………………………………………………52 ANEXO 5. FOTOGRAFÍA DE ALGUNOS DE LOS GÉNEROS ENCONTRADOS……………………………………….….53 V Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 INDICE DE CUADROS Cuadro 1. Fincas muestreadas en el municipio de León y Telica ............................................................... 19 Cuadro 2. Correlación lineal entre los diferentes grupos tróficos encontrados en 100g de suelo. .............. 31 Cuadro 3.Clasificación y porcentaje de grupos tróficos encontrados en100g de suelo en tres fincas productoras de plátano de León y Telica. ................................................................................................... 32 Cuadro 4. Proporción de bacterivoros y fungivoros en tres fincas de León y Telica. ................................ 34 Cuadro 5.Promedios de fitonemátodos (FN) en 100g de raíz y densidad poblacional de los cuatro principales géneros de fitonemátodos encontrados en plantaciones de plátano en Telica y León. ............ 36 Cuadro 6. Análisis de varianza entre los diferentes géneros de fitonemátodos por fincas en los sitios de muestreo. ..................................................................................................................................................... 37 Cuadro 7. Correlación lineal entre los diferentes géneros de fitonemátodos en raíz y el peso de la raíz funcional (PRF), peso de la raíz no funcional (PRNF) y % de necrosis. .................................................... 38 VI Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 INDICE DE FIGURAS Figura 1. Morfología de una planta de plátano (Crane & Balerdi, 1972) ..................................................... 7 Figura 2. Clasificación de los grupos tróficos de nematodos...................................................................... 13 Figura 3. Diseño del muestreo en campo utilizado para nematodos de vida libre y fitonemátodos en tres fincas productoras de plátano en León y Telica. ......................................................................................... 20 Figura 4. Valores medios de porcentaje de necrosis en las Fincas bajo estudio ......................................... 26 Figura 5. Composición de las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en las tres fincas muestreadas. ................................................................................................................................................ 28 Figura 6. Población promedio de los cuatro principales géneros de fitonemátodos encontrados 100g de raíz en fincas productoras de plátano en León y Telica .............................................................................. 36 VII Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 RESUMEN El cultivo de plátano en los países de América Latina y el Caribe tiene especial importancia, no solo por formar parte de la dieta de sus habitantes, sino también por los beneficios económicos que se generan de esta actividad como son la generación de empleos e ingresos a los países involucrados. Los fitonemátodos son una de las plagas más importantes en el cultivo de plátano a nivel mundial ya que afectan el desarrollo y crecimiento de las plantaciones debido al daño que provocan en el sistema radicular. Los principales géneros de fotonematodos que afectan el cultivo de plátano son: Radopholus, Helicotylenchus, Pratylenchus y Meloidogyne. Las poblaciones de nematodos varían en relación a las zonas en donde habitan por tal razón el objetivo de esta investigación fue comparar las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre presentes en dos fincas de Telica y una finca de la ciudad de León. Se tomaron muestras de suelo para la identificación de nematodos de vida libre al igual que muestras de raíces para determinar el índice de necrosis y proceder a la identificación de los fitonemátodos. Se realizó una encuesta a los propietarios de la finca para conocer el historial de manejo del lote en estudio. Los datos obtenidos en las poblaciones de fitonemátodos fueron analizados con ANAVA y con las poblaciones de nematodos de vida libre se realizaron comparaciones múltiples y se determinó el índice Shannon. Se identificaron un total de 106,200 nematodos de vida libre y 25,000 fitonemátodos en el suelo. Estos fueron agrupados en cinco grupo tróficos; bacterívoros, fungívoros, Micófagos, depredadores y fitonemátodos; siendo el grupo más abundante el de los bacterivoros con el 74% de la población, posteriormente se determinó la proporción de bacterívoros y fungívoros, en donde las poblaciones de la finca El Pegón están siendo dominados por fungívoros y las poblaciones de la finca de Mariano Chévez y Gustavo Mendoza son dominadas por bacterívoros. En todas las fincas fueron mayores los promedios de nematodos de vida libre en comparación con los fitonemátodos encontrados en el suelo. Se identificó un total de 15,702.17 fitonemátodos en las raíces de plátano, distribuidos en los géneros Meloidogyne, Pratylenchus, Radopholus y Helicotylenchus; siendo este último el más abundante y Meloidogyne el menos abundante. Las poblaciones máximas de Helicotylenchus se encontraron en la finca El Pegón y las poblaciones más bajas de Meloidogyne se encontraron en la finca de Gustavo Mendoza. Se determinó que existe diferencia significativa 1 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 para el género Helicotylenchus entre la finca El pegón y Gustavo Mendoza. No se encontró relación entre el peso de la raíz funcional, el peso de la raíz no funcional y el índice de necrosis en los diferentes géneros de fitonemátodos. 2 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 1 INTRODUCCIÓN El plátano es considerado un producto altamente energético y el cuarto cultivo más importante a nivel mundial después del arroz, el maíz y el trigo (Fundación Produce de Guerrero A.C, 2012). Este cultivo forma parte importante de la dieta de más de cien países tropicales y subtropicales, en especial los países de África y el continente americano (Jones, 2000), lo que le da su relevancia como elemento de la seguridad alimentaria. La importancia socioeconómica de este cultivo a nivel mundial se ve reflejada en la generación de fuente fijas de empleo, proporcionando ingreso de divisas mediante las exportaciones (IICA Oficina Nicaragua, 2009; González, 2010). La producción mundial de plátano está en manos de los países en vías de desarrollo, principalmente en aquellos países que se encuentran en África, Centroamérica y el Caribe, en donde se lleva cabo cerca del 98% de la producción mundial. El 1% de la producción es destinada al comercio global debido a la alta demanda interna, siendo los principales mercados Estados Unidos y Europa (Ministerio de Fomento, Industria y Comercio [MIFIC], 2009; Fundación Produce de Guerrero A.C, 2012). Nicaragua fundamenta su economía en la agricultura, presentando diferentes zonas aptas para la producción de plátano con alta rentabilidad (Blanco Beteta, 2007). Las plantaciones de plátano ocupan un estimado de 10,000 hectáreas, distribuidas entre Masaya, Granada, León, Chinandega y Rivas (Centro de producción más limpia de Nicaragua [CPML], 2012), siendo este último el principal productor, con aproximadamente 375 millones de unidades del fruto. En nuestro país el 65% de los productores de plátano son pequeños productores (MIFIC, 2009). No obstante, aunque Rivas genere el 85% de la producción nacional, León y Chinandega son los departamentos que presentan mejores condiciones para el establecimiento de este cultivo bajo riego (Blanco Beteta, 2007). Las exportaciones de este producto están destinadas al mercado centroamericano (Costa Rica, El Salvador y Honduras), Puerto Rico y Estados Unidos. Por otro lado, la alta diversidad de suelos aptos para este cultivo está provocando cambios marcados en el ecosistema del suelo y su salud, afectando la productividad y sostenibilidad de los cultivos. Dentro del ecosistema del suelo los nematodos de vida libre pueden ser asignados a muchos grupos ecológicos y su interacción con el medio puede generar un impacto positivo o 3 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 negativo de acuerdo a las circunstancias. Estos organismos desempeñan un papel muy importante en cuanto a la capacidad de regular el nitrógeno inorgánico, saprofitos y rizobacterias (Niblack, 1989). Muchas veces, el cultivo del plátano se ve afectado por un grupo de nematodos patógenos llamados fitonemátodos, los cuales causan el 20% de pérdidas en América Latina, África y Asia. Los géneros de mayor importancia desde el punto de vista económico son: Radopholus, Pratylenchus, Helicotylenchus y Meloidogyne. Estos provocan afectaciones en el sistema radicular y por ende en el desarrollo normal de la planta, reduciendo la vida útil de las plantaciones (González C, 2009; Duong Thi Minh, Elsen, Nguyet, 2012; Garcia Salazar, 2012). Actualmente se han llevado a cabo investigaciones en Nicaragua sobre las afectaciones de los fitonemátodos en el cultivo de plátano en Rivas (Castellón, 2009), Matagalpa, Jinotega (García Salazar, 2012). Sin embargo, aun no se ha cubierto en su totalidad todas las áreas productoras pese a que ya se ha reportado reducciones en el rendimiento asociado a estos organismos. Por lo que es importante hacer un diagnóstico de las poblaciones de fitonemátodos y de esta manera brindar información más presisa sobre los diferentes géneros de nematodos presentes en León y Chinandega. El propósito de esta investigación fue determinar las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre asociados a la rizósfera del cultivo de plátano (Hartón enano AAB) en 3 fincas de los municipios de León y Telica. La información generada podrá ser usada para mejorar el manejo de este cultivo y por consiguiente disminuir las pérdidas causadas por estos patógenos, aumentando la producción de plátano en la región. 4 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 2 OBJETIVOS 2.1 Objetivo general Determinar la diversidad de fitonemátodos y nematodos de vida libre asociados al cultivo de plátano variedad Hartón enano (AAB) en 3 fincas productoras de León y Telica, Nicaragua en el período Enero–Julio 2013. 2.2 Objetivos específicos Diagnosticar la población de fitonemátodos asociados a las raíces del cultivo de plátano variedad Hartón enano (AAB) en tres fincas productivas de plátano. Determinar las poblaciones de nematodos de vida libre presentes en plátano variedad Hartón enano en las tres fincas de estudio. 5 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 3 HIPOTESIS Ha: Las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre varían dependiendo de la ubicación de cada finca. Ho: Las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre no varían dependiendo de la ubicación de cada finca. 6 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 4 MARCO TEORICO 4.1 El género Musa El plátano es una planta monocotiledónea herbácea que tuvo su origen en el sureste de Asia y las islas del Pacífico, extendiéndose desde la India hasta Papua Nueva Guinea, incluyendo Malasia e Indonesia (Chavarría Castillo, 2010). De acuerdo a Crane (1998) y Hernández (2009), los plátanos agrupan un gran número de clones partenocárpicos pertenecientes al orden Escitamineales, familia Musaceae y subfamilia Musoideae, la cual tiene dos géneros Musa y Encete. Existen dos especies económicamente importantes Musa acuminata y M. balbisiana. La mayoría de las variedades cultivadas son híbridos entre estas especies. Cada variedad se diferencia por el tamaño de la planta y el fruto, la morfología, calidad y resistencia a las enfermedades (Crane & Balerdi, 1972; Rodríguez Manzano, 2001; Méndez, 2007). Según Marín (2002) el primer lugar en donde el plátano fue considerado como comestible fue la península Malaya, siendo favorecida inicialmente la especie M.acuminata. 4.1.1 Generalidades Morfológicamente la planta de plátano consiste de un sistema de raíces fibrosas, un cormo subterráneo o rizoma y un pseudotallo que sustenta las hojas, flores y frutos (Castellón, 2009). Véase Figura 1. La formación de raíces se da a nivel del cambium, las cuales emergen a través de los nudos y entrenudos subterráneos del cormo (Orozco, 1999). Las raíces se encuentran establecidas de la Figura 1. Morfología de una planta de plátano (Crane & Balerdi, 1972) Indira Martínez Página 7 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 siguiente manera: el 0.68% de las raíces son primarias, el 53.44% son raíces secundarias y el 45.88% son raíces terciarias con pelos absorbentes (Vergara Castillo, 2010). Las raíces y las hojas son consideradas los dos órganos más importantes de la planta de plátano, ya que su comportamiento fisiológico y su estado fitosanitario están ligados al cumplimiento de muchas funciones relacionadas con la producción y el rendimiento del cultivo (Belalcázar, 2003). El cormo o rizoma original es un órgano importante de almacenamiento que ayuda a sustentar el desarrollo del racimo y el surgimiento de los hijos de la planta, denominados colinos, mediante una serie de cambios morfológicos y anatómicos en los tejidos (Orozco, 1999). Antes de la floración, el cormo contiene el 35% de la materia orgánica de la planta, el cual baja un 20% en el momento que la planta alcanza la madurez del fruto (Menjivar Barahona, 2005). El pseudotallo tiene su origen en el cormo y se encuentra estructurado por la prolongación y modificaciones de las hojas. Presenta la misma anatomía del cormo, con menor espesor en su corteza y con sistema foliar compuesto por haces vasculares (Orozco, 1999).Ofrece apoyo a la planta y la capacidad de almacenar reservas amiláceas. Por otra parte, le permite alcanzar mayor altura y elevar el nivel de las láminas foliares que captan la luz solar (Menjivar Barahona, 2005). Las hojas se originan en el meristemo terminal, ubicado en la parte superior del bulbo, dando lugar a la formación del pecíolo y la nervadura central (Menjivar Barahona, 2005). En todo su ciclo de vida la planta presenta varios tipos de hojas ya sean rudimentarias, estrechas ensiformes y otras pueden ser anchas y verdaderas (Landaverde Toruño, 2006). El crecimiento y producción del cultivo de plátano están condicionados por el desarrollo progresivo de las hojas, por lo cual deben mantenerse funcionales desde la emisión de la inflorescencia y durante el desarrollo de los frutos. Esto se debe a que la producción de los frutos depende de manera directa de la actividad fisiológica de las hojas (principalmente la fotosíntesis).Por tal razón, es en la fase reproductiva en donde culmina la producción de hojas (Acosta & Salinas, 2011). Según Crane en 1998 las flores de plátano son amarillentas, irregulares y con seis estambres, de los cuales uno es estéril. Se encuentran dispuestas en inflorescencias en forma de espiral a lo largo del eje organizadas en grupos de 10 a 20. Estas están cubiertas por brácteas Indira Martínez Página 8 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 carnosas de color púrpura verdoso, las cuales se caen a medida que el desarrollo de las flores progresa. Las primeras flores que emergen son femeninas y rápidamente crecen para transformarse en grupos de frutos llamados manos. Las últimas flores en surgir son las masculinas y estas pueden estar ausentes o reducidas grandemente (Crane, 1998). El fruto es una baya con muchos óvulos pero sin semillas, que presenta una forma lineal o falcada entre cilíndrica y marcadamente angulosa según la variedad (Vergara Castillo, 2010). Se desarrolla en bastones curvos que crecen en racimos en todas direcciones, siendo el peso de este lo que permite que el pedúnculo se doble. Esta reacción determina la forma del racimo (Crane, 1998). El desarrollo del fruto está condicionado por la acumulación de pulpa en el interior del pericarpio; de tal manera que un buen racimo consta de 8 manos de 15 dedos, con un peso medio de 150g por dedo, variando de esta manera el peso del racimo entero de 20 a 30kg (Salunke & Desai, 1984). 4.1.2 Requerimientos edafoclimáticos del género Musa El cultivo de plátano requiere de cierta estabilidad en las condiciones agroclimáticas para lograr un óptimo crecimiento, desarrollo y producción. Por lo tanto, al verse alterado uno de estos factores por debajo de los niveles de tolerancia de la planta, va a incidir de manera directa en su desempeño fisiológico y productivo (Cayón Salinas, 2004). La temperatura es un factor determinante para el crecimiento y desarrollo del plátano, ya que tiene un efecto directo sobre la velocidad de la mayoría de los procesos metabólicos y de manera más específica en el ciclo vegetativo de la planta, su actividad fotosintética y respiratoria (Cayón Salinas, 2004). El crecimiento de la planta puede ocurrir por debajo de 16ºC pero se detiene a 10ºC, retardándose la frecuencia de producción de hojas, el ritmo de brotación de colinos y el desarrollo de los racimos (Munro Olmos, 2005). Las temperaturas óptimas para la floración están entre 26-28ºC, mientras que para el crecimiento de los frutos fluctúan entre 2930ºC (Crane, 1998). Las temperaturas bajas causan la producción de hojas lanceoladas, racimos y frutos con formas anormales (Cayón Salinas, 2004). Los suelos más aptos para el cultivo de plátano son planos, profundos, ricos en materia orgánica con textura arenosa pero con suficiente arcilla y limo para que haya unas permeabilidad Indira Martínez Página 9 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 media; ya que si ésta es muy baja se presentan daños por asfixia en el sistema radicular (Castaño, 2011).Por lo tanto el porcentaje de arcilla no debe ser mayor del 40% ni menor al 20% (Munro Olmos, 2005). La humedad del suelo debe de mantenerse a capacidad de campo, ya que las raíces de plátano extraen agua del suelo únicamente a valores bajos de succión (Munro Olmos, 2005). Las condiciones de pH favorables para el cultivo de plátano oscilan entre 6 y 7.5, pudiendo prosperar en suelos que presenten un intervalo de pH de 5 a 8 (Munro Olmos, 2005). 4.1.3 Importancia económica del cultivo de plátano La producción de plátano es de mucha importancia a nivel mundial, debido a la generación de empleos y como importante recurso económico. Asimismo, constituye el cuarto cultivo más significativo por su fruto rico en carbohidratos y nutrientes, que es parte importante en la dieta de muchos países tropicales y subtropicales (Castellón, 2009). La producción mundial de plátano está en manos de los países en vías de desarrollo que se encuentran principalmente en África, Centroamérica y el Caribe, los cuales producen aproximadamente el 98% de la producción mundial. Para el 2008, en América Latina se producía el 60 % de la producción mundial de plátano (IICA Oficina Nicaragua, 2009). Según la FAO, en el 2010 los principales veinte países productores de plátano cosecharon 4.9 millones de hectáreas de plátano equivalentes a 92.38 millones de toneladas producidas (USD 25,694.06) (Fundación Produce de Guerrero A.C, 2012). Los mayores países productores de plátano a nivel mundial son: India (34.53%), China (10.66%), Filipinas (9.95%), Ecuador (8.59%) y Brasil (7.55%) (Macotto Oquelí, 2009; Fundación Produce de Guerrero A.C, 2012; Centro de Información del Paraquat, 2013). Nicaragua es un país agrícola, que presenta una gran variedad de suelos aptos para el cultivo de plátano con alta rentabilidad, proporcionando empleos permanentes para los habitantes de la región y por ende, constituyendo una importante fuente de ingresos a corto plazos para los pequeños y medianos productores (IICA Oficina Nicaragua, 2009). Indira Martínez Página 10 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 En Nicaragua existen alrededor de 4,102 productores de plátano, de los cuales el 85% se encuentran organizados en cooperativas, facilitando la exportación de este producto (MIFIC, 2009; CPML, 2012). Actualmente se estima un área de siembra a nivel nacional entre 18 mil y 20 mil manzanas con rendimientos promedios entre 15 y 18 mil unidades por manzana, en condiciones de siembra tradicional (IICA Oficina Nicaragua, 2009).Un estimado de 10,000 hectáreas se encuentra distribuido en Masaya, Granada, León, Chinandega y Rivas; siendo este último el principal exportador, con una producción de unos 375 millones de unidades del fruto (MIFIC, 2009; CPML, 2012).Las exportaciones nicaragüenses de plátano están dirigidas al mercado Centroamericano (Costa Rica, El Salvador y Honduras). Otros países importadores son Canadá y los Estados unidos en donde se consume como fruta fresca (IICA Oficina Nicaragua, 2009). 4.2 Nematodos Los nematodos son gusanos redondos, de simetría bilateral, no segmentados, incoloros y circulares pertenecientes al phylum Nematoda (Thorne, 1961). Poseen una considerable variación en las estructuras internas y externas, la cual los capacita a vivir en un amplio rango de condiciones climáticas (Evans, 1993). A pesar de su pequeño tamaño, los nematodos tienen bien desarrollados los sistemas digestivo, excretor, reproductivo, muscular y nervioso. Sin embargo ellos no poseen ni sistema circulatorio, ni sistema respiratorio. La cavidad del cuerpo contiene un fluido a través del cual se lleva a cabo la circulación y respiración. La locomoción consiste en ondulaciones serpenteantes por contracciones alternadas de fibras musculares longitudinales ventrales y dorsales (Tamayo, 2004). El ciclo de vida consta de seis estados: huevo, cuatro estados juveniles o larvarios y adulto. Al pasar de un estado a otro hay una muda; la primera muda se produce dentro del huevo. Después de la última muda, los nematodos se diferencian en macho y hembras (Chacón, 2012). Los nematodos son considerados como el grupo de vertebrados más numerosos de la tierra (Medrano, 2008) y se encuentran presentes en todos los suelos especialmente en aquellos con cierto grado de humedad y con abundante disposición de materia orgánica. Los nematodos Indira Martínez Página 11 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 son el grupo de consumidores de bacterias y hongos más abundante y cosmopolita, por lo que tienen gran importancia en las cadenas tróficas (Poisson et ál. 1976). Actualmente los nematodos han sido objeto de profundos estudios. Algunos nematodos como la lombriz intestinal (Ascaris lumbricoides), las triquinas (Trichuris trichura) y los oxiuros (Enterobius vermicularis) son estudiados por los daños en la salud humana; ocasionando muchas veces hasta la muerte. Asimismo, los nematodos pueden provocar el deterioro de las plantas afectando la producción, como el caso del nematodo dorado (Heterodera rostochiensis). Sin embargo, también existen nematodos de vida libre (benéficos) los cuales favorecen la creación y la circulación de nutrientes en la tierra, más si no se les controla se pueden convertir en plagas (Medrano, 2008). 4.2.1 Nematodos de vida libre Los nematodos de vida libre se encuentran presentes en todos los suelos, especialmente en aquellos con cierto grado de humedad y con abundante disposición de materia orgánica (Tamayo H, 2004). Son organismos que afectan la disponibilidad de nutrientes del suelo a través de sus interacciones tróficas con otros microorganismos, están envueltos en la transformación de la materia orgánica en mineral, regulan las poblaciones de bacterias y de hongos, sirven como indicadores de perturbaciones ambientales y renuevan los nutrientes (Linden, Hendrix, Coleman & Van Vliet, 1994), por lo que tienen gran importancia en las cadenas tróficas. Lara (2003) afirma que los nematodos de vida libre son organismos que en los últimos años han cobrado importancia para la investigación científica mundial, debido a la facilidad de cultivo y su ciclo de vida corto, así como su tolerancia a variaciones del ambiente. Los nematodos poseen varias características que los hacen muy útiles como indicadores ecológicos (Freckman, 1988), por lo que la estructura de la comunidad ofrece una herramienta valiosa para evaluar las condiciones del suelo. Además, el análisis de su comunidad da más información de su taxonomía y roles alimenticios (Gupta &Yeates, 1997). Los nematodos ocupan posiciones claves en los sitios alimenticios en el suelo, se alimentan de la mayoría de organismos del suelo y son alimento para muchos otros, también ejercen influencia sobre la vegetación de sucesión (Londoño, 2006). Indira Martínez Página 12 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 Hay una relación clara entre estructura y función del comportamiento alimenticio que es fácilmente deducido de la estructura de la cavidad bucal y la faringe (Yeates et al., 1993). De tal manera que mediante el análisis del tipo de boca y esófago los nematodos pueden dividirse en los siguientes grupos tróficos: bacterívoros (Rhabditida), fungívoros (Aphelenchida), omnívoros (Dorylaimida), depredadores (Mononchida) y parásitos (Tylenchida) (Figura 2). La evaluación de la estructura de las comunidades de nematodos requiere del conocimiento de sus estrategias de vida a través de la escala “cp”, la cual cataloga a los nematodos en cinco grupos de consumidores de microorganismos. Ésta fue descrita de la siguiente manera, por Ferris et al. (2001): cp-1: Corto ciclo de vida, huevos pequeños, principalmente bacterívoros, comúnmente se alimentan de medios enriquecidos, subsisten fácilmente a disturbios en el suelo. cp-2: Largos ciclos de vida y más baja fecundidad que el cp-1, muy tolerantes a condiciones adversas y pueden ser criptibióticos. Se alimentan muy deliberadamente, principalmente bacterívoros y fungívoros. cp-3: Ciclos de vida más largos, más sensibles a condiciones adversas, fungívoros, bacterívoros y carnívoros. cp-4: Largos ciclos de vida y baja fecundidad, más sensibles a disturbios, pequeñas especies de omnívoros. cp-5: Ciclos de vida más largos, talla de cuerpo muy grande, tasas más bajas de fertilidad, mucho más sensibles a disturbios. Predominantemente carnívoros y omnívoros. Bacterívoro Wilsonema Omnívoro Dorilaymida Fungívoro Aphelenchida Depredadores Mononchida Fitopatógeno Helicotylenchus Figura 2. Clasificación de los grupos tróficos de nematodos Las poblaciones que se ubican como colonizadores (r-estratégicos), se caracterizan por presentar ciclo de vida corto, un estado profundo de dormancia, se encuentran en mayor número, muestran altas fluctuaciones en densidades de población, producen una gran cantidad de huevos Indira Martínez Página 13 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 pequeños y muchas veces son vivíparos, viven en ecosistemas efímeros. Por otro lado, las poblaciones que son persistentes (k-estratégicos), presentan ciclo de vida largo, una baja tasa de reproducción, poca habilidad para colonizar, son muy sensibles a disturbios en el suelo, casi nunca predomina en una muestra de suelo, difícilmente su número fluctúa durante el año, tienen poca descendencia y producen huevos largos y viven en hábitats con estabilidad de larga duración (Ferris & Matute 2003). 4.2.2 Fitonemátodos A los nematodos que parasitan a las plantas se les denomina fitonemátodos. Estos se diferencian de los nematodos de vida libre por ser más inactivos y contar con una lanza o estilete (estructura cuticular, endurecida y hueca) situado en la parte delantera de su cuerpo y mediante el cual absorben los jugos celulares de las plantas (Hunt, 2000). El desarrollo de las poblaciones de fitonemátodos en un cultivo, involucra los procesos de supervivencia, diseminación, infección, alimentación y reproducción (Medrano, 2008). En muchos nematodos fitoparásitos, se presenta un fenómeno llamado hipobiosis en el cual se da la detención en algún punto del desarrollo permitiéndoles sobrevivir en condiciones adversas (Arauz, 1998). La cantidad y distribución de estos organismos estará en dependencia de factores climáticos y del tipo de suelo, así como del manejo que se le dé a los cultivos, pudiéndose encontrar alrededor de 150,000 millones en una hectárea, de los cuales el 30% son parásitos de plantas (Taylor, 1968). Los fitonemátodos presentan una amplia gama de hospederos, causando a nivel mundial pérdidas económicas promedio anuales de aproximadamente 11% equivalentes a 80 billones de dólares. Dentro de los cultivos afectados por la acción patógena de los nematodos destacan los de tomate, banana, cacahuete, tabaco, café, cacao, algodón, coco, soja y en regiones templadas principalmente los de cereales, patata, remolacha, maíz y judías y demás hortícolas (Andres, 2003). Indira Martínez Página 14 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 4.2.2.1 Fitonemátodos en la familia de las Musáceas Según varios estudios se han reportado 146 especies de nematodos asociados al género Musa, distribuidos en 43 géneros ubicados dentro del Orden Tylenchida (Yépez, 1972; (Nematode-Plant Expert Information System [NEMAPLEX], 2010). De manera, general los fitonemátodos ocupan el segundo lugar en importancia económica debido al daño que provocan en el cultivo de plátano (Araya, 2003). Los cuatro géneros más perjudiciales dependiendo del ambiente y ubicación geográfica son Pratylenchus, Helicotylenchus, Meloidogyne y Radopholus, tomando mayor relevancia en los trópicos y subtrópicos el género Radopholus (Araya, 1995; Ploetz, 2004). La sintomatología que presentan las plantas de plátano infectadas con fitonemátodos es muy variable. Pueden presentar tumores, lesiones internas de la raíz y deformaciones del sistema radicular, siendo los daños más severos la defoliación, marchitez y/o el volcamiento de las plantas que presentan sus frutos desarrollados. Todo esto retrasa considerablemente los ciclos de producción (Gobierno del estado de Colima, 2005; Instituto Colombiano Agropecuario [ICA], 2012). 4.2.2.2 Géneros de fitonemátodos más importantes de los cultivos de Musáceas A. Pratylenchus spp. (nematodos lesionadores) Existen ocho especies de este género reportadas en cultivares de plátano y banano a nivel mundial. Las especies de mayor importancia son P. goodeyi yP. coffeae; siendo esta última la más ampliamente distribuida en los trópicos (Marín, 2002; Torrado Jaime, 2009) y presentando un amplio rango de hospederos (Gowen & Queneherve, 1990). Los nematodos pertenecientes a este género son endoparásitos (migran constantemente hacia el interior de las raíces), por lo cual se considera que todos los estadíos son infectivos (Bridge, Fogain & Speijer, 1997). El daño causado es probablemente subestimado debido a la similitud entre la necrosis de la raíz y del cormo causada por el nematodo barrenador Radopholus similis (Marín, 2002). Indira Martínez Página 15 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 El daño ocasionado por la alimentación y migración intracelular de estos fitonemátodos se manifiesta como lesiones pardo oscuras en el parénquima, las cuales pueden avanzar de manera progresiva hasta alcanzar el cilindro central, provocando una atrofia del tejido radical (Bridge, Fogain & Speijer, 1997). Los daños se reflejan en la reducción del peso de los racimos, alargamiento en el ciclo reproductivo, falta de crecimiento de las plantas y en casos severos se puede presentar caída de las plantas (Marín, 2002). B. Meloidogyne spp. (nematodos noduladores ) Las especies del género Meloidogyne son parásitas sedentarias, distribuidas por todas las zonas en donde se cultiva plátano (Torrado Jaime, 2009), pudiéndose encontrar junto a otros patógenos como Radopholus similis y Pratylenchu ssp. En lugares donde estos últimos no se han establecido es probable que Meloidogyne sea más abundante (Davide, 1998). Los estados juveniles infectivos de Meloidogyne ssp penetran las raíces causando muerte a nivel celular. Los síntomas primarios se reflejan a través de abultamiento y engrosamiento irregulares en las raíces primarias con secciones corchosas y la epidermis corrugada. Las raíces secundarias y terciarias presentan algunas agallas características de la infección por este nematodo (Rivas, 2003). Dentro de los síntomas secundarios se pueden observar amarillamiento en las partes aéreas de las plantas, hojas más angostas, detención del crecimiento de la planta y menor producción con pérdidas hasta del 57% (Guzmán Piedrahita, 2004). C. Radopholus spp. (nematodos barrenadores) Este género presenta una amplia distribución mundial, así como también una gran variedad de hospederos, dentro de los cuales se encuentra los principales representantes de la familia Musaceae. Este género constituye hasta el 70% de la población de nematodos en las raíces de musáceas (Menjivar Barahona, 2005). Radopholus similis, una de las especies más destacadas en este género, es un nematodo fitoparásito que se alimenta de raíces y cormos de plátano en todo el mundo. Entre los daños Indira Martínez Página 16 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 figuran afectaciones en el crecimiento y desarrollo de la planta, reducción en el tamaño de los racimos y alargamiento del ciclo vegetativo. En estado avanzado de infección, las plantas muestran carencia total de raíces absorbentes. Por tal razón, es considerada como la especie de fitonematodo más dañina, con pérdidas en producción entre el 20 y 100% (Marín, 2002; Secretaria de Agricultura, Ganaderia, Desarrollo Rural, Pezca y Alimentación[SAGARPA], 2012). D. Helicotylenchus spp. (nematodos en espiral) Helicotylenchus multicinctus (nematodo en espiral) es probablemente, después de R. similis, el nematodo más numeroso y ampliamente diseminado en las plantaciones de banano y plátano del mundo.El daño causado por este nematodo se evidencia por la presencia de lesiones rojas en la superficie de las raíces y la destrucción de las raíces secundarias. Este daño superficial es distinto al daño causado por R. similis (Guzmán Piedrahita, 2004). Helicotylenchus no es capaz de entrar en los cormos de las musáceas, aunque sí ha sido reportado reduciendo los rendimientos en un 19 y 34%. También puede causar acame (volcamiento) en las plantaciones de plátano (Guzmán Piedrahita, 2011). 4.2.2.3 Análisis fitosanitario para nematodos Para determinar de manera temprana si un cultivo está siendo afectado por nematodos el método más preciso es la toma de muestras de suelo y raíces en campo. Posteriormente se procede a la extracción de estos organismos a nivel de laboratorio. Existen diversos mecanismos de extracción de nematodos, los cuales varían dependiendo de las necesidades del investigador. Algunos métodos son para la extracción de nematodos en general y otros son más específicos como por ejemplo el extracto de quistes y el cribado mojado. Los métodos de extracción pueden ser activos (donde el nematodo mueve de la tierra o raíz) o pasivo dónde el nematodo está físicamente separado de la tierra o raíz. Los métodos activos incluyen las técnicas de la bandeja; los métodos pasivos incluyen cribando o centrifugación (Kelly, 2006). Indira Martínez Página 17 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 A continuación se identifican los nematodos mediante el uso de caracteres morfológicos y especialmente de parámetros morfométricos. Esto se debe a que la variabilidad morfológica entre los nematodos es muy escasa. Los principales caracteres morfométricos utilizados son: longitud, anchura, posición de la vulva y tamaño del estilete (Guzmán Piedrahita, 2004). Luego que han sido identificados los nematodos, se relaciona la presencia de estos con los sintomas que presenta la planta como la precencia de raices necroticas. Una vez obtenidos los analisis del laboratorio, si son positivos, se procede a tomar medidas de control ya sean culturales como la desinfección de los materiales y la eliminación de residuos de cosecha. Tambien de puede recurrir al control biologico basado el el uso de variedades resistentes y microorganismos entomopatógenos como fusarium. El control fisico es otra opcion mediante la desinfeccion del suelo con calor, aplicando agua caliente al suelo para matar adultos y huevos de nematodos (Instituto Colombiano Agropecuario ICA, 2012). Indira Martínez Página 18 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 5 MATERIALES Y MÉTODOS Los métodos usados para el muestreo y análisis de las muestras en el presente estudio siguieron las líneas establecidas en el estudio realizado por Castellón (2009) con pequeñas modificaciones. 5.1 Área del estudio El estudio se llevó a cabo en tres fincas productoras de León (Anexo 1) y Telica (Anexo 2). La finca El pegón en el municipio de León y las fincas de Mariano Chévez y Gustavo Mendoza en el municipio de Telica. Cuadro 1. Fincas muestreadas en el municipio de León y Telica Finca Municipio Propietario Manzanas de cultivo de plátano El Pegón León UNAN-León 35 Santa Ana Telica Gustavo Mendoza 2.5 Mariano Chévez Telica Mariano Chévez 4.5 León se encuentra a una altura promedio de 94msnm, con temperaturas promedios de 28.9oC, humedad relativa del 63%, precipitación pluvial anual promedia entre los 500 y 1200mm concentrada en la estación lluviosa (Instituto Nicaragüense de Estudios Territoriales [INETER], 2012). Los suelos son profundos, de color rojizo con subsuelos arcillosos que se derivan de cenizas volcánicas, siendo ricos en minerales básicos (Mendoza, 2010). El Municipio de Telica presenta condiciones climáticas similares al trópico de sabanas, se encuentra a una altura promedio de 119msnm con temperatura promedio de 28.4oC, humedad relativa de 52% y precipitación anual de 1,827mm (INETER, 2012). Los suelos de este municipio se caracterizan por presentar suelos de origen volcánicos (Andisol), desde franco a franco-arenosos. Son suelos profundos, bien drenados, de topografía plana alternados con lomeríos y suelos de textura pesada los cuales han sido utilizados para la explotación cañera, Indira Martínez Página 19 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 frutales, granos básicos, ganadería y el cultivo de las musáceas, particularmente plátanos (Instituto Nicaragüense de Industria y Fomento [INIFOM], 1994). 5.2 Prediagnóstico Se realizó un prediagnóstico en campo con el objetivo de conocer el historial de manejo de cada lote y para esto se aplicó una encuesta (Anexo 3) a cada uno de los productores para trazar los criterios de selección del lote. 5.3 Método de muestreo En cada finca se delimitó un lote de 1ha como mínimo (Figura 3). Dentro de cada lote se definieron 6 parcelas de 25m² y dentro de cada una se tomaron 3 plantas recién paridas/florecidas. En resumen 3 lotes x 6 parcelas/lote x 3 plantas /parcela= 216 plantas. Figura 3. Diseño del muestreo en campo utilizado para nematodos de vida libre y fitonemátodos en tres fincas productoras de plátano en León y Telica. P= parcela Indira Martínez Página 20 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 5.3.1 Toma de muestra para el diagnóstico de nematodos de vida libre Para la extracción de nematodos de vida libre se utilizaron las tres plantas seleccionadas en campo. Se extrajo una muestra de suelo con el uso de un barreno a 10cm de profundidad y a 50cm de interface. Posteriormente se mezclaron las tres muestras de suelo para obtener una muestra compuesta. Las muestras fueron previamente codificadas, y luego trasladadas al Campus Agropecuario № 2, Finca el Pegón de la UNAN-León para ser analizadas. 5.3.2 Toma de muestra para el diagnóstico de fitonemátodos De las tres plantas seleccionadas en cada parcela se extrajo una muestra de suelo con raíces (2kg) en el centro de la planta madre e hijo (interface), las cuales se mezclaron para obtener una muestra compuesta y de esta manera lograr mayor representatividad de cada parcela. La muestra se extrajo mediante el método tradicional (Araya, 1999), el cual consiste en extraer las muestras de suelo y raíces con un palín a 50cm de la base de la planta (interface) en dirección hacia el centro de la calle y a 30cm de profundidad. 5.4 Métodos de análisis de las muestras en el laboratorio 5.4.1 Análisis del sistema radicular a nivel de laboratorio De las muestras extraídas en campo se separaron las raíces del contenido de suelo y se lavaron con agua potable para remover partículas de suelo, residuos e impurezas. Seguidamente con un bisturí, se separaron las raíces funcionales (raíces de color blanco o crema) y no funcionales (raíces de color negro o necróticas) y se pesaron por separado permitiéndonos conocer el peso total de las raíces recolectadas. Posteriormente los segmentos de las raíces funcionales se depositaron en una bandeja plástica para tratar de homogenizarlos. De esta bandeja se tomaron 5 segmentos de 10cm de Indira Martínez Página 21 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 largo para determinarle el índice de necrosis el cual permitió evaluar el daño interno provocado por los fitonemátodos. 5.4.2 Extracción de nematodos de vida libre (NVL) Para la extracción de los NVL se usó el método de Baermann (1917) modificado Hooper (1961). Se pesaron 250g del suelo tamizado y se colocaron sobre papel toalla que fue sobrepuesto en un tamiz de 2mm dentro de un contenedor plástico. Luego se le agregó agua potable al contenedor hasta que llegó al nivel del suelo, con el objetivo de mantener el suelo completamente húmedo y no sumergido. Después de transcurridas 48 horas, se procedió a filtrar el agua del contenedor por un tamiz de 25μm dos veces para colectar los nematodos de la solución y luego se transfirió la solución a un tubo de ensayo hasta completar 20ml de solución de agua, en la cual se procedió a realizar un conteo general de los nematodos presentes. Después de transcurrida una hora y logrando que los nematodos se concentren en el fondo del recipiente se extrajeron 15ml de 20ml, quedando 5ml para realizar la identificación y conteo de los nematodos de vida libre. La identificación se realizó en alícuotas de 0.10ml de la solución que se depositaron en un porta objeto, al cual se le sobrepuso un cubre objeto para ser flameado por 3-5s para lograr la inmovilización de los nematodos. Esto facilitó su identificación (Salguero, 2006; Castellón, 2009). 5.4.3 Extracción de fitonemátodos (FN) Para determinar las poblaciones de fitonemátodos se utilizó el método de macerado y filtrado; el cual consiste en colocar 25g de raíces funcionales en un contenedor plástico con 300ml de agua potable. Posteriormente se licuaron las raíces a baja velocidad por 10s y luego en alta por 5s. Seguidamente la solución del licuado se pasó en un juego de cribas superpuestas de arriba hacia abajo de 250, 106 y 0.25μm. Se lavó la criba de 250μm por 2min y la de 106μm por 1min. El contenido de la criba de 0.25μm se recolectó en un beaker para identificar y cuantificar Indira Martínez Página 22 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 la población de fitonemátodos. Se tomaron alícuotas de 2ml después de homogenizar la suspensión para transferirlas a microcámaras de conteo. Se realizaron dos conteos de fitonemátodos por alícuota en un microscopio de luz con aumento de 40x, 60x y 100x. A partir de los nematodos cuantificados por alícuota, se estimó la cantidad total de nematodos por 100g de raíz a través de una extrapolación con relación al volumen total de raíces procesadas. Asimismo, los fitonemátodos se identificaron hasta nivel de grupo. 5.5 Análisis de datos Todos los análisis estadísticos se llevaron a cabo con el programa SPSS for Windows ver. 17.0 y Sigman Plot. Primeramente, se hicieron gráficos de resumen y/o cuadros de frecuencia para los datos poblacionales de NVL y FN. Luego se hicieron análisis específicos para cada grupo tal como se describe a continuación. 5.5.1 Nematodos de vida libre Los nematodos identificados en la muestras de suelo se agruparon de acuerdo al grupo trófico al que pertenecían (bacterívoros, omnívoros, depredadores, fungívoros y fitonemátodos). También se hizo un análisis de correlación simple entra cada grupo trófico para ver si había alguna relación entre ellos. Igualmente, se calcularon el índice de diversidad de Shannon-Weiner y la proporción de bacterívoros -fungívoros. 5.5.1.1 Índice de diversidad de Shannon-Weiner El índice de Shannon-Weiner es una de las medidas de diversidad de especies-grupo taxonómico de una localidad, el cual se calculó mediante el programa SPADE usando el método MLE (estimador de probabilidad máxima) (Chao & Shen, 2003). Indira Martínez Página 23 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en el cultivo de plátano en 3 fincas de León y Telica durante el período Enero Julio 2013 5.5.1.2 Proporción de bacterívoros y fungívoros (B/F) Mide la contribución de nematodos bacterívoros y fungívoros al total de la abundancia de nematodos (B/(B+F), los cuales están comprendidos entre 1 (totalmente dominado por bacterívoros) y 0 (totalmente dominado por fungívoros) (Yeates 2003). 5.5.2 Fitonemátodos Se identificaron y contaron los cuatro principales géneros de fitonemátodos encontrados en las raíces de los plátanos. Posteriormente se hizo un análisis de varianza (ANAVA) y pruebas de contraste de la mínima diferencia significativa a través del proceso sugerido por Fisher en 1935, para ver si había diferencias entra las localidades para cada género identificado. Después se hizo un análisis de correlación simple entre el número de fitonemátodos de estos cuatro géneros y el peso de la raíz funcional, peso de la raíz no funcional y el porcentaje de necrosis. El modelo utilizado en el ANAVA fue el siguiente: Yij= μ + βi + εij, donde:Yij = Variable respuesta, μ = Media general, ßi = Efecto del i-ésimo bloque (finca), εij = Término de error aleatorio e independiente distribuido normal con media cero y varianza constante. El nivel de significancia fue de α= 0.05. Indira Martínez Página 24 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 6 RESULTADOS Y DISCUSION 6.1 Prediagnóstico Los lotes en estudio tienen entre 2 y 3 años de establecidos. Las renovaciones de los lotes la realizan cada 3 o 4 años; utilizando semillas de la misma parcela en el caso del Pegón, semillas de parcelas vecinas en la finca de Don Mariano y vitrocormo en la finca de Gustavo. En cuanto al manejo y limpieza de la semilla antes de la siembra en el pegón se utiliza Cloro al 4% con dosis de 300cc/20 l de agua, por su parte Don Mariano además de aplicar cloro utiliza Larbón (20cc/l) y Carbendazil (2cc/l); en cambio Gustavo no practica la desinfección de la semilla por lo que ha optado por aplicar Corban granulado (10 kg/Mz) en el suelo antes de la siembra. Por otra parte el manejo de la fertilidad del suelo en los sitios de muestreo se da mediante el uso de fertilizantes químicos y foliares. Además del uso de fertilizante don Mariano utiliza Furadan (30g/planta) y el encalado (3oz/planta). Los fertilizantes foliares corresponden a 10-0-40 para el pegón con una dosis de 3kg/ha/año, 11-6-40 en el caso de la finca de Don Mariano con aplicaciones de 0.41L/Mz cada 15 días y 13-20-40 en la finca de Gustavo en donde aplican 2kg/ Mz cada 8 meses. Dentro de manejo fitosanitario el pegón utiliza fungicidas sistémicos (4kg/ha) y fungicidas protectores (6kg/ha) cada año, además de aplicar herbicidas pos-emergentes (3l/ha) e insecticidas (1l/ha) tres veces al año. De igual manera realizan prácticas culturales de manejo de enfermedades e insectos cada 15 días en invierno. Don Mariano aplica fungicidas sistémicos y protectores cada 15 días en invierno. Los fungicidas utilizados son: Clotolonil, carbendazin y promecobre con dosis de 200cc por bombada. También se aplican insecticidas tres veces al año, además de herbicidas pre y pos-emergentes (6 l/Mz) cada 45ó 50 días en invierno. En esta finca se aplica el nematicida Euradan (30g/planta) durante todo el año. Las prácticas culturales de manejo de enfermedades se realizan cada 15 días en cambio el manejo de insectos es todo el año. Asimismo en la finca de Gustavo se aplican fungicidas sistémicos (60cc/bomba/2l) e insecticidas (40cc/bomba/20l) en presencia de la plaga o enfermedad y herbicidas preemergentes como glicerina (175cc/bomba/20l). No obstante se aplica herbicidas pos- emergentes Indira Martínez Página 25 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 solo de ser necesario. Las prácticas culturales de manejo de enfermedades e insectos de realizan durante todo el año. El sistema de riego utilizado en el Pegón es por aspersión procedente de poso con una frecuencia de riego de 7ml por riego cada 5 días. En las finca de Gustavo y Don Mariano el riego es por goteo, con agua proveniente de pozo perforado, con frecuencia de 7.5ml cada 2 horas. 6.2 Porcentaje de necrosis En la figura 4, se puede observar los valores medios del porcentaje de necrosis en las tres fincas muestreadas en este estudio. Esta figura refleja que el mayor porcentaje de necrosis se encontró en El Pegón y el menor porcentaje en la finca de Gustavo Mendoza. No obstante, de acuerdo a una prueba de t pareada, las diferencias en el índice de necrosis entre las tres fincas no son significativas. 60 50 a a Valores medios a 40 30 20 10 0 El Pegón Mariano Chévez Gustavo Mendoza Fincas Figura 4. Valores medios de porcentaje de necrosis en las Fincas bajo estudio Según la prueba de t, diferencias entre las medias con la misma letra no fueron estadísticamente significativas Indira Martínez Página 26 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 6.3 Nematodos totales, nematodos de vida libre (NVL) y fitonemátodos (FN) en 100g de suelo Se identificó un total 106,200 nematodos de vida libre (20,600 nematodos en la finca El Pegón, 23,800 en la finca de Mariano Chévez y 61,800 en Gustavo Mendoza) y 25,000 fitonemátodos (11,400 fitonemátodos en la finca El Pegón, 6,800 en la finca de Mariano Chévez y 6,800 fitonemátodos en la finca de Gustavo Mendoza) en 100g de suelo. Los valores medios encontrados en las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre presentes en 100g de suelo en cada localidad se ven reflejados en la figura 5, en donde se muestra que las poblaciones de nematodos de vida libre son superiores a las poblaciones de fitonemátodos en todas las fincas. También se puede observar que a medida que aumentan las poblaciones de nematodos de vida libre disminuyen las poblaciones de fitonemátodos. En el Cuadro 3, se puede observar los géneros de nematodos encontrados en este estudio. Los nematodos de vida libre más abundantes fueron los géneros Eucephalobus y Cephalobus con valores medios de 10,800 y 4,733.33 individuos en 100g de suelo, respectivamente. Los géneros menos abundantes fueron Teratocephalus, Coomansus, Mesodorylaimus, Tripyla, Aetolaymus, Nygolaimus con valores medios de 66.67 individuos encontrados. Las poblaciones máximas de fitonemátodos se encontraron en el género Paraphelenchus con 1,533.33 individuos en 100g de suelo y las poblaciones mínimas en los géneros Bursaphelenchus y Paratrophurus ambos con un promedio de 66.67 individuos. En el estudio realizado por Castellón en el 2009 las poblaciones de nematodos de vida libre fueron superiores a las poblaciones de fitonemátodos al igual que en el presente estudio; no obstante en el estudio realizado en estas mismas fincas por Carballo Lacayo, Córdobas Morales, & Blanco Niño en Marzo del 2013 las poblaciones de fitonemátodos fueron superiores a las de nematodos de vida libre encontrados en el suelo. Las diferencias encontradas en estos estudios podrian estar ligadas a situaciones de manejo en las las fincas o a factores ambientales. Indira Martínez Página 27 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 14000 12000 Valores medios 10000 8000 6000 4000 2000 0 El Pegón Mariano Chévez Gustavo Mendoza Finca NVL FN Figura 5. Composición de las poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en las tres fincas muestreadas. NVL= Nematodos de vida libre FN= Fitonemátodos 6.3.1 Nematodos de vida libre (NVL) en 100g de suelo Las poblaciones de nematodos de vida libre encontradas en este estudio estaban compuestas por 18 familias distribuidas en 29 géneros (Cuadro 3). En la finca El pegón el género Eucephalobus es más abundante con una media de 5600 individuos encontrados, siendo Tylolaimophorus, Deontolaimus, Coomansus y Tripyla los géneros menos abundantes con una media de 200 individuos encontrados respectivamente. Indira Martínez Página 28 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 En la finca de Mariano Chévez el género más abundante fue Wilsonema con una media de 5600 individuos encontrados en 100 g de suelo y el menos abundante corresponde al género Tobrilus con 1000 individuos reportados. Para la finca de Gustavo Mendoza se reportaron niveles máximos en el género Eucephalobus con una media de 23,200 nematodos encontrados en 100g de suelo y niveles mínimos en los géneros Teratocephalus, Aetolaymus y Nygolaimus con una media de 200 individuos encontrados. La alta ocurrencia de los géneros Cephalobus, Eucephalobus y Wilsonema puede atribuirse a que estos presentan una alta tasa de supervivencia debido a que son criptobioticos, sobreviviendo aun en periodos prolongados de sequía. Contrario a lo que ocurre con los géneros que presentan densidades poblacionales bajas; por lo que son sensibles a las prácticas agrícolas; debido a su baja tasa de fecundidad y largo tiempo de generación (Ferris et al. 2001). Los nematodos de vida libre son muy abundantes, lo cual sugiere una buena interacción entre suelo, planta y clima. 6.3.2 Fitonemátodos (FN) en 100g de suelo En el cuadro 5, se observa que las poblaciones de fitonemátodos están estructuradas por 9 familias distribuidas en 16 géneros. Los niveles máximos se encuentran en el género Macropostonia con una media de 2,200 individuos y los niveles mínimos en el género Paratrophurus con una media de 200 individuos reportados para la finca El Pegón. Asimismo, los niveles máximos de fitonemátodos encontrados en la finca de Mariano Chévez se encuentran el género Paraphelenchus con una media de 4600 individuos y los niveles mínimos reportados en los géneros Rotylenchus y Malenchus con una media de 200 individuos presentes en 100g de suelo cada uno. Para la finca de Gustavo Mendoza los niveles máximos encontrados pertenecen al género Malenchus con una media de 4600 individuos y los niveles mínimos al género Paraphelenchus, Bursaphelenchus y Longidorus con una media de 200 individuos encontrados. Indira Martínez Página 29 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 6.3.3 Distribución porcentual de grupos tróficos en 100g de suelo en las tres localidades Se identificaron un promedio de 41,466.67 nematodos en el suelo los cuales fueron agrupados en cinco grupos trófico a como se refleja en el cuadro 5. De acuerdo con el total de nematodos encontrados en el suelo, los bacterívoros fueron el grupo más representativo con el 74%, seguido de los fitopatógenos con el 19% de la población. Los niveles inferiores se encontraron en las poblaciones de Depredadores (3%), los Micófagos (2%) y los omnívoros (2%) (Figura 6). Estos resultados fueron similares a los encontrados por Castellón quien reportó que los grupos tróficos más representativos corresponden a los bacterívoros (26.8%) y fitonemátodos (4.95%). García encontró en su estudio en Jinotega que los fitonemátodos representan el 58% de población total y que los nematodos de vida libre representan el 42%. En comparación con los otros grupos tróficos encontrados en este estudio, las altas poblaciones de bacterívoros podrían deberse a las aplicaciones de plaguicidas y fertilizantes, los cuales según Yeates y Bongers (1995) aumentan las poblaciones de bacterivoros. De igual manera es posible que la presencia de los bacterivoros en suelos cultivados con plátanos, estén relacionados con la biodegradación de los nematicidas, plaguicidas y fertilizantes; pudiendo ser utilizados como indicadores de la presencia y movimiento de los nematicidas. Indira Martínez Página 30 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 19% Bacterívoros Micófagos 3% 2% 2% Omnívoros Depredadores Fitonematodos 74% Figura 6. Clasificación de los géneros de nematodos de vida libre y porcentaje de grupos tróficos encontrados en los sitios de muestreo. En el Cuadro 2, se muestran los resultados de una correlación lineal en donde se determinó que los depredadores tienen una relación significativa positiva con los micofagos (r= 0.792,p=0.000), los omnívoros tiene una relación significativa positiva con los micófagos (r= 0.526, p=0.025), al igual que los omnívoros tienen una relación significativa positiva con los depredadores (r=0.594, p=0.009), y los fitonemátodos tienen relación significativa positiva con los bacterívoros (r=0.512, p= 0.030). Cuadro 2. Correlación lineal entre los diferentes grupos tróficos encontrados en 100g de suelo. Bacterívoros Micófagos Depredadores Omnívoros Fitonemátodos Bacterívoros 1.000 0.097 0.037 -0.092 0.512 Micófagos 0.702 1.000 0.792 0.526 0.237 Depredadores 0.884 0.000 1.000 0.594 0.175 Omnívoros 0.717 0.025 0.009 1.000 -0.026 Fitonemátodos 0.030 0.344 0.487 0.917 1.000 Indira Martínez Página 31 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 Cuadro 3.Clasificación y porcentaje de grupos tróficos encontrados en100g de suelo en tres fincas productoras de plátano de León y Telica. Familia Género Grupo Promedio Porcentaje trófico Alaimidae Paramphidelus B 133.33 0.32 Cephalobidae Heterocephalobus B 1933.33 4.66 Cephalobidae Cervidellus B 466.67 1.13 Cephalobidae Chiloplacus B 466.67 1.13 Cephalobidae Eucephalobus B 10800.00 26.05 Cephalobidae Cephalobus B 4733.33 11.41 Cephalobidae Acrobeles B 2800.00 6.75 Plectidae Wilsonema B 3133.33 7.56 Prismatolaimidae Prismatolaimus B 3266.67 7.88 Rhabditidae Mesorhabditis B 333.33 0.80 Rhabditidae Rhabditis B 2400.00 5.79 Teratocephalidae Metateratocephalus B 2066.67 4.98 Teratocephalidae Teratocephalus B 66.67 0.16 Diphtherophoridae Tylolaimophorus M 66.67 0.16 Diphtherophoridae Diphtherophora M 266.67 0.64 Leptolaimidae Deontolaimus M 66.67 0.16 Leptonchidae Tylencholaimus M 66.67 0.16 Nordiidae Thornia M 133.33 0.32 Dorylaimidae Dorylaimus O 266.67 0.64 Qudsianematidae Eudorylaimus O 533.33 1.29 Qudsianematidae Allodorylaimus O 133.33 0.32 Discolaimidae Discolaimus D 200.00 0.48 Mononchidae Coomansus D 66.67 0.16 Thornenematidae Mesodorylaimus D 66.67 0.16 Indira Martínez Página 32 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 Continuación Cuadro 3.Clasificación y porcentaje de grupos tróficos encontrados en100g de suelo en tres fincas productoras de plátano de León y Telica. Familia Género Grupo Promedio Porcentaje trófico Tobrilidae Tobrilus D 666.67 1.61 Tripylidae Tripyla D 66.67 0.16 Nygolaimidae Aetolaymus D 66.67 0.16 Niygolaimidae Nygolaimus D 66.67 0.16 Anguinidae Ditylenchus FN 333.33 0.80 Aphelenchoididae Bursaphelenchus FN 66.67 0.16 Criconematidae Macropostonia FN 733.33 1.77 Dolichodoridae Paratrophurus FN 66.67 0.16 Dolichodoridae Dolichorhynchus FN 466.67 1.13 Dolichodoridae Merlinius FN 400.00 0.96 Heteroderidae Heterodera FN 466.67 1.13 Longidoridae Longidorus FN 266.67 0.64 Longidoridae Xiphinema FN 400.00 0.96 Nordiidae Longidorella FN 533.33 1.29 Psilenchidae Psilenchus FN 266.67 0.64 Tylenchidae Rotylenchus FN 66.67 0.16 Tylenchidae Paratylenchus FN 200.00 0.48 Tylenchidae Paraphelenchus FN 1533.33 3.70 Tylenchidae Tylenchus FN 133.33 0.32 Tylenchidae Malenchus FN 200.00 0.48 Total 41466.67 100.00 Indira Martínez Página 33 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 6.3.4 Índices calculados para las poblaciones de nematodos en 100g de suelo De acuerdo a los índices de Diversidad de Shannon- Wiener la localidad que presento mayor diversidad de nematodos de vida libre corresponde a la finca El Pegón (H=2.915) y las localidades menos diversa corresponden a las fincas de los señores Mariano Chévez (H=2.226) y Gustavo Mendoza (H=2.269). Al comparar las proporciones de bacterívoros y fungívoros por fincas, se determinó que la finca de Mariano Chévez y Gustavo Mendoza presentaron una población totalmente dominada por bacterívoros, en cambio las poblaciones encontradas en la finca El Pegón están siendo dominadas por fungívoros (cuadro 4). Fincas Proporción de bacterivoros- fungivoros El Pegón Mariano Chévez 0.62 Gustavo Mendoza 1 1 Cuadro 4. Proporción de bacterivoros y fungivoros en tres fincas de León y Telica. 6.4 Poblaciones de fitonemátodos en 100g de raíz de plátano Se encontró un total de 15,702.17 fitonemátodos asociados a las raíces de plátano en las tres fincas muestreadas, distribuidos en los géneros Helicotylenchus (4,985.50 individuos), Pratylenchus (4,000 individuos), Meloidogyne (3,816.67 individuos) y Radopholus (2,900 individuos) (Figura 6, Cuadro 5). Estos mismos géneros han sido reportados por Belalcázar et al (1991), Varón (1991), Piedrahita & Zapata (2004), Castellón (2009), Garcia Salazar (2012) como los cuatro principales géneros que afectan al cultivo de plátano. De acuerdo con la Figura 6, las poblaciones de Helicotylenchus fueron las más abundantes en la finca de Mariano (2466.67) y en El pegón (2516.67). No así en la finca de Gustavo Mendoza en donde este género presenta los valores más bajos con una media de 2.17 individuos en 100g de raíz. También se puede observar que en la finca de Mariano Chévez se encuentran los mayores promedios en los géneros Meloidogyne, Pratylenchus y Radopholus. La finca de Gustavo Indira Martínez Página 34 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 Mendoza presentó los promedios más bajos para todos los géneros de fitonemátodos encontrados en los tres sitios de muestreo. Según los valores promedios en el estudio el género Helicotylenchus presenta los valores más altos seguido por el género Radopholus. El género Helicotylenchus presentó un promedio de 4985.5 individuos presentes en 100g de raíz. En un estudio realizado por Castellón (2009) en plantaciones de plátano en Rivas el género predominante fue Pratylenchus. De igual manera se reportó este género como el predominante en el estudio realizado en Costa Rica por (Assi Bou Assi et al, 2009), encontrandose en el presente estudio como el segundo género más abundante. En este estudio el género menos dominante fue Meloidogyne con una población máxima de 4400 individuos contrario a lo reportado en Jinotega por Garcia Salazar (2012), en cuyo estudio este género es el predominante con poblaciones iguales a las escontradas en este estudio (Cuadro 5). En la presente investigación las poblaciones de Meloidogyne (966.67 individuos/100g de suelo) y Pratylenchus (1550 individuos/ 100g de suelo) fueron menores a las encontradas por (Guzmán Hernández et al., 2011) en cultivo de arroz, donde las poblaciones son mayores a los 10,000 individuos en 100g de raíz. De acuerdo con Castellón (2009), los resultados demuestran que las poblaciones de fitonemátodos presentes en el sistema radicular de las plantas muestreadas en el departamento de León y Telica no se encuentran en niveles críticos (los niveles críticos andan alrededor de 10,000 a 20,000 nematodos en 100g de raíces). Indira Martínez Página 35 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 3000 NÚMERO DE INDIVIDUOS FINCAS EL PEGÓN 2500 FINCAS MARIANO 2000 FINCAS GUSTAVO 1500 1000 500 0 Meloidogyne Pratylenchus Helicotylenchus Radopholus PRINCIPALES GÉNEROS Figura 6. Población promedio de los cuatro principales géneros de fitonemátodos encontrados 100g de raíz en fincas productoras de plátano en León y Telica. Cuadro 5. Promedios de fitonemátodos (FN) en 100g de raíz y densidad poblacional de los cuatro principales géneros de fitonemátodos encontrados en plantaciones de plátano en Telica y León. Género El Mariano pegón Chévez Gustavo Población promedio Población Mendoza de FN en 100g de raíz máxima Helicotylenchus + + + 4985.50 11400 Radopholus + + + 4000 6000 Pratylenchus + + + 3816.67 7800 Meloidogyne + + + 2900 4400 Indira Martínez Página 36 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 En el Cuadro 6, se puede observar el análisis de ANOVA de un factor que se llevó a cabo para cada género de fitonematodo que ataca las plantas de musa. Se puede observar de que solo existe diferencia significativa (p= 0.05) para el género Helicotylenchus. Para los demás géneros no hay diferencias significativas. En Anexo 4, se puede observar los contrastes entre fincas para cada género identificado y se puede observar de que la única diferencia se encontró en el género Helicotylenchus entre la finca de Gustavo Mendoza y El Pegón. Castellón en su estudio encontró diferencia significativa entre las poblaciones de Helicotylenchus por localidad y estación al igual que Londoño en el 2006 encontró diferencia significativa para las poblaciones de este género en dos sitios de produccion de banano. Cuadro 6. Análisis de varianza entre los diferentes géneros de fitonemátodos por fincas en los sitios de muestreo. Meloydogine Pratylenchus Helicotylenchus Radopholus Indira Martínez Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig. Inter-grupos 61.056 2 30.528 1.098 0.345 Intra-grupos 917.250 33 27.795 Total 978.306 35 Inter-grupos 154.167 2 77.083 1.297 0.287 Intra-grupos 1960.583 33 59.412 Total 2114.750 35 Inter-grupos 699.389 2 349.694 3.225 0.053 Intra-grupos 3578.250 33 108.432 Total 4277.639 35 Inter-grupos 268.167 2 134.083 2.438 0.103 Intra-grupos 1814.833 33 54.995 Total 2083.000 35 Página 37 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 6.5 Relación entre el peso de la raíz y los géneros de fitonemátodos Al realizar un análisis de correlación se determinó que no existe relación entre el peso de las raíces funcionales, peso de las raíces no funcionales, porcentaje de necrosis y los géneros de fitonemátodos (Cuadro 7). De igual manera no se encontró relación entre los diferentes géneros de fitonemátodos y el índice de necrosis. No existe relación entre ninguno de los grupos, por lo tanto el daño presente en las raíces puede ser producto de la presencia de algún otro microorganismo o a problemas de drenaje y compactación del suelo. García Salazar encontró una relación significativa positiva entre el promedio de daño de la raíz funcional de banano y los géneros Helicotylenchus y Meloidogyne. Según el estudio realizado por Soto Valverde, 2009 entre mayor sea el peso de raíz funcional mayor será el número de nematodos en 100 gr de raíz y entre mayor sea el peso de raíz no funcional menor será el número de nematodos en 100 gr de raíz. Cuadro 7. Correlación lineal entre los diferentes géneros de fitonemátodos en raíz y el peso de la raíz funcional (PRF), peso de la raíz no funcional (PRNF) y % de necrosis. Géneros PRF PRNF % de necrosis r p r p r p Meloidogyne 0.054 0.754 0.200 0.253 -0.030 0.864 Pratylenchus 0.184 0.282 0.257 0.131 0.090 0.601 Helicotylenchus 0.099 0.564 0.207 0.225 0.048 0.780 Radopholus 0.185 0.281 0.302 0.74 -0.158 0.358 Indira Martínez Página 38 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 7 CONCLUSIONES 1. Los géneros de fitonemátodos asociados al cultivo de plátano Hartón enano (AAB) identificados en las tres fincas muestreadas de León y Telica fueron Helicotylenchus, Radopholus, Pratylenchus, y Meloidogyne. El género de fitonematodo que se presentó con mayor abundancia fue el semi-endoparásito Helicotylenchus (31.75%) y el menos abundante fue el endoparásito Meloidogyne (18.47). El estudio de las poblaciones de fitonemátodos permitió determinar que no existe relación entre la presencia de estos géneros con el porcentaje de necrosis en las raíces funcionales por lo cual se presume que los porcentajes de necrosis podrían deberse a factores como la compactación del suelo, problemas de drenaje o la presencia de bacterias u otro microorganismo en el suelo. 2. Se determinó que las poblaciones de nematodos de vida libre fueron superiores a las poblaciones de fitonemátodos en las tres fincas muestreadas. Así mismo se determinó que la finca El Pegón es más diversa que las fincas de los señores Mariano Chévez y Gustavo Mendoza. 3. Se encontraron cinco grupos tróficos en las comunidades de nematodos de vida libre; bacterívoros, micófagos, omnívoros, depredadores y fitonemátodos; siendo más abundante el grupo de los bacterívoros y los menos abundantes los micófagos y omnívoros. Indira Martínez Página 39 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 8. RECOMENDACIONES 1. Realizar en el país estudios más detallados de las comunidades de nematodos que incluyan análisis de suelo, factores climáticos y todos los índices de las comunidades para un mayor entendimiento del comportamiento de estas poblaciones. 2. Hacer uso de las claves para identificación de estos organismos o estudios apoyados en la biología molecular. 3. Realizar estudios durante un periodo más prolongado para determinar el comportamiento de estas poblaciones en estación seca y lluviosa. 4. Para reducir el daño provocado por los fitonemátodos es necesario proporcionar las condiciones favorables para el desarrollo de los enemigos naturales que están presentes en el suelo, mediante enmiendas orgánicas o aplicaciones superficiales de recubrimientos vegetales. Indira Martínez Página 40 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 8 BIBLIOGRAFIA Acosta, A. M., & Salinas, D. G. (2011). Dinámica y desarrollo del crecimiento del banano (Musa AAA Simmonds cvs. Gran Enano y Valery). Recuperado el 20 de febrero de 2013, de http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/refame/article/view/29360/37145 Andres, M. F. (2003). Nematodos parásitos de plantas en suelos agricolas. Revista profesional de sanidad vegetal, 32-42. Angela Maria Castaño P, M. A. (16 de mayo de 2011). Requerimiento Hidrico del Plátano Dominico Hartón (Musa AAB SIMMONDS) en la región Santágueda, Palestina, Caldas. 57-67. Arauz Cavallini, L. (1998). Fitopatologia. San José: Editorial de la universidad de Costa Rica. Araya, M. (2003). Los nemátodos parasitos de Musa AAA. Sistema Radical del Banano: hacia un mejor comocimiento para su manejo productivo (pág. 57). Costa Rica: CORBANA SA. 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Mapa de la parcela muestreada en la finca El Pegón Indira Martínez Página 47 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 ANEXO 2. Mapa de las dos fincas muestreadas en Telica. FINCA DE GUSTAVO MENDOZA FINCA DE MARIANO CHÉVEZ Indira Martínez Página 48 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 ANEXO 3. Formato de encuesta para el prediagnóstico de las fincas muestreadas Zona o sitio Fecha Productor 1. Actividad económica Seleccione Producción convencional para el mercado internacional Producción convencional para el mercado local Producción orgánica para el mercado local Ninguna de las anteriores Labranza indicar: 2. Cultivar y años de cultivo del lote en estudio Cultivares Edad de la plantación Área (mz) Área (ha) 3. Cada cuanto renueva su lote caso específico del lote en estudio 1-2 año Indira Martínez 3-4 año 4-5 año 6-7 años Página 49 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 4. Material que utiliza para la siembra del lote en estudio y origen de la semilla Cormos Vitrocormo Vitroplantas De su propia parcela Vecino 5. Manejo y limpieza de semilla antes de la siembra del lote en estudio Mondado y desinfección Producto que utiliza Dosis 6. Manejo de la fertilidad del suelo del lote seleccionado para el estudio Indicador Si No Fórmula Ciclos/año Kg/ha/año Fertilizantes Fertilizantes foliares Materia orgánica (tipo) Encalado Otros Indira Martínez Página 50 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 7. Manejo fitosanitario del lote seleccionado para el estudio Indicador Si No Ciclos/año Kg/ha/año Fungicidas sistémicos Fungicidas protectores Herbicidas pre-emergentes Herbicidas pos-emergentes Nematicidas organofosforados Nematicidas carbamatos Insecticidas Plaguicidas orgánicos Prácticas culturales de manejo de enfermedades Prácticas culturales de manejo de insectos Prácticas culturales de manejo de malezas Prácticas culturales de manejo de nematodos 8. Manejo de agua del lote seleccionado para el estudio Riego y drenaje Indicar Sistema de riego Sistema de drenaje Fuente de agua para el riego frecuencia de riego Observaciones Indira Martínez Página 51 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 ANEXO 4. Comparación múltiple de los géneros de fitonemátodos por finca en la ciudad de León y Telica. Variable dependiente (I) Finca (J) Finca Diferencia de Error típico Sig. medias (I-J) Meloydogine El Pegón Mariano Chévez -0.833 2.152 Gustavo Mendoza 2.250 El Pegón HSD de Tukey Mariano Chévez Gustavo Mendoza Pratylenchus HSD de Tukey El Pegón Mariano Chévez Gustavo Mendoza Helicotylenchus HSD de Tukey El Pegón Mariano Chévez Gustavo Mendoza Radopholus HSD de ukey El Pegón Mariano Chévez Gustavo Mendoza Indira Martínez Intervalo de confianza al 95% Límite inferior Límite superior 0.921 -6.11 4.45 2.152 0.554 -3.03 7.53 .833 2.152 0.921 -4.45 6.11 Gustavo Mendoza 3.083 2.152 0.336 -2.20 8.36 El Pegón -2.250 2.152 0.554 -7.53 3.03 Mariano Chévez Mariano Chévez Gustavo Mendoza El Pegón Gustavo Mendoza El Pegón Mariano Chévez Mariano Chévez Gustavo Mendoza El Pegón Gustavo Mendoza El Pegón Mariano Chévez Mariano Chévez Gustavo Mendoza El Pegón Gustavo Mendoza El Pegón Mariano Chévez -3.083 0.417 4.583 -0.417 4.167 -4.583 -4.167 2.750 10.417 -2.750 7.667 -10.417 -7.667 1.583 6.417 -1.583 4.833 -6.417 -4.833 2.152 3.147 3.147 3.147 3.147 3.147 3.147 4.251 4.251 4.251 4.251 4.251 4.251 3.028 3.028 3.028 3.028 3.028 3.028 0.336 0.990 0.325 0.990 0.392 0.325 0.392 0.795 0.050 0.795 0.184 0.050 0.184 0.861 0.101 0.861 0.261 0.101 0.261 -8.36 -7.30 -3.14 -8.14 -3.55 -12.30 -11.89 -7.68 -0.01 -13.18 -2.76 -20.85 -18.10 -5.85 -1.01 -9.01 -2.60 -13.85 -12.26 2.20 8.14 12.30 7.30 11.89 3.14 3.55 13.18 20.85 7.68 18.10 0.01 2.76 9.01 13.85 5.85 12.26 1.01 2.60 Página 52 Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 ANEXO 5. Fotografías de algunos géneros que pertenecen a los diferentes grupos tróficos encontrados en las zonas de muestreo. Indira Martínez Cola de Prismatolaimus Cola de Rhabditis Cola de Mesorhabditis Cabeza de Prismatolaimus Cabeza de Rabditis Cabeza de Mesorhabditis Cola de Cephalobus Cola de Wilsonema Cola de Acrobeles Cabeza de Cephalobus Cabeza de Wilsonema Cabeza de Acrobeles BACTERIVOROS Página 53 Indira Martínez Cola de Rotylenchus Esofago de Xiphinema Cabeza de Xiphinema Cabeza de Macropostonia Malenchus Cabeza de Malenchus Cola de Malenchus Cola de Xiphinema Cabeza de Xiphinema Cabeza de Rotylenchus Cabeza de Xiphinema Cola de Macropostonia Rotylencfhus Cola de Bursaphelenchus Cabeza de Bursaphelenchus Bursaphelenchus Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 FITONEMÁTODOS Página 54 Cabeza de Paratylenchus Paratylenchus Diagnóstico de poblaciones de fitonemátodos y nematodos de vida libre en plantaciones de plátanos, León, Chinandega y Telica -Nicaragua 2012 Cabeza de Dorylaimus Dorylaimus OMNIVOROS Indira Martínez Cabeza de Nygolaimus Cabeza de Nygolaimus Nygolaimus Nygolaimus DEPREDADORES Página 55