ISolate - Gonagen Medikal

ENGLISH
®
ISolate
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
PRODUCT DESCRIPTION
ISolate® is a density gradient medium designed to separate
the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer
gradient system, it effectively reduces cellular contaminants
such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous
debris. The resulting sample contains predominantly
motile sperm.
ISolate is a membrane filtered, aseptically processed
colloidal suspension of silica particles stabilized with
covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF.
The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested
and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test.
DIRECTIONS FOR USE
Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL
SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50%
and 90%)
A. Materials Suggested:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or
100mL vial kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper
and lower layer gradient is ready for use. Continue to
GENERAL PROCEDURE section of product insert.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed and
optimized for your individual medical program.
STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY
Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC.
Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior
to use.
Do not freeze or expose to high temperatures.
ISolate is stable until the expiration date shown on the box
and bottle labels when stored as directed.
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
assisted reproductive procedures that include the indicated
application for which the device is intended.
ISolate will appear opaque. This is normal for this product.
Do not use any vial of medium which shows evidence of
particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness).
Catalog #99275 - STOCK SOLUTION
90% density gradient medium for use in a one-step
procedure or for further dilution.
ISolate should be tightly capped when used in a CO2
incubator to avoid pH changes.
A.Materials Suggested:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Catalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
This product contains no preservatives, antibiotics, or
protein supplements. To avoid problems with contamination,
handle using aseptic techniques.
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1. Upper Layer solution - 50%:
a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube
b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a
sterile centrifuge tube and cap - (No further
dilutions necessary - Stock Solution is 90%)
b) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product
insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower
Layer will process approximately 5 semen samples.)
Catalog #99306 - CONCENTRATE
Colloidal silica concentrate for further dilution into density
gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates
the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
was evaluated according to this package insert at 50%
and 90% gradients. Each laboratory may choose to make
gradients at different concentrations which should be
evaluated for effectiveness.
A. Materials Suggested:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific Catalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1.) Upper Layer solution - 50%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of
product insert.
Note: The terms 50% and 90% do not represent
an actual concentration. The 50% and 90% are
relative concentrations based on the previous
nomenclature that defined a 1:9 dilution of
Percoll® as equal to a 100% working, isotonic
solution.
GENERAL PROCEDURE
The following is a general procedure for a two-step gradient
separation of motile sperm from semen. The volume and
concentration can be modified to meet each laboratory’s
preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen,
three-layer gradient).
1. Bring all media components to room temperature
or 37°C.
2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the
“LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical
centrifuge tube.
3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of
“UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is
done by contacting the surface of the “LOWER LAYER”
at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully
dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette
tip around the circumference of the tube in an upward
motion as the level of the “UPPER LAYER” rises.
4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the
“UPPER LAYER” using a new sterile pipette.
5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating
off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly
removing the pellet and transferring to a new sterile
centrifuge tube.
Note: The quality of the sperm sample should
be evaluated and taken into consideration
when determining the proper centrifugation
speed and time. These should be adjusted
according to the individual specimen quality
for optimization of the procedure.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
DEUTSCH
6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of
appropriate washing medium such as Sperm Washing
Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog
#90126) with protein supplementation. Resuspend the
isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes
and remove the supernatant. Repeat this step for a
second wash. Discard the supernatant and resuspend
the pellet using a suitable volume of appropriate
medium. The sample is now ready for analysis.
In case of damage, do not use. Please discard
or return to Manufacturer for replacement.
Caution: Federal (U.S.) law restricts this
device to sale by or on the order of a
physician.
Produktbeschreibung
ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder
Konzentrationgradientsmedium], das fuer das
Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der
Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem
mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren
Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen
Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende
Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma.
ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension
von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und
stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen
Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das
Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance
level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die
Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von
Pyrogen gefunden.
GEBRAUCHSANLEITUNG
Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE
KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI
KONZENTRATIONEN (50% UND 90%)
A. Vorgeschlagene Materialien:
ISolate®
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL
oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium
[Spermaspuelungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig
Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic
tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum
ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ
teinsatzes fort.
Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung
90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem
Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung.
A. Vorgeschlagene Materialen
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht
1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]:
a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr.
99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126)
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHTt”.
2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]:
a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem
sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es
(keine weitere Verduennungen werden benoetigt
– Stock Solution ist 90%).
b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt
des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL
Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden
ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten)
Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT
Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung
zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten
bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und
naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate
KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz
bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor
kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen
Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit
ausgewertet werden sollten.
A. Vorgeschlagene Materialien
ISolate Concentrate
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht.
1. Oberschichtloesung – 50%
a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr.
99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas.
b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHT”.
2. Unterschichtloesung – 90%
a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306)
und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”.
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN
Abschnitt des Paketeinsatz fort.
Anmerkung: Die Bezeichnungen 50%
und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche
Konzentration. Die 50% und die 90% sind die
relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen
Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine
1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu
einer Funktion 100% der isotonische Loesung
ALLGEMEINES VERFAHREN
Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine
zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen
Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration
koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu
entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient],
kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient).
1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei
der Raumtemperatur oder 37°C sein.
2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis
2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches
Wegwerfzentrifugeglas.
3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches
Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT.
Das wird getan, indem man die Oberflaeche der
UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der
Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt.
Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der
Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases
in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der
OBERSCHICHT steigt.
ITALIANO
4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie
sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die
OBERSCHICHT hinzu.
5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis
20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus,
entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und
von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen
Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein
neues steriles Zentrifugeglas
*Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte
ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden,
um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit
und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend
der einzelnen Probestückqualität für Optimierung
des Verfahrens justiert werden.
6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0
mL des passenden Spuelungsmediums wie das
Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog #
9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog #
90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren
Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg)
fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den
Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für
eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant
weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer
ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die
Probe ist jetzt zur Analyse bereit.
Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten
soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen,
die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch
entwickelt und optimiert worden sind.
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET
Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf.
Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der
Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch.
Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen
Temperaturen heraus.
ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die
Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie
das Medium wie angewiesen auf.
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer
dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums,
wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination
(uneinheitliche Truebung) gibt.
ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn
es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden.
Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel,
Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die
Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit
aseptischer Methode benutzt werden.
Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium
nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden
Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück.
ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses
Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt
verkauft werden.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per
dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale.
Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce
effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti,
cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione
che risulta contiene sperma con preponderanza mobile.
ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice
stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente
in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e
preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di
sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non
avere pirogeni via il test pirogene di coniglio.
ESPAÑOL
5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente
a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con
il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI”
via aspirazione, o con il allontanamento diretto della
tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo
sterilizzato.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
El ISolate® es un medio de gradiente de densidades
diseñado para separar la fracción móvil de esperma del
fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos
capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares
como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos.
*Nota: La qualità del campione di sperm
dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere
considerata quando se determina la velocità
e tempo di centrifugazione propri. Questi
dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità
del campione individuale per l’ottimizzazione
della procedura.
El ISolate es una suspensión coloidal de partículas
de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido
covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que
ha sido filtrada a través de membrana y procesada
en condiciones asépticas. El nivel de garantía de
esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado
para pirógenos con resultados negativos por el test de
pirógenos en conejo.
ISTRUZIONI PER L’ USO
Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE
PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI
(50% E 90%)
A. Materie Suggerite:
ISolate
• Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/
cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di
100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da
2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata
come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo
#9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con
integrazione di proteina . Risospendere la pallina
isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie
il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda
spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la
pallina usando un volume conveniente di sostanza
appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi.
B. Preparazione Gradiente:
Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di
gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso.
Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del
l’inserzione del prodotto.
ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA
Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C.
Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno
(Stock)
90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura
di uno stado o per ulteriore diluzione.
Non congelare o esporre a temperature alte.
A. Materie Suggerite:
Soluzione di Sostegno d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99275
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di
separazione di sperma gradiente: uno strato superiore
e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK
SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di
5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per
permettere miscuglio completo.
d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%:
a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI
SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo
#99275) in un tubo e coperchio di centrifugo
sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari
– Soluzione di Sostegno è 90%)
b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO:
10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI
S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O
APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI
SPERMA).
Catalogo #99306 – Concentrato
Concentrazione di silice colloidale per ulteriore
diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone
isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ.
Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa
inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni
laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a
concentrazioni differenti che devono essere evaluati per
efficacia.
A. Materie Suggerite:
Concentrato d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99306
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo
di separazione di sperma gradiente: uno strato
superiore e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo.
d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo
d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’nserzione del prodotto.
APPUNTO: I TERMINI 50% E 90%
N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A
C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E
50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI
RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA
PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA
DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A
UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA
DI 100%.
C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I
SPECIALI
Il seguente è una procedura generale per una seperazione
gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm)
dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione
possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza
del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma
criopreservata, gradiente di tre-strati).
1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura
ambientale o 37°C.
2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0
mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo,
buttabile, conico, sterilizzato.
3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo
stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo
“STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare
la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/
fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi
attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a
spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza
del tubo in movimento ascendente come il livello dello
“STRATO SUPERIORE” alza.
4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata
sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta
nuova, sterilizzata.
Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio
dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard
che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la
sua impianto.
Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura
d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso.
Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino
alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia
e della scatola.
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo
prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha
evidenza di sostanze particolari o contaminazione
(torbidezza non uniforme).
ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato
in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH.
Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o
supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il
prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche.
IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER
FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA
MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE.
CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita
questo meccanismo/prodotto a la vendita da
o sull’ordine di un medico o dottore.
INSTRUCCIONES DE USO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE
COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS
CONCENTRACIONES (50% y 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de
6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado
de esperma
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y
desechables
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial
de capa de gradiente superior e inferior está lista para
usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK
Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado
en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones.
A. Material sugerido:
ISolate - Solución Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por
gradiente se necesitan dos soluciones: la capa
superiory la capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y
pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “capa superior”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo
estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más
diluciones. La solución stock está al 90%).
b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
FRANÇAIS
Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser
evaluada y tomada en consideración para determinar el
tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos
parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual
de la muestra para optimizar el el proceso.
*
6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0
mL de un medio de lavado adecuado como el Medio
de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico.
Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir
este paso para un segundo lavado. Descartar el
sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando
un volumen adecuado de medio. La muestra está lista
para el análisis.
Para más detalles sobre la utilización de estos productos,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre
2ºC y 8ºC.
Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC)
antes de su uso.
No congele ni exponga a temperaturas elevadas.
El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta de la botella y de la caja,
siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones
recomendadas.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este
producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias
de contener partículas o contaminación (turbidez no
homogénea).
Los viales de ISolate deben estar herméticamente
cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para
evitar cambios de pH.
Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni
suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones,
manipule el producto en condiciones de esterilidad.
En caso de alteración del medio, no lo
utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo
al fabricante para que lo reemplace.
PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.)
restringen la venta de este producto a la
prescripción de un facultativo.
Description du produit
ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la
fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale.
Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les
contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes
morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte
une fraction de sperme contenant essentiellement les
spermatozoïdes mobiles.
ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale
de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au
silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES.
Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility
Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par
le “rabbit pyrogen test”.
Conseils d’utilisation
Référence 99264, Gradient de densité à deux
concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation
A. Matériel suggéré :
ISolate
• % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml,
50mL ou de 100ml)
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de
gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à
la section “Procédure générale” de cette notice.
Référence 99275, Solution mère
Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le
protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures.
A. Matériel suggéré :
ISolate, solution mère
• % Irvine Scientific, référence 99275
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la
solution mère (réf. 99275),
b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de
la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution
nécessaire, la solution mère est à 90%)
b. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette
notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et
10 ml de couche inférieure permettront de traiter
approximativement 5 prélèvements de sperme)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones
en gradientes de densidad; formulado en un tampón
isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir.
El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del
50% y 90% de acuerdo a este Información de producto.
Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes
a concentraciones diferentes, previa comprobación de
su efectividad.
Référence 99306, Concentré
Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour
former des gradients de densité ; formulé comme un tampon
isotonique dont la densité est approximativement la même
que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a
été évalué pour cette notice par des gradients de 50%
et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des
gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces
derniers doit être évaluée.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
A. Matériel suggéré :
ISolate, Concentré
• % Irvine Scientific, référence 99306
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi
ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la
capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice
Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen
a una co
centración real. El 50 % y el 90% son
concentraciones
relativas basadas en una nomenclatura anterior
que
definía una solución 1:9 de Percoll® como una
solución
de trabajo isotónica al 100%.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
El protocolo que aquí se describe es un procedimiento
general para separar del semen la fracción móvil de
esperma a través de un gradiente. El volumen y la
concentración se pueden modificar para adecuarse a las
preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente,
semen criopreservado, gradiente de 3 capas).
1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente
o a 37ºC.
2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de
medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga
cónico, estéril y desechable.
3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen
igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la
parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello,
colocar con la punta de la pipeta en la parte superior
de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con
mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la
pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del
tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA
INFERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado
sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con
mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y
superior o bien.
Remarque : les termes 50% et 90% ne
représentent pas des concentrations réelles.
Les 50% et 90% sont des concentrations relatives
basées sur la précédente nomenclature qui a
défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant
égale à 100% de solution isotonique.
Procédure générale
Ce qui suit est une méthode générale de séparation par
gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma
séminale. Les volumes et les concentrations peuvent
être modifiés pour répondre aux préférences de chaque
laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient
à trois couches).
1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les
préchauffer à 37°C.
2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml
de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour
centrifugeuse, jetable, stérile.
3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer
un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche
supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche
inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de
la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir
soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la
pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement
ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte.
4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié
sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle
pipette stérile.
5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes
*Remarque: la qualité du prélèvement du sperme
doit être évaluée et prise en considération lors de
la détermination de la durée et de la vitesse de
centrifugation appropriées. Pour une optimisation
de la procédure, ces dernières doivent être
ajustées selon la qualité de chaque prélèvement.
6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0
ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de
lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié
(IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre
le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant
8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette
étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et
resuspendre le culot dans le volume désiré d’un
milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à
l’analyse.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles standards spécialement développés et optimisés
pour chaque établissement médical particulier.
C onsignes de conservation et
stabilité 
Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C.
Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C
(dans une étuve) avant utilisation.
Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées.
Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable
jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les
étiquettes des flacons.
Précautions et mise en garde 
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit.
N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules
ou s’il est contaminé (non uniformément trouble).
Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2,
les flacons doivent être bien fermés pour éviter les
changements de pH.
Ce produit ne contient ni conservateurs, ni
antibiotiques, ni supplément protéiques.
Pour éviter les contaminations, il doit être
manipulé stérilement.
ATTENTION : La loi fédérale limite la vente
de ce dispositif aux médecins ou sur ordre
d’un médecin.
ENGLISH
®
ISolate
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
PRODUCT DESCRIPTION
ISolate® is a density gradient medium designed to separate
the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer
gradient system, it effectively reduces cellular contaminants
such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous
debris. The resulting sample contains predominantly
motile sperm.
ISolate is a membrane filtered, aseptically processed
colloidal suspension of silica particles stabilized with
covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF.
The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested
and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test.
DIRECTIONS FOR USE
Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL
SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50%
and 90%)
A. Materials Suggested:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or
100mL vial kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper
and lower layer gradient is ready for use. Continue to
GENERAL PROCEDURE section of product insert.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed and
optimized for your individual medical program.
STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY
Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC.
Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior
to use.
Do not freeze or expose to high temperatures.
ISolate is stable until the expiration date shown on the box
and bottle labels when stored as directed.
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
assisted reproductive procedures that include the indicated
application for which the device is intended.
ISolate will appear opaque. This is normal for this product.
Do not use any vial of medium which shows evidence of
particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness).
Catalog #99275 - STOCK SOLUTION
90% density gradient medium for use in a one-step
procedure or for further dilution.
ISolate should be tightly capped when used in a CO2
incubator to avoid pH changes.
A.Materials Suggested:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Catalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
This product contains no preservatives, antibiotics, or
protein supplements. To avoid problems with contamination,
handle using aseptic techniques.
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1. Upper Layer solution - 50%:
a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube
b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a
sterile centrifuge tube and cap - (No further
dilutions necessary - Stock Solution is 90%)
b) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product
insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower
Layer will process approximately 5 semen samples.)
Catalog #99306 - CONCENTRATE
Colloidal silica concentrate for further dilution into density
gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates
the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
was evaluated according to this package insert at 50%
and 90% gradients. Each laboratory may choose to make
gradients at different concentrations which should be
evaluated for effectiveness.
A. Materials Suggested:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific Catalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1.) Upper Layer solution - 50%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of
product insert.
Note: The terms 50% and 90% do not represent
an actual concentration. The 50% and 90% are
relative concentrations based on the previous
nomenclature that defined a 1:9 dilution of
Percoll® as equal to a 100% working, isotonic
solution.
GENERAL PROCEDURE
The following is a general procedure for a two-step gradient
separation of motile sperm from semen. The volume and
concentration can be modified to meet each laboratory’s
preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen,
three-layer gradient).
1. Bring all media components to room temperature
or 37°C.
2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the
“LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical
centrifuge tube.
3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of
“UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is
done by contacting the surface of the “LOWER LAYER”
at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully
dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette
tip around the circumference of the tube in an upward
motion as the level of the “UPPER LAYER” rises.
4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the
“UPPER LAYER” using a new sterile pipette.
5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating
off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly
removing the pellet and transferring to a new sterile
centrifuge tube.
Note: The quality of the sperm sample should
be evaluated and taken into consideration
when determining the proper centrifugation
speed and time. These should be adjusted
according to the individual specimen quality
for optimization of the procedure.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
DEUTSCH
6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of
appropriate washing medium such as Sperm Washing
Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog
#90126) with protein supplementation. Resuspend the
isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes
and remove the supernatant. Repeat this step for a
second wash. Discard the supernatant and resuspend
the pellet using a suitable volume of appropriate
medium. The sample is now ready for analysis.
In case of damage, do not use. Please discard
or return to Manufacturer for replacement.
Caution: Federal (U.S.) law restricts this
device to sale by or on the order of a
physician.
Produktbeschreibung
ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder
Konzentrationgradientsmedium], das fuer das
Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der
Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem
mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren
Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen
Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende
Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma.
ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension
von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und
stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen
Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das
Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance
level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die
Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von
Pyrogen gefunden.
GEBRAUCHSANLEITUNG
Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE
KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI
KONZENTRATIONEN (50% UND 90%)
A. Vorgeschlagene Materialien:
ISolate®
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL
oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium
[Spermaspuelungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig
Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic
tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum
ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ
teinsatzes fort.
Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung
90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem
Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung.
A. Vorgeschlagene Materialen
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht
1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]:
a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr.
99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126)
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHTt”.
2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]:
a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem
sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es
(keine weitere Verduennungen werden benoetigt
– Stock Solution ist 90%).
b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt
des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL
Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden
ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten)
Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT
Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung
zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten
bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und
naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate
KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz
bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor
kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen
Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit
ausgewertet werden sollten.
A. Vorgeschlagene Materialien
ISolate Concentrate
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht.
1. Oberschichtloesung – 50%
a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr.
99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas.
b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHT”.
2. Unterschichtloesung – 90%
a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306)
und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”.
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN
Abschnitt des Paketeinsatz fort.
Anmerkung: Die Bezeichnungen 50%
und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche
Konzentration. Die 50% und die 90% sind die
relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen
Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine
1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu
einer Funktion 100% der isotonische Loesung
ALLGEMEINES VERFAHREN
Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine
zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen
Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration
koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu
entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient],
kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient).
1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei
der Raumtemperatur oder 37°C sein.
2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis
2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches
Wegwerfzentrifugeglas.
3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches
Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT.
Das wird getan, indem man die Oberflaeche der
UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der
Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt.
Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der
Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases
in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der
OBERSCHICHT steigt.
ITALIANO
4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie
sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die
OBERSCHICHT hinzu.
5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis
20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus,
entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und
von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen
Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein
neues steriles Zentrifugeglas
*Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte
ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden,
um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit
und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend
der einzelnen Probestückqualität für Optimierung
des Verfahrens justiert werden.
6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0
mL des passenden Spuelungsmediums wie das
Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog #
9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog #
90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren
Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg)
fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den
Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für
eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant
weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer
ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die
Probe ist jetzt zur Analyse bereit.
Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten
soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen,
die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch
entwickelt und optimiert worden sind.
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET
Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf.
Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der
Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch.
Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen
Temperaturen heraus.
ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die
Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie
das Medium wie angewiesen auf.
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer
dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums,
wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination
(uneinheitliche Truebung) gibt.
ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn
es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden.
Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel,
Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die
Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit
aseptischer Methode benutzt werden.
Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium
nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden
Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück.
ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses
Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt
verkauft werden.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per
dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale.
Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce
effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti,
cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione
che risulta contiene sperma con preponderanza mobile.
ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice
stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente
in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e
preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di
sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non
avere pirogeni via il test pirogene di coniglio.
ESPAÑOL
5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente
a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con
il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI”
via aspirazione, o con il allontanamento diretto della
tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo
sterilizzato.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
El ISolate® es un medio de gradiente de densidades
diseñado para separar la fracción móvil de esperma del
fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos
capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares
como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos.
*Nota: La qualità del campione di sperm
dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere
considerata quando se determina la velocità
e tempo di centrifugazione propri. Questi
dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità
del campione individuale per l’ottimizzazione
della procedura.
El ISolate es una suspensión coloidal de partículas
de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido
covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que
ha sido filtrada a través de membrana y procesada
en condiciones asépticas. El nivel de garantía de
esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado
para pirógenos con resultados negativos por el test de
pirógenos en conejo.
ISTRUZIONI PER L’ USO
Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE
PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI
(50% E 90%)
A. Materie Suggerite:
ISolate
• Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/
cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di
100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da
2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata
come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo
#9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con
integrazione di proteina . Risospendere la pallina
isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie
il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda
spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la
pallina usando un volume conveniente di sostanza
appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi.
B. Preparazione Gradiente:
Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di
gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso.
Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del
l’inserzione del prodotto.
ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA
Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C.
Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno
(Stock)
90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura
di uno stado o per ulteriore diluzione.
Non congelare o esporre a temperature alte.
A. Materie Suggerite:
Soluzione di Sostegno d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99275
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di
separazione di sperma gradiente: uno strato superiore
e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK
SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di
5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per
permettere miscuglio completo.
d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%:
a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI
SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo
#99275) in un tubo e coperchio di centrifugo
sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari
– Soluzione di Sostegno è 90%)
b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO:
10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI
S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O
APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI
SPERMA).
Catalogo #99306 – Concentrato
Concentrazione di silice colloidale per ulteriore
diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone
isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ.
Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa
inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni
laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a
concentrazioni differenti che devono essere evaluati per
efficacia.
A. Materie Suggerite:
Concentrato d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99306
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo
di separazione di sperma gradiente: uno strato
superiore e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo.
d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo
d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’nserzione del prodotto.
APPUNTO: I TERMINI 50% E 90%
N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A
C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E
50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI
RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA
PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA
DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A
UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA
DI 100%.
C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I
SPECIALI
Il seguente è una procedura generale per una seperazione
gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm)
dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione
possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza
del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma
criopreservata, gradiente di tre-strati).
1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura
ambientale o 37°C.
2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0
mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo,
buttabile, conico, sterilizzato.
3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo
stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo
“STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare
la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/
fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi
attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a
spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza
del tubo in movimento ascendente come il livello dello
“STRATO SUPERIORE” alza.
4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata
sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta
nuova, sterilizzata.
Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio
dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard
che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la
sua impianto.
Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura
d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso.
Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino
alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia
e della scatola.
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo
prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha
evidenza di sostanze particolari o contaminazione
(torbidezza non uniforme).
ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato
in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH.
Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o
supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il
prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche.
IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER
FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA
MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE.
CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita
questo meccanismo/prodotto a la vendita da
o sull’ordine di un medico o dottore.
INSTRUCCIONES DE USO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE
COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS
CONCENTRACIONES (50% y 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de
6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado
de esperma
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y
desechables
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial
de capa de gradiente superior e inferior está lista para
usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK
Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado
en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones.
A. Material sugerido:
ISolate - Solución Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por
gradiente se necesitan dos soluciones: la capa
superiory la capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y
pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “capa superior”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo
estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más
diluciones. La solución stock está al 90%).
b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
FRANÇAIS
Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser
evaluada y tomada en consideración para determinar el
tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos
parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual
de la muestra para optimizar el el proceso.
*
6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0
mL de un medio de lavado adecuado como el Medio
de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico.
Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir
este paso para un segundo lavado. Descartar el
sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando
un volumen adecuado de medio. La muestra está lista
para el análisis.
Para más detalles sobre la utilización de estos productos,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre
2ºC y 8ºC.
Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC)
antes de su uso.
No congele ni exponga a temperaturas elevadas.
El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta de la botella y de la caja,
siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones
recomendadas.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este
producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias
de contener partículas o contaminación (turbidez no
homogénea).
Los viales de ISolate deben estar herméticamente
cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para
evitar cambios de pH.
Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni
suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones,
manipule el producto en condiciones de esterilidad.
En caso de alteración del medio, no lo
utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo
al fabricante para que lo reemplace.
PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.)
restringen la venta de este producto a la
prescripción de un facultativo.
Description du produit
ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la
fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale.
Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les
contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes
morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte
une fraction de sperme contenant essentiellement les
spermatozoïdes mobiles.
ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale
de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au
silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES.
Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility
Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par
le “rabbit pyrogen test”.
Conseils d’utilisation
Référence 99264, Gradient de densité à deux
concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation
A. Matériel suggéré :
ISolate
• % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml,
50mL ou de 100ml)
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de
gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à
la section “Procédure générale” de cette notice.
Référence 99275, Solution mère
Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le
protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures.
A. Matériel suggéré :
ISolate, solution mère
• % Irvine Scientific, référence 99275
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la
solution mère (réf. 99275),
b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de
la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution
nécessaire, la solution mère est à 90%)
b. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette
notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et
10 ml de couche inférieure permettront de traiter
approximativement 5 prélèvements de sperme)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones
en gradientes de densidad; formulado en un tampón
isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir.
El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del
50% y 90% de acuerdo a este Información de producto.
Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes
a concentraciones diferentes, previa comprobación de
su efectividad.
Référence 99306, Concentré
Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour
former des gradients de densité ; formulé comme un tampon
isotonique dont la densité est approximativement la même
que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a
été évalué pour cette notice par des gradients de 50%
et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des
gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces
derniers doit être évaluée.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
A. Matériel suggéré :
ISolate, Concentré
• % Irvine Scientific, référence 99306
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi
ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la
capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice
Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen
a una co
centración real. El 50 % y el 90% son
concentraciones
relativas basadas en una nomenclatura anterior
que
definía una solución 1:9 de Percoll® como una
solución
de trabajo isotónica al 100%.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
El protocolo que aquí se describe es un procedimiento
general para separar del semen la fracción móvil de
esperma a través de un gradiente. El volumen y la
concentración se pueden modificar para adecuarse a las
preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente,
semen criopreservado, gradiente de 3 capas).
1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente
o a 37ºC.
2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de
medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga
cónico, estéril y desechable.
3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen
igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la
parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello,
colocar con la punta de la pipeta en la parte superior
de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con
mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la
pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del
tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA
INFERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado
sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con
mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y
superior o bien.
Remarque : les termes 50% et 90% ne
représentent pas des concentrations réelles.
Les 50% et 90% sont des concentrations relatives
basées sur la précédente nomenclature qui a
défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant
égale à 100% de solution isotonique.
Procédure générale
Ce qui suit est une méthode générale de séparation par
gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma
séminale. Les volumes et les concentrations peuvent
être modifiés pour répondre aux préférences de chaque
laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient
à trois couches).
1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les
préchauffer à 37°C.
2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml
de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour
centrifugeuse, jetable, stérile.
3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer
un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche
supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche
inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de
la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir
soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la
pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement
ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte.
4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié
sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle
pipette stérile.
5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes
*Remarque: la qualité du prélèvement du sperme
doit être évaluée et prise en considération lors de
la détermination de la durée et de la vitesse de
centrifugation appropriées. Pour une optimisation
de la procédure, ces dernières doivent être
ajustées selon la qualité de chaque prélèvement.
6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0
ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de
lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié
(IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre
le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant
8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette
étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et
resuspendre le culot dans le volume désiré d’un
milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à
l’analyse.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles standards spécialement développés et optimisés
pour chaque établissement médical particulier.
C onsignes de conservation et
stabilité 
Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C.
Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C
(dans une étuve) avant utilisation.
Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées.
Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable
jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les
étiquettes des flacons.
Précautions et mise en garde 
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit.
N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules
ou s’il est contaminé (non uniformément trouble).
Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2,
les flacons doivent être bien fermés pour éviter les
changements de pH.
Ce produit ne contient ni conservateurs, ni
antibiotiques, ni supplément protéiques.
Pour éviter les contaminations, il doit être
manipulé stérilement.
ATTENTION : La loi fédérale limite la vente
de ce dispositif aux médecins ou sur ordre
d’un médecin.
ENGLISH
®
ISolate
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
PRODUCT DESCRIPTION
ISolate® is a density gradient medium designed to separate
the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer
gradient system, it effectively reduces cellular contaminants
such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous
debris. The resulting sample contains predominantly
motile sperm.
ISolate is a membrane filtered, aseptically processed
colloidal suspension of silica particles stabilized with
covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF.
The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested
and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test.
DIRECTIONS FOR USE
Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL
SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50%
and 90%)
A. Materials Suggested:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or
100mL vial kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper
and lower layer gradient is ready for use. Continue to
GENERAL PROCEDURE section of product insert.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed and
optimized for your individual medical program.
STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY
Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC.
Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior
to use.
Do not freeze or expose to high temperatures.
ISolate is stable until the expiration date shown on the box
and bottle labels when stored as directed.
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
assisted reproductive procedures that include the indicated
application for which the device is intended.
ISolate will appear opaque. This is normal for this product.
Do not use any vial of medium which shows evidence of
particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness).
Catalog #99275 - STOCK SOLUTION
90% density gradient medium for use in a one-step
procedure or for further dilution.
ISolate should be tightly capped when used in a CO2
incubator to avoid pH changes.
A.Materials Suggested:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Catalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
This product contains no preservatives, antibiotics, or
protein supplements. To avoid problems with contamination,
handle using aseptic techniques.
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1. Upper Layer solution - 50%:
a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube
b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a
sterile centrifuge tube and cap - (No further
dilutions necessary - Stock Solution is 90%)
b) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product
insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower
Layer will process approximately 5 semen samples.)
Catalog #99306 - CONCENTRATE
Colloidal silica concentrate for further dilution into density
gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates
the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
was evaluated according to this package insert at 50%
and 90% gradients. Each laboratory may choose to make
gradients at different concentrations which should be
evaluated for effectiveness.
A. Materials Suggested:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific Catalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1.) Upper Layer solution - 50%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of
product insert.
Note: The terms 50% and 90% do not represent
an actual concentration. The 50% and 90% are
relative concentrations based on the previous
nomenclature that defined a 1:9 dilution of
Percoll® as equal to a 100% working, isotonic
solution.
GENERAL PROCEDURE
The following is a general procedure for a two-step gradient
separation of motile sperm from semen. The volume and
concentration can be modified to meet each laboratory’s
preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen,
three-layer gradient).
1. Bring all media components to room temperature
or 37°C.
2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the
“LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical
centrifuge tube.
3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of
“UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is
done by contacting the surface of the “LOWER LAYER”
at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully
dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette
tip around the circumference of the tube in an upward
motion as the level of the “UPPER LAYER” rises.
4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the
“UPPER LAYER” using a new sterile pipette.
5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating
off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly
removing the pellet and transferring to a new sterile
centrifuge tube.
Note: The quality of the sperm sample should
be evaluated and taken into consideration
when determining the proper centrifugation
speed and time. These should be adjusted
according to the individual specimen quality
for optimization of the procedure.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
DEUTSCH
6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of
appropriate washing medium such as Sperm Washing
Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog
#90126) with protein supplementation. Resuspend the
isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes
and remove the supernatant. Repeat this step for a
second wash. Discard the supernatant and resuspend
the pellet using a suitable volume of appropriate
medium. The sample is now ready for analysis.
In case of damage, do not use. Please discard
or return to Manufacturer for replacement.
Caution: Federal (U.S.) law restricts this
device to sale by or on the order of a
physician.
Produktbeschreibung
ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder
Konzentrationgradientsmedium], das fuer das
Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der
Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem
mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren
Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen
Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende
Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma.
ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension
von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und
stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen
Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das
Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance
level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die
Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von
Pyrogen gefunden.
GEBRAUCHSANLEITUNG
Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE
KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI
KONZENTRATIONEN (50% UND 90%)
A. Vorgeschlagene Materialien:
ISolate®
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL
oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium
[Spermaspuelungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig
Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic
tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum
ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ
teinsatzes fort.
Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung
90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem
Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung.
A. Vorgeschlagene Materialen
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht
1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]:
a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr.
99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126)
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHTt”.
2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]:
a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem
sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es
(keine weitere Verduennungen werden benoetigt
– Stock Solution ist 90%).
b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt
des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL
Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden
ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten)
Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT
Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung
zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten
bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und
naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate
KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz
bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor
kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen
Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit
ausgewertet werden sollten.
A. Vorgeschlagene Materialien
ISolate Concentrate
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht.
1. Oberschichtloesung – 50%
a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr.
99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas.
b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHT”.
2. Unterschichtloesung – 90%
a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306)
und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”.
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN
Abschnitt des Paketeinsatz fort.
Anmerkung: Die Bezeichnungen 50%
und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche
Konzentration. Die 50% und die 90% sind die
relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen
Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine
1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu
einer Funktion 100% der isotonische Loesung
ALLGEMEINES VERFAHREN
Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine
zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen
Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration
koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu
entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient],
kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient).
1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei
der Raumtemperatur oder 37°C sein.
2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis
2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches
Wegwerfzentrifugeglas.
3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches
Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT.
Das wird getan, indem man die Oberflaeche der
UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der
Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt.
Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der
Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases
in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der
OBERSCHICHT steigt.
ITALIANO
4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie
sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die
OBERSCHICHT hinzu.
5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis
20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus,
entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und
von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen
Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein
neues steriles Zentrifugeglas
*Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte
ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden,
um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit
und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend
der einzelnen Probestückqualität für Optimierung
des Verfahrens justiert werden.
6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0
mL des passenden Spuelungsmediums wie das
Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog #
9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog #
90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren
Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg)
fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den
Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für
eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant
weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer
ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die
Probe ist jetzt zur Analyse bereit.
Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten
soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen,
die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch
entwickelt und optimiert worden sind.
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET
Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf.
Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der
Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch.
Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen
Temperaturen heraus.
ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die
Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie
das Medium wie angewiesen auf.
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer
dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums,
wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination
(uneinheitliche Truebung) gibt.
ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn
es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden.
Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel,
Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die
Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit
aseptischer Methode benutzt werden.
Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium
nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden
Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück.
ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses
Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt
verkauft werden.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per
dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale.
Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce
effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti,
cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione
che risulta contiene sperma con preponderanza mobile.
ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice
stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente
in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e
preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di
sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non
avere pirogeni via il test pirogene di coniglio.
ESPAÑOL
5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente
a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con
il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI”
via aspirazione, o con il allontanamento diretto della
tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo
sterilizzato.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
El ISolate® es un medio de gradiente de densidades
diseñado para separar la fracción móvil de esperma del
fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos
capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares
como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos.
*Nota: La qualità del campione di sperm
dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere
considerata quando se determina la velocità
e tempo di centrifugazione propri. Questi
dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità
del campione individuale per l’ottimizzazione
della procedura.
El ISolate es una suspensión coloidal de partículas
de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido
covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que
ha sido filtrada a través de membrana y procesada
en condiciones asépticas. El nivel de garantía de
esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado
para pirógenos con resultados negativos por el test de
pirógenos en conejo.
ISTRUZIONI PER L’ USO
Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE
PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI
(50% E 90%)
A. Materie Suggerite:
ISolate
• Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/
cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di
100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da
2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata
come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo
#9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con
integrazione di proteina . Risospendere la pallina
isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie
il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda
spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la
pallina usando un volume conveniente di sostanza
appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi.
B. Preparazione Gradiente:
Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di
gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso.
Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del
l’inserzione del prodotto.
ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA
Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C.
Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno
(Stock)
90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura
di uno stado o per ulteriore diluzione.
Non congelare o esporre a temperature alte.
A. Materie Suggerite:
Soluzione di Sostegno d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99275
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di
separazione di sperma gradiente: uno strato superiore
e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK
SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di
5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per
permettere miscuglio completo.
d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%:
a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI
SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo
#99275) in un tubo e coperchio di centrifugo
sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari
– Soluzione di Sostegno è 90%)
b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO:
10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI
S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O
APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI
SPERMA).
Catalogo #99306 – Concentrato
Concentrazione di silice colloidale per ulteriore
diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone
isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ.
Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa
inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni
laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a
concentrazioni differenti che devono essere evaluati per
efficacia.
A. Materie Suggerite:
Concentrato d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99306
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo
di separazione di sperma gradiente: uno strato
superiore e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo.
d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo
d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’nserzione del prodotto.
APPUNTO: I TERMINI 50% E 90%
N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A
C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E
50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI
RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA
PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA
DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A
UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA
DI 100%.
C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I
SPECIALI
Il seguente è una procedura generale per una seperazione
gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm)
dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione
possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza
del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma
criopreservata, gradiente di tre-strati).
1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura
ambientale o 37°C.
2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0
mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo,
buttabile, conico, sterilizzato.
3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo
stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo
“STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare
la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/
fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi
attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a
spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza
del tubo in movimento ascendente come il livello dello
“STRATO SUPERIORE” alza.
4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata
sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta
nuova, sterilizzata.
Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio
dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard
che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la
sua impianto.
Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura
d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso.
Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino
alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia
e della scatola.
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo
prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha
evidenza di sostanze particolari o contaminazione
(torbidezza non uniforme).
ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato
in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH.
Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o
supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il
prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche.
IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER
FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA
MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE.
CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita
questo meccanismo/prodotto a la vendita da
o sull’ordine di un medico o dottore.
INSTRUCCIONES DE USO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE
COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS
CONCENTRACIONES (50% y 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de
6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado
de esperma
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y
desechables
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial
de capa de gradiente superior e inferior está lista para
usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK
Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado
en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones.
A. Material sugerido:
ISolate - Solución Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por
gradiente se necesitan dos soluciones: la capa
superiory la capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y
pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “capa superior”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo
estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más
diluciones. La solución stock está al 90%).
b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
FRANÇAIS
Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser
evaluada y tomada en consideración para determinar el
tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos
parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual
de la muestra para optimizar el el proceso.
*
6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0
mL de un medio de lavado adecuado como el Medio
de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico.
Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir
este paso para un segundo lavado. Descartar el
sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando
un volumen adecuado de medio. La muestra está lista
para el análisis.
Para más detalles sobre la utilización de estos productos,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre
2ºC y 8ºC.
Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC)
antes de su uso.
No congele ni exponga a temperaturas elevadas.
El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta de la botella y de la caja,
siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones
recomendadas.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este
producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias
de contener partículas o contaminación (turbidez no
homogénea).
Los viales de ISolate deben estar herméticamente
cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para
evitar cambios de pH.
Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni
suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones,
manipule el producto en condiciones de esterilidad.
En caso de alteración del medio, no lo
utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo
al fabricante para que lo reemplace.
PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.)
restringen la venta de este producto a la
prescripción de un facultativo.
Description du produit
ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la
fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale.
Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les
contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes
morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte
une fraction de sperme contenant essentiellement les
spermatozoïdes mobiles.
ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale
de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au
silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES.
Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility
Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par
le “rabbit pyrogen test”.
Conseils d’utilisation
Référence 99264, Gradient de densité à deux
concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation
A. Matériel suggéré :
ISolate
• % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml,
50mL ou de 100ml)
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de
gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à
la section “Procédure générale” de cette notice.
Référence 99275, Solution mère
Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le
protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures.
A. Matériel suggéré :
ISolate, solution mère
• % Irvine Scientific, référence 99275
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la
solution mère (réf. 99275),
b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de
la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution
nécessaire, la solution mère est à 90%)
b. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette
notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et
10 ml de couche inférieure permettront de traiter
approximativement 5 prélèvements de sperme)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones
en gradientes de densidad; formulado en un tampón
isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir.
El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del
50% y 90% de acuerdo a este Información de producto.
Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes
a concentraciones diferentes, previa comprobación de
su efectividad.
Référence 99306, Concentré
Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour
former des gradients de densité ; formulé comme un tampon
isotonique dont la densité est approximativement la même
que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a
été évalué pour cette notice par des gradients de 50%
et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des
gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces
derniers doit être évaluée.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
A. Matériel suggéré :
ISolate, Concentré
• % Irvine Scientific, référence 99306
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi
ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la
capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice
Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen
a una co
centración real. El 50 % y el 90% son
concentraciones
relativas basadas en una nomenclatura anterior
que
definía una solución 1:9 de Percoll® como una
solución
de trabajo isotónica al 100%.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
El protocolo que aquí se describe es un procedimiento
general para separar del semen la fracción móvil de
esperma a través de un gradiente. El volumen y la
concentración se pueden modificar para adecuarse a las
preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente,
semen criopreservado, gradiente de 3 capas).
1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente
o a 37ºC.
2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de
medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga
cónico, estéril y desechable.
3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen
igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la
parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello,
colocar con la punta de la pipeta en la parte superior
de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con
mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la
pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del
tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA
INFERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado
sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con
mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y
superior o bien.
Remarque : les termes 50% et 90% ne
représentent pas des concentrations réelles.
Les 50% et 90% sont des concentrations relatives
basées sur la précédente nomenclature qui a
défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant
égale à 100% de solution isotonique.
Procédure générale
Ce qui suit est une méthode générale de séparation par
gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma
séminale. Les volumes et les concentrations peuvent
être modifiés pour répondre aux préférences de chaque
laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient
à trois couches).
1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les
préchauffer à 37°C.
2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml
de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour
centrifugeuse, jetable, stérile.
3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer
un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche
supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche
inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de
la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir
soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la
pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement
ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte.
4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié
sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle
pipette stérile.
5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes
*Remarque: la qualité du prélèvement du sperme
doit être évaluée et prise en considération lors de
la détermination de la durée et de la vitesse de
centrifugation appropriées. Pour une optimisation
de la procédure, ces dernières doivent être
ajustées selon la qualité de chaque prélèvement.
6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0
ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de
lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié
(IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre
le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant
8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette
étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et
resuspendre le culot dans le volume désiré d’un
milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à
l’analyse.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles standards spécialement développés et optimisés
pour chaque établissement médical particulier.
C onsignes de conservation et
stabilité 
Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C.
Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C
(dans une étuve) avant utilisation.
Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées.
Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable
jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les
étiquettes des flacons.
Précautions et mise en garde 
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit.
N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules
ou s’il est contaminé (non uniformément trouble).
Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2,
les flacons doivent être bien fermés pour éviter les
changements de pH.
Ce produit ne contient ni conservateurs, ni
antibiotiques, ni supplément protéiques.
Pour éviter les contaminations, il doit être
manipulé stérilement.
ATTENTION : La loi fédérale limite la vente
de ce dispositif aux médecins ou sur ordre
d’un médecin.
ENGLISH
®
ISolate
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
PRODUCT DESCRIPTION
ISolate® is a density gradient medium designed to separate
the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer
gradient system, it effectively reduces cellular contaminants
such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous
debris. The resulting sample contains predominantly
motile sperm.
ISolate is a membrane filtered, aseptically processed
colloidal suspension of silica particles stabilized with
covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF.
The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested
and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test.
DIRECTIONS FOR USE
Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL
SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50%
and 90%)
A. Materials Suggested:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or
100mL vial kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper
and lower layer gradient is ready for use. Continue to
GENERAL PROCEDURE section of product insert.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed and
optimized for your individual medical program.
STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY
Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC.
Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior
to use.
Do not freeze or expose to high temperatures.
ISolate is stable until the expiration date shown on the box
and bottle labels when stored as directed.
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
assisted reproductive procedures that include the indicated
application for which the device is intended.
ISolate will appear opaque. This is normal for this product.
Do not use any vial of medium which shows evidence of
particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness).
Catalog #99275 - STOCK SOLUTION
90% density gradient medium for use in a one-step
procedure or for further dilution.
ISolate should be tightly capped when used in a CO2
incubator to avoid pH changes.
A.Materials Suggested:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Catalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
This product contains no preservatives, antibiotics, or
protein supplements. To avoid problems with contamination,
handle using aseptic techniques.
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1. Upper Layer solution - 50%:
a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube
b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a
sterile centrifuge tube and cap - (No further
dilutions necessary - Stock Solution is 90%)
b) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product
insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower
Layer will process approximately 5 semen samples.)
Catalog #99306 - CONCENTRATE
Colloidal silica concentrate for further dilution into density
gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates
the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
was evaluated according to this package insert at 50%
and 90% gradients. Each laboratory may choose to make
gradients at different concentrations which should be
evaluated for effectiveness.
A. Materials Suggested:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific Catalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1.) Upper Layer solution - 50%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of
product insert.
Note: The terms 50% and 90% do not represent
an actual concentration. The 50% and 90% are
relative concentrations based on the previous
nomenclature that defined a 1:9 dilution of
Percoll® as equal to a 100% working, isotonic
solution.
GENERAL PROCEDURE
The following is a general procedure for a two-step gradient
separation of motile sperm from semen. The volume and
concentration can be modified to meet each laboratory’s
preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen,
three-layer gradient).
1. Bring all media components to room temperature
or 37°C.
2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the
“LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical
centrifuge tube.
3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of
“UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is
done by contacting the surface of the “LOWER LAYER”
at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully
dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette
tip around the circumference of the tube in an upward
motion as the level of the “UPPER LAYER” rises.
4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the
“UPPER LAYER” using a new sterile pipette.
5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating
off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly
removing the pellet and transferring to a new sterile
centrifuge tube.
Note: The quality of the sperm sample should
be evaluated and taken into consideration
when determining the proper centrifugation
speed and time. These should be adjusted
according to the individual specimen quality
for optimization of the procedure.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
DEUTSCH
6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of
appropriate washing medium such as Sperm Washing
Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog
#90126) with protein supplementation. Resuspend the
isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes
and remove the supernatant. Repeat this step for a
second wash. Discard the supernatant and resuspend
the pellet using a suitable volume of appropriate
medium. The sample is now ready for analysis.
In case of damage, do not use. Please discard
or return to Manufacturer for replacement.
Caution: Federal (U.S.) law restricts this
device to sale by or on the order of a
physician.
Produktbeschreibung
ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder
Konzentrationgradientsmedium], das fuer das
Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der
Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem
mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren
Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen
Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende
Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma.
ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension
von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und
stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen
Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das
Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance
level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die
Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von
Pyrogen gefunden.
GEBRAUCHSANLEITUNG
Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE
KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI
KONZENTRATIONEN (50% UND 90%)
A. Vorgeschlagene Materialien:
ISolate®
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL
oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium
[Spermaspuelungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig
Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic
tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum
ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ
teinsatzes fort.
Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung
90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem
Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung.
A. Vorgeschlagene Materialen
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht
1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]:
a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr.
99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126)
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHTt”.
2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]:
a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem
sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es
(keine weitere Verduennungen werden benoetigt
– Stock Solution ist 90%).
b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt
des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL
Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden
ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten)
Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT
Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung
zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten
bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und
naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate
KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz
bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor
kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen
Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit
ausgewertet werden sollten.
A. Vorgeschlagene Materialien
ISolate Concentrate
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht.
1. Oberschichtloesung – 50%
a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr.
99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas.
b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHT”.
2. Unterschichtloesung – 90%
a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306)
und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”.
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN
Abschnitt des Paketeinsatz fort.
Anmerkung: Die Bezeichnungen 50%
und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche
Konzentration. Die 50% und die 90% sind die
relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen
Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine
1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu
einer Funktion 100% der isotonische Loesung
ALLGEMEINES VERFAHREN
Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine
zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen
Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration
koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu
entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient],
kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient).
1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei
der Raumtemperatur oder 37°C sein.
2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis
2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches
Wegwerfzentrifugeglas.
3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches
Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT.
Das wird getan, indem man die Oberflaeche der
UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der
Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt.
Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der
Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases
in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der
OBERSCHICHT steigt.
ITALIANO
4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie
sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die
OBERSCHICHT hinzu.
5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis
20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus,
entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und
von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen
Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein
neues steriles Zentrifugeglas
*Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte
ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden,
um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit
und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend
der einzelnen Probestückqualität für Optimierung
des Verfahrens justiert werden.
6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0
mL des passenden Spuelungsmediums wie das
Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog #
9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog #
90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren
Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg)
fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den
Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für
eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant
weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer
ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die
Probe ist jetzt zur Analyse bereit.
Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten
soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen,
die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch
entwickelt und optimiert worden sind.
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET
Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf.
Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der
Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch.
Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen
Temperaturen heraus.
ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die
Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie
das Medium wie angewiesen auf.
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer
dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums,
wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination
(uneinheitliche Truebung) gibt.
ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn
es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden.
Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel,
Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die
Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit
aseptischer Methode benutzt werden.
Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium
nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden
Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück.
ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses
Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt
verkauft werden.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per
dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale.
Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce
effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti,
cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione
che risulta contiene sperma con preponderanza mobile.
ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice
stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente
in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e
preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di
sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non
avere pirogeni via il test pirogene di coniglio.
ESPAÑOL
5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente
a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con
il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI”
via aspirazione, o con il allontanamento diretto della
tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo
sterilizzato.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
El ISolate® es un medio de gradiente de densidades
diseñado para separar la fracción móvil de esperma del
fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos
capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares
como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos.
*Nota: La qualità del campione di sperm
dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere
considerata quando se determina la velocità
e tempo di centrifugazione propri. Questi
dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità
del campione individuale per l’ottimizzazione
della procedura.
El ISolate es una suspensión coloidal de partículas
de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido
covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que
ha sido filtrada a través de membrana y procesada
en condiciones asépticas. El nivel de garantía de
esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado
para pirógenos con resultados negativos por el test de
pirógenos en conejo.
ISTRUZIONI PER L’ USO
Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE
PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI
(50% E 90%)
A. Materie Suggerite:
ISolate
• Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/
cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di
100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da
2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata
come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo
#9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con
integrazione di proteina . Risospendere la pallina
isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie
il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda
spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la
pallina usando un volume conveniente di sostanza
appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi.
B. Preparazione Gradiente:
Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di
gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso.
Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del
l’inserzione del prodotto.
ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA
Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C.
Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno
(Stock)
90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura
di uno stado o per ulteriore diluzione.
Non congelare o esporre a temperature alte.
A. Materie Suggerite:
Soluzione di Sostegno d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99275
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di
separazione di sperma gradiente: uno strato superiore
e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK
SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di
5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per
permettere miscuglio completo.
d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%:
a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI
SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo
#99275) in un tubo e coperchio di centrifugo
sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari
– Soluzione di Sostegno è 90%)
b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO:
10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI
S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O
APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI
SPERMA).
Catalogo #99306 – Concentrato
Concentrazione di silice colloidale per ulteriore
diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone
isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ.
Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa
inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni
laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a
concentrazioni differenti che devono essere evaluati per
efficacia.
A. Materie Suggerite:
Concentrato d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99306
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo
di separazione di sperma gradiente: uno strato
superiore e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo.
d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo
d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’nserzione del prodotto.
APPUNTO: I TERMINI 50% E 90%
N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A
C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E
50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI
RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA
PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA
DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A
UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA
DI 100%.
C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I
SPECIALI
Il seguente è una procedura generale per una seperazione
gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm)
dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione
possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza
del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma
criopreservata, gradiente di tre-strati).
1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura
ambientale o 37°C.
2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0
mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo,
buttabile, conico, sterilizzato.
3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo
stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo
“STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare
la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/
fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi
attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a
spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza
del tubo in movimento ascendente come il livello dello
“STRATO SUPERIORE” alza.
4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata
sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta
nuova, sterilizzata.
Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio
dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard
che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la
sua impianto.
Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura
d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso.
Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino
alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia
e della scatola.
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo
prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha
evidenza di sostanze particolari o contaminazione
(torbidezza non uniforme).
ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato
in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH.
Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o
supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il
prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche.
IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER
FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA
MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE.
CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita
questo meccanismo/prodotto a la vendita da
o sull’ordine di un medico o dottore.
INSTRUCCIONES DE USO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE
COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS
CONCENTRACIONES (50% y 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de
6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado
de esperma
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y
desechables
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial
de capa de gradiente superior e inferior está lista para
usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK
Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado
en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones.
A. Material sugerido:
ISolate - Solución Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por
gradiente se necesitan dos soluciones: la capa
superiory la capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y
pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “capa superior”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo
estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más
diluciones. La solución stock está al 90%).
b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
FRANÇAIS
Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser
evaluada y tomada en consideración para determinar el
tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos
parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual
de la muestra para optimizar el el proceso.
*
6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0
mL de un medio de lavado adecuado como el Medio
de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico.
Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir
este paso para un segundo lavado. Descartar el
sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando
un volumen adecuado de medio. La muestra está lista
para el análisis.
Para más detalles sobre la utilización de estos productos,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre
2ºC y 8ºC.
Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC)
antes de su uso.
No congele ni exponga a temperaturas elevadas.
El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta de la botella y de la caja,
siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones
recomendadas.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este
producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias
de contener partículas o contaminación (turbidez no
homogénea).
Los viales de ISolate deben estar herméticamente
cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para
evitar cambios de pH.
Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni
suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones,
manipule el producto en condiciones de esterilidad.
En caso de alteración del medio, no lo
utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo
al fabricante para que lo reemplace.
PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.)
restringen la venta de este producto a la
prescripción de un facultativo.
Description du produit
ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la
fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale.
Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les
contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes
morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte
une fraction de sperme contenant essentiellement les
spermatozoïdes mobiles.
ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale
de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au
silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES.
Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility
Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par
le “rabbit pyrogen test”.
Conseils d’utilisation
Référence 99264, Gradient de densité à deux
concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation
A. Matériel suggéré :
ISolate
• % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml,
50mL ou de 100ml)
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de
gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à
la section “Procédure générale” de cette notice.
Référence 99275, Solution mère
Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le
protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures.
A. Matériel suggéré :
ISolate, solution mère
• % Irvine Scientific, référence 99275
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la
solution mère (réf. 99275),
b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de
la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution
nécessaire, la solution mère est à 90%)
b. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette
notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et
10 ml de couche inférieure permettront de traiter
approximativement 5 prélèvements de sperme)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones
en gradientes de densidad; formulado en un tampón
isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir.
El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del
50% y 90% de acuerdo a este Información de producto.
Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes
a concentraciones diferentes, previa comprobación de
su efectividad.
Référence 99306, Concentré
Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour
former des gradients de densité ; formulé comme un tampon
isotonique dont la densité est approximativement la même
que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a
été évalué pour cette notice par des gradients de 50%
et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des
gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces
derniers doit être évaluée.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
A. Matériel suggéré :
ISolate, Concentré
• % Irvine Scientific, référence 99306
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi
ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la
capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice
Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen
a una co
centración real. El 50 % y el 90% son
concentraciones
relativas basadas en una nomenclatura anterior
que
definía una solución 1:9 de Percoll® como una
solución
de trabajo isotónica al 100%.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
El protocolo que aquí se describe es un procedimiento
general para separar del semen la fracción móvil de
esperma a través de un gradiente. El volumen y la
concentración se pueden modificar para adecuarse a las
preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente,
semen criopreservado, gradiente de 3 capas).
1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente
o a 37ºC.
2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de
medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga
cónico, estéril y desechable.
3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen
igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la
parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello,
colocar con la punta de la pipeta en la parte superior
de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con
mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la
pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del
tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA
INFERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado
sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con
mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y
superior o bien.
Remarque : les termes 50% et 90% ne
représentent pas des concentrations réelles.
Les 50% et 90% sont des concentrations relatives
basées sur la précédente nomenclature qui a
défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant
égale à 100% de solution isotonique.
Procédure générale
Ce qui suit est une méthode générale de séparation par
gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma
séminale. Les volumes et les concentrations peuvent
être modifiés pour répondre aux préférences de chaque
laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient
à trois couches).
1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les
préchauffer à 37°C.
2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml
de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour
centrifugeuse, jetable, stérile.
3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer
un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche
supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche
inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de
la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir
soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la
pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement
ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte.
4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié
sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle
pipette stérile.
5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes
*Remarque: la qualité du prélèvement du sperme
doit être évaluée et prise en considération lors de
la détermination de la durée et de la vitesse de
centrifugation appropriées. Pour une optimisation
de la procédure, ces dernières doivent être
ajustées selon la qualité de chaque prélèvement.
6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0
ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de
lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié
(IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre
le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant
8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette
étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et
resuspendre le culot dans le volume désiré d’un
milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à
l’analyse.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles standards spécialement développés et optimisés
pour chaque établissement médical particulier.
C onsignes de conservation et
stabilité 
Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C.
Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C
(dans une étuve) avant utilisation.
Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées.
Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable
jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les
étiquettes des flacons.
Précautions et mise en garde 
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit.
N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules
ou s’il est contaminé (non uniformément trouble).
Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2,
les flacons doivent être bien fermés pour éviter les
changements de pH.
Ce produit ne contient ni conservateurs, ni
antibiotiques, ni supplément protéiques.
Pour éviter les contaminations, il doit être
manipulé stérilement.
ATTENTION : La loi fédérale limite la vente
de ce dispositif aux médecins ou sur ordre
d’un médecin.
ENGLISH
®
ISolate
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
PRODUCT DESCRIPTION
ISolate® is a density gradient medium designed to separate
the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer
gradient system, it effectively reduces cellular contaminants
such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous
debris. The resulting sample contains predominantly
motile sperm.
ISolate is a membrane filtered, aseptically processed
colloidal suspension of silica particles stabilized with
covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF.
The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested
and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test.
DIRECTIONS FOR USE
Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL
SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50%
and 90%)
A. Materials Suggested:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or
100mL vial kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper
and lower layer gradient is ready for use. Continue to
GENERAL PROCEDURE section of product insert.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed and
optimized for your individual medical program.
STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY
Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC.
Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior
to use.
Do not freeze or expose to high temperatures.
ISolate is stable until the expiration date shown on the box
and bottle labels when stored as directed.
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
assisted reproductive procedures that include the indicated
application for which the device is intended.
ISolate will appear opaque. This is normal for this product.
Do not use any vial of medium which shows evidence of
particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness).
Catalog #99275 - STOCK SOLUTION
90% density gradient medium for use in a one-step
procedure or for further dilution.
ISolate should be tightly capped when used in a CO2
incubator to avoid pH changes.
A.Materials Suggested:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Catalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
This product contains no preservatives, antibiotics, or
protein supplements. To avoid problems with contamination,
handle using aseptic techniques.
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1. Upper Layer solution - 50%:
a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube
b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a
sterile centrifuge tube and cap - (No further
dilutions necessary - Stock Solution is 90%)
b) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product
insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower
Layer will process approximately 5 semen samples.)
Catalog #99306 - CONCENTRATE
Colloidal silica concentrate for further dilution into density
gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates
the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
was evaluated according to this package insert at 50%
and 90% gradients. Each laboratory may choose to make
gradients at different concentrations which should be
evaluated for effectiveness.
A. Materials Suggested:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific Catalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1.) Upper Layer solution - 50%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of
product insert.
Note: The terms 50% and 90% do not represent
an actual concentration. The 50% and 90% are
relative concentrations based on the previous
nomenclature that defined a 1:9 dilution of
Percoll® as equal to a 100% working, isotonic
solution.
GENERAL PROCEDURE
The following is a general procedure for a two-step gradient
separation of motile sperm from semen. The volume and
concentration can be modified to meet each laboratory’s
preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen,
three-layer gradient).
1. Bring all media components to room temperature
or 37°C.
2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the
“LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical
centrifuge tube.
3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of
“UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is
done by contacting the surface of the “LOWER LAYER”
at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully
dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette
tip around the circumference of the tube in an upward
motion as the level of the “UPPER LAYER” rises.
4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the
“UPPER LAYER” using a new sterile pipette.
5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating
off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly
removing the pellet and transferring to a new sterile
centrifuge tube.
Note: The quality of the sperm sample should
be evaluated and taken into consideration
when determining the proper centrifugation
speed and time. These should be adjusted
according to the individual specimen quality
for optimization of the procedure.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
DEUTSCH
6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of
appropriate washing medium such as Sperm Washing
Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog
#90126) with protein supplementation. Resuspend the
isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes
and remove the supernatant. Repeat this step for a
second wash. Discard the supernatant and resuspend
the pellet using a suitable volume of appropriate
medium. The sample is now ready for analysis.
In case of damage, do not use. Please discard
or return to Manufacturer for replacement.
Caution: Federal (U.S.) law restricts this
device to sale by or on the order of a
physician.
Produktbeschreibung
ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder
Konzentrationgradientsmedium], das fuer das
Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der
Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem
mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren
Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen
Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende
Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma.
ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension
von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und
stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen
Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das
Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance
level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die
Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von
Pyrogen gefunden.
GEBRAUCHSANLEITUNG
Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE
KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI
KONZENTRATIONEN (50% UND 90%)
A. Vorgeschlagene Materialien:
ISolate®
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL
oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium
[Spermaspuelungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig
Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic
tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum
ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ
teinsatzes fort.
Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung
90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem
Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung.
A. Vorgeschlagene Materialen
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht
1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]:
a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr.
99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126)
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHTt”.
2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]:
a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem
sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es
(keine weitere Verduennungen werden benoetigt
– Stock Solution ist 90%).
b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt
des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL
Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden
ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten)
Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT
Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung
zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten
bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und
naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate
KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz
bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor
kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen
Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit
ausgewertet werden sollten.
A. Vorgeschlagene Materialien
ISolate Concentrate
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht.
1. Oberschichtloesung – 50%
a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr.
99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas.
b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHT”.
2. Unterschichtloesung – 90%
a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306)
und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”.
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN
Abschnitt des Paketeinsatz fort.
Anmerkung: Die Bezeichnungen 50%
und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche
Konzentration. Die 50% und die 90% sind die
relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen
Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine
1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu
einer Funktion 100% der isotonische Loesung
ALLGEMEINES VERFAHREN
Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine
zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen
Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration
koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu
entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient],
kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient).
1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei
der Raumtemperatur oder 37°C sein.
2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis
2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches
Wegwerfzentrifugeglas.
3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches
Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT.
Das wird getan, indem man die Oberflaeche der
UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der
Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt.
Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der
Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases
in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der
OBERSCHICHT steigt.
ITALIANO
4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie
sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die
OBERSCHICHT hinzu.
5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis
20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus,
entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und
von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen
Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein
neues steriles Zentrifugeglas
*Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte
ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden,
um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit
und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend
der einzelnen Probestückqualität für Optimierung
des Verfahrens justiert werden.
6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0
mL des passenden Spuelungsmediums wie das
Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog #
9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog #
90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren
Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg)
fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den
Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für
eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant
weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer
ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die
Probe ist jetzt zur Analyse bereit.
Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten
soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen,
die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch
entwickelt und optimiert worden sind.
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET
Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf.
Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der
Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch.
Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen
Temperaturen heraus.
ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die
Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie
das Medium wie angewiesen auf.
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer
dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums,
wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination
(uneinheitliche Truebung) gibt.
ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn
es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden.
Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel,
Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die
Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit
aseptischer Methode benutzt werden.
Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium
nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden
Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück.
ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses
Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt
verkauft werden.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per
dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale.
Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce
effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti,
cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione
che risulta contiene sperma con preponderanza mobile.
ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice
stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente
in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e
preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di
sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non
avere pirogeni via il test pirogene di coniglio.
ESPAÑOL
5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente
a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con
il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI”
via aspirazione, o con il allontanamento diretto della
tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo
sterilizzato.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
El ISolate® es un medio de gradiente de densidades
diseñado para separar la fracción móvil de esperma del
fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos
capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares
como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos.
*Nota: La qualità del campione di sperm
dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere
considerata quando se determina la velocità
e tempo di centrifugazione propri. Questi
dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità
del campione individuale per l’ottimizzazione
della procedura.
El ISolate es una suspensión coloidal de partículas
de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido
covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que
ha sido filtrada a través de membrana y procesada
en condiciones asépticas. El nivel de garantía de
esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado
para pirógenos con resultados negativos por el test de
pirógenos en conejo.
ISTRUZIONI PER L’ USO
Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE
PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI
(50% E 90%)
A. Materie Suggerite:
ISolate
• Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/
cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di
100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da
2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata
come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo
#9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con
integrazione di proteina . Risospendere la pallina
isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie
il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda
spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la
pallina usando un volume conveniente di sostanza
appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi.
B. Preparazione Gradiente:
Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di
gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso.
Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del
l’inserzione del prodotto.
ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA
Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C.
Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno
(Stock)
90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura
di uno stado o per ulteriore diluzione.
Non congelare o esporre a temperature alte.
A. Materie Suggerite:
Soluzione di Sostegno d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99275
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di
separazione di sperma gradiente: uno strato superiore
e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK
SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di
5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per
permettere miscuglio completo.
d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%:
a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI
SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo
#99275) in un tubo e coperchio di centrifugo
sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari
– Soluzione di Sostegno è 90%)
b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO:
10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI
S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O
APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI
SPERMA).
Catalogo #99306 – Concentrato
Concentrazione di silice colloidale per ulteriore
diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone
isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ.
Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa
inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni
laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a
concentrazioni differenti che devono essere evaluati per
efficacia.
A. Materie Suggerite:
Concentrato d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99306
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo
di separazione di sperma gradiente: uno strato
superiore e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo.
d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo
d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’nserzione del prodotto.
APPUNTO: I TERMINI 50% E 90%
N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A
C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E
50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI
RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA
PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA
DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A
UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA
DI 100%.
C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I
SPECIALI
Il seguente è una procedura generale per una seperazione
gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm)
dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione
possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza
del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma
criopreservata, gradiente di tre-strati).
1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura
ambientale o 37°C.
2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0
mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo,
buttabile, conico, sterilizzato.
3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo
stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo
“STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare
la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/
fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi
attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a
spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza
del tubo in movimento ascendente come il livello dello
“STRATO SUPERIORE” alza.
4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata
sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta
nuova, sterilizzata.
Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio
dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard
che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la
sua impianto.
Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura
d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso.
Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino
alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia
e della scatola.
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo
prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha
evidenza di sostanze particolari o contaminazione
(torbidezza non uniforme).
ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato
in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH.
Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o
supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il
prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche.
IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER
FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA
MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE.
CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita
questo meccanismo/prodotto a la vendita da
o sull’ordine di un medico o dottore.
INSTRUCCIONES DE USO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE
COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS
CONCENTRACIONES (50% y 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de
6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado
de esperma
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y
desechables
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial
de capa de gradiente superior e inferior está lista para
usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK
Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado
en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones.
A. Material sugerido:
ISolate - Solución Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por
gradiente se necesitan dos soluciones: la capa
superiory la capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y
pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “capa superior”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo
estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más
diluciones. La solución stock está al 90%).
b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
FRANÇAIS
Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser
evaluada y tomada en consideración para determinar el
tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos
parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual
de la muestra para optimizar el el proceso.
*
6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0
mL de un medio de lavado adecuado como el Medio
de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico.
Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir
este paso para un segundo lavado. Descartar el
sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando
un volumen adecuado de medio. La muestra está lista
para el análisis.
Para más detalles sobre la utilización de estos productos,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre
2ºC y 8ºC.
Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC)
antes de su uso.
No congele ni exponga a temperaturas elevadas.
El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta de la botella y de la caja,
siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones
recomendadas.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este
producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias
de contener partículas o contaminación (turbidez no
homogénea).
Los viales de ISolate deben estar herméticamente
cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para
evitar cambios de pH.
Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni
suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones,
manipule el producto en condiciones de esterilidad.
En caso de alteración del medio, no lo
utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo
al fabricante para que lo reemplace.
PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.)
restringen la venta de este producto a la
prescripción de un facultativo.
Description du produit
ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la
fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale.
Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les
contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes
morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte
une fraction de sperme contenant essentiellement les
spermatozoïdes mobiles.
ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale
de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au
silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES.
Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility
Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par
le “rabbit pyrogen test”.
Conseils d’utilisation
Référence 99264, Gradient de densité à deux
concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation
A. Matériel suggéré :
ISolate
• % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml,
50mL ou de 100ml)
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de
gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à
la section “Procédure générale” de cette notice.
Référence 99275, Solution mère
Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le
protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures.
A. Matériel suggéré :
ISolate, solution mère
• % Irvine Scientific, référence 99275
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la
solution mère (réf. 99275),
b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de
la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution
nécessaire, la solution mère est à 90%)
b. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette
notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et
10 ml de couche inférieure permettront de traiter
approximativement 5 prélèvements de sperme)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones
en gradientes de densidad; formulado en un tampón
isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir.
El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del
50% y 90% de acuerdo a este Información de producto.
Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes
a concentraciones diferentes, previa comprobación de
su efectividad.
Référence 99306, Concentré
Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour
former des gradients de densité ; formulé comme un tampon
isotonique dont la densité est approximativement la même
que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a
été évalué pour cette notice par des gradients de 50%
et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des
gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces
derniers doit être évaluée.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
A. Matériel suggéré :
ISolate, Concentré
• % Irvine Scientific, référence 99306
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi
ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la
capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice
Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen
a una co
centración real. El 50 % y el 90% son
concentraciones
relativas basadas en una nomenclatura anterior
que
definía una solución 1:9 de Percoll® como una
solución
de trabajo isotónica al 100%.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
El protocolo que aquí se describe es un procedimiento
general para separar del semen la fracción móvil de
esperma a través de un gradiente. El volumen y la
concentración se pueden modificar para adecuarse a las
preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente,
semen criopreservado, gradiente de 3 capas).
1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente
o a 37ºC.
2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de
medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga
cónico, estéril y desechable.
3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen
igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la
parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello,
colocar con la punta de la pipeta en la parte superior
de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con
mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la
pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del
tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA
INFERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado
sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con
mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y
superior o bien.
Remarque : les termes 50% et 90% ne
représentent pas des concentrations réelles.
Les 50% et 90% sont des concentrations relatives
basées sur la précédente nomenclature qui a
défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant
égale à 100% de solution isotonique.
Procédure générale
Ce qui suit est une méthode générale de séparation par
gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma
séminale. Les volumes et les concentrations peuvent
être modifiés pour répondre aux préférences de chaque
laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient
à trois couches).
1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les
préchauffer à 37°C.
2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml
de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour
centrifugeuse, jetable, stérile.
3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer
un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche
supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche
inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de
la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir
soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la
pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement
ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte.
4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié
sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle
pipette stérile.
5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes
*Remarque: la qualité du prélèvement du sperme
doit être évaluée et prise en considération lors de
la détermination de la durée et de la vitesse de
centrifugation appropriées. Pour une optimisation
de la procédure, ces dernières doivent être
ajustées selon la qualité de chaque prélèvement.
6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0
ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de
lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié
(IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre
le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant
8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette
étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et
resuspendre le culot dans le volume désiré d’un
milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à
l’analyse.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles standards spécialement développés et optimisés
pour chaque établissement médical particulier.
C onsignes de conservation et
stabilité 
Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C.
Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C
(dans une étuve) avant utilisation.
Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées.
Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable
jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les
étiquettes des flacons.
Précautions et mise en garde 
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit.
N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules
ou s’il est contaminé (non uniformément trouble).
Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2,
les flacons doivent être bien fermés pour éviter les
changements de pH.
Ce produit ne contient ni conservateurs, ni
antibiotiques, ni supplément protéiques.
Pour éviter les contaminations, il doit être
manipulé stérilement.
ATTENTION : La loi fédérale limite la vente
de ce dispositif aux médecins ou sur ordre
d’un médecin.
ENGLISH
®
ISolate
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
PRODUCT DESCRIPTION
ISolate® is a density gradient medium designed to separate
the motile fraction of sperm from seminal fluid. As a two layer
gradient system, it effectively reduces cellular contaminants
such as dead sperm, white blood cells and miscellaneous
debris. The resulting sample contains predominantly
motile sperm.
ISolate is a membrane filtered, aseptically processed
colloidal suspension of silica particles stabilized with
covalently bound hydrophilic silane in HEPES-buffered HTF.
The sterility assurance level (SAL) is 10-3. ISolate is tested
and found negative for pyrogens by rabbit pyrogen test.
DIRECTIONS FOR USE
Catalog #99264 - READY TO USE COLLOIDAL
SILICA AT TWO CONCENTRATIONS (50%
and 90%)
A. Materials Suggested:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (6mL , 50 mL or
100mL vial kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
No preliminary dilutions are necessary. Each vial of upper
and lower layer gradient is ready for use. Continue to
GENERAL PROCEDURE section of product insert.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed and
optimized for your individual medical program.
STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY
Store the unopened containers refrigerated at 2º to 8ºC.
Warm to ambient or incubator (37°C) temperature prior
to use.
Do not freeze or expose to high temperatures.
ISolate is stable until the expiration date shown on the box
and bottle labels when stored as directed.
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
assisted reproductive procedures that include the indicated
application for which the device is intended.
ISolate will appear opaque. This is normal for this product.
Do not use any vial of medium which shows evidence of
particulate matter or contamination (nonuniform cloudiness).
Catalog #99275 - STOCK SOLUTION
90% density gradient medium for use in a one-step
procedure or for further dilution.
ISolate should be tightly capped when used in a CO2
incubator to avoid pH changes.
A.Materials Suggested:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Catalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
This product contains no preservatives, antibiotics, or
protein supplements. To avoid problems with contamination,
handle using aseptic techniques.
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1. Upper Layer solution - 50%:
a) Take STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
and pipette 5.6 mL into a sterile centrifuge tube
b Add 4.4 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Aliquot 10 mL of the STOCK SOLUTION into a
sterile centrifuge tube and cap - (No further
dilutions necessary - Stock Solution is 90%)
b) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of product
insert. (NOTE: 10 mL Upper Layer and 10 mL Lower
Layer will process approximately 5 semen samples.)
Catalog #99306 - CONCENTRATE
Colloidal silica concentrate for further dilution into density
gradients; formulated in an isotonic buffer and approximates
the density of undiluted Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
was evaluated according to this package insert at 50%
and 90% gradients. Each laboratory may choose to make
gradients at different concentrations which should be
evaluated for effectiveness.
A. Materials Suggested:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific Catalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Sterile, disposable conical centrifuge tubes
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pasteur Pipettes, sterile
Centrifuge
Incubator, 37°C
B. Gradient Preparation:
Two solutions are required to perform the gradient sperm
separation method: An upper layer and a lower layer.
1.) Upper Layer solution - 50%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 4.5 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 5.5 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “UPPER LAYER”
2. Lower Layer solution - 90%:
a) Take CONCENTRATE (Catalog #99306) and
pipette 8.1 mL into a sterile centrifuge tube
b) Add 1.9 mL of Modified Human Tubal Fluid
(Catalog #90126)
c) Cap tube and invert gently 3-4 times to allow
for complete mixing
d) Label tube as “LOWER LAYER”
3. Continue to GENERAL PROCEDURE section of
product insert.
Note: The terms 50% and 90% do not represent
an actual concentration. The 50% and 90% are
relative concentrations based on the previous
nomenclature that defined a 1:9 dilution of
Percoll® as equal to a 100% working, isotonic
solution.
GENERAL PROCEDURE
The following is a general procedure for a two-step gradient
separation of motile sperm from semen. The volume and
concentration can be modified to meet each laboratory’s
preference (i.e. mini-gradient, cryopreserved semen,
three-layer gradient).
1. Bring all media components to room temperature
or 37°C.
2. Using a sterile pipette, transfer 1.5 - 2.0 mL of the
“LOWER LAYER” into a sterile, disposable, conical
centrifuge tube.
3. Using a new sterile pipette, transfer an equal volume of
“UPPER LAYER” on top of the “LOWER LAYER”. This is
done by contacting the surface of the “LOWER LAYER”
at the side of the tube with the tip of the pipette. Carefully
dispense the “UPPER LAYER” by spiraling the pipette
tip around the circumference of the tube in an upward
motion as the level of the “UPPER LAYER” rises.
4. Gently place 1.5 - 2.0 mL of liquefied semen onto the
“UPPER LAYER” using a new sterile pipette.
5. Centrifuge for 10-20 minutes at approximately 200 300xg.* Carefully expose the pellet by either aspirating
off the “UPPER” and “LOWER LAYERS”, or directly
removing the pellet and transferring to a new sterile
centrifuge tube.
Note: The quality of the sperm sample should
be evaluated and taken into consideration
when determining the proper centrifugation
speed and time. These should be adjusted
according to the individual specimen quality
for optimization of the procedure.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
DEUTSCH
6. Using a new sterile pipette, add 2.0 - 3.0 mL of
appropriate washing medium such as Sperm Washing
Medium (IS Catalog #9983) or Modified HTF (IS Catalog
#90126) with protein supplementation. Resuspend the
isolated pellet. Centrifuge (~200xg) for 8 -10 minutes
and remove the supernatant. Repeat this step for a
second wash. Discard the supernatant and resuspend
the pellet using a suitable volume of appropriate
medium. The sample is now ready for analysis.
In case of damage, do not use. Please discard
or return to Manufacturer for replacement.
Caution: Federal (U.S.) law restricts this
device to sale by or on the order of a
physician.
Produktbeschreibung
ISolate ® ist ein Dichtegradientsmedium [oder
Konzentrationgradientsmedium], das fuer das
Trennen des freibeweglichen Spermafraktion von der
Samenfluessigkeit bestimmt ist. Als ein Gradientssystem
mit zwei Schichten verringert es effektiv die zellulaeren
Kontaminationsstoffe wie das tote Sperma, die weissen
Blutkoerperchen, und andere Rückstaende. Die ergebende
Probe enthält überwiegendes freibewegliches Sperma.
ISolate ist Membran gefiltert, es ist eine Kolloidsuspension
von Kieselpartikel, die aseptisch verarbeitet ist, und
stabilisiert mit dem kovalentgebundenen hydrophilen
Silan im HEPES-buffered [gepuffertem] HTF. Das
Sterilitaetversicherungsniveau [sterility assurance
level (SAL)] ist 10 -3 . ISolate wurde durch die
Kaninchenpyrogenprobe getestet und wurde negativ von
Pyrogen gefunden.
GEBRAUCHSANLEITUNG
Katalog Nr. 99264 - BETRIEBSFERTIGE
KOLLOIDAL SILICA BEI ZWEI
KONZENTRATIONEN (50% UND 90%)
A. Vorgeschlagene Materialien:
ISolate®
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99264 (6mL, 50mL
oder 100mL Phiolesatz) Sperm Washing Medium
[Spermaspuelungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Sterile wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Keine vorbereitende Verdünnungen sind notwendig
Jede Phiole der Oberschichtsgradient und Unterschic
tsgradient ist zum Gebrauch bereit. Setzen Sie zum
ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt des Produ
teinsatzes fort.
Katalog Nr. 99275 - verdichtete Lösung
90% Density Gradient Medium ist für den Gebrauch in einem
Einschrittverfahren oder für weitere Verdünnung.
A. Vorgeschlagene Materialen
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium [Spermaspülungsmedium]
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterile, wegwerfbare konische Zentrifugegläser
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht
1. Upper Layer solution - 50% [Oberschichtlösung – 50%]:
a. Nehmen Sie die STOCK SOLUTION (Katalog Nr.
99275) und pipettieren Sie 5,6 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126)
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie es behutsam 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHTt”.
2. Lower Layer solution- 90% [Unterschichtloesung-90%]:
a. Aliquotieren Sie 10 mL Stock Solution in einem
sterilen Zentrifugeglas und verschliessen Sie es
(keine weitere Verduennungen werden benoetigt
– Stock Solution ist 90%).
b. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN Abschnitt
des Produkteinsatzes fort. (ANMERKUNG: 10 mL
Oberschicht und 10 mL Unterschicht werden
ungefaehr 5 Samenproben verarbeiten)
Katalog Nr. 99306 – KONZENTRAT
Kolloid-Kieselerdekonzentrat ist für weitere Verdünnung
zu brauchbare Konzentrationen der Dichtegradienten
bestimmt; formuliert in einem isotonischen Puffer und
naehert die Dichte von unverdünntem Percoll® an. ISolate
KONZENTRAT wurde entsprechend diesem Paketeinsatz
bei 50% und 90% Gradient ausgewertet. Jedes Labor
kann beschliessen, die Gradienten bei unterschiedlichen
Konzentrationen zu bilden, die für die Wirksamkeit
ausgewertet werden sollten.
A. Vorgeschlagene Materialien
ISolate Concentrate
• Irvine Scientific Katalog Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog Nr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog Nr. 9983
Steriles, wegwerfbares konisches Zentrifugeglaeser
• Irvine Scientific Katalog Nr. IS-325
Pasteurpipetten,
Steriler Zentrifugebrutkasten, 37°C
B. Gradientvorbereitung:
Zwei Lösungen werden benoetigt, um die Trennung
methode des Spermagradients durchzuführen: Eine
Oberschicht und eine Unterschicht.
1. Oberschichtloesung – 50%
a. Nehmen Sie das CONCENTRATE (Katalog Nr.
99306) und pipettieren Sie 4,5 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas.
b. Fuegen Sie 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen.
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“OBERSCHICHT”.
2. Unterschichtloesung – 90%
a. Nehmen Sie CONCENTRATE (Katalog Nr. 99306)
und pipettieren Sie 8,1 mL in einem sterilen
Zentrifugeglas
b. Fuegen Sie 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(Katalog Nr. 90126) hinzu.
c. Verschliessen Sie das Zentrifugeglas und kehren
Sie sorgfaeltig 3 bis 4 mal um, um eine komplette
Mischung zuzulassen
d. Etikettieren Sie das Zentrifugeglas als
“UNTERSCHICHT”.
3. Setzen Sie zum ALLGEMEINEN VERFAHREN
Abschnitt des Paketeinsatz fort.
Anmerkung: Die Bezeichnungen 50%
und 90% bedeuten nicht eine tatsächliche
Konzentration. Die 50% und die 90% sind die
relativen Konzentrationen, die auf der vorherigen
Namenklatur basieren. Das bedeuted, dass eine
1:9 Verdünnung von Percoll® is gleichwertig zu
einer Funktion 100% der isotonische Loesung
ALLGEMEINES VERFAHREN
Das folgende ist ein allgemeines Verfahren für eine
zweistufige Gradientstrennung des freibeweglichen
Sperma vom Samen. Das Volumen und die Konzentration
koennen geändert werden, um jedes Labors’ Präferenz zu
entsprechen (d.h. Mini-Steigung [oder Mini-Gradient],
kaeltekonservierter Samen, Dreischichtsgradient).
1. Die Temperatur von alle Mediumbestandteile sollte bei
der Raumtemperatur oder 37°C sein.
2. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie 1,5 mL bis
2,0 mL der UNTERSCHICHT auf ein steriles konisches
Wegwerfzentrifugeglas.
3. Mit einer sterilen Pipette uebertragen Sie ein gleiches
Volumen von OBERSCHICHT auf die UNTERSCHICHT.
Das wird getan, indem man die Oberflaeche der
UNTERSCHICHT mit der Pipettenspitze an der
Seite des Zentrifugeglas in Beruehrung kommt.
Verteilen Sie sorgfaeltig die “OBERSCHICHT” mit der
Pipettenspitze um den Umkreis des Zentrifugeglases
in einer aufwaerts Bewegung als das Niveau der
OBERSCHICHT steigt.
ITALIANO
4. Mit einer neuen sterilen Pipette, fuegen Sie
sorgfaeltig 1,5 – 2,0 mL verfluessigter Samen auf die
OBERSCHICHT hinzu.
5. Zentrifugierien Sie ungefaehr 200 – 300xg fuer 10 bis
20 Minuten.* Stellen Sie sorgfaeltig die Tablette heraus,
entweder indem Sie weg von der “OBERSCHICHT” und
von der “UNTERSCHICHT” ansaugen, oder entfernen
Sie direkt die Tablette und uebertragen Sie auf ein
neues steriles Zentrifugeglas
*Anmerkung: Die Qualität der Spermaprobe sollte
ausgewertet und in Erwaegung gezogen werden,
um die korrekte Zentrifugierungsgeschwindigkeit
und Zeit festzustellen. Diese sollten entsprechend
der einzelnen Probestückqualität für Optimierung
des Verfahrens justiert werden.
6. Mit einer neuen sterilen Pipette, fügen Sie 2,0 - 3,0
mL des passenden Spuelungsmediums wie das
Sperm Washing Medium (Irvine Scientific Katalog #
9983) oder Modified HTF (Irvine Scientific Katalog #
90126), mit Proteinergänzung hinzu. Resuspendieren
Sie die isolierte Tablette. Zentrifugieren Sie (~200xg)
fuer 8 bis 10 Minuten und entfernen Sie den
Supernatant. Wiederholen Sie diese Massnahme für
eine zweite Spuelung. Werfen Sie den Supernatant
weg und resuspendieren Sie die Tablette mit einer
ensprechenden Volumen des passenden Medium. Die
Probe ist jetzt zur Analyse bereit.
Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten
soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen,
die für die spezifische medizinische Einstellung spezifisch
entwickelt und optimiert worden sind.
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITAET
Bewahren Sie die ungeoeffneten Flaschen bei 2º to 8ºC auf.
Wärmen Sie das Medium zur umgebenden oder der
Temperatur des Brutkastens (37°C) vor Gebrauch.
Frieren Sie es nicht oder stellen Sie es nicht in den hohen
Temperaturen heraus.
ISolate ist bis zum Verfallsdatum beständig, das auf die
Schachtel und Flaschenetikett gezeigt wird. Bewahren Sie
das Medium wie angewiesen auf.
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
ISolate wird undurchlässig aussehen. Das ist normal fuer
dieses Produkt. Benutzen Sie keine Phiole des Mediums,
wenn es Beweis der Feststoffe oder Kontamination
(uneinheitliche Truebung) gibt.
ISolate sollte fest mit einer Kappe bedeckt werden, wenn
es in einem CO2 Brutkasten verwendet wird, um die pHVeränderungen zu vermeiden.
Dieses Produkt enthält keine Konservierungsmittel,
Antibiotika oder Proteinergänzungen. Um die
Verschmutzung zu vermeiden, muss das Produkt mit
aseptischer Methode benutzt werden.
Im Schadensfalle, verwenden Sie das Medium
nicht. Bitte werfen Sie es weg oder senden
Sie zum Hersteller fuer Austausch zurück.
ORSICHT: Nach US-Bundesgesetz darf dieses
Gerät nur von oder auf Antrag von einem Arzt
verkauft werden.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
ISolateâ è un terreno di gradiente di densità preparato per
dividire la frazione mobile di sperma dal fluido seminale.
Come sistema gradiente di due strati, il terreno riduce
effetivamente i contaminanti cellulari come sperma morti,
cellule di sangue bianco e detriti miscellani. Il campione
che risulta contiene sperma con preponderanza mobile.
ISolate è un suspensione colloidale di particelle di silice
stabilizzato con silane hidrofilico legato covalentamente
in HTF pulito con HEPES che è filtrato su membrana e
preparato in condizioni di sterilità. Il livello di sicurezza di
sterilità(SAL) è 10-3. ISolate è analizzato e trovato di non
avere pirogeni via il test pirogene di coniglio.
ESPAÑOL
5. Centrifugare per 10 – 20 minuti approssimativamente
a 200 – 300xg.* Esporre attentamente la tavoletta con
il levare degli “STRATI SUPERIORI ED INFERIORI”
via aspirazione, o con il allontanamento diretto della
tavoletta ed il trasferimento a un tubo centrifugo
sterilizzato.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
El ISolate® es un medio de gradiente de densidades
diseñado para separar la fracción móvil de esperma del
fluido seminal. Como un sistema de gradiente de dos
capas, reduce eficazmente los contaminantes celulares
como espermatozoides muertos, leucocitos y otros restos.
*Nota: La qualità del campione di sperm
dovrebbe essere valutata e dovrebbe essere
considerata quando se determina la velocità
e tempo di centrifugazione propri. Questi
dovrebbero essere aggiustati secondo la qualità
del campione individuale per l’ottimizzazione
della procedura.
El ISolate es una suspensión coloidal de partículas
de sílice estabilizada con silano hidrofílico unido
covalentemente en HTF tamponado con HEPES, que
ha sido filtrada a través de membrana y procesada
en condiciones asépticas. El nivel de garantía de
esterilidad (SAL) es de 10-3. El ISolate ha sido testado
para pirógenos con resultados negativos por el test de
pirógenos en conejo.
ISTRUZIONI PER L’ USO
Catalogo # 99264 – SILICE COLLOIDALE
PRONTO PER USO A DUE CONCENTRAZIONI
(50% E 90%)
A. Materie Suggerite:
ISolate
• Catalogo di Irvine Scientific # 99264 (arrezzatura/
cassetta di fiala di 6mL, 50mL o arrezzatura di fiala di
100 mL Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
6. Usando una nuova pipetta sterilizatta, aggiungere da
2.0 a 3.0 mL di sostanza di spruzzetta appropriata
come Sostanza di Spruzzetta di Sperma (IS Catalogo
#9983) o HTF Modificato (ISCatalogo #9963) con
integrazione di proteina . Risospendere la pallina
isolata. Centrifugare (~200xg) per 8 -10 minuti e toglie
il supernatante. Ripetere questo passo per una seconda
spruzzetta. Butare il supernatante ed risospendere la
pallina usando un volume conveniente di sostanza
appropriata. Il campione è adesso pronto per l’analisi.
B. Preparazione Gradiente:
Le diluzioni preliminarie non sono necessarie. Ogni fiala di
gradiente di strato superiore ed Inferiore è pronto per l’uso.
Prosegui a sezione di PROC DURA GENERALE del
l’inserzione del prodotto.
ISTRUZIONI DI STOCCAGIO E STABILITA
Stoccare i contenitori non aperti refrigerati da 2° C a 8° C.
Catalogo #99275 – Soluzione di Sostegno
(Stock)
90% terreno di gradiente di densità per uso in una procedura
di uno stado o per ulteriore diluzione.
Non congelare o esporre a temperature alte.
A. Materie Suggerite:
Soluzione di Sostegno d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99275
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo di
separazione di sperma gradiente: uno strato superiore
e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere SOLUZIONE DI SOSTEGNO(STOCK
SOLUTION) –(Catalogo #99275) e una pipetta di
5.6 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 4.4 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Chiudere il tubo e capovolgere gentilmente per
permettere miscuglio completo.
d) Classificare il tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%:
a) Aliquotare 10 mL della SOLUZIONE DI
SOSTEGNO(STOCK SOLUTION–Catalogo
#99275) in un tubo e coperchio di centrifugo
sterilizzato – (No ulteriori diluzioni sono necessari
– Soluzione di Sostegno è 90%)
b) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’inserzione del prodotto. (APPUNTO:
10 mL DI STRATO SUPERIORE E DI
S T R ATO I N F E R I O R E T R AT TA N N O
APPROSSIMATIVAMENTE 5 CAMPIONI DI
SPERMA).
Catalogo #99306 – Concentrato
Concentrazione di silice colloidale per ulteriore
diluzione a gradienti di densità; formulato in un tampone
isotonico(isotonic) e approssima la densità di Percollâ.
Concentrato d’ISolate fù valutato in accordo con questa
inserzione di pachetto gradienti di 50% e 90%. Ogni
laboratorio puo scegliere per produrre gradienti a
concentrazioni differenti che devono essere evaluati per
efficacia.
A. Materie Suggerite:
Concentrato d’ISolate
• Catalogo d’Irvine Scientific #99306
Fluido Tubarico Umano Modificato
• Catalogo d’Irvine Scientific #90126
Terreno di Sciaquio di Sperma
• Catalogo d’Irvine Scientific #9983
Tubi buttabili conici centrifugi
• Catalogo d’Irvine Scientific #IS-325
Pipette Pasteur, sterilizzate
Centrifugo
Incubatore, 37° C
B. Preparazione Gradiente:
Si richiede due soluzioni per eseguire il metodo
di separazione di sperma gradiente: uno strato
superiore e uno strato inferiore.
1. Soluzione di Strato Superiore – 50%:
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 4.5 mL in un tubo centrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 5.5 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo.
d) Classificare tubo come “STRATO SUPERIORE”
2. Soluzione di Strato Inferiore – 90%
a) Mettere CONCENTRATO (Catalogo # 99306) e
pipetta di 8.1 mL in un tubocentrifugo sterilizzato
b) Aggiungere 1.9 mL di Fluido Tubarico Umano
Modificato(Catalogo #90126)
c) Coprire il tubo e capovolgere gentilmente 3 o 4 volte
per miscuglio completo
d) Classificare il tubo come “STRATO INFERIORE”
3. Prosegui a sezione di PROCEDURA GENERALE
dell’nserzione del prodotto.
APPUNTO: I TERMINI 50% E 90%
N O N R A P P R E S E N TA N N O U N A
C O N C E N T R A Z I O N E E F F E T I VA . L E
50% E 90% SONO CONCENTRAZIONI
RELATIVE BASATE ALLA NOMENCLATURA
PRECEDENTE CHE DEFINI(ACCENT) UNA
DILUZIONE DI PERCOLLâ DI 1:9 UGUALE A
UNA SOLUZIONE OPERANTE, ISOTONICA
DI 100%.
C O N S I D E R A Z I O N I D I T R AT TA M E N T I
SPECIALI
Il seguente è una procedura generale per una seperazione
gradiente di due strati di sperma mobile(motile sperm)
dallo sperma(semen). Il volume e concentrazione
possono essere modificati per soddisfare ogni preferenza
del laboratorio(per esempio mini-gradiente, sperma
criopreservata, gradiente di tre-strati).
1. Alzare tutti i componenti di terreno a temperatura
ambientale o 37°C.
2. Utilizzando una pipetta sterilizzata, trasferire 1.5 – 2.0
mL del “STRATO INFERIORE” a un tubo centrifugo,
buttabile, conico, sterilizzato.
3. Utilizzando una nuova pipetta sterilizzata, trasferire lo
stesso volume di “STRATO SUPERIORE” sopra allo
“STRATO INFERIORE”. Questo è fatto via toccare
la superficie dello “STRATO INFERIORE” al lato/
fianco del tubo con la punta della pipetta. Dispensi
attentamente lo “STRATO SUPERIORE” via girare a
spirale la punta della pipetta attorno alla circonferenza
del tubo in movimento ascendente come il livello dello
“STRATO SUPERIORE” alza.
4. Mettere gentilmente 1.5 – 2.0 mL di sperma liquificata
sopra lo “STRATO SUPERIORE” utilizzando una pipetta
nuova, sterilizzata.
Per ulteriori dettagl sull’uso de queste prodotti, il laboratorio
dovrebbe consultare le sue protocolli/tecniche standard
che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la
sua impianto.
Riscaldare a temperatura ambientale o temperatura
d’incubatore(incubator) – (37° C) prima dell’uso.
Quando sono stoccate direttamente, ISolate è stabile fino
alla data di scadenza mostrata sulle etichette della bottiglia
e della scatola.
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
ISolate si vede opaco. Questo è normale per questo
prodotto. Non usare qualsiasi fiale o terreno che ha
evidenza di sostanze particolari o contaminazione
(torbidezza non uniforme).
ISolate deve essere chiuso strettamente quando è utilizzato
in un incubatore CO2 per evitare cambi di pH.
Questo prodotto non contiene preservativi, antibiotici, o
supplementi di proteina. Per evitare contaminazione, il
prodotto deve essere utilizzato con tecniche assetiche.
IN CASO DI DANNO, NON USARE. PER
FAVORE ELIMINARE O REGRESSALO ALLA
MANIFATTURA PER SOSTITUZIONE.
CAUTELA: La legge federale (U.S.) se limita
questo meccanismo/prodotto a la vendita da
o sull’ordine di un medico o dottore.
INSTRUCCIONES DE USO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICE
COLOIDAL LISTA PARA USAR A DOS
CONCENTRACIONES (50% y 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de viales de
6mL, 50mL o kit de viales de 100mL) Medio de lavado
de esperma
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y
desechables
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
No son necesarias diluciones preliminares. Cada vial
de capa de gradiente superior e inferior está lista para
usar. Continue con la sección “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUCIÓN STOCK
Medio de gradiente de densidades al 90% para ser utilizado
en protocolos de un solo paso o para posteriores diluciones.
A. Material sugerido:
ISolate - Solución Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por
gradiente se necesitan dos soluciones: la capa
superiory la capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger la SOLUCIÓN STOCK (Nº Cat. 99275) y
pipetear 5,6mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “capa superior”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Alicuotar 10mL de la SOLUCIÓN STOCK en un tubo
estéril de centrífuga y taparlo. (No se necesitan más
diluciones. La solución stock está al 90%).
b. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
FRANÇAIS
Nota: la calidad de la muestra de esperma debe ser
evaluada y tomada en consideración para determinar el
tiempo y la velocidad adecuados de centrifugación. Estos
parámetros deben ajustarse conforme a la calidad individual
de la muestra para optimizar el el proceso.
*
6. Utilizando una nueva pipeta estéril, añadir 2.0 – 3.0
mL de un medio de lavado adecuado como el Medio
de Lavado de Esperma (IS Nº Cat 9983) o HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) son suplemento proteico.
Resuspender el sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos y descartar el sobrenadante. Repetir
este paso para un segundo lavado. Descartar el
sobrenadante y resuspender el sedimento utilizando
un volumen adecuado de medio. La muestra está lista
para el análisis.
Para más detalles sobre la utilización de estos productos,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
Conserve las botellas no abiertas refrigeradas entre
2ºC y 8ºC.
Atempere a temperatura ambiente o en un incubador (37ºC)
antes de su uso.
No congele ni exponga a temperaturas elevadas.
El ISolate es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta de la botella y de la caja,
siempre que se conserve de acuerdo a las instrucciones
recomendadas.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
El ISolate tiene un aspecto opaco. Esto es normal en este
producto. No utilice ningún vial de medio con evidencias
de contener partículas o contaminación (turbidez no
homogénea).
Los viales de ISolate deben estar herméticamente
cerrados cuando se usen en un incubador de CO2 para
evitar cambios de pH.
Este medio no contiene conservantes, ni antibióticos ni
suplementos proteicos. Para evitar contaminaciones,
manipule el producto en condiciones de esterilidad.
En caso de alteración del medio, no lo
utilice. Por favor, descártelo o devuélvalo
al fabricante para que lo reemplace.
PRECAUCIÓN: Las leyes federales (U.S.)
restringen la venta de este producto a la
prescripción de un facultativo.
Description du produit
ISolate® est un gradient de densité conçu pour séparer la
fraction des spermatozoïdes mobiles du plasma séminale.
Système gradient à deux couches, il réduit efficacement les
contaminations cellulaires telles que les spermatozoïdes
morts, les globules blancs et les débris divers. Il en résulte
une fraction de sperme contenant essentiellement les
spermatozoïdes mobiles.
ISolate, stérilisé par filtration, est une suspension colloïdale
de particules de silice stabilisés par une liaison covalente au
silane hydrophile, dans du milieu HTF tamponné au HEPES.
Le niveau de stérilité de la solution est de 10-3 (Sterility
Assurance Level). ISolate a été trouvé non-pyrogène par
le “rabbit pyrogen test”.
Conseils d’utilisation
Référence 99264, Gradient de densité à deux
concentrations 50% et 90%, prêt à l’utilisation
A. Matériel suggéré :
ISolate
• % Irvine Scientific, référence 99264 (kit de 6 ml,
50mL ou de 100ml)
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Pas de dilution préalable nécessaire. Chaque flacon de
gradient supérieur et inférieur est prêt à l’utilisation. Aller à
la section “Procédure générale” de cette notice.
Référence 99275, Solution mère
Milieu de gradient de densité à 90%, à utiliser dans le
protocole à une étape ou pour des dilutions ultérieures.
A. Matériel suggéré :
ISolate, solution mère
• % Irvine Scientific, référence 99275
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 5,6 ml de la
solution mère (réf. 99275),
b. Ajouter 4,4 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 10 ml de
la solution mère (réf. 99275) (pas de dilution
nécessaire, la solution mère est à 90%)
b. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette
notice (Remarque : 10 ml de couche supérieure et
10 ml de couche inférieure permettront de traiter
approximativement 5 prélèvements de sperme)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílice coloidal para posteriores diluciones
en gradientes de densidad; formulado en un tampón
isotónico, se aproxima a la densidad del Percoll sin diluir.
El ISolate Concentrado ha sido evaluado en gradientes del
50% y 90% de acuerdo a este Información de producto.
Cada laboratorio puede elegir preparar los gradientes
a concentraciones diferentes, previa comprobación de
su efectividad.
Référence 99306, Concentré
Suspension colloïdale de silice concentrée à diluer pour
former des gradients de densité ; formulé comme un tampon
isotonique dont la densité est approximativement la même
que celle du Percoll® non dilué. Le concentré ISolate® a
été évalué pour cette notice par des gradients de 50%
et 90%. Chaque laboratoire pourrait choisir de faire des
gradients de différentes concentrations. l’efficacité de ces
derniers doit être évaluée.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Medio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Medio de lavado de esperma
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estériles y desechables
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur estériles
Centrífuga
Incubador a 37ºC
A. Matériel suggéré :
ISolate, Concentré
• % Irvine Scientific, référence 99306
Fluide tubulaire humain modifié
• % Irvine Scientific, référence 90126
Milieu de lavage du sperme
• % Irvine Scientific, référence 9983
Tubes coniques pour centrifugeuse, jetables, stériles
• % Irvine Scientific, référence IS-325
Pipettes Pasteur, stériles
Centrifugeuse
Etuve, 37°C
B. Preparación del gradiente:
Para llevar a cabo una separación de esperma por gradi
ente se necesitan dos soluciones: la capa superior y la
capa inferior.
1. Solución de la capa superior: 50%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 4,5 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA SUPERIOR”.
2. Solución de la capa inferior: 90%
a. Coger el CONCENTRADO (Nº Cat. 99306) y
pipetear 8,1 mL en un tubo de centrífuga estéril.
b. Añadir 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat. 90126)
c. Tapar el tubo e invertir suavemente 3 o 4 veces
para permitir una mezcla completa.
d. Etiquetar el tubo como “CAPA INFERIOR”.
3. Continúe en la sección de “PROCEDIMIENTOS
GENERALES”.
B. Préparation du gradient :
Deux solutions sont requises pour réaliser la séparation des
spermatozoïdes par la méthode de gradient de densité : une
couche supérieure et une couche inférieure.
1. Solution pour la couche supérieure – 50%
a. Prélever dans un tube conique stérile 4,5 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 5,5 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche supérieure”
2. Solution pour la couche inférieure – 90%
a. Prélever dans un tube conique stérile 8,1 ml de la
solution CONCENTRE (réf. 99306)
b. Ajouter 1,9 ml de fluide tubulaire humain modifié
(réf. 90126)
c. Bouchonner le tube et le retourner 3-4 fois pour
permettre un mélange complet
d. Marquer ce tube “couche inférieure”
3. Aller à la section “Procédure générale” de cette notice
Nota: Los términos 50% y 90% no equivalen
a una co
centración real. El 50 % y el 90% son
concentraciones
relativas basadas en una nomenclatura anterior
que
definía una solución 1:9 de Percoll® como una
solución
de trabajo isotónica al 100%.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
El protocolo que aquí se describe es un procedimiento
general para separar del semen la fracción móvil de
esperma a través de un gradiente. El volumen y la
concentración se pueden modificar para adecuarse a las
preferencias de cada laboratorio (p.ej. mini-gradiente,
semen criopreservado, gradiente de 3 capas).
1. Atemperar todos los medios a temperatura ambiente
o a 37ºC.
2. Utilizando una pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL de
medio de la “CAPA INFERIOR” a un tubo de centrífuga
cónico, estéril y desechable.
3. Utilizando otra pipeta estéril, transferir un volumen
igual al del paso 1 de la “CAPA SUPERIOR” a la
parte superior de la “CAPA INFERIOR”. Para ello,
colocar con la punta de la pipeta en la parte superior
de la capa tocando la pared del tubo. Dispensar con
mucho cuidado la “CAPA SUPERIOR” moviendo la
pipeta en círculos alrededor de la circunferencia del
tubo subiendo a medida que se aumenta la “CAPA
INFERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de semen licuado
sobre la “CAPA SUPERIOR” con otra pipeta estéril.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x g*. Con
mucho cuidado, aspirar y desechar las capas inferior y
superior o bien.
Remarque : les termes 50% et 90% ne
représentent pas des concentrations réelles.
Les 50% et 90% sont des concentrations relatives
basées sur la précédente nomenclature qui a
défini la dilution 1:9 du Percoll® comme étant
égale à 100% de solution isotonique.
Procédure générale
Ce qui suit est une méthode générale de séparation par
gradient de densité des spermatozoïdes mobiles du plasma
séminale. Les volumes et les concentrations peuvent
être modifiés pour répondre aux préférences de chaque
laboratoire (ex. Mini gradient, sperme congelé, gradient
à trois couches).
1. Amener tous les milieux à température ambiante ou les
préchauffer à 37°C.
2. A l’aide d’une pipette stérile, transférer 1,5 – 2,0 ml
de la ‘couche inférieure’ dans un tube conique pour
centrifugeuse, jetable, stérile.
3. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer
un volume équivalent (1,5 – 2,0 ml) de la ‘couche
supérieure’ et la déposer au-dessus de la ‘couche
inférieure’. Ceci est réalisé en touchant la surface de
la ‘couche inférieure’ par le bout de la pipette. Répartir
soigneusement la ‘couche supérieure’ en tournant la
pipette autour de la paroi du tube dans un mouvement
ascendant à mesure que la ‘couche supérieure’ monte.
4. Soigneusement placer 1,5 – 2,0 ml de sperme liquéfié
sur la ‘couche supérieure’ en utilisant une nouvelle
pipette stérile.
5. Centrifuger à 200-300xg* pendant 10-20 minutes
*Remarque: la qualité du prélèvement du sperme
doit être évaluée et prise en considération lors de
la détermination de la durée et de la vitesse de
centrifugation appropriées. Pour une optimisation
de la procédure, ces dernières doivent être
ajustées selon la qualité de chaque prélèvement.
6. A l’aide d’une nouvelle pipette stérile, ajouter 2,0 –3,0
ml d’un milieu de lavage adéquat comme le milieu de
lavage du sperme (IS réf. 9983) ou le milieu HTF modifié
(IS réf. 90126) supplémenté en protéines. Resuspendre
le culot de centrifugation. Centrifuger (~200xg) pendant
8-10 minutes et aspirer le surnageant. Répéter cette
étape (deuxième lavage). Aspirer le surnageant et
resuspendre le culot dans le volume désiré d’un
milieu adéquat. Le prélèvement est maintenant prêt à
l’analyse.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles standards spécialement développés et optimisés
pour chaque établissement médical particulier.
C onsignes de conservation et
stabilité 
Conserver les flacons non entamés réfrigérés entre 2 et 8°C.
Amener à température ambiante ou préchauffer à 37°C
(dans une étuve) avant utilisation.
Ne pas congeler ou exposer à des températures élevées.
Conservé comme indiqué ci-dessus, ISolate est stable
jusqu’à la date d’expiration indiquée sur la boite et les
étiquettes des flacons.
Précautions et mise en garde 
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
ISolate apparaîtra opaque. Ceci est normal pour ce produit.
N’utiliser aucun flacon de milieu s’il contient des particules
ou s’il est contaminé (non uniformément trouble).
Lors de l’incubation de ISolate dans une étuve à CO2,
les flacons doivent être bien fermés pour éviter les
changements de pH.
Ce produit ne contient ni conservateurs, ni
antibiotiques, ni supplément protéiques.
Pour éviter les contaminations, il doit être
manipulé stérilement.
ATTENTION : La loi fédérale limite la vente
de ce dispositif aux médecins ou sur ordre
d’un médecin.
O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas
de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido
covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que
foi filtrado através de membrana e processado em
condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade
(SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios
com resultados negativos pelo teste de pirogénios
no coelho.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL
P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S
CONCENTRAÇÕES (50% E 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de
recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de
100mL)
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente
de camada de gradiente superior e inferior está pronta
para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS
GERAIS”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK
Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em
protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições.
A. Material sugerido:
ISolate - Solução Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275)
5,6mL para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO
STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo.
(Não são necessárias mais diluições. A solução
stock está a 90%).
b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
(Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da
“CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente
5 amostras de sémen)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições
em gradientes de densidade; formulado num tampão
isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído.
O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50%
e 90% de acordo com este folheto informativo de produto.
Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a
concentrações diferentes, os quais devem ser previamente
avaliados para a sua eficácia.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
Nota: Os valores 50% e 90% não representam
uma conc
tração real. Os valores 50% e 90% são
concentrações
relativas baseadas numa nomenclatura anterior
que
definia uma solução 1:9 de Percoll® como
uma solução
de trabalho isotónica a 100%.
PROCEDIMENTOS GERAIS
O protocolo que aqui se descreve é um procedimento
geral para separar do sémen a fracção móvel dos
espermatozoides através de um gradiente. O volume e
a concentração podem-se modificar para ajustar-se às
preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente,
sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas).
1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a
37ºC.
2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL
de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de
centrífuga cónico, estéril e descartável.
3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume
igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para
a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta
da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR”
tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente
a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos
em redor da circunferência do tubo subindo à medida
que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito
sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril.
ČESKY
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
PORTUGUÊS
Descrição do Produto
O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades
concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide
do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas
camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares
como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x
g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer
através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES
E INFERIORES”, ou directamente removendo o
sedimento e transferindo-o para um novo tubo de
centrífuga estéril.
*
Nota: a qualidade da amostra de
espermatozóides deve ser avaliada e tomada
em consideração para determinar o tempo e
a velocidade de centrifugação adequadas.
Estes parâmetros devem ajustar-se conforme
a qualidade individual da amostra para
optimizar o processo.
6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0
mL de meio de lavagem adequado como o Meio de
Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico.
Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir
este passo para numa segunda lavagem. Descartar o
sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando
um volume adequado de meio. A amostra está pronta
para análise.
Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos,
o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos
padrão e protocolos que foram especificamente
desenvolvidos e optimizados para a sua instituição.
I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E
ESTABILIDADE
Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC
e 8ºC.
Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora
(37ºC) antes de utilizar.
Não congele ou exponha a temperaturas altas.
O ISolate é estável até à data de expiração indicada no
rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo
com as instruções recomendadas.
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados
em procedimentos aos quais se destina.
O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este
produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com
evidências de conter partículas ou contaminação (turvação
não homogénea).
Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente
fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2
para evitar alterações de pH.
Este meio não contém conservantes, antibióticos nem
suplementos proteicos. Para evitar contaminações,
manipule o produto em condições de esterilidade.
E m caso de alteração do meio, não o
utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o
ao fabricante para que seja substituído.
CUIDADO: As leis federais dos EUA,
restringem a venda deste dispositivo, apenas
a médicos ou por sua prescrição.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας
σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος
του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα
κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές
μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά
αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που
προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα.
Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη,
ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από
μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με
ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο
διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate
έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα
από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%)
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate
• Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή
100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο
κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση.
Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του
φυλλαδίου του προϊόντος.
Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION
90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία
ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση.
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Κατάλογος #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας
χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
Πάνω και κάτω στρώμα.
1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου
99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK
SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν
χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK
SOLUTION είναι 90%)
β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml
Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος,
επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα
σπέρματος.)
Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE
Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω
διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε
ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την
πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate®
CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το
φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε
εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις
με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να
αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα.
A.
Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate® Συμπύκνωμα
• Irvine Scientific Κατάλογος #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω
Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται
κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.)
Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν
αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση.
Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις
βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία
που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με
100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα.
ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό
κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου
από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση
μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται
στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση,
κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων).
1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία
δωματίου ή στους 37°C.
2. Χρησιμοποιώντας
αποστειρωμένη
πιπέτα,
μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ»
σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο
σωλήνα.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω
από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή
της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι
του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε
προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας
την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του
σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο
του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται.
4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου
σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας
νέα αποστειρωμένη πιπέτα.
5.
Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά
σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το
συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ»
και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση
του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου.
*Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος
σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και
να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό
της σωστής ταχύτητας και του χρόνου
φυγοκέντρησης.
Θα
πρέπει
να
προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή
ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της
διαδικασίας.
6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης
όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου
9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126)
με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το
απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε
φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε
το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για
δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και
αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας
κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα
είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC.
Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα
(37°C) πριν τη χρήση.
Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες.
Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των
φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι
φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε
χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη
σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία
θολότητας).
Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν
χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται
οι αλλαγές pH.
Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά
ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε
προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές
τεχνικές.
Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε.
Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον
Παρασκευαστή για αντικατάσταση.
ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.)
νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε
πώληση από ή κατά εντολή γιατρού.
POPIS VÝROBKU
ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení
motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je
to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje
buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé
krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje
většinou motilní spermie.
ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze
křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a
stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v
pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace
(SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním
na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na
laboratorním králíkovi.
NÁVOD K POUŽITÍ
Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE
DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K
OKAMŽITÉMU POUŽITÍ
A. Doporučený materiál:
ISolate
• Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml
nebo 100 ml ampulek )
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka
gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití.
Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou
OBECNÁ METODA.
Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK
Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové
proceduře nebo na další ředění.
A. Doporučený materiál:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific Katalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
Horní vrstva a spodní vrstva.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE
(kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid
(kat. č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte
3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK
SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se
zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK
SOLUTION je 90%)
b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.)
Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT
Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na
gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má
přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového
letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si
může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž
efektivnost by měla být ohodnocena.
A. Doporučený materiál:
Koncentrát ISolate®
• Irvine Scientific Katalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č.
90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat.
č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku
nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml
Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně
5 vzorků sperma.)
Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují
skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní
koncentrace založené na dřívější terminologii,
která definovala poměr 1:9 ředění přípravku
Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému
isotonickému roztoku.
OBECNÁ METODA
Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní
separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace
mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé
laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno,
trojvrstevní gradient).
1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu
nebo na 37 °C.
2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ
VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky
na jedno použití.
3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem
„HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“.
Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY”
na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte
„HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem
obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se
hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat.
4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu
do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety.
5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“
a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a
přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky.
*Poznámka: Kvalita vzorku spermií by
měla být zhodnocena a brána v úvahu při
určování správné rychlosti odstředivky a
doby odstředění. Měly by být upraveny podle
kvality individuálních vzorků pro optimalizaci
procedury.
6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml
mycího média jako např. Sperm Washing Medium
(IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č.
90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte
separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10
minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro
druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte
granuli pomocí vhodného objemového množství
náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST
Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC.
Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37
°C) před použitím.
Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám.
Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační
doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve.
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek
normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které
jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot
(nerovnoměrně zakalené).
ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno
v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH .
Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky,
antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se
problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické
metody.
V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte
nebo zašlete výrobci na výměnu.
POZOR: Federální zákony USA omezují
prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo
na jeho předpis.
ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet
kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF.
Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet
testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit.
BRUGSANVISNING
Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID
SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 %
og 90 %)
A. Anbefalede materialer:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml,
50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert
hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar
til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE
på indlægssedlen.
Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION
Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding.
A. Anbefalede materialer:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og
pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr.
90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for
at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt
centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt
at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %)
b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på
indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste
lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5
sædprøver).
6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et
passende vaskemedium såsom Sperm Washing
Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS
katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender
de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200
xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag
dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten
og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet
volumen af passende medium. Prøven er nu klar til
analysering.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG
STABILITET
Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC.
Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37
°C) inden brug.
Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer.
ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens
etiket, når det opbevares som anvist.
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette
produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der
indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret
(uensartede uklarheder).
Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i
en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien.
Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler,
antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med
kontamination ved at bruge aseptiske teknikker.
Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse.
Bortskaf eller returner til producenten med
henblik på udskiftning.
FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA)
må dette produkt kun sælges af eller efter
ordination af en læge.
TUOTTEEN KUVAUS
ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään
erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä.
Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti
vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä,
valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu
näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä.
ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty
kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu
kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3.
ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi
kanin pyrogeenitestissä.
KÄYTTÖOHJEET
L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S
KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA
PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %)
A. Suositellut materiaalit:
ISolates
• Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai
100 ml:n pullopakkaus)
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai
alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry
tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET.
Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION
90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään
yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa.
A. Suositellut materiaalit:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific luettelonro 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %.
a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja
pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin
sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia
ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista).
b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN
PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml
alempaa kerrosta riittää noin 5:n
siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Katalognr. 99306 – CONCENTRATE
Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i
densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og
svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne
indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert
laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige
koncentrationer, som bør evalueres med henblik på
effektivitet.
Luettelonro 99306 - CONCENTRATE
Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus
tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja
vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä.
ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen
mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin
laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla,
joiden tehokkuus tulee arvioida.
A. Anbefalede materialer:
ISolate® koncentrat
• Irvine Scientific katalognr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
A. Suositellut materiaalit:
ISolate® -tiiviste
• Irvine Scientific luettelonro 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det
øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan
behandle ca. 5 sædprøver).
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306)
ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja
pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen
b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET.
(HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta
riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver
ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er
relative koncentrationer baseret på det tidligere
nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af
Percoll® som svarende til en 100 %
isotonisk arbejdsopløsning.
GENEREL PROCEDURE
Følgende er en generel procedure for en gradientseparation
af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og
koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt
laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret
sæd, gradient i tre lag).
1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller
37 °C.
2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det
“NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til
engangsbrug.
3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende
volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE
LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det
“UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen.
Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre
pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod
rørets inderside efterhånden, som niveauet af det
“ØVERSTE LAG” stiger.
4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på
“ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette.
5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.*
Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at
aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk,
eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem
til et nyt, sterilt centrifugerør.
Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal
evalueres og tages i betragtning, når den
korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal
fastslås. Disse skal justeres i henhold til den
enkelte sædprøves kvalitet med henblik på
optimering af proceduren.
LATVISKI
SUOMI
DANSK
PRODUKTBESKRIVELSE
ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet
til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som
et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære
kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse
restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt
motile sædceller.
Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista
pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat
suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen,
jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100
%:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi.
YLEISET TOIMENPITEET
Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen
siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla.
Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin
laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti,
kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti).
1.
Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa
huoneenlämpötila tai 37 °C.
2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA
KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen
sentrifugiputkeen.
3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ
KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä
tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN
KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä
“YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä
ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN
KERROKSEN” taso nousee.
4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä
“YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä
pipetillä.
5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.*
Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se
“YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA”
tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen
steriiliin sentrifugiputkeen.
*Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida
ja ottaa huomioon niiden linkoamisen
tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa
määritettäessä. Näitä tulee säädellä
yksittäisen näytteen laadun mukaisesti
toimenpiteen optimoimiseksi.
6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml
sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium
(IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro
90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti
uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista
pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä
pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen
asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa.
Näyte on nyt valmis analysoitavaksi.
PRODUKTA APRAKSTS
ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas
paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai
no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā
efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas,
piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem,
baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām.
Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus
spermatozoīdus.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta
koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta
ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF.
Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate
ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz
pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem.
SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI
Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC.
Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan
(37 °C) ennen käyttöä.
Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille.
ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin
merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti
säilytettynä.
VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle
normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy
hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta).
ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään
hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi.
Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä
proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään
aseptisella käsittelytekniikalla.
Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä
sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle
vaihdettavaksi.
VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki
rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin
toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS
KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS
KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%)
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate
• Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai
100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
• Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons
ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai.
Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS.
Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION
90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai
atšķaidīšanai turpmāk.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga
Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas
stobriņā.
b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal
Fluid (kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā
centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni
(Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama
– STOCK SOLUTION ir 90%).
b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās
VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar
10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa
šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5
spermas paraugus.)
Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE
Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai
atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks
buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll®
blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate®
CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā.
Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju
gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate® koncentrāts
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet
3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa
un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt
apmēram 5 spermas paraugus.)
Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda
faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir
relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz
iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll®
atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam,
izotoniskam šķīdumam.
VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA
Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai
gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu
no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt,
lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem
mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu,
kā trīsslāņu gradientu).
1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra
ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C.
2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml
“APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas,
konisku centrifūgas stobriņu.
3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu
daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ
SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties
„APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi
izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot
pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas
kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim
paaugstinoties.
4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet
1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”.
5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g
paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost
„AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot
lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu.
*Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte
jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo
centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai
procedūru optimizētu, šos parametrus
vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā
parauga kvalitātei.
6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0
ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram,
Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai
Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna
papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti.
Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes
un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu
otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna
suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas
barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots
analīzes veikšanai.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN
STABILITĀTE
Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º
C temperatūrā.
Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai
inkubatora (37°C) temperatūrai.
Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai.
Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz
derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu
marķējuma.
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas
ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā
saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs
duļķainums).
ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā,
lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas.
Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna
piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām,
rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas.
Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai
nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai.
BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj
šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar
viņu norīkojumu.
O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas
de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido
covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que
foi filtrado através de membrana e processado em
condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade
(SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios
com resultados negativos pelo teste de pirogénios
no coelho.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL
P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S
CONCENTRAÇÕES (50% E 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de
recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de
100mL)
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente
de camada de gradiente superior e inferior está pronta
para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS
GERAIS”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK
Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em
protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições.
A. Material sugerido:
ISolate - Solução Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275)
5,6mL para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO
STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo.
(Não são necessárias mais diluições. A solução
stock está a 90%).
b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
(Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da
“CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente
5 amostras de sémen)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições
em gradientes de densidade; formulado num tampão
isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído.
O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50%
e 90% de acordo com este folheto informativo de produto.
Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a
concentrações diferentes, os quais devem ser previamente
avaliados para a sua eficácia.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
Nota: Os valores 50% e 90% não representam
uma conc
tração real. Os valores 50% e 90% são
concentrações
relativas baseadas numa nomenclatura anterior
que
definia uma solução 1:9 de Percoll® como
uma solução
de trabalho isotónica a 100%.
PROCEDIMENTOS GERAIS
O protocolo que aqui se descreve é um procedimento
geral para separar do sémen a fracção móvel dos
espermatozoides através de um gradiente. O volume e
a concentração podem-se modificar para ajustar-se às
preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente,
sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas).
1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a
37ºC.
2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL
de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de
centrífuga cónico, estéril e descartável.
3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume
igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para
a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta
da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR”
tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente
a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos
em redor da circunferência do tubo subindo à medida
que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito
sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril.
ČESKY
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
PORTUGUÊS
Descrição do Produto
O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades
concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide
do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas
camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares
como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x
g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer
através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES
E INFERIORES”, ou directamente removendo o
sedimento e transferindo-o para um novo tubo de
centrífuga estéril.
*
Nota: a qualidade da amostra de
espermatozóides deve ser avaliada e tomada
em consideração para determinar o tempo e
a velocidade de centrifugação adequadas.
Estes parâmetros devem ajustar-se conforme
a qualidade individual da amostra para
optimizar o processo.
6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0
mL de meio de lavagem adequado como o Meio de
Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico.
Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir
este passo para numa segunda lavagem. Descartar o
sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando
um volume adequado de meio. A amostra está pronta
para análise.
Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos,
o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos
padrão e protocolos que foram especificamente
desenvolvidos e optimizados para a sua instituição.
I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E
ESTABILIDADE
Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC
e 8ºC.
Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora
(37ºC) antes de utilizar.
Não congele ou exponha a temperaturas altas.
O ISolate é estável até à data de expiração indicada no
rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo
com as instruções recomendadas.
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados
em procedimentos aos quais se destina.
O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este
produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com
evidências de conter partículas ou contaminação (turvação
não homogénea).
Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente
fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2
para evitar alterações de pH.
Este meio não contém conservantes, antibióticos nem
suplementos proteicos. Para evitar contaminações,
manipule o produto em condições de esterilidade.
E m caso de alteração do meio, não o
utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o
ao fabricante para que seja substituído.
CUIDADO: As leis federais dos EUA,
restringem a venda deste dispositivo, apenas
a médicos ou por sua prescrição.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας
σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος
του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα
κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές
μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά
αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που
προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα.
Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη,
ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από
μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με
ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο
διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate
έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα
από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%)
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate
• Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή
100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο
κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση.
Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του
φυλλαδίου του προϊόντος.
Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION
90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία
ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση.
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Κατάλογος #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας
χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
Πάνω και κάτω στρώμα.
1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου
99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK
SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν
χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK
SOLUTION είναι 90%)
β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml
Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος,
επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα
σπέρματος.)
Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE
Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω
διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε
ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την
πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate®
CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το
φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε
εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις
με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να
αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα.
A.
Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate® Συμπύκνωμα
• Irvine Scientific Κατάλογος #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω
Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται
κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.)
Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν
αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση.
Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις
βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία
που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με
100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα.
ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό
κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου
από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση
μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται
στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση,
κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων).
1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία
δωματίου ή στους 37°C.
2. Χρησιμοποιώντας
αποστειρωμένη
πιπέτα,
μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ»
σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο
σωλήνα.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω
από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή
της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι
του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε
προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας
την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του
σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο
του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται.
4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου
σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας
νέα αποστειρωμένη πιπέτα.
5.
Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά
σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το
συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ»
και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση
του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου.
*Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος
σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και
να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό
της σωστής ταχύτητας και του χρόνου
φυγοκέντρησης.
Θα
πρέπει
να
προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή
ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της
διαδικασίας.
6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης
όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου
9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126)
με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το
απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε
φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε
το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για
δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και
αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας
κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα
είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC.
Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα
(37°C) πριν τη χρήση.
Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες.
Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των
φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι
φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε
χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη
σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία
θολότητας).
Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν
χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται
οι αλλαγές pH.
Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά
ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε
προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές
τεχνικές.
Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε.
Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον
Παρασκευαστή για αντικατάσταση.
ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.)
νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε
πώληση από ή κατά εντολή γιατρού.
POPIS VÝROBKU
ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení
motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je
to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje
buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé
krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje
většinou motilní spermie.
ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze
křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a
stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v
pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace
(SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním
na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na
laboratorním králíkovi.
NÁVOD K POUŽITÍ
Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE
DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K
OKAMŽITÉMU POUŽITÍ
A. Doporučený materiál:
ISolate
• Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml
nebo 100 ml ampulek )
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka
gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití.
Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou
OBECNÁ METODA.
Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK
Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové
proceduře nebo na další ředění.
A. Doporučený materiál:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific Katalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
Horní vrstva a spodní vrstva.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE
(kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid
(kat. č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte
3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK
SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se
zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK
SOLUTION je 90%)
b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.)
Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT
Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na
gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má
přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového
letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si
může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž
efektivnost by měla být ohodnocena.
A. Doporučený materiál:
Koncentrát ISolate®
• Irvine Scientific Katalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č.
90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat.
č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku
nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml
Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně
5 vzorků sperma.)
Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují
skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní
koncentrace založené na dřívější terminologii,
která definovala poměr 1:9 ředění přípravku
Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému
isotonickému roztoku.
OBECNÁ METODA
Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní
separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace
mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé
laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno,
trojvrstevní gradient).
1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu
nebo na 37 °C.
2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ
VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky
na jedno použití.
3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem
„HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“.
Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY”
na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte
„HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem
obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se
hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat.
4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu
do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety.
5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“
a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a
přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky.
*Poznámka: Kvalita vzorku spermií by
měla být zhodnocena a brána v úvahu při
určování správné rychlosti odstředivky a
doby odstředění. Měly by být upraveny podle
kvality individuálních vzorků pro optimalizaci
procedury.
6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml
mycího média jako např. Sperm Washing Medium
(IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č.
90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte
separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10
minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro
druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte
granuli pomocí vhodného objemového množství
náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST
Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC.
Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37
°C) před použitím.
Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám.
Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační
doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve.
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek
normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které
jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot
(nerovnoměrně zakalené).
ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno
v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH .
Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky,
antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se
problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické
metody.
V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte
nebo zašlete výrobci na výměnu.
POZOR: Federální zákony USA omezují
prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo
na jeho předpis.
ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet
kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF.
Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet
testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit.
BRUGSANVISNING
Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID
SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 %
og 90 %)
A. Anbefalede materialer:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml,
50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert
hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar
til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE
på indlægssedlen.
Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION
Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding.
A. Anbefalede materialer:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og
pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr.
90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for
at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt
centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt
at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %)
b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på
indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste
lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5
sædprøver).
6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et
passende vaskemedium såsom Sperm Washing
Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS
katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender
de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200
xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag
dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten
og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet
volumen af passende medium. Prøven er nu klar til
analysering.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG
STABILITET
Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC.
Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37
°C) inden brug.
Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer.
ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens
etiket, når det opbevares som anvist.
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette
produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der
indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret
(uensartede uklarheder).
Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i
en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien.
Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler,
antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med
kontamination ved at bruge aseptiske teknikker.
Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse.
Bortskaf eller returner til producenten med
henblik på udskiftning.
FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA)
må dette produkt kun sælges af eller efter
ordination af en læge.
TUOTTEEN KUVAUS
ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään
erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä.
Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti
vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä,
valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu
näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä.
ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty
kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu
kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3.
ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi
kanin pyrogeenitestissä.
KÄYTTÖOHJEET
L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S
KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA
PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %)
A. Suositellut materiaalit:
ISolates
• Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai
100 ml:n pullopakkaus)
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai
alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry
tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET.
Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION
90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään
yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa.
A. Suositellut materiaalit:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific luettelonro 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %.
a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja
pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin
sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia
ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista).
b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN
PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml
alempaa kerrosta riittää noin 5:n
siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Katalognr. 99306 – CONCENTRATE
Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i
densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og
svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne
indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert
laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige
koncentrationer, som bør evalueres med henblik på
effektivitet.
Luettelonro 99306 - CONCENTRATE
Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus
tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja
vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä.
ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen
mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin
laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla,
joiden tehokkuus tulee arvioida.
A. Anbefalede materialer:
ISolate® koncentrat
• Irvine Scientific katalognr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
A. Suositellut materiaalit:
ISolate® -tiiviste
• Irvine Scientific luettelonro 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det
øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan
behandle ca. 5 sædprøver).
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306)
ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja
pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen
b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET.
(HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta
riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver
ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er
relative koncentrationer baseret på det tidligere
nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af
Percoll® som svarende til en 100 %
isotonisk arbejdsopløsning.
GENEREL PROCEDURE
Følgende er en generel procedure for en gradientseparation
af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og
koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt
laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret
sæd, gradient i tre lag).
1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller
37 °C.
2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det
“NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til
engangsbrug.
3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende
volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE
LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det
“UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen.
Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre
pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod
rørets inderside efterhånden, som niveauet af det
“ØVERSTE LAG” stiger.
4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på
“ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette.
5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.*
Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at
aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk,
eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem
til et nyt, sterilt centrifugerør.
Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal
evalueres og tages i betragtning, når den
korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal
fastslås. Disse skal justeres i henhold til den
enkelte sædprøves kvalitet med henblik på
optimering af proceduren.
LATVISKI
SUOMI
DANSK
PRODUKTBESKRIVELSE
ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet
til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som
et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære
kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse
restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt
motile sædceller.
Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista
pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat
suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen,
jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100
%:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi.
YLEISET TOIMENPITEET
Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen
siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla.
Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin
laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti,
kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti).
1.
Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa
huoneenlämpötila tai 37 °C.
2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA
KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen
sentrifugiputkeen.
3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ
KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä
tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN
KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä
“YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä
ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN
KERROKSEN” taso nousee.
4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä
“YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä
pipetillä.
5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.*
Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se
“YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA”
tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen
steriiliin sentrifugiputkeen.
*Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida
ja ottaa huomioon niiden linkoamisen
tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa
määritettäessä. Näitä tulee säädellä
yksittäisen näytteen laadun mukaisesti
toimenpiteen optimoimiseksi.
6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml
sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium
(IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro
90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti
uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista
pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä
pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen
asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa.
Näyte on nyt valmis analysoitavaksi.
PRODUKTA APRAKSTS
ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas
paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai
no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā
efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas,
piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem,
baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām.
Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus
spermatozoīdus.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta
koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta
ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF.
Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate
ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz
pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem.
SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI
Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC.
Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan
(37 °C) ennen käyttöä.
Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille.
ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin
merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti
säilytettynä.
VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle
normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy
hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta).
ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään
hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi.
Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä
proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään
aseptisella käsittelytekniikalla.
Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä
sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle
vaihdettavaksi.
VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki
rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin
toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS
KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS
KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%)
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate
• Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai
100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
• Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons
ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai.
Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS.
Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION
90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai
atšķaidīšanai turpmāk.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga
Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas
stobriņā.
b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal
Fluid (kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā
centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni
(Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama
– STOCK SOLUTION ir 90%).
b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās
VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar
10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa
šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5
spermas paraugus.)
Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE
Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai
atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks
buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll®
blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate®
CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā.
Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju
gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate® koncentrāts
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet
3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa
un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt
apmēram 5 spermas paraugus.)
Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda
faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir
relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz
iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll®
atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam,
izotoniskam šķīdumam.
VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA
Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai
gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu
no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt,
lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem
mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu,
kā trīsslāņu gradientu).
1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra
ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C.
2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml
“APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas,
konisku centrifūgas stobriņu.
3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu
daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ
SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties
„APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi
izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot
pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas
kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim
paaugstinoties.
4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet
1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”.
5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g
paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost
„AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot
lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu.
*Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte
jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo
centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai
procedūru optimizētu, šos parametrus
vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā
parauga kvalitātei.
6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0
ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram,
Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai
Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna
papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti.
Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes
un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu
otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna
suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas
barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots
analīzes veikšanai.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN
STABILITĀTE
Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º
C temperatūrā.
Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai
inkubatora (37°C) temperatūrai.
Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai.
Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz
derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu
marķējuma.
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas
ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā
saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs
duļķainums).
ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā,
lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas.
Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna
piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām,
rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas.
Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai
nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai.
BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj
šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar
viņu norīkojumu.
O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas
de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido
covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que
foi filtrado através de membrana e processado em
condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade
(SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios
com resultados negativos pelo teste de pirogénios
no coelho.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL
P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S
CONCENTRAÇÕES (50% E 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de
recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de
100mL)
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente
de camada de gradiente superior e inferior está pronta
para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS
GERAIS”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK
Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em
protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições.
A. Material sugerido:
ISolate - Solução Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275)
5,6mL para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO
STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo.
(Não são necessárias mais diluições. A solução
stock está a 90%).
b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
(Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da
“CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente
5 amostras de sémen)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições
em gradientes de densidade; formulado num tampão
isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído.
O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50%
e 90% de acordo com este folheto informativo de produto.
Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a
concentrações diferentes, os quais devem ser previamente
avaliados para a sua eficácia.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
Nota: Os valores 50% e 90% não representam
uma conc
tração real. Os valores 50% e 90% são
concentrações
relativas baseadas numa nomenclatura anterior
que
definia uma solução 1:9 de Percoll® como
uma solução
de trabalho isotónica a 100%.
PROCEDIMENTOS GERAIS
O protocolo que aqui se descreve é um procedimento
geral para separar do sémen a fracção móvel dos
espermatozoides através de um gradiente. O volume e
a concentração podem-se modificar para ajustar-se às
preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente,
sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas).
1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a
37ºC.
2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL
de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de
centrífuga cónico, estéril e descartável.
3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume
igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para
a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta
da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR”
tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente
a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos
em redor da circunferência do tubo subindo à medida
que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito
sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril.
ČESKY
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
PORTUGUÊS
Descrição do Produto
O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades
concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide
do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas
camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares
como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x
g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer
através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES
E INFERIORES”, ou directamente removendo o
sedimento e transferindo-o para um novo tubo de
centrífuga estéril.
*
Nota: a qualidade da amostra de
espermatozóides deve ser avaliada e tomada
em consideração para determinar o tempo e
a velocidade de centrifugação adequadas.
Estes parâmetros devem ajustar-se conforme
a qualidade individual da amostra para
optimizar o processo.
6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0
mL de meio de lavagem adequado como o Meio de
Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico.
Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir
este passo para numa segunda lavagem. Descartar o
sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando
um volume adequado de meio. A amostra está pronta
para análise.
Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos,
o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos
padrão e protocolos que foram especificamente
desenvolvidos e optimizados para a sua instituição.
I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E
ESTABILIDADE
Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC
e 8ºC.
Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora
(37ºC) antes de utilizar.
Não congele ou exponha a temperaturas altas.
O ISolate é estável até à data de expiração indicada no
rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo
com as instruções recomendadas.
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados
em procedimentos aos quais se destina.
O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este
produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com
evidências de conter partículas ou contaminação (turvação
não homogénea).
Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente
fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2
para evitar alterações de pH.
Este meio não contém conservantes, antibióticos nem
suplementos proteicos. Para evitar contaminações,
manipule o produto em condições de esterilidade.
E m caso de alteração do meio, não o
utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o
ao fabricante para que seja substituído.
CUIDADO: As leis federais dos EUA,
restringem a venda deste dispositivo, apenas
a médicos ou por sua prescrição.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας
σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος
του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα
κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές
μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά
αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που
προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα.
Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη,
ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από
μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με
ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο
διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate
έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα
από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%)
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate
• Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή
100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο
κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση.
Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του
φυλλαδίου του προϊόντος.
Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION
90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία
ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση.
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Κατάλογος #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας
χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
Πάνω και κάτω στρώμα.
1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου
99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK
SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν
χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK
SOLUTION είναι 90%)
β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml
Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος,
επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα
σπέρματος.)
Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE
Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω
διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε
ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την
πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate®
CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το
φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε
εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις
με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να
αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα.
A.
Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate® Συμπύκνωμα
• Irvine Scientific Κατάλογος #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω
Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται
κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.)
Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν
αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση.
Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις
βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία
που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με
100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα.
ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό
κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου
από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση
μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται
στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση,
κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων).
1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία
δωματίου ή στους 37°C.
2. Χρησιμοποιώντας
αποστειρωμένη
πιπέτα,
μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ»
σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο
σωλήνα.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω
από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή
της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι
του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε
προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας
την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του
σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο
του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται.
4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου
σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας
νέα αποστειρωμένη πιπέτα.
5.
Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά
σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το
συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ»
και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση
του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου.
*Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος
σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και
να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό
της σωστής ταχύτητας και του χρόνου
φυγοκέντρησης.
Θα
πρέπει
να
προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή
ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της
διαδικασίας.
6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης
όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου
9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126)
με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το
απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε
φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε
το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για
δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και
αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας
κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα
είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC.
Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα
(37°C) πριν τη χρήση.
Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες.
Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των
φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι
φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε
χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη
σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία
θολότητας).
Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν
χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται
οι αλλαγές pH.
Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά
ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε
προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές
τεχνικές.
Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε.
Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον
Παρασκευαστή για αντικατάσταση.
ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.)
νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε
πώληση από ή κατά εντολή γιατρού.
POPIS VÝROBKU
ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení
motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je
to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje
buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé
krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje
většinou motilní spermie.
ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze
křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a
stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v
pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace
(SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním
na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na
laboratorním králíkovi.
NÁVOD K POUŽITÍ
Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE
DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K
OKAMŽITÉMU POUŽITÍ
A. Doporučený materiál:
ISolate
• Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml
nebo 100 ml ampulek )
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka
gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití.
Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou
OBECNÁ METODA.
Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK
Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové
proceduře nebo na další ředění.
A. Doporučený materiál:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific Katalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
Horní vrstva a spodní vrstva.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE
(kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid
(kat. č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte
3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK
SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se
zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK
SOLUTION je 90%)
b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.)
Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT
Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na
gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má
přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového
letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si
může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž
efektivnost by měla být ohodnocena.
A. Doporučený materiál:
Koncentrát ISolate®
• Irvine Scientific Katalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č.
90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat.
č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku
nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml
Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně
5 vzorků sperma.)
Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují
skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní
koncentrace založené na dřívější terminologii,
která definovala poměr 1:9 ředění přípravku
Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému
isotonickému roztoku.
OBECNÁ METODA
Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní
separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace
mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé
laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno,
trojvrstevní gradient).
1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu
nebo na 37 °C.
2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ
VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky
na jedno použití.
3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem
„HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“.
Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY”
na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte
„HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem
obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se
hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat.
4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu
do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety.
5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“
a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a
přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky.
*Poznámka: Kvalita vzorku spermií by
měla být zhodnocena a brána v úvahu při
určování správné rychlosti odstředivky a
doby odstředění. Měly by být upraveny podle
kvality individuálních vzorků pro optimalizaci
procedury.
6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml
mycího média jako např. Sperm Washing Medium
(IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č.
90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte
separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10
minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro
druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte
granuli pomocí vhodného objemového množství
náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST
Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC.
Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37
°C) před použitím.
Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám.
Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační
doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve.
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek
normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které
jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot
(nerovnoměrně zakalené).
ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno
v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH .
Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky,
antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se
problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické
metody.
V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte
nebo zašlete výrobci na výměnu.
POZOR: Federální zákony USA omezují
prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo
na jeho předpis.
ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet
kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF.
Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet
testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit.
BRUGSANVISNING
Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID
SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 %
og 90 %)
A. Anbefalede materialer:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml,
50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert
hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar
til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE
på indlægssedlen.
Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION
Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding.
A. Anbefalede materialer:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og
pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr.
90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for
at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt
centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt
at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %)
b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på
indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste
lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5
sædprøver).
6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et
passende vaskemedium såsom Sperm Washing
Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS
katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender
de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200
xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag
dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten
og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet
volumen af passende medium. Prøven er nu klar til
analysering.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG
STABILITET
Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC.
Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37
°C) inden brug.
Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer.
ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens
etiket, når det opbevares som anvist.
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette
produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der
indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret
(uensartede uklarheder).
Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i
en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien.
Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler,
antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med
kontamination ved at bruge aseptiske teknikker.
Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse.
Bortskaf eller returner til producenten med
henblik på udskiftning.
FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA)
må dette produkt kun sælges af eller efter
ordination af en læge.
TUOTTEEN KUVAUS
ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään
erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä.
Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti
vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä,
valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu
näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä.
ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty
kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu
kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3.
ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi
kanin pyrogeenitestissä.
KÄYTTÖOHJEET
L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S
KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA
PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %)
A. Suositellut materiaalit:
ISolates
• Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai
100 ml:n pullopakkaus)
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai
alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry
tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET.
Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION
90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään
yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa.
A. Suositellut materiaalit:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific luettelonro 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %.
a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja
pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin
sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia
ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista).
b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN
PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml
alempaa kerrosta riittää noin 5:n
siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Katalognr. 99306 – CONCENTRATE
Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i
densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og
svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne
indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert
laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige
koncentrationer, som bør evalueres med henblik på
effektivitet.
Luettelonro 99306 - CONCENTRATE
Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus
tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja
vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä.
ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen
mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin
laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla,
joiden tehokkuus tulee arvioida.
A. Anbefalede materialer:
ISolate® koncentrat
• Irvine Scientific katalognr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
A. Suositellut materiaalit:
ISolate® -tiiviste
• Irvine Scientific luettelonro 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det
øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan
behandle ca. 5 sædprøver).
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306)
ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja
pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen
b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET.
(HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta
riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver
ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er
relative koncentrationer baseret på det tidligere
nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af
Percoll® som svarende til en 100 %
isotonisk arbejdsopløsning.
GENEREL PROCEDURE
Følgende er en generel procedure for en gradientseparation
af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og
koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt
laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret
sæd, gradient i tre lag).
1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller
37 °C.
2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det
“NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til
engangsbrug.
3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende
volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE
LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det
“UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen.
Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre
pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod
rørets inderside efterhånden, som niveauet af det
“ØVERSTE LAG” stiger.
4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på
“ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette.
5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.*
Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at
aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk,
eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem
til et nyt, sterilt centrifugerør.
Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal
evalueres og tages i betragtning, når den
korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal
fastslås. Disse skal justeres i henhold til den
enkelte sædprøves kvalitet med henblik på
optimering af proceduren.
LATVISKI
SUOMI
DANSK
PRODUKTBESKRIVELSE
ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet
til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som
et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære
kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse
restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt
motile sædceller.
Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista
pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat
suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen,
jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100
%:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi.
YLEISET TOIMENPITEET
Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen
siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla.
Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin
laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti,
kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti).
1.
Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa
huoneenlämpötila tai 37 °C.
2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA
KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen
sentrifugiputkeen.
3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ
KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä
tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN
KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä
“YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä
ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN
KERROKSEN” taso nousee.
4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä
“YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä
pipetillä.
5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.*
Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se
“YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA”
tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen
steriiliin sentrifugiputkeen.
*Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida
ja ottaa huomioon niiden linkoamisen
tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa
määritettäessä. Näitä tulee säädellä
yksittäisen näytteen laadun mukaisesti
toimenpiteen optimoimiseksi.
6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml
sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium
(IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro
90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti
uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista
pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä
pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen
asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa.
Näyte on nyt valmis analysoitavaksi.
PRODUKTA APRAKSTS
ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas
paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai
no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā
efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas,
piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem,
baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām.
Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus
spermatozoīdus.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta
koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta
ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF.
Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate
ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz
pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem.
SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI
Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC.
Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan
(37 °C) ennen käyttöä.
Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille.
ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin
merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti
säilytettynä.
VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle
normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy
hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta).
ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään
hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi.
Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä
proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään
aseptisella käsittelytekniikalla.
Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä
sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle
vaihdettavaksi.
VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki
rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin
toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS
KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS
KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%)
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate
• Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai
100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
• Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons
ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai.
Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS.
Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION
90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai
atšķaidīšanai turpmāk.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga
Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas
stobriņā.
b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal
Fluid (kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā
centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni
(Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama
– STOCK SOLUTION ir 90%).
b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās
VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar
10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa
šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5
spermas paraugus.)
Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE
Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai
atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks
buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll®
blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate®
CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā.
Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju
gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate® koncentrāts
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet
3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa
un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt
apmēram 5 spermas paraugus.)
Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda
faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir
relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz
iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll®
atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam,
izotoniskam šķīdumam.
VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA
Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai
gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu
no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt,
lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem
mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu,
kā trīsslāņu gradientu).
1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra
ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C.
2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml
“APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas,
konisku centrifūgas stobriņu.
3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu
daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ
SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties
„APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi
izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot
pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas
kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim
paaugstinoties.
4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet
1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”.
5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g
paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost
„AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot
lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu.
*Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte
jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo
centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai
procedūru optimizētu, šos parametrus
vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā
parauga kvalitātei.
6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0
ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram,
Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai
Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna
papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti.
Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes
un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu
otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna
suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas
barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots
analīzes veikšanai.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN
STABILITĀTE
Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º
C temperatūrā.
Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai
inkubatora (37°C) temperatūrai.
Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai.
Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz
derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu
marķējuma.
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas
ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā
saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs
duļķainums).
ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā,
lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas.
Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna
piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām,
rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas.
Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai
nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai.
BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj
šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar
viņu norīkojumu.
O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas
de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido
covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que
foi filtrado através de membrana e processado em
condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade
(SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios
com resultados negativos pelo teste de pirogénios
no coelho.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL
P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S
CONCENTRAÇÕES (50% E 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de
recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de
100mL)
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente
de camada de gradiente superior e inferior está pronta
para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS
GERAIS”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK
Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em
protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições.
A. Material sugerido:
ISolate - Solução Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275)
5,6mL para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO
STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo.
(Não são necessárias mais diluições. A solução
stock está a 90%).
b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
(Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da
“CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente
5 amostras de sémen)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições
em gradientes de densidade; formulado num tampão
isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído.
O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50%
e 90% de acordo com este folheto informativo de produto.
Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a
concentrações diferentes, os quais devem ser previamente
avaliados para a sua eficácia.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
Nota: Os valores 50% e 90% não representam
uma conc
tração real. Os valores 50% e 90% são
concentrações
relativas baseadas numa nomenclatura anterior
que
definia uma solução 1:9 de Percoll® como
uma solução
de trabalho isotónica a 100%.
PROCEDIMENTOS GERAIS
O protocolo que aqui se descreve é um procedimento
geral para separar do sémen a fracção móvel dos
espermatozoides através de um gradiente. O volume e
a concentração podem-se modificar para ajustar-se às
preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente,
sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas).
1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a
37ºC.
2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL
de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de
centrífuga cónico, estéril e descartável.
3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume
igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para
a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta
da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR”
tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente
a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos
em redor da circunferência do tubo subindo à medida
que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito
sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril.
ČESKY
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
PORTUGUÊS
Descrição do Produto
O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades
concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide
do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas
camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares
como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x
g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer
através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES
E INFERIORES”, ou directamente removendo o
sedimento e transferindo-o para um novo tubo de
centrífuga estéril.
*
Nota: a qualidade da amostra de
espermatozóides deve ser avaliada e tomada
em consideração para determinar o tempo e
a velocidade de centrifugação adequadas.
Estes parâmetros devem ajustar-se conforme
a qualidade individual da amostra para
optimizar o processo.
6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0
mL de meio de lavagem adequado como o Meio de
Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico.
Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir
este passo para numa segunda lavagem. Descartar o
sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando
um volume adequado de meio. A amostra está pronta
para análise.
Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos,
o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos
padrão e protocolos que foram especificamente
desenvolvidos e optimizados para a sua instituição.
I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E
ESTABILIDADE
Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC
e 8ºC.
Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora
(37ºC) antes de utilizar.
Não congele ou exponha a temperaturas altas.
O ISolate é estável até à data de expiração indicada no
rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo
com as instruções recomendadas.
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados
em procedimentos aos quais se destina.
O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este
produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com
evidências de conter partículas ou contaminação (turvação
não homogénea).
Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente
fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2
para evitar alterações de pH.
Este meio não contém conservantes, antibióticos nem
suplementos proteicos. Para evitar contaminações,
manipule o produto em condições de esterilidade.
E m caso de alteração do meio, não o
utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o
ao fabricante para que seja substituído.
CUIDADO: As leis federais dos EUA,
restringem a venda deste dispositivo, apenas
a médicos ou por sua prescrição.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας
σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος
του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα
κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές
μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά
αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που
προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα.
Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη,
ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από
μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με
ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο
διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate
έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα
από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%)
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate
• Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή
100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο
κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση.
Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του
φυλλαδίου του προϊόντος.
Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION
90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία
ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση.
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Κατάλογος #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας
χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
Πάνω και κάτω στρώμα.
1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου
99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK
SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν
χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK
SOLUTION είναι 90%)
β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml
Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος,
επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα
σπέρματος.)
Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE
Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω
διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε
ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την
πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate®
CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το
φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε
εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις
με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να
αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα.
A.
Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate® Συμπύκνωμα
• Irvine Scientific Κατάλογος #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω
Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται
κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.)
Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν
αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση.
Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις
βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία
που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με
100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα.
ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό
κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου
από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση
μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται
στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση,
κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων).
1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία
δωματίου ή στους 37°C.
2. Χρησιμοποιώντας
αποστειρωμένη
πιπέτα,
μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ»
σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο
σωλήνα.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω
από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή
της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι
του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε
προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας
την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του
σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο
του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται.
4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου
σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας
νέα αποστειρωμένη πιπέτα.
5.
Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά
σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το
συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ»
και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση
του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου.
*Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος
σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και
να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό
της σωστής ταχύτητας και του χρόνου
φυγοκέντρησης.
Θα
πρέπει
να
προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή
ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της
διαδικασίας.
6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης
όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου
9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126)
με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το
απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε
φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε
το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για
δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και
αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας
κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα
είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC.
Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα
(37°C) πριν τη χρήση.
Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες.
Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των
φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι
φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε
χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη
σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία
θολότητας).
Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν
χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται
οι αλλαγές pH.
Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά
ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε
προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές
τεχνικές.
Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε.
Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον
Παρασκευαστή για αντικατάσταση.
ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.)
νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε
πώληση από ή κατά εντολή γιατρού.
POPIS VÝROBKU
ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení
motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je
to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje
buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé
krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje
většinou motilní spermie.
ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze
křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a
stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v
pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace
(SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním
na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na
laboratorním králíkovi.
NÁVOD K POUŽITÍ
Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE
DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K
OKAMŽITÉMU POUŽITÍ
A. Doporučený materiál:
ISolate
• Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml
nebo 100 ml ampulek )
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka
gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití.
Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou
OBECNÁ METODA.
Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK
Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové
proceduře nebo na další ředění.
A. Doporučený materiál:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific Katalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
Horní vrstva a spodní vrstva.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE
(kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid
(kat. č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte
3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK
SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se
zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK
SOLUTION je 90%)
b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.)
Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT
Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na
gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má
přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového
letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si
může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž
efektivnost by měla být ohodnocena.
A. Doporučený materiál:
Koncentrát ISolate®
• Irvine Scientific Katalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č.
90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat.
č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku
nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml
Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně
5 vzorků sperma.)
Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují
skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní
koncentrace založené na dřívější terminologii,
která definovala poměr 1:9 ředění přípravku
Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému
isotonickému roztoku.
OBECNÁ METODA
Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní
separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace
mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé
laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno,
trojvrstevní gradient).
1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu
nebo na 37 °C.
2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ
VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky
na jedno použití.
3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem
„HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“.
Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY”
na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte
„HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem
obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se
hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat.
4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu
do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety.
5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“
a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a
přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky.
*Poznámka: Kvalita vzorku spermií by
měla být zhodnocena a brána v úvahu při
určování správné rychlosti odstředivky a
doby odstředění. Měly by být upraveny podle
kvality individuálních vzorků pro optimalizaci
procedury.
6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml
mycího média jako např. Sperm Washing Medium
(IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č.
90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte
separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10
minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro
druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte
granuli pomocí vhodného objemového množství
náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST
Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC.
Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37
°C) před použitím.
Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám.
Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační
doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve.
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek
normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které
jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot
(nerovnoměrně zakalené).
ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno
v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH .
Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky,
antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se
problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické
metody.
V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte
nebo zašlete výrobci na výměnu.
POZOR: Federální zákony USA omezují
prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo
na jeho předpis.
ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet
kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF.
Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet
testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit.
BRUGSANVISNING
Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID
SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 %
og 90 %)
A. Anbefalede materialer:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml,
50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert
hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar
til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE
på indlægssedlen.
Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION
Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding.
A. Anbefalede materialer:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og
pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr.
90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for
at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt
centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt
at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %)
b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på
indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste
lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5
sædprøver).
6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et
passende vaskemedium såsom Sperm Washing
Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS
katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender
de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200
xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag
dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten
og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet
volumen af passende medium. Prøven er nu klar til
analysering.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG
STABILITET
Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC.
Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37
°C) inden brug.
Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer.
ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens
etiket, når det opbevares som anvist.
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette
produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der
indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret
(uensartede uklarheder).
Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i
en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien.
Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler,
antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med
kontamination ved at bruge aseptiske teknikker.
Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse.
Bortskaf eller returner til producenten med
henblik på udskiftning.
FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA)
må dette produkt kun sælges af eller efter
ordination af en læge.
TUOTTEEN KUVAUS
ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään
erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä.
Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti
vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä,
valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu
näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä.
ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty
kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu
kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3.
ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi
kanin pyrogeenitestissä.
KÄYTTÖOHJEET
L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S
KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA
PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %)
A. Suositellut materiaalit:
ISolates
• Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai
100 ml:n pullopakkaus)
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai
alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry
tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET.
Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION
90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään
yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa.
A. Suositellut materiaalit:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific luettelonro 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %.
a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja
pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin
sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia
ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista).
b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN
PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml
alempaa kerrosta riittää noin 5:n
siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Katalognr. 99306 – CONCENTRATE
Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i
densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og
svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne
indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert
laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige
koncentrationer, som bør evalueres med henblik på
effektivitet.
Luettelonro 99306 - CONCENTRATE
Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus
tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja
vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä.
ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen
mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin
laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla,
joiden tehokkuus tulee arvioida.
A. Anbefalede materialer:
ISolate® koncentrat
• Irvine Scientific katalognr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
A. Suositellut materiaalit:
ISolate® -tiiviste
• Irvine Scientific luettelonro 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det
øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan
behandle ca. 5 sædprøver).
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306)
ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja
pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen
b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET.
(HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta
riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver
ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er
relative koncentrationer baseret på det tidligere
nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af
Percoll® som svarende til en 100 %
isotonisk arbejdsopløsning.
GENEREL PROCEDURE
Følgende er en generel procedure for en gradientseparation
af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og
koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt
laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret
sæd, gradient i tre lag).
1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller
37 °C.
2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det
“NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til
engangsbrug.
3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende
volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE
LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det
“UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen.
Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre
pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod
rørets inderside efterhånden, som niveauet af det
“ØVERSTE LAG” stiger.
4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på
“ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette.
5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.*
Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at
aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk,
eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem
til et nyt, sterilt centrifugerør.
Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal
evalueres og tages i betragtning, når den
korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal
fastslås. Disse skal justeres i henhold til den
enkelte sædprøves kvalitet med henblik på
optimering af proceduren.
LATVISKI
SUOMI
DANSK
PRODUKTBESKRIVELSE
ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet
til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som
et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære
kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse
restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt
motile sædceller.
Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista
pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat
suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen,
jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100
%:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi.
YLEISET TOIMENPITEET
Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen
siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla.
Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin
laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti,
kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti).
1.
Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa
huoneenlämpötila tai 37 °C.
2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA
KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen
sentrifugiputkeen.
3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ
KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä
tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN
KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä
“YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä
ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN
KERROKSEN” taso nousee.
4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä
“YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä
pipetillä.
5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.*
Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se
“YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA”
tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen
steriiliin sentrifugiputkeen.
*Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida
ja ottaa huomioon niiden linkoamisen
tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa
määritettäessä. Näitä tulee säädellä
yksittäisen näytteen laadun mukaisesti
toimenpiteen optimoimiseksi.
6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml
sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium
(IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro
90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti
uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista
pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä
pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen
asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa.
Näyte on nyt valmis analysoitavaksi.
PRODUKTA APRAKSTS
ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas
paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai
no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā
efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas,
piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem,
baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām.
Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus
spermatozoīdus.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta
koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta
ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF.
Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate
ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz
pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem.
SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI
Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC.
Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan
(37 °C) ennen käyttöä.
Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille.
ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin
merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti
säilytettynä.
VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle
normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy
hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta).
ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään
hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi.
Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä
proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään
aseptisella käsittelytekniikalla.
Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä
sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle
vaihdettavaksi.
VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki
rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin
toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS
KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS
KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%)
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate
• Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai
100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
• Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons
ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai.
Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS.
Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION
90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai
atšķaidīšanai turpmāk.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga
Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas
stobriņā.
b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal
Fluid (kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā
centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni
(Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama
– STOCK SOLUTION ir 90%).
b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās
VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar
10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa
šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5
spermas paraugus.)
Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE
Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai
atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks
buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll®
blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate®
CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā.
Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju
gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate® koncentrāts
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet
3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa
un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt
apmēram 5 spermas paraugus.)
Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda
faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir
relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz
iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll®
atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam,
izotoniskam šķīdumam.
VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA
Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai
gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu
no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt,
lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem
mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu,
kā trīsslāņu gradientu).
1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra
ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C.
2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml
“APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas,
konisku centrifūgas stobriņu.
3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu
daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ
SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties
„APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi
izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot
pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas
kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim
paaugstinoties.
4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet
1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”.
5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g
paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost
„AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot
lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu.
*Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte
jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo
centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai
procedūru optimizētu, šos parametrus
vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā
parauga kvalitātei.
6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0
ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram,
Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai
Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna
papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti.
Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes
un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu
otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna
suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas
barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots
analīzes veikšanai.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN
STABILITĀTE
Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º
C temperatūrā.
Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai
inkubatora (37°C) temperatūrai.
Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai.
Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz
derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu
marķējuma.
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas
ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā
saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs
duļķainums).
ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā,
lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas.
Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna
piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām,
rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas.
Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai
nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai.
BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj
šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar
viņu norīkojumu.
O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas
de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido
covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que
foi filtrado através de membrana e processado em
condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade
(SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios
com resultados negativos pelo teste de pirogénios
no coelho.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL
P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S
CONCENTRAÇÕES (50% E 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de
recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de
100mL)
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente
de camada de gradiente superior e inferior está pronta
para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS
GERAIS”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK
Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em
protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições.
A. Material sugerido:
ISolate - Solução Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275)
5,6mL para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO
STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo.
(Não são necessárias mais diluições. A solução
stock está a 90%).
b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
(Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da
“CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente
5 amostras de sémen)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições
em gradientes de densidade; formulado num tampão
isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído.
O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50%
e 90% de acordo com este folheto informativo de produto.
Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a
concentrações diferentes, os quais devem ser previamente
avaliados para a sua eficácia.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
Nota: Os valores 50% e 90% não representam
uma conc
tração real. Os valores 50% e 90% são
concentrações
relativas baseadas numa nomenclatura anterior
que
definia uma solução 1:9 de Percoll® como
uma solução
de trabalho isotónica a 100%.
PROCEDIMENTOS GERAIS
O protocolo que aqui se descreve é um procedimento
geral para separar do sémen a fracção móvel dos
espermatozoides através de um gradiente. O volume e
a concentração podem-se modificar para ajustar-se às
preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente,
sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas).
1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a
37ºC.
2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL
de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de
centrífuga cónico, estéril e descartável.
3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume
igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para
a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta
da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR”
tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente
a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos
em redor da circunferência do tubo subindo à medida
que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito
sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril.
ČESKY
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
PORTUGUÊS
Descrição do Produto
O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades
concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide
do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas
camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares
como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x
g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer
através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES
E INFERIORES”, ou directamente removendo o
sedimento e transferindo-o para um novo tubo de
centrífuga estéril.
*
Nota: a qualidade da amostra de
espermatozóides deve ser avaliada e tomada
em consideração para determinar o tempo e
a velocidade de centrifugação adequadas.
Estes parâmetros devem ajustar-se conforme
a qualidade individual da amostra para
optimizar o processo.
6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0
mL de meio de lavagem adequado como o Meio de
Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico.
Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir
este passo para numa segunda lavagem. Descartar o
sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando
um volume adequado de meio. A amostra está pronta
para análise.
Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos,
o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos
padrão e protocolos que foram especificamente
desenvolvidos e optimizados para a sua instituição.
I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E
ESTABILIDADE
Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC
e 8ºC.
Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora
(37ºC) antes de utilizar.
Não congele ou exponha a temperaturas altas.
O ISolate é estável até à data de expiração indicada no
rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo
com as instruções recomendadas.
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados
em procedimentos aos quais se destina.
O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este
produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com
evidências de conter partículas ou contaminação (turvação
não homogénea).
Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente
fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2
para evitar alterações de pH.
Este meio não contém conservantes, antibióticos nem
suplementos proteicos. Para evitar contaminações,
manipule o produto em condições de esterilidade.
E m caso de alteração do meio, não o
utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o
ao fabricante para que seja substituído.
CUIDADO: As leis federais dos EUA,
restringem a venda deste dispositivo, apenas
a médicos ou por sua prescrição.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας
σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος
του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα
κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές
μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά
αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που
προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα.
Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη,
ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από
μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με
ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο
διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate
έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα
από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%)
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate
• Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή
100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο
κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση.
Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του
φυλλαδίου του προϊόντος.
Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION
90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία
ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση.
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Κατάλογος #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας
χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
Πάνω και κάτω στρώμα.
1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου
99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK
SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν
χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK
SOLUTION είναι 90%)
β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml
Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος,
επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα
σπέρματος.)
Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE
Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω
διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε
ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την
πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate®
CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το
φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε
εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις
με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να
αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα.
A.
Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate® Συμπύκνωμα
• Irvine Scientific Κατάλογος #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω
Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται
κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.)
Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν
αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση.
Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις
βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία
που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με
100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα.
ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό
κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου
από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση
μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται
στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση,
κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων).
1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία
δωματίου ή στους 37°C.
2. Χρησιμοποιώντας
αποστειρωμένη
πιπέτα,
μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ»
σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο
σωλήνα.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω
από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή
της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι
του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε
προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας
την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του
σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο
του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται.
4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου
σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας
νέα αποστειρωμένη πιπέτα.
5.
Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά
σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το
συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ»
και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση
του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου.
*Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος
σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και
να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό
της σωστής ταχύτητας και του χρόνου
φυγοκέντρησης.
Θα
πρέπει
να
προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή
ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της
διαδικασίας.
6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης
όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου
9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126)
με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το
απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε
φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε
το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για
δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και
αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας
κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα
είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC.
Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα
(37°C) πριν τη χρήση.
Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες.
Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των
φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι
φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε
χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη
σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία
θολότητας).
Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν
χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται
οι αλλαγές pH.
Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά
ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε
προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές
τεχνικές.
Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε.
Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον
Παρασκευαστή για αντικατάσταση.
ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.)
νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε
πώληση από ή κατά εντολή γιατρού.
POPIS VÝROBKU
ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení
motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je
to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje
buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé
krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje
většinou motilní spermie.
ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze
křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a
stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v
pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace
(SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním
na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na
laboratorním králíkovi.
NÁVOD K POUŽITÍ
Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE
DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K
OKAMŽITÉMU POUŽITÍ
A. Doporučený materiál:
ISolate
• Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml
nebo 100 ml ampulek )
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka
gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití.
Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou
OBECNÁ METODA.
Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK
Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové
proceduře nebo na další ředění.
A. Doporučený materiál:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific Katalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
Horní vrstva a spodní vrstva.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE
(kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid
(kat. č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte
3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK
SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se
zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK
SOLUTION je 90%)
b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.)
Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT
Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na
gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má
přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového
letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si
může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž
efektivnost by měla být ohodnocena.
A. Doporučený materiál:
Koncentrát ISolate®
• Irvine Scientific Katalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č.
90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat.
č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku
nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml
Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně
5 vzorků sperma.)
Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují
skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní
koncentrace založené na dřívější terminologii,
která definovala poměr 1:9 ředění přípravku
Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému
isotonickému roztoku.
OBECNÁ METODA
Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní
separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace
mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé
laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno,
trojvrstevní gradient).
1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu
nebo na 37 °C.
2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ
VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky
na jedno použití.
3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem
„HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“.
Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY”
na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte
„HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem
obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se
hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat.
4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu
do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety.
5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“
a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a
přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky.
*Poznámka: Kvalita vzorku spermií by
měla být zhodnocena a brána v úvahu při
určování správné rychlosti odstředivky a
doby odstředění. Měly by být upraveny podle
kvality individuálních vzorků pro optimalizaci
procedury.
6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml
mycího média jako např. Sperm Washing Medium
(IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č.
90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte
separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10
minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro
druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte
granuli pomocí vhodného objemového množství
náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST
Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC.
Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37
°C) před použitím.
Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám.
Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační
doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve.
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek
normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které
jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot
(nerovnoměrně zakalené).
ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno
v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH .
Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky,
antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se
problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické
metody.
V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte
nebo zašlete výrobci na výměnu.
POZOR: Federální zákony USA omezují
prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo
na jeho předpis.
ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet
kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF.
Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet
testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit.
BRUGSANVISNING
Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID
SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 %
og 90 %)
A. Anbefalede materialer:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml,
50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert
hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar
til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE
på indlægssedlen.
Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION
Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding.
A. Anbefalede materialer:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og
pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr.
90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for
at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt
centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt
at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %)
b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på
indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste
lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5
sædprøver).
6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et
passende vaskemedium såsom Sperm Washing
Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS
katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender
de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200
xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag
dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten
og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet
volumen af passende medium. Prøven er nu klar til
analysering.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG
STABILITET
Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC.
Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37
°C) inden brug.
Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer.
ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens
etiket, når det opbevares som anvist.
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette
produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der
indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret
(uensartede uklarheder).
Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i
en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien.
Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler,
antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med
kontamination ved at bruge aseptiske teknikker.
Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse.
Bortskaf eller returner til producenten med
henblik på udskiftning.
FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA)
må dette produkt kun sælges af eller efter
ordination af en læge.
TUOTTEEN KUVAUS
ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään
erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä.
Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti
vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä,
valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu
näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä.
ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty
kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu
kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3.
ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi
kanin pyrogeenitestissä.
KÄYTTÖOHJEET
L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S
KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA
PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %)
A. Suositellut materiaalit:
ISolates
• Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai
100 ml:n pullopakkaus)
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai
alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry
tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET.
Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION
90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään
yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa.
A. Suositellut materiaalit:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific luettelonro 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %.
a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja
pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin
sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia
ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista).
b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN
PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml
alempaa kerrosta riittää noin 5:n
siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Katalognr. 99306 – CONCENTRATE
Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i
densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og
svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne
indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert
laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige
koncentrationer, som bør evalueres med henblik på
effektivitet.
Luettelonro 99306 - CONCENTRATE
Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus
tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja
vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä.
ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen
mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin
laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla,
joiden tehokkuus tulee arvioida.
A. Anbefalede materialer:
ISolate® koncentrat
• Irvine Scientific katalognr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
A. Suositellut materiaalit:
ISolate® -tiiviste
• Irvine Scientific luettelonro 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det
øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan
behandle ca. 5 sædprøver).
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306)
ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja
pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen
b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET.
(HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta
riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver
ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er
relative koncentrationer baseret på det tidligere
nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af
Percoll® som svarende til en 100 %
isotonisk arbejdsopløsning.
GENEREL PROCEDURE
Følgende er en generel procedure for en gradientseparation
af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og
koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt
laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret
sæd, gradient i tre lag).
1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller
37 °C.
2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det
“NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til
engangsbrug.
3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende
volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE
LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det
“UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen.
Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre
pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod
rørets inderside efterhånden, som niveauet af det
“ØVERSTE LAG” stiger.
4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på
“ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette.
5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.*
Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at
aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk,
eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem
til et nyt, sterilt centrifugerør.
Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal
evalueres og tages i betragtning, når den
korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal
fastslås. Disse skal justeres i henhold til den
enkelte sædprøves kvalitet med henblik på
optimering af proceduren.
LATVISKI
SUOMI
DANSK
PRODUKTBESKRIVELSE
ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet
til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som
et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære
kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse
restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt
motile sædceller.
Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista
pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat
suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen,
jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100
%:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi.
YLEISET TOIMENPITEET
Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen
siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla.
Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin
laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti,
kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti).
1.
Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa
huoneenlämpötila tai 37 °C.
2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA
KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen
sentrifugiputkeen.
3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ
KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä
tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN
KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä
“YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä
ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN
KERROKSEN” taso nousee.
4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä
“YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä
pipetillä.
5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.*
Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se
“YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA”
tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen
steriiliin sentrifugiputkeen.
*Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida
ja ottaa huomioon niiden linkoamisen
tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa
määritettäessä. Näitä tulee säädellä
yksittäisen näytteen laadun mukaisesti
toimenpiteen optimoimiseksi.
6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml
sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium
(IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro
90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti
uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista
pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä
pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen
asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa.
Näyte on nyt valmis analysoitavaksi.
PRODUKTA APRAKSTS
ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas
paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai
no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā
efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas,
piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem,
baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām.
Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus
spermatozoīdus.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta
koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta
ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF.
Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate
ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz
pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem.
SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI
Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC.
Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan
(37 °C) ennen käyttöä.
Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille.
ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin
merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti
säilytettynä.
VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle
normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy
hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta).
ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään
hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi.
Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä
proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään
aseptisella käsittelytekniikalla.
Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä
sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle
vaihdettavaksi.
VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki
rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin
toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS
KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS
KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%)
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate
• Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai
100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
• Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons
ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai.
Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS.
Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION
90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai
atšķaidīšanai turpmāk.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga
Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas
stobriņā.
b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal
Fluid (kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā
centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni
(Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama
– STOCK SOLUTION ir 90%).
b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās
VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar
10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa
šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5
spermas paraugus.)
Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE
Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai
atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks
buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll®
blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate®
CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā.
Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju
gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate® koncentrāts
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet
3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa
un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt
apmēram 5 spermas paraugus.)
Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda
faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir
relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz
iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll®
atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam,
izotoniskam šķīdumam.
VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA
Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai
gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu
no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt,
lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem
mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu,
kā trīsslāņu gradientu).
1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra
ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C.
2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml
“APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas,
konisku centrifūgas stobriņu.
3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu
daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ
SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties
„APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi
izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot
pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas
kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim
paaugstinoties.
4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet
1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”.
5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g
paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost
„AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot
lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu.
*Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte
jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo
centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai
procedūru optimizētu, šos parametrus
vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā
parauga kvalitātei.
6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0
ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram,
Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai
Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna
papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti.
Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes
un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu
otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna
suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas
barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots
analīzes veikšanai.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN
STABILITĀTE
Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º
C temperatūrā.
Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai
inkubatora (37°C) temperatūrai.
Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai.
Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz
derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu
marķējuma.
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas
ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā
saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs
duļķainums).
ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā,
lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas.
Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna
piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām,
rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas.
Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai
nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai.
BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj
šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar
viņu norīkojumu.
O ISolate é uma suspensão coloidal de partículas
de sílica estabilizada com silano hidrofílico unido
covalentemente em HTF tamponado com HEPES, que
foi filtrado através de membrana e processado em
condições estéreis. O nivel de garantia de esterilidade
(SAL) é de 10-3. O ISolate foi testado para pirogénios
com resultados negativos pelo teste de pirogénios
no coelho.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Nº de Catálogo 99264 – SÍLICA COLOIDAL
P R O N TA PA R A U T I L I Z A R A D U A S
CONCENTRAÇÕES (50% E 90%)
A. Material sugerido:
ISolate
• Irvine Scientific, Nº catálogo 99264 (kit de
recipientes de6mL, 50mL ou kit de recipientes de
100mL)
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº catálogo 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº catálogo IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Não são necessárias diluições preliminares. Cada recipiente
de camada de gradiente superior e inferior está pronta
para utilizar. Continue com a secção “PROCEDIMENTOS
GERAIS”
Nº de Catálogo 99275 – SOLUÇÃO STOCK
Meio de gradiente de densidade a 90% para ser utilizado em
protocolos de uma só etapa ou para posteriores diluições.
A. Material sugerido:
ISolate - Solução Stock
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99275
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar da SOLUÇÃO STOCK (Nº Cat. 99275)
5,6mL para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 4,4 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Inserir uma alíquota de 10mL da SOLUÇÃO
STOCK num tubo estéril de centrífuga e tapá-lo.
(Não são necessárias mais diluições. A solução
stock está a 90%).
b. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continuar na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
(Nota: 10 ml da “CAMADA SUPERIOR” e 10 ml da
“CAMADA INFERIOR” processam aproximadamente
5 amostras de sémen)
Nº de Catálogo 99306 – CONCENTRADO
Concentrado de sílica coloidal para posteriores diluições
em gradientes de densidade; formulado num tampão
isotónico, aproxima-se da densidade do Percoll não diluído.
O ISolate Concentrado foi avaliado em gradientes de 50%
e 90% de acordo com este folheto informativo de produto.
Cada laboratório pode escolher preparar os gradientes a
concentrações diferentes, os quais devem ser previamente
avaliados para a sua eficácia.
A. Material sugerido:
ISolate - Concentrado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 99306
Meio HTF modificado
• Irvine Scientific, Nº Cat. 90126
Meio de lavagem dos espermatozóides
• Irvine Scientific, Nº Cat. 9983
Tubos de centrífuga cónicos estéreis e descartáveis
• Irvine Scientific, Nº Cat. IS-325
Pipetas Pasteur, estéreis
Centrífuga
Incubadora a 37ºC
B. Preparação do gradiente:
Para levar a cabo uma separação de espermatozóides
por gradiente necessitam-se de duas soluções: a camada
superior e a camada inferior.
1. Solução da camada superior: 50%
a. Pipetar 4,5 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 5,5 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA SUPERIOR”.
2. Solução da camada inferior: 90%
a. Pipetar 8,1 mL do CONCENTRADO (Nº Cat. 99306)
para um tubo de centrífuga estéril.
b. Adicionar 1,9 mL de HTF modificado (Nº Cat.
90126)
c. Tapar o tubo e inverter suavemente 3 ou 4 vezes
para permitir uma mistura completa.
d. Etiquetar o tubo como “CAMADA INFERIOR”.
3. Continue na secção de “PROCEDIMENTOS GERAIS”.
Nota: Os valores 50% e 90% não representam
uma conc
tração real. Os valores 50% e 90% são
concentrações
relativas baseadas numa nomenclatura anterior
que
definia uma solução 1:9 de Percoll® como
uma solução
de trabalho isotónica a 100%.
PROCEDIMENTOS GERAIS
O protocolo que aqui se descreve é um procedimento
geral para separar do sémen a fracção móvel dos
espermatozoides através de um gradiente. O volume e
a concentração podem-se modificar para ajustar-se às
preferências de cada laboratório (p.ex. mini-gradiente,
sémen crioconservado, gradiente de 3 camadas).
1. Coloque todos os meios à temperatura ambiente ou a
37ºC.
2. Utilizando uma pipeta estéril, transferir 1,5 – 2,0 mL
de meio da “CAMADA INFERIOR” para um tubo de
centrífuga cónico, estéril e descartável.
3. Utilizando outra pipeta estéril, transferir um volume
igual ao do passo 1 de “CAMADA SUPERIOR” para
a “CAMADA INFERIOR”. Para isso, colocar a ponta
da pipeta na parte superior da “CAMADA INFERIOR”
tocando na parede do tubo. Distribuir cuidadosamente
a “CAMADA SUPERIOR” movendo a pipeta em círculos
em redor da circunferência do tubo subindo à medida
que aumenta o nível da “CAMADA SUPERIOR”.
4. Coloque suavemente 1,5 – 2,0 mL de sémen liquefeito
sobre a “CAMADA SUPERIOR” com outra pipeta estéril.
ČESKY
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
PORTUGUÊS
Descrição do Produto
O ISolate ® é um meio de gradiente de densidades
concebido para separar a fracção móvel do espermatozóide
do fluído seminal. Como um sistema de gradiente de duas
camadas, reduz eficazmente os contaminantes celulares
como espermatozóides mortos, leucócitos e outros restos.
5. Centrifugar durante 10-20 minutos a 200-300 x
g*. Cuidadosamente, exponha o sedimento quer
através da aspiração das “CAMADAS SUPERIORES
E INFERIORES”, ou directamente removendo o
sedimento e transferindo-o para um novo tubo de
centrífuga estéril.
*
Nota: a qualidade da amostra de
espermatozóides deve ser avaliada e tomada
em consideração para determinar o tempo e
a velocidade de centrifugação adequadas.
Estes parâmetros devem ajustar-se conforme
a qualidade individual da amostra para
optimizar o processo.
6. Utilizando uma nova pipeta estéril, adicionar 2.0 – 3.0
mL de meio de lavagem adequado como o Meio de
Lavagem de Espermatozóides (IS Nº Cat 9983) ou HTF
modificado (IS Nº Cat 90126) com suplemento proteico.
Ressuspender o sedimento. Centrifugar (aprox. 200xg)
8-10 minutos e descartar o sobrenadante. Repetir
este passo para numa segunda lavagem. Descartar o
sobrenadante e ressuspender o sedimento utilizando
um volume adequado de meio. A amostra está pronta
para análise.
Para detalhes adicionais sobre a utilização destes produtos,
o laboratório deve consultar os seus próprios procedimentos
padrão e protocolos que foram especificamente
desenvolvidos e optimizados para a sua instituição.
I N S T R U Ç Õ E S D E C O N S E R VA Ç Ã O E
ESTABILIDADE
Conserve os recipientes fechados refrigerados entre 2ºC
e 8ºC.
Aqueça à temperatura ambiente ou numa incubadora
(37ºC) antes de utilizar.
Não congele ou exponha a temperaturas altas.
O ISolate é estável até à data de expiração indicada no
rótulo do recipiente, sempre que seja conservado de acordo
com as instruções recomendadas.
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados
em procedimentos aos quais se destina.
O ISolate tem um aspecto opaco. Isto é normal para este
produto. Não utilize nenhum recipiente de meio com
evidências de conter partículas ou contaminação (turvação
não homogénea).
Os recipientes de ISolate devem estar hermeticamente
fechados quando se utilizar uma incubadora de CO2
para evitar alterações de pH.
Este meio não contém conservantes, antibióticos nem
suplementos proteicos. Para evitar contaminações,
manipule o produto em condições de esterilidade.
E m caso de alteração do meio, não o
utilize. Por favor, descarte-o o devolva-o
ao fabricante para que seja substituído.
CUIDADO: As leis federais dos EUA,
restringem a venda deste dispositivo, apenas
a médicos ou por sua prescrição.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το ISolate® είναι ένα μέσο κλίσης πυκνότητας
σχεδιασμένο για διαχωρισμό του κινητικού κλάσματος
του σπέρματος από το σπερματικό υγρό. Ως σύστημα
κλίσης δύο στρωμάτων, μειώνει δραστικά τις κυτταρικές
μολυσματικές ουσίες, όπως το νεκρό σπέρμα, τα λευκά
αιμοσφαίρια και διάφορα υπολείμματα.Το δείγμα που
προκύπτει περιέχει κυρίως κινητικό σπέρμα.
Το ISolate είναι ένα φιλτραρισμένο με μεμβράνη,
ασηπτικά επεξεργασμένο κολλοειδές αιώρημα από
μόρια πυρίτιας σταθεροποιημένα με υδρόφιλο σιλάνιο με
ισοσθενή δεσμό σε HEPES-ρυθμιστικό HTF. Το επίπεδο
διασφάλισης αποστείρωσης (SAL) είναι 10-3. Το ISolate
έχει ελεγχθεί και αποδειχθεί αρνητικό για πυρετογόνα
από την εξέταση πυρετογόνων σε λαγούς.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
Αρ. Καταλόγου 99264 – ΕΤΟΙΜΗ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΚΟΛΛΟΕΙΔΗΣ ΠΥΡΙΤΙΑ ΣΕ ΔΥΟ
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΕΙΣ (50% και 90%)
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate
• Irvine Scientific Κατάλογος #99264 (6ml, 50ml ή
100 ml κιτ φιαλιδίων) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Δεν χρειάζονται προκαταρκτικά διαλύματα. Κάθε φιαλίδιο
κλίσης άνω και κάτω στρώματος είναι έτοιμο για χρήση.
Προχωρήστε στο μέρος της ΓΕΝΙΚΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ του
φυλλαδίου του προϊόντος.
Αρ. Καταλόγου 99275 - STOCK SOLUTION
90% πυκνότητας μέσο κλίσης για χρήση σε διαδικασία
ενός βήματος ή για περαιτέρω διάλυση.
A. Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific Κατάλογος #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου μιας
χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
Πάνω και κάτω στρώμα.
1.) Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε STOCK SOLUTION (αρ. Καταλόγου
99275) και πιπεταρίστε 5.6 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 4.4 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Υποπολλαπλασιάστε 10 ml του STOCK
SOLUTION σε αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου και σφραγίστε το – (Δεν
χρειάζονται άλλες διαλύσεις - STOCK
SOLUTION είναι 90%)
β) Βάλτε ετικέτα στον σωλήνα ως «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml
Άνω Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος,
επεξεργάζονται κατά προσέγγιση 5 δείγματα
σπέρματος.)
Αρ. Καταλόγου 99306 - CONCENTRATE
Συμπύκνωμα κολλοειδούς πυρίτιας για περαιτέρω
διάλυση σε κλίσεις πυκνότητας. Σχηματίζεται σε
ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα και προσεγγίζει την
πυκνότητα μη αραιωμένου Percoll®. Το ISolate®
CONCENTRATE αξιολογήθηκε σύμφωνα με αυτό το
φυλλάδιο συσκευασίας σε κλίσεις 50% και 90% . Κάθε
εργαστήριο μπορεί να επιλέξει να δημιουργήσει κλίσεις
με διαφορετικές συγκεντρώσεις που θα πρέπει να
αξιολογηθούν για αποτελεσματικότητα.
A.
Προτεινόμενα Υλικά:
ISolate® Συμπύκνωμα
• Irvine Scientific Κατάλογος #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Κατάλογος #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Κατάλογος #9983
Αποστειρωμένοι, κωνικοί σωλήνες φυγόκεντρου
μιας χρήσης
• Irvine Scientific Κατάλογος #IS-325
Πιπέτες Παστέρ, αποστειρωμένες
Φυγόκεντρος
Επωαστήρας, 37°C
B. Προετοιμασία Κλίσης:
Χρειάζονται δύο διαλύματα για την μέθοδο διαχωρισμού
σπέρματος κλίσης: Ένα άνω και ένα κάτω στρώμα.
1. Διάλυμα Άνω Στρώματος - 50%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 4.5 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 5.5 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΑΝΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
2. Διάλυμα Κάτω Στρώματος - 90%:
α) Πάρτε CONCENTRATE (αρ. Καταλόγου
99306) και πιπεταρίστε 8.1 ml σε
αποστειρωμένο σωλήνα φυγόκεντρου
β) Προσθέστε 1.9 ml από Modified Human
Tubal Fluid (αρ. Καταλόγου 90126)
γ) Κλείστε τον σωλήνα και αναποδογυρίστε το
απαλά 3-4 φορές για να επιτραπεί η πλήρης
ανάδευση
δ) Αναγράψτε στην ετικέτα του σωλήνα «ΚΑΤΩ
ΣΤΡΩΜΑ»
3. Συνεχίστε στο τμήμα ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ του
φυλλαδίου του προϊόντος. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: 10 ml Άνω
Στρώματος και 10 ml Κάτω Στρώματος, επεξεργάζονται
κατά προσέγγιση 5 δείγματα σπέρματος.)
Σημείωση: Οι όροι 50% και 90% δεν
αναφέρονται σε πραγματική συγκέντρωση.
Τα 50% και 90% είναι σχετικές συγκεντρώσεις
βασισμένες στην προηγούμενη ονοματολογία
που όριζε διάλυμα 1:9 από Percoll® ως ίσο με
100% λειτουργικό, ισοτονικό διάλυμα.
ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Παρακάτω ακολουθεί η γενική διαδικασία για διαχωρισμό
κλίσης δύο βημάτων του κινητού σπερματοζωαρίου
από το σπέρμα. Ο όγκος και η συγκέντρωση
μπορούν να τροποποιηθούν για να ανταποκρίνονται
στις εργαστηριακές προτιμήσεις (δηλ. μινι-κλίση,
κρυοσυντηρημένο σπέρμα, κλίση τριών στρωμάτων).
1. Φέρτε όλα τα εξαρτήματα των μέσων σε θερμοκρασία
δωματίου ή στους 37°C.
2. Χρησιμοποιώντας
αποστειρωμένη
πιπέτα,
μεταφέρετε 1.5 - 2.0 ml του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ»
σε αποστειρωμένο, μίας χρήσης, κωνικό φυγόκεντρο
σωλήνα.
3. Χρησιμοποιώντας μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
μεταφέρετε ίσο όγκο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» πάνω
από το «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑ». Αυτό γίνεται με επαφή
της επιφάνειας του «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» στο πλάι
του σωλήνα με την άκρη της πιπέτας. Διαχύστε
προσεκτικά το «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» στροβιλίζοντας
την άκρη της πιπέτας γύρω από την περιφέρεια του
σωλήνα με κινήσεις προς τα πάνω, καθώς το επίπεδο
του «ΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ανυψώνεται.
4. Τοποθετήστε απαλά 1.5 - 2.0 ml ρευστοποιημένου
σπέρματος στο «ΠΑΝΩ ΣΤΡΩΜΑ» χρησιμοποιώντας
νέα αποστειρωμένη πιπέτα.
5.
Τοποθετήστε για φυγοκέντρηση για 10-20 λεπτά
σε περίπου 200 - 300xg.* Εκθέστε προσεκτικά το
συσσωμάτωμα είτε με αναρρόφηση του «ΑΝΩ»
και «ΚΑΤΩ ΣΤΡΩΜΑΤΟΣ» ή με άμεση αφαίρεση
του και μεταφορά σε νέο αποστειρωμένο σωλήνα
φυγόκεντρου.
*Σημείωση: Η ποιότητα του δείγματος
σπέρματος θα πρέπει να αξιολογείται και
να λαμβάνεται υπόψη στον καθορισμό
της σωστής ταχύτητας και του χρόνου
φυγοκέντρησης.
Θα
πρέπει
να
προσαρμοστούν σύμφωνα με την ξεχωριστή
ποιότητα δείγματος για βελτιστοποίηση της
διαδικασίας.
6. Χρησιμοποιώντας νέα αποστειρωμένη πιπέτα,
προσθέστε 2.0 - 3.0 ml κατάλληλου μέσου έκπλυσης
όπως το Sperm Washing Medium (IS αρ. Καταλόγου
9983) ή Modified HTF (IS αρ. Καταλόγου 90126)
με συμπλήρωμα πρωτεϊνών. Αιωρείστε ξανά το
απομονωμένο συσσωμάτωμα. Υποβάλλετε σε
φυγοκέντρηση (~200xg) για 8 -10 λεπτά και αφαιρέστε
το υπερκείμενο υγρό. Επαναλάβετε αυτό το βήμα για
δεύτερη έκπλυση. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό και
αιωρείστε ξανά το συσσωμάτωμα χρησιμοποιώντας
κατάλληλο όγκο του κατάλληλου μέσου. Το δείγμα
είναι πλέον έτοιμο για ανάλυση.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε τα κλειστά δοχεία σε ψύξη στους 2º έως 8ºC.
Θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος ή επωαστήρα
(37°C) πριν τη χρήση.
Μην ψύχετε ή εκθέτετε σε υψηλές θερμοκρασίες.
Το ISolate παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία
λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες του κουτιού και των
φιαλών, όταν φυλάσσεται σύμφωνα με τις οδηγίες.
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
Το ISolate έχει αδιαφανή εμφάνιση. Αυτό είναι
φυσιολογικό για το συγκεκριμένο προϊόν. Μην κάνετε
χρήση φιαλιδίου μέσου που παρουσιάζει ύπαρξη
σωματιδίων ή μολυσματικών ουσιών (μη ενιαία
θολότητας).
Το ISolate πρέπει να είναι καλά κλειστό όταν
χρησιμοποιείται σε επωαστήρα CO2, για να αποφεύγονται
οι αλλαγές pH.
Το προϊόν δεν περιέχει συντηρητικά, αντιβιοτικά
ή συμπληρώματα πρωτεϊνών. Για να αποφύγετε
προβλήματα μόλυνσης, χρησιμοποιήστε ασηπτικές
τεχνικές.
Σε περίπτωση ζημιάς, μην χρησιμοποιείτε.
Παρακαλούμε απορρίψτε ή επιστρέψτε στον
Παρασκευαστή για αντικατάσταση.
ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ομοσπονδιακή (Η.Π.Α.)
νομοθεσία περιορίζει αυτή τη συσκευή σε
πώληση από ή κατά εντολή γιατρού.
POPIS VÝROBKU
ISolate® je médium gradientu hustoty zhotovené na oddělení
motilní frakce spermií ze semenné kapaliny. Protože je
to dvouvrstevný gradientní systém, efektivně snižuje
buňkovou kontaminaci jako např. odumřelé spermie, bílé
krevní buňky a jiné nečistoty. Výsledný vzorek obsahuje
většinou motilní spermie.
ISolate asepticky zpracovaná koloidní suspenze
křemíkových částic, filtrovaná přes membránu a
stabilizovaná kovalentně vázaným hydrofilním silanem v
pufrovaném HEPES HTF. Hladina zaručené sterilizace
(SAL) je 10-3. ISolate bylo testováno a shledáno negativním
na pyrogeny při pyrogenním testu provedeném na
laboratorním králíkovi.
NÁVOD K POUŽITÍ
Kat. č. 99264 – KOLOIDNÍ KŘEMÍK VE
DVOU KONCENTRACÍCH (50 % a 90 %) K
OKAMŽITÉMU POUŽITÍ
A. Doporučený materiál:
ISolate
• Irvine Scientific Katalog #99264 (sada 6ml, 50ml
nebo 100 ml ampulek )
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Žádné předběžné ředění není nutné. Každá ampulka
gradientu horní a spodní vrstvy je připravena na použití.
Pokračujte až po část příbalového letáku nazvanou
OBECNÁ METODA.
Kat. č. #99275 - ZÁSOBNÍ ROZTOK
Médium s 90% gradientem hustoty na použití v jednokrokové
proceduře nebo na další ředění.
A. Doporučený materiál:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific Katalog #99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
Horní vrstva a spodní vrstva.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a.) Napipetujte 5,6 ml koncentrátu CONCENTRATE
(kat. č. 99275) do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid
(kat. č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte
3-4krát, aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Nadávkujte alikvotní podíl 10 ml roztoku STOCK
SOLUTION do sterilní odstředivkové trubičky se
zátkou – (Dalšího ředění není třeba - STOCK
SOLUTION je 90%)
b) Označte trubičku “SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně 5 vzorků sperma.)
Kat. č. #99306 - KONCENTRÁT
Koncentrát koloidního křemíku pro další ředění na
gradienty hustoty; je formulován v izotonickém pufru a má
přibližnou hustotu neředěného přípravku Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE byl hodnocen podle tohoto příbalového
letáku při 50% a 90% gradientech. Každá laboratoř si
může zvolit vytvoření gradientů různých koncentrací, jejichž
efektivnost by měla být ohodnocena.
A. Doporučený materiál:
Koncentrát ISolate®
• Irvine Scientific Katalog #99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific Katalog #90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalog #9983
Sterilní kónické odstředivkové trubičky
• Irvine Scientific Katalog #IS-325
Sterilní pipety Pasteur
Odstředivka
Inkubátor, 37 °C
B. Příprava gradientu:
Jsou potřeba dva roztoky na provedení metody gradientní
separace spermií: horní vrstvy a spodní vrstvy.
1. Roztok horní vrstvy – 50 %:
a) Napipetujte 4,5 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid (kat. č.
90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „HORNÍ VRSTVA“
2. Roztok spodní vrstvy – 90 %:
a) Napipetujte 8,1 ml CONCENTRATE (kat. č. 99306)
do sterilní odstředivkové trubičky.
b) Přidejte 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid (kat.
č. 90126)
c) Zazátkujte zkumavku a opatrně ji převraťte 3-4krát,
aby došlo k celkovému promíchání.
d) Označte trubičku „SPODNÍ VRSTVA“
3. Pokračujte až po část příbalového letáku výrobku
nazvanou ZÁKLADNÍ POSTUP. (POZNÁMKA: 10 ml
Horní vrstvy a 10 ml Spodní vrstvy zpracuje přibližně
5 vzorků sperma.)
Poznámka: Hodnoty 50 % a 90 % nepředstavují
skutečné koncentrace. 5 0% a 90 % jsou relativní
koncentrace založené na dřívější terminologii,
která definovala poměr 1:9 ředění přípravku
Percoll ® jako rovnající se 100% účinnému
isotonickému roztoku.
OBECNÁ METODA
Následující je obecný postup na dvoukrokovou gradientní
separaci motilní spermie od spermatu. Objem a koncentrace
mohou být upraveny, aby splňovaly preference každé
laboratoře (např. mini-gradient, kryoprezervované semeno,
trojvrstevní gradient).
1. Vytemperujte všechny složky média na pokojovou teplotu
nebo na 37 °C.
2. Pomocí sterilní pipety převeďte 1,5 – 2,0 ml „SPODNÍ
VRSTVY“ do sterilní, kónické odstředivkové trubičky
na jedno použití.
3. Pomocí nové sterilní pipety převeďte stejný objem
„HORNÍ VRSTVY“ na horní část „SPODNÍ VRSTVY“.
Provádí se to dotykem povrchu „SPODNÍ VRSTVY”
na straně zkumavky hrotem pipety. Opatrně dávkujte
„HORNÍ VRSTVU“ kroužením hrotu pipety kolem
obvodu trubičky pohybem směrem nahoru zatímco se
hladina „HORNÍ VRSTVY“ bude zvedat.
4. Opatrně umístěte 1,5 – 2,0 ml zkapalněného spermatu
do „HORNÍ VRSTVY“ pomocí nové sterilní pipety.
5. Odstřeďte 10-20 minut při odstředivé síle kolem 200 300xg.* Opatrně odhalte granuli buď aspirací „HORNÍ“
a „SPODNÍ VRSTVY“ nebo vyjměte granuli přímo a
přeneste ji do nové sterilní odstředivkové trubičky.
*Poznámka: Kvalita vzorku spermií by
měla být zhodnocena a brána v úvahu při
určování správné rychlosti odstředivky a
doby odstředění. Měly by být upraveny podle
kvality individuálních vzorků pro optimalizaci
procedury.
6. Pomocí nové sterilní pipety přidejte 2,0 – 3,0 ml
mycího média jako např. Sperm Washing Medium
(IS kat. č. 9983) nebo Modified HTF (IS kat. č.
90126) s proteinovým suplementem. Resuspendujte
separovanou granuli. Odstřeďte (~200xg) po dobu 8 -10
minut a odeberte supernatant. Zopakujte tento krok pro
druhé promytí. Odstraňte supernatant a resuspendujte
granuli pomocí vhodného objemového množství
náležitého média. Vzorek je nyní připraven pro analýzu.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
POKYNY PRO SKLADOVÁNÍ A STÁLOST
Skladujte neotevřené nádoby v lednici při 2 º až 8 ºC.
Ohřejte na okolní teplotu nebo na teplotu inkubátoru (37
°C) před použitím.
Nezmrazujte a nevystavujte vysokým teplotám.
Při doporučeném skladování je ISolate stabilní do expirační
doby, která je vyznačena na štítcích kartónu a láhve.
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
ISolate se bude jevit neprůhledné. Je to pro tento výrobek
normální. Nepoužívejte žádné ampulky média, které
jeví známky přítomnosti částic hmoty nebo nečistot
(nerovnoměrně zakalené).
ISolate by mělo být těsně uzavřeno, pokud bude používáno
v CO2 inkubátoru, aby se předešlo změnám pH .
Tento výrobek neobsahuje žádné konzervační látky,
antibiotika, ani protein nebo jiné suplementy. Vyhněte se
problémům kontaminace, při práci dodržujte aseptické
metody.
V případě poškození nepoužívejte. Likvidujte
nebo zašlete výrobci na výměnu.
POZOR: Federální zákony USA omezují
prodej tohoto zařízení pouze na lékaře nebo
na jeho předpis.
ISolate er en membranfiltreret, aseptisk behandlet
kolloid suspension af silicapartikler stabiliseret med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-bufret HTF.
Sterilitetssikringsniveauet (SAL) er 10-3. ISolate er blevet
testet med en kaninpyrogentest og fundet pyrogentfrit.
BRUGSANVISNING
Katalognr. 99264 – BRUGSKLART KOLLOID
SILIKA I TO KONCENTRATIONER (50 %
og 90 %)
A. Anbefalede materialer:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr. 99264 (sæt med 6 ml,
50ml- eller 100 ml-hætteglas) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Forudgående fortynding er ikke nødvendig. Hvert
hætteglas med øverste eller underste lag gradient er klar
til brug. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE
på indlægssedlen.
Katalognr. 99275 – STOCK SOLUTION
Medium med 90 % densitetsgradient til brug i en ét-trinsprocedure eller til yderligere fortynding.
A. Anbefalede materialer:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag STOCK SOLUTION (katalognr. 99275) og
pipetter 5,6 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 4,4 ml Modified Human Tubal Fluid (katalognr.
90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4 gange for
at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag 10 ml STOCK SOLUTION op i et sterilt
centrifugerør og sæt låg på - (det er ikke nødvendigt
at fortynde yderligere - STOCK SOLUTION er 90 %)
b) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på
indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det øverste
lag og 10 ml af det nederste lag kan behandle ca. 5
sædprøver).
6. Brug en ny, steril pipette og tilsæt 2,0-3,0 ml af et
passende vaskemedium såsom Sperm Washing
Medium (IS katalognr. 9983) eller Modified HTF (IS
katalognr. 90126) med tilsat protein. Resuspender
de isolerede sædceller (pellet). Centrifuger (~ 200
xg) i 8-10 minutter og fjern supernatanten. Gentag
dette trin og vask en gang til. Bortskaf supernatanten
og resuspender sædcellerne (pellet) vha. en egnet
volumen af passende medium. Prøven er nu klar til
analysering.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
ANVISNINGER ANG OPBEVARING OG
STABILITET
Uåbnede beholdere opbevares nedkølet ved 2-8 ºC.
Opvarm til stuetemeperatur eller inkubatortemperatur (37
°C) inden brug.
Må ikke nedfryses eller udsættes for høje temperaturer.
ISolate er stabilt indtil udløbsdatoen på æskens og flaskens
etiket, når det opbevares som anvist.
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
ISolate er uigennemsigtigt. Det er normalt for dette
produkt. Anvend ikke hætteglas med medium, der
indeholder partikler eller viser tegn på at være kontamineret
(uensartede uklarheder).
Låget på ISolate skal sidde tæt til, hvis det skal bruges i
en CO2-inkubator, for at undgå ændringer i pH-værdien.
Dette produkt indeholder ingen konserveringsmidler,
antibiotika eller proteinsupplementer. Undgå problemer med
kontamination ved at bruge aseptiske teknikker.
Må ikke anvendes i tilfælde af beskadigelse.
Bortskaf eller returner til producenten med
henblik på udskiftning.
FORSIGTIG: Ifølge amerikansk lov (USA)
må dette produkt kun sælges af eller efter
ordination af en læge.
TUOTTEEN KUVAUS
ISolate ® on tiheysgradienttiliuos, jota käytetään
erottamaan motiilien siittiöiden osa siemennesteestä.
Kaksikerroksisena gradienttijärjestelmänä se tehokkaasti
vähentää solukontaminantteja, kuten kuolleita siittiöitä,
valkoisia verisoluja ja vastaavia jätteitä. Tuloksena saatu
näyte sisältää pääasiassa motiileja siittiöitä.
ISolate – HEPES on kalvosuodatettu ja aseptisesti käsitelty
kolloidisuspensio, jossa silikahiukkaset on stabiloitu
kovalenttisidoksessa hydrofiilisen silaanin kanssa HEPESpuskuroidussa HTF:ssä. Steriilisyystaso (SAL) on 10-3.
ISolate on testattu ja todettu pyrogeeneille negatiiviseksi
kanin pyrogeenitestissä.
KÄYTTÖOHJEET
L u e t t e l o n r o 9 9 2 6 4 - K Ä Y T T ÖVA L M I S
KOLLOIDINEN SILIKA KAHDESSA
PITOISUUDESSA (50 % ja 90 %)
A. Suositellut materiaalit:
ISolates
• Irvine Scientific luettelonro 99264 (6ml:n, 50ml tai
100 ml:n pullopakkaus)
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Alustavia laimennuksia ei tarvita. Kukin ylemmän tai
alemman kerroksen gradienttipullo on käyttövalmis. Siirry
tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMENPITEET.
Luettelonro 99275 - STOCK SOLUTION
90 %:n tiheysgradienttinen ravintoliuos, jota käytetään
yksivaiheisessa toimenpiteessä tai lisälaimennuksessa.
A. Suositellut materiaalit:
ISolate STOCK SOLUTION
• Irvine Scientific luettelonro 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos 50 %.
a) Ota STOCK SOLUTIONia (luettelonro 99275) ja
pipetoi 5,6 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 4,4 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Jaa tasan 10 ml STOCK SOLUTIONia steriiliin
sentrifugiputkeen ja sulje se – (Lisälaimennuksia
ei tarvita -STOCK SOLUTION on 90-prosenttista).
b) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN
PITEET. (HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml
alempaa kerrosta riittää noin 5:n
siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Katalognr. 99306 – CONCENTRATE
Koncentrat af kolloid silika til yderligere fortynding i
densitetsgradienter; formuleret i en isotonisk buffer og
svarende til densiteten af ufortyndet Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE er blevet evalueret ifølge denne
indlægsseddel ved 50 % og 90 % gradienter. Hvert
laboratorium kan vælge at lave gradienter i forskellige
koncentrationer, som bør evalueres med henblik på
effektivitet.
Luettelonro 99306 - CONCENTRATE
Kolloidisilikatiiviste, jolla saadaan aikaan laimennus
tiheysgradientteihin; formuloitu isotonisessa puskurissa ja
vastaa suunnilleen laimentamattoman Percoll®in tiheyttä.
ISolate® CONCENTRATE on arvioitu pakkauksen esitteen
mukaisesti 50 %- ja 90 %-gradienttia vastaaviksi. Kukin
laboratorio voi valmistaa gradientteja eri pitoisuuksilla,
joiden tehokkuus tulee arvioida.
A. Anbefalede materialer:
ISolate® koncentrat
• Irvine Scientific katalognr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr. 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr. 9983
Sterile, koniske centrifugerør til engangsbrug
• Irvine Scientific katalognr. IS-325
Pasteurpipetter, sterile
Centrifuge
Inkubator, 37 ºC
A. Suositellut materiaalit:
ISolate® -tiiviste
• Irvine Scientific luettelonro 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific luettelonro 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific luettelonro 9983
Steriilit kertakäyttöiset kartiomaiset sentrifugiputket
• Irvine Scientific luettelonro IS-325
Pasteur -pipetit, steriilit
Sentrifugi
Inkubaattori, 37 °C
B. Forberedelse af gradientopløsning:
Der kræves to opløsninger til at udføre gradientseparation
af sæd: Et øverste lag og et nederste lag.
1. Opløsning i øverste lag - 50 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 4,5 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “ØVERSTE LAG” på rørets etiket
2. Opløsning i nederste lag - 90 %.
a) Tag CONCENTRATE (katalognr. 99306) og
pipetter 8,1 ml ned i et sterilt centrifugerør
b) Tilsæt 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(katalognr. 90126)
c) Sæt låg på røret og vend det forsigtigt 3-4
gange for at blande helt
d) Skriv “NEDERSTE LAG” på rørets etiket
3. Forsæt med afsnittet GENEREL PROCEDURE på indlægssedlen. (BEMÆRK: 10 ml af det
øverste lag og 10 ml af det nederste lag kan
behandle ca. 5 sædprøver).
B. Gradientin valmistus:
Siittiöiden gradienttierotteluun tarvitaan kaksi liuosta: ylempi
kerros ja alempi kerros.
1. Ylemmän kerroksen liuos - 50 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306)
ja pipetoi 4,5 ml steriiliin sentrifugiputkeen.
b) Lisää 5,5 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “YLEMPI KERROS”
2. Alemman kerroksen liuos – 90 %.
a) Ota CONCENTRATE:a (luettelonro 99306) ja
pipetoi 8,1 ml steriiliin sentrifugiputkeen
b) Lisää 1,9 ml Modified Human Tubal Fluidia
(luettelonro 90126).
c) Sulje putki ja käännä se varovasti ylösalaisin 3 - 4
kertaa, jotta se saa täysin sekoittua.
d) Merkitse putkeen “ALEMPI KERROS”
3. Jatka tuote-esitteen osaan YLEISET TOIMEN PITEET.
(HUOM: 10 ml ylempää ja 10 ml alempaa kerrosta
riittää noin 5:n siemennestenäytteen käsittelyyn.)
Bemærk: Betegnelserne 50 % og 90 % angiver
ikke en faktisk koncentration. 50 % og 90 % er
relative koncentrationer baseret på det tidligere
nomenklatur, der definerede en 1:9 fortynding af
Percoll® som svarende til en 100 %
isotonisk arbejdsopløsning.
GENEREL PROCEDURE
Følgende er en generel procedure for en gradientseparation
af motile sædceller fra sædvæsken. Volumenen og
koncentrationen kan modificeres i henhold til hvert enkelt
laboratories præferencer (dvs. minigradient, cryopreserveret
sæd, gradient i tre lag).
1. Bring alle mediekomponenter til stuetemperatur eller
37 °C.
2. Brug en steril pipette og overfør 1,5-2,0 ml af det
“NEDERSTE LAG” til et sterilt, konisk centrifugerør til
engangsbrug.
3. Brug en ny, steril pipette og overfør en tilsvarende
volumen af “ØVERSTE LAG” oven på “NEDERSTE
LAG”. Det gøres ved at berøre overfladen af det
“UNDERSTE LAG” i siden af røret med pipettespidsen.
Dispenser forsigtigt det “ØVERSTE LAG” ved at føre
pipettespidsen i en opadgående spiralbevægelse mod
rørets inderside efterhånden, som niveauet af det
“ØVERSTE LAG” stiger.
4. Placer forsigtigt 1,5-2,0 ml flydende sæd oven på
“ØVERSTE LAG” med en ny, steril pipette.
5. Centrifuger i 10-20 minutter ved ca. 200-300 x g.*
Eksponer forsigtigt sædcellerne (pellet) ved enten at
aspirere det “ØVERSTE” og “UNDERSTE” lag væk,
eller direkte ved at fjerne sædcellerne og overføre dem
til et nyt, sterilt centrifugerør.
Bemærk: Kvaliteten af sædprøven skal
evalueres og tages i betragtning, når den
korrekte centrifugeringshastighed og -tid skal
fastslås. Disse skal justeres i henhold til den
enkelte sædprøves kvalitet med henblik på
optimering af proceduren.
LATVISKI
SUOMI
DANSK
PRODUKTBESKRIVELSE
ISolate® er et densitetsgradientmedium, der er fremstillet
til at separere de motile sædceller fra sædvæsken. Som
et gradientsystem i to lag reducerer det effektivt cellulære
kontaminanter såsom død sæd, leukocytter og diverse
restmaterialer. Den færdige prøve indeholder hovedsageligt
motile sædceller.
Huom: Termit 50 % ja 90 % eivät edusta todellista
pitoisuutta. 50- ja 90-prosenttiset pitoisuudet ovat
suhteellisia ja perustuvat aiempaan luokitukseen,
jossa 1:9 laimennus Percoll®illa on määritelty 100
%:sti toimivaa isotonista liuosta vastaavaksi.
YLEISET TOIMENPITEET
Seuraavassa annetaan yleiset ohjeet kaksivaiheiseen
siittiöiden siemennesteestä erottamiseen gradientin avulla.
Tilavuutta ja pitoisuutta voidaan muunnella kunkin
laboratorion toivomusten mukaan (so. minigradientti,
kylmäsäilötty siemenneste, kolmikerroksinen gradientti).
1.
Anna kaikkien ravintoliuosainesosien saavuttaa
huoneenlämpötila tai 37 °C.
2. Steriiliä pipettiä käyttäen siirrä1,5 – 2,0 ml “ALEMPAA
KERROSTA” steriiliin kertakäyttöiseen kartiomaiseen
sentrifugiputkeen.
3. Siirrä steriilillä pipetillä sama tilavuus ”YLEMPÄÄ
KERROSTA” ”ALEMMAN KERROKSEN” päälle. Tämä
tapahtuu koskettamalla pipetin kärjellä ”ALEMMAN
KERROKSEN” pintaa putken reunalla. Tyhjennä
“YLEMPI KERROS” varovasti kiertäen pipetin kärkeä
ympäri putkea yläsuuntaan samalla kun “YLEMMÄN
KERROKSEN” taso nousee.
4. Aseta varovasti 1,5 – 2,0 ml nestemäistä siemennestettä
“YLEMMÄLLE KERROKSELLE” uudella steriilillä
pipetillä.
5. Linkoa 10 - 20 minuuttia asetuksella 200 – 300 x g.*
Paljasta pelletti varovasti joko aspiroimalla se
“YLEMMÄSTÄ” ja “ALEMMASTA KERROKSESTA”
tai poistamalla pelletti suoraan ja siirtämällä se uuteen
steriiliin sentrifugiputkeen.
*Huom: Siittiönäytteen laatu tulee arvioida
ja ottaa huomioon niiden linkoamisen
tarkoituksenmukaista nopeutta ja kestoa
määritettäessä. Näitä tulee säädellä
yksittäisen näytteen laadun mukaisesti
toimenpiteen optimoimiseksi.
6. Käyttäen uutta steriiliä pipettiä lisää 2,0 – 3,0 ml
sopivaa pesuainetta, kuten Sperm Washing Medium
(IS luettelonro 9983) tai Modified HTF (IS luettelonro
90126) proteiinilisineen. Upota eristetty pelletti
uudelleen. Linkoa se (~ 200 x g) 8 -10 minuuttia ja poista
pintaneste. Toista tämä vaihe uutta pesua varten. Hävitä
pintaneste ja suspendoi pelletti uudelleen käyttäen
asianmukaista ravintoliuosta sopivassa tilavuudessa.
Näyte on nyt valmis analysoitavaksi.
PRODUKTA APRAKSTS
ISolate® blīvuma gradienta barotnes ir materiāls, kas
paredzēts spermatozoīdu motilo frakciju atdalīšanai
no sēklas šķidruma. Kā divslāņu gradientu sistēma tā
efektīvi mazina šūnu izraisītas kontaminācijas iespējas,
piemēram, kontamināciju ar nedzīviem spermatozoīdiem,
baltajiem asinsķermenīšiem un dažādām pārpalikumšūnām.
Rezultātā iegūtais paraugs galvenokārt satur kustīgus
spermatozoīdus.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
ISolate ir caur membrānu filtrēta un aseptiski apstrādāta
koloidāla silīcija dioksīda daļiņu suspensija, kas stabilizēta
ar kovalenti piesaistītu hidrofīlu silānu HEPES buferētā HTF.
Sterilitātes nodrošināšanas līmenis (SAL) ir 10-3. ISolate
ir testēts, un ir konstatēts, ka tas ir negatīvs attiecībā uz
pirogēnām baktērijām pirogēno baktēriju testā trušiem.
SÄILYTYSOHJEET JA STABILITEETTI
Avaamattomat säiliöt säilytettävä kylmässä, 2 – 8 ºC.
Lämmitä ympäristölämpöön tai inkubaattorin lämpötilaan
(37 °C) ennen käyttöä.
Ei saa jäädyttää tai altistaa korkeille lämpötiloille.
ISolate on stabiili pakkaukseen ja pullojen etiketteihin
merkittyyn eräpäivään saakka ohjeiden mukaisesti
säilytettynä.
VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEITÄ
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
ISolate näyttää läpinäkymättömältä. Tämä on tuotteelle
normaalia. Älä käytä ravintoliuospulloa, jossa näkyy
hiukkasia tai saastumista (epätasaista sameutta).
ISolaten korkin tulee olla tiiviisti kiinni, kun sitä käytetään
hiilidioksidi-inkubaattorissa pH-muutosten välttämiseksi.
Tässä tuotteessa ei ole säilöntäaineita, antibiootteja eikä
proteiinilisäaineita. Kontaminaatio-ongelmat vältetään
aseptisella käsittelytekniikalla.
Jos pakkaus on vahingoittunut, älä käytä
sitä. Hävitä tuote tai palauta se valmistajalle
vaihdettavaksi.
VAROITUS: Yhdysvaltain liittovaltion laki
rajoittaa tämän välineen myynnin vain lääkärin
toimesta tai määräyksestä tapahtuvaksi.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Kataloga Nr. 99264 – LIETOŠANAI GATAVS
KOLOIDĀLS SILĪCIJA DIOKSĪDS DIVĀS
KONCENTRĀCIJĀS (50% un 90%)
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate
• Irvine Scientific kataloga Nr. 99264 (6ml, 50ml vai
100 ml flakonu komplekts) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
• Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Nav nepieciešama iepriekšēja atšķaidīšana. Katrs flakons
ar augšējā un apakšējā slāņa gradientu ir gatavs lietošanai.
Pārejiet pie izstrādājuma ieliktnī aprakstītās VISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS.
Kataloga Nr. - 99275 - STOCK SOLUTION
90% specifiska barotne izmantošanai tūlītējā procedūrā vai
atšķaidīšanai turpmāk.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga
Nr. 99275) un pipeti 5,6 ml sterilā centrifūgas
stobriņā.
b) Pievienojiet 4,4 ml Modified Human Tubal
Fluid (kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Iedaliet 10 ml STOCK SOLUTION sterilā
centrifūgas stobriņā un uzlieciet aizbāzni
(Turpmāka atšķaidīšana nav nepieciešama
– STOCK SOLUTION ir 90%).
b) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās
VISPĀRĒJĀS PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar
10 ml augšējā slāņa un 10 ml apakšējā slāņa
šķīdumu iespējams apstrādāt apmēram 5
spermas paraugus.)
Kataloga Nr. 99306 - CONCENTRATE
Koloidāls silīcija dioksīda koncentrāts turpmākai
atšķaidīšanai blīvuma gradientos, tā sastāvā ir izotonisks
buferis un tam piemīt aptuvenais neatšķaidīta Percoll®
blīvums. Saskaņā ar šo iepakojuma ieliktni ISolate®
CONCENTRATE ir ticis novērtēts 50% un 90% gradientā.
Katra laboratorija var izvēlēties veidot atšķirīgu koncentrāciju
gradientus, kuri jāizvērtē attiecībā uz efektivitāti.
A. Ieteicamie materiāli:
ISolate® koncentrāts
•Irvine Scientific kataloga Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific kataloga Nr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific kataloga Nr. 9983
Sterili, koniski vienreizējās lietošanas centrifūgas
stobriņi
•Irvine Scientific kataloga Nr. IS-325
Pastēra pipetes, sterilas
Centrifūga
Inkubators, 37°C
B. Gradienta sagatavošana:
Lai lietotu spermatozoīda atdalīšanas metodi gradientā,
nepieciešami divi šķīdumi: augšējais slānis un apakšējais
slānis.
1. Augšējā slāņa šķīdums – 50%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 4.5 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 5,5 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi
apvērsiet 3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā
sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „AUGŠĒJAIS
SLĀNIS”
2. Apakšējā slāņa šķīdums – 90%:
a) Ievietojiet CONCENTRATE (kataloga Nr. 99306)
un pipeti 8,1 ml sterilā centrifūgas stobriņā.
b) Pievienojiet 1,9 ml Modified Human Tubal Fluid
(kataloga Nr. 90126)
c) Uzlieciet stobriņam aizbāzni un uzmanīgi apvērsiet
3-4 reizes, lai saturam ļautu pilnībā sajaukties.
d) Piestipriniet stobriņam uzlīmi „APAKŠĒJAIS
SLĀNIS”
3. Pārejiet pie produkta ieliktnī aprakstītās ISPĀRĒJĀS
PROCEDŪRAS. (PIEZĪME: ar 10 ml augšējā slāņa
un 10 ml apakšējā slāņa šķīdumu iespējams apstrādāt
apmēram 5 spermas paraugus.)
Piezīme: Apzīmējumi 50% un 90% nenorāda
faktisko koncentrāciju. 50% un 90% ir
relatīvas koncentrācijas, kas pamatojas uz
iepriekšējo nomenklatūru, kas definēja Percoll®
atšķaidīšanu1:9 kā līdzvērtīgu 100% iedarbīgam,
izotoniskam šķīdumam.
VISPĀRĒJĀ PROCEDŪRA
Turpmāk minētā ir vispārpieņemta procedūra izolēšanai
gradientā divos posmos, atdalot kustīgu spermatozoīdu
no spermas. Daudzumu un koncentrāciju iespējams mainīt,
lai tos varētu izmantot atbilstoši laboratorijas galvenajiem
mērķiem (t. i., kā mini-gradientu, ar kriokonservēto spermu,
kā trīsslāņu gradientu).
1. Nodrošiniet, ka visu barotnes sastāvdaļu temperatūra
ir sasniegusi istabas temperatūras līmeni vai 37°C.
2. Izmantojot sterilu pipeti, pārnesiet 1,5-2,0 ml
“APAKŠĒJĀ SLĀŅA” uz sterilu, vienreizējās lietošanas,
konisku centrifūgas stobriņu.
3. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pārnesiet to pašu
daudzumu „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” uz „APAKŠĒJĀ
SLĀŅA” augšdaļu. To veic, ar pipetes galu pieskaroties
„APAKŠĒJAM SLĀNIM” no stobriņa puses. Uzmanīgi
izpiliniet „AUGŠĒJO SLĀNI”, spirālveidīgi virpinot
pipetes galu pa stobriņa perimetru augšupejošas
kustības veidā, „AUGŠĒJĀ SLĀŅA” līmenim
paaugstinoties.
4. Ar jaunas sterilas pipetes palīdzību uzmanīgi ievietojiet
1,5-2,0 ml sašķidrinātas spermas „AUGŠĒJĀ SLĀNĪ”.
5. Centrifugējiet 10-20 minūtes ar apmēram 200-300 g
paātrinājumu.* Uzmanīgi atdaliet lodīti, atvelkot nost
„AUGŠĒJO” un ”APAKŠĒJO SLĀNI” vai tieši izņemot
lodīti un pārnesot to uz citu sterilu centrifūgas stobriņu.
*Piezīme: Spermatozoīda parauga kvalitāte
jāizvērtē un jāņem vērā, nosakot atbilstošo
centrifugēšanas ātrumu un ilgumu. Lai
procedūru optimizētu, šos parametrus
vajadzētu pielāgot atbilstoši atsevišķā
parauga kvalitātei.
6. Izmantojot jaunu sterilu pipeti, pievienojiet 2,0-3,0
ml piemērota skalošanas materiāla, piemēram,
Sperm Washing Medium (IS kataloga Nr. 9983) vai
Modified HTF (IS kataloga Nr. 90126) ar proteīna
papildinājumu. Suspendējiet atkārtoti izolēto lodīti.
Centrifugējiet (ar ~200 g paātrinājumu) 8-10 minūtes
un atdaliet supernatantu. Atkārtojiet šo soli, lai veiktu
otru skalošanu. Novāciet supernatantu un no jauna
suspendējiet lodīti, izmantojot atbilstošu piemērotas
barotnes daudzumu. Tagad paraugs ir sagatavots
analīzes veikšanai.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
UZGLABĀŠANAS NORĀDĪJUMI UN
STABILITĀTE
Neatvērtus konteinerus uzglabāt atdzesētus no 2º līdz 8º
C temperatūrā.
Pirms lietošanas sasildiet līdz apkārtējās vides vai
inkubatora (37°C) temperatūrai.
Nesaldēt un nepakļaut augstu temperatūru iedarbībai.
Uzglabājot, kā norādīts, ISolate saglabā stabilitāti līdz
derīguma termiņam, kas norādīts uz kastes un uz pudeļu
marķējuma.
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
ISolate izskatīsies necaurspīdīgs. Šim produktam tas
ir normāli. Nelietot nevienu flakonu ar barotni, kurā
saskatāmas vielas daļiņas vai piesārņojums (neviendabīgs
duļķainums).
ISolate cieši jānoslēdz ar aizbāzni, lietojot CO2 inkubatorā,
lai nepieļautu pH līmeņa izmaiņas.
Šis produkts nesatur konservantus, antibiotikas vai proteīna
piedevas. Lai izvairītos no kontaminācijas problēmām,
rīkojoties izmantojiet aseptiskas tehnikas.
Ja bojāts, nelietot. Lūdzu, likvidējiet vai
nosūtiet atpakaļ ražotājam atvietošanai.
BRĪDINĀJUMS: Federālie (ASV) likumi pieļauj
šīs ierīces tirdzniecību vienīgi ārstiem vai ar
viņu norīkojumu.
ISolate®
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze
bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn
gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan
in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level
(SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen
bij een konijnpyrogeentest.
GEBRUIKSAANWIJZING
C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE
CONCENTRATIES (50% en 90%)
A.Voorgestelde materialen:
ISolate
• Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of
100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
• Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul
van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik.
Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in
de productbijsluiter.
Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION
90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een
enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific catalogusnr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200
- 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de
“BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren
of de pellet direct te verwijderen en over te brengen
naar een nieuw steriel centrifugebuisje.
*Opm.: de kwaliteit van het spermamonster
dient te worden beoordeeld en in aanmerking
te worden genomen bij het bepalen van de
juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze
moeten worden aangepast aan de individuele
monsterkwaliteit zodat een optimale
procedure wordt verkregen.
6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een
geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS
catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr.
90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de
geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8
-10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze
stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af
en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van
het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT
Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C.
Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of
incubatortemperatuur (37 °C).
Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen.
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE
Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in
dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer
en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter
bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan
kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die
op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate® concentraat
•Irvine Scientific catalogusnr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 4,5 ml in een
steriel centrifugebuisje
b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig
3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE
in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en
10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking
van ca. 5 semen monsters.)
Opm.: de aanduidingen 50% en 90%
vertegenwoordigen geen werkelijke
concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve
concentraties gebaseerd op de vorige
nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van
Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende,
isotone oplossing
ALGEMENE PROCEDURE
Hieronder wordt een algemene procedure beschreven
voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma
en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden
aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv.
minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt).
op
2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de
“ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch
wegwerpcentrifugebuisje.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen
voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van
een nieuw steriel pipet.
Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het
stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker
van de doos en fles is vermeld.
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr.
99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
(catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van
de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een
dop - (Geen verdere verdunningen
noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%)
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE
PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.:
10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn
voldoende voor de bewerking van ca. 5
semenmonsters.)
1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n
omgevingstemperatuur of 37 °C.
ROMÂNĂ
POLSKI
NEDERLANDS
PRODUCTBESCHRIJVING
ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is
om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van
de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem
vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals
dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het
resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma.
3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume
van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste
gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden
bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE
LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden
met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE
LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse
spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te
draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt.
ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product.
Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes
bevat of besmet is (niet-uniform troebel).
ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als
het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen
te vermijden.
Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica
of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om
besmettingsproblemen te vermijden.
Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren
of terugsturen naar de fabrikant voor een
vervanging.
VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse
federale wetgeving mag dit product alleen
door of op voorschrift van een arts worden
verkocht.
OPIS PRODUKTU
ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną
do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu
nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest
skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych,
takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe
zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie
ruchliwe plemniki.
ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie
przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu,
stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym
krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny
poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został
przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy
użyciu testu króliczych pirogenów.,
WSKAZÓWKI UŻYCIA
Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA
KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W
DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%)
A. Sugerowane materiały:
ISolate
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml
lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania
nasienia
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne,
jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z
gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia.
Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej
ulotki o leku.
Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR
ZAPASOWY
Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w
jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania.
A. Sugerowane materiały:
ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr
katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do
sterylnej probówki wirówkowej
b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza
nie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA
SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej
i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne
dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR
ZAPASOWY jest 90%)
b) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml
warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy
na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY
Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania
na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze
i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®.
STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem
50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce.
Każde laboratorium może przygotować swoje własne
roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod
względem ich skuteczności.
A. Sugerowane materiały:
Stężony roztwór ISolate®
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid
(nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 azy, aby umożliwić dokładne
wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4
razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10
ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej
wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Uwaga: Terminy 50% i 90% nie
odpowiadają
właściwym stężeniom. 50% i 90% są
odpowiadającymi stężeniami opartymi na
porzedniej nomenklaturze, która
definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu
Percoll®
jako równe z 100% pracującym, roztworem
izotonicznym.
PROCEDURA OGÓLNA
Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej
separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i
stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z
preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie
zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy).
1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej
lub 37 °C.
2.
Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml
„DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej,
stożkowej probówki wirówkowej.
3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową
objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ
WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie
końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY”
z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ
WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem
końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem
wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu
„GÓRNEJ WARSTWY”.
4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na
„GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej
pipety.
5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około
200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez
zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub
bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej
sterylnej probówki.
*Uwaga: Jakość próbki nasienia należy
zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania
odpowiedniego czasu i szybkości wirowania.
Należy je dopasować zgodnie z jakością
indywidualnej próbki w celu optymalizacji
procedury.
6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml
odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm
Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified
HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka.
Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg)
przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap
w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie
zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej
pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI
Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce
o temperaturze 2º C do 8 ºC.
Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37
°C) przed użyciem.
Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich
temperatur.
ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności
wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy
przechowywany zgodnie z instrukcją.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego
produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której
widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie
(nierównomierne zmętnienie).
ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania
inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH.
Ten produkt nie zawiera środków konserwujących,
antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć
próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym
produktem należy stosować technikę aseptyczną.
Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy
wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu
dokonania wymiany.
U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w
Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego
urządzenia tylko przez lub na polecenie
lekarza.
DESCRIEREA PRODUSULUI
ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie
destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din
lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce
contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă,
leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin
predominant spermatozoizi mobile.
ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care
conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate
prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată
HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de
(SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure
şi găsit apirogen .
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA
S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă
CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%)
A. Materiale propuse:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL,
50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu
gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă.
Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful
utilizarea produsului.
Catalog # 99275 STOCK SOLUTION
Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în
prima treaptă sau pentru diluări ulterioare.
A. Materiale propuse:
ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate
•Irvine Scientific Catalog #99275
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă
sterilă
b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi
realiza amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub
steril de centrifugă cu capac - (nu este
necesară diluţia ulterioară - soluţia
STOCK are concentraţia de 90%)
b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi
10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Catalog # 99306 CONCENTRATE
Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a
densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi
aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate®
CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de
50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la
90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la
diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate.
A. Materiale propuse:
ISolate® Concentrat
•Irvine Scientific Catalog #99306
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306)
şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de
centrifugă
b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza
amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete
de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă
b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid
(Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată
cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea
completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10
ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă
concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt
concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară
care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® ,
identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru.
PROCEDURI GENERALE
Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume
de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul
şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele
fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea
spermei, gradient în trei straturi.)
1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura
camerei sau 37°C.
2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din
“STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă
conică de unică folosinţă.
3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un
volum egal cu cel situat între cele două semne care
delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta
este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI
JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi
cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a
vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa
cum “STRATUL DE SUS” se ridică.
4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml
de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului.
EESTI
SVENSKA
5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ
200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin
aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE
JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea
lor într-un tub steril de centrifugă.
*Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids
trebuie să fie evaluată şi luată în considerare
când se determină timpul şi viteza proprie
pentru centrifugare. Acestea trebuie
ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei
individuale în vederea optimizării procesului
de prelucrare.
6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml
mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS
Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126)
cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate.
Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi
supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua
spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi
granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat.
Mostra acum este gata pentru analiză.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI
STABILITATE
Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate
la 2º to 8ºC.
Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator
la temperatură (37°C) înainte de a utilliza.
Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari.
ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta
de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare.
PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs.
Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule
sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă)
ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se
foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale
nivelurilor de pH.
Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau
suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de
contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice.
Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă
rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului
pentru a fi înlocuit.
AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA)
nu permit vânzarea acestui aparat numai
la comanda unui medic sau pe bază de
comanadă.
PRODUKTBESKRIVNING
ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att
separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska.
Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt
förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda
spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande
provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier.
ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad
kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF.
Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3.
ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits
negativ för pyrogener.
BRUKSANVISNING
Katalognr 99264 - KOLLOIDAL
KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I
TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %)
A. Rekommenderat material:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL,
50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och
bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet
ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel.
Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION
90 % densitetsgradient-medium för användning i en
procedur i ett steg eller för ytterligare spädning.
A. Rekommenderat material:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och
pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock
Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut
- (ingen ytterligare spädning krävs - Stock
Solution är på 90 %)
b) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och
10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover).
Katalognr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till
densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma
densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna
50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa
gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas
för effektivitet.
A. Rekommenderat material:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific katalognr 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4
gånger så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel.
Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte
en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är
relativa koncentrationer baserade på tidigare
nomenklatur som definierade en 1:9-spädning
av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 %
fungerande, isoton lösning.
ALLMÄNT FÖRFARANDE
Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska.
Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa
det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient,
kryopreserverad sperma, treskiktsgradient).
1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller
37 °C.
2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av
“BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör
för engångsbruk.
3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym
“TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs
genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret
sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt
“TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral
runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand
som “TOPPSKIKT”-nivån ökar.
4.
Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på
“TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett.
5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.*
Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen
suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom
att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt
centrifugrör.
*Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas
och tas i beaktande vid bestämning av korrekt
centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör
justeras i enlighet med det enskilda provets
kvalitet, för optimering av förfarandet.
6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL
lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium
(IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr
90126) med proteinsupplement. Resuspendera den
isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10
minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta
steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och
resuspendera pelleten med användning av en adekvat
volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC.
Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur
före användning.
Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer.
ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges
på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt
anvisningarna.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna
produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller
partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn
grumlighet).
ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en
CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks.
Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel,
antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik
vid hantering, så att kontamination undviks.
Om produkten är skadad får den inte
användas. Kassera den eller returnera den
till tillverkaren för utbyte.
OBS! Enligt federal (USA) lag får denna
produkt endast säljas av eller på ordination
av läkare.
TOOTE KIRJELDUS
ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud
liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust.
Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt
rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude
ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov
sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide.
ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis
membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste
kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse
silaaniga.
Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku
pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on
pürogeenide suhtes negatiivne.
KASUTUSJUHEND
Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS
KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES
KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%)
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate
• Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või
100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed,
ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
• Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise
gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake
toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION
90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises
protseduuris või edasiseks lahjendamiseks.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific katalooginr 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
Ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr
99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse
tsentrifuugi tuubi.
b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit
steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage
- (edasine lahjendamine ei ole vajalik
- STOCK SOLUTION on 90%)
b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS:
Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist
kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku
proovi.)
Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks
tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja
tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile.
ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule
ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma
äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides
gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate® kontsentraat
•Irvine Scientific katalooginr 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta
endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90%
kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone,
mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille
järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise
töölahusega.
ÜLDINE PROTSEDUUR
Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust
gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur
Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori
eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud
seemnevedelik, kolmekihiline gradient).
1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st
37°C.
2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL
ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse
tsentrifuugituubi.
3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI
peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige
pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda.
Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti
otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina
ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes.
4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d
seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks
uut steriilset pipetti.
5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20
minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas
ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise
teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude
steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel.
*Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja
määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta
spermaproovi kvaliteeti.
Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust
ja aega korrigeerida vastavalt proovi
kvaliteedite.
6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL
sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium
(IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi
nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige
isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures
8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda
sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant
ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades
selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd
analüüsimiseks valmis.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS
Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril
2 º... 8 ºC.
Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori
temperatuurile (37°C).
Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte.
ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud
tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud
tingimustes.
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks
tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava
koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud
kasutuse alal.
ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul
normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata
osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus).
ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema
tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s.
Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega
proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege
vahendeid aseptilist tehnikat kasutades.
Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada.
Palun visake ära või tagastage tootjale, kes
selle asendab.
ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus
piirab seadme müüki ning see võib toimuda
üksnes arsti poolt või arsti korraldusel.
ISolate®
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze
bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn
gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan
in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level
(SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen
bij een konijnpyrogeentest.
GEBRUIKSAANWIJZING
C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE
CONCENTRATIES (50% en 90%)
A.Voorgestelde materialen:
ISolate
• Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of
100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
• Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul
van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik.
Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in
de productbijsluiter.
Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION
90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een
enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific catalogusnr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200
- 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de
“BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren
of de pellet direct te verwijderen en over te brengen
naar een nieuw steriel centrifugebuisje.
*Opm.: de kwaliteit van het spermamonster
dient te worden beoordeeld en in aanmerking
te worden genomen bij het bepalen van de
juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze
moeten worden aangepast aan de individuele
monsterkwaliteit zodat een optimale
procedure wordt verkregen.
6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een
geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS
catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr.
90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de
geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8
-10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze
stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af
en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van
het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT
Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C.
Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of
incubatortemperatuur (37 °C).
Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen.
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE
Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in
dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer
en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter
bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan
kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die
op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate® concentraat
•Irvine Scientific catalogusnr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 4,5 ml in een
steriel centrifugebuisje
b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig
3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE
in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en
10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking
van ca. 5 semen monsters.)
Opm.: de aanduidingen 50% en 90%
vertegenwoordigen geen werkelijke
concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve
concentraties gebaseerd op de vorige
nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van
Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende,
isotone oplossing
ALGEMENE PROCEDURE
Hieronder wordt een algemene procedure beschreven
voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma
en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden
aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv.
minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt).
op
2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de
“ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch
wegwerpcentrifugebuisje.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen
voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van
een nieuw steriel pipet.
Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het
stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker
van de doos en fles is vermeld.
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr.
99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
(catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van
de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een
dop - (Geen verdere verdunningen
noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%)
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE
PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.:
10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn
voldoende voor de bewerking van ca. 5
semenmonsters.)
1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n
omgevingstemperatuur of 37 °C.
ROMÂNĂ
POLSKI
NEDERLANDS
PRODUCTBESCHRIJVING
ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is
om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van
de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem
vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals
dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het
resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma.
3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume
van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste
gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden
bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE
LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden
met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE
LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse
spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te
draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt.
ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product.
Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes
bevat of besmet is (niet-uniform troebel).
ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als
het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen
te vermijden.
Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica
of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om
besmettingsproblemen te vermijden.
Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren
of terugsturen naar de fabrikant voor een
vervanging.
VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse
federale wetgeving mag dit product alleen
door of op voorschrift van een arts worden
verkocht.
OPIS PRODUKTU
ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną
do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu
nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest
skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych,
takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe
zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie
ruchliwe plemniki.
ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie
przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu,
stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym
krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny
poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został
przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy
użyciu testu króliczych pirogenów.,
WSKAZÓWKI UŻYCIA
Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA
KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W
DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%)
A. Sugerowane materiały:
ISolate
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml
lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania
nasienia
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne,
jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z
gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia.
Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej
ulotki o leku.
Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR
ZAPASOWY
Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w
jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania.
A. Sugerowane materiały:
ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr
katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do
sterylnej probówki wirówkowej
b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza
nie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA
SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej
i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne
dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR
ZAPASOWY jest 90%)
b) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml
warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy
na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY
Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania
na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze
i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®.
STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem
50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce.
Każde laboratorium może przygotować swoje własne
roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod
względem ich skuteczności.
A. Sugerowane materiały:
Stężony roztwór ISolate®
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid
(nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 azy, aby umożliwić dokładne
wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4
razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10
ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej
wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Uwaga: Terminy 50% i 90% nie
odpowiadają
właściwym stężeniom. 50% i 90% są
odpowiadającymi stężeniami opartymi na
porzedniej nomenklaturze, która
definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu
Percoll®
jako równe z 100% pracującym, roztworem
izotonicznym.
PROCEDURA OGÓLNA
Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej
separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i
stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z
preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie
zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy).
1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej
lub 37 °C.
2.
Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml
„DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej,
stożkowej probówki wirówkowej.
3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową
objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ
WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie
końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY”
z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ
WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem
końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem
wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu
„GÓRNEJ WARSTWY”.
4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na
„GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej
pipety.
5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około
200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez
zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub
bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej
sterylnej probówki.
*Uwaga: Jakość próbki nasienia należy
zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania
odpowiedniego czasu i szybkości wirowania.
Należy je dopasować zgodnie z jakością
indywidualnej próbki w celu optymalizacji
procedury.
6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml
odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm
Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified
HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka.
Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg)
przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap
w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie
zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej
pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI
Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce
o temperaturze 2º C do 8 ºC.
Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37
°C) przed użyciem.
Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich
temperatur.
ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności
wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy
przechowywany zgodnie z instrukcją.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego
produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której
widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie
(nierównomierne zmętnienie).
ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania
inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH.
Ten produkt nie zawiera środków konserwujących,
antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć
próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym
produktem należy stosować technikę aseptyczną.
Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy
wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu
dokonania wymiany.
U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w
Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego
urządzenia tylko przez lub na polecenie
lekarza.
DESCRIEREA PRODUSULUI
ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie
destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din
lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce
contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă,
leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin
predominant spermatozoizi mobile.
ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care
conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate
prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată
HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de
(SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure
şi găsit apirogen .
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA
S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă
CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%)
A. Materiale propuse:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL,
50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu
gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă.
Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful
utilizarea produsului.
Catalog # 99275 STOCK SOLUTION
Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în
prima treaptă sau pentru diluări ulterioare.
A. Materiale propuse:
ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate
•Irvine Scientific Catalog #99275
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă
sterilă
b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi
realiza amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub
steril de centrifugă cu capac - (nu este
necesară diluţia ulterioară - soluţia
STOCK are concentraţia de 90%)
b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi
10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Catalog # 99306 CONCENTRATE
Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a
densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi
aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate®
CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de
50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la
90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la
diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate.
A. Materiale propuse:
ISolate® Concentrat
•Irvine Scientific Catalog #99306
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306)
şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de
centrifugă
b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza
amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete
de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă
b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid
(Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată
cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea
completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10
ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă
concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt
concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară
care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® ,
identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru.
PROCEDURI GENERALE
Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume
de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul
şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele
fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea
spermei, gradient în trei straturi.)
1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura
camerei sau 37°C.
2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din
“STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă
conică de unică folosinţă.
3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un
volum egal cu cel situat între cele două semne care
delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta
este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI
JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi
cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a
vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa
cum “STRATUL DE SUS” se ridică.
4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml
de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului.
EESTI
SVENSKA
5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ
200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin
aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE
JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea
lor într-un tub steril de centrifugă.
*Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids
trebuie să fie evaluată şi luată în considerare
când se determină timpul şi viteza proprie
pentru centrifugare. Acestea trebuie
ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei
individuale în vederea optimizării procesului
de prelucrare.
6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml
mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS
Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126)
cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate.
Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi
supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua
spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi
granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat.
Mostra acum este gata pentru analiză.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI
STABILITATE
Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate
la 2º to 8ºC.
Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator
la temperatură (37°C) înainte de a utilliza.
Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari.
ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta
de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare.
PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs.
Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule
sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă)
ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se
foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale
nivelurilor de pH.
Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau
suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de
contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice.
Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă
rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului
pentru a fi înlocuit.
AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA)
nu permit vânzarea acestui aparat numai
la comanda unui medic sau pe bază de
comanadă.
PRODUKTBESKRIVNING
ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att
separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska.
Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt
förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda
spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande
provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier.
ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad
kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF.
Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3.
ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits
negativ för pyrogener.
BRUKSANVISNING
Katalognr 99264 - KOLLOIDAL
KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I
TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %)
A. Rekommenderat material:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL,
50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och
bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet
ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel.
Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION
90 % densitetsgradient-medium för användning i en
procedur i ett steg eller för ytterligare spädning.
A. Rekommenderat material:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och
pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock
Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut
- (ingen ytterligare spädning krävs - Stock
Solution är på 90 %)
b) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och
10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover).
Katalognr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till
densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma
densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna
50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa
gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas
för effektivitet.
A. Rekommenderat material:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific katalognr 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4
gånger så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel.
Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte
en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är
relativa koncentrationer baserade på tidigare
nomenklatur som definierade en 1:9-spädning
av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 %
fungerande, isoton lösning.
ALLMÄNT FÖRFARANDE
Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska.
Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa
det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient,
kryopreserverad sperma, treskiktsgradient).
1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller
37 °C.
2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av
“BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör
för engångsbruk.
3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym
“TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs
genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret
sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt
“TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral
runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand
som “TOPPSKIKT”-nivån ökar.
4.
Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på
“TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett.
5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.*
Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen
suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom
att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt
centrifugrör.
*Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas
och tas i beaktande vid bestämning av korrekt
centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör
justeras i enlighet med det enskilda provets
kvalitet, för optimering av förfarandet.
6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL
lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium
(IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr
90126) med proteinsupplement. Resuspendera den
isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10
minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta
steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och
resuspendera pelleten med användning av en adekvat
volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC.
Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur
före användning.
Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer.
ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges
på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt
anvisningarna.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna
produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller
partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn
grumlighet).
ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en
CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks.
Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel,
antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik
vid hantering, så att kontamination undviks.
Om produkten är skadad får den inte
användas. Kassera den eller returnera den
till tillverkaren för utbyte.
OBS! Enligt federal (USA) lag får denna
produkt endast säljas av eller på ordination
av läkare.
TOOTE KIRJELDUS
ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud
liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust.
Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt
rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude
ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov
sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide.
ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis
membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste
kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse
silaaniga.
Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku
pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on
pürogeenide suhtes negatiivne.
KASUTUSJUHEND
Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS
KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES
KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%)
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate
• Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või
100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed,
ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
• Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise
gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake
toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION
90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises
protseduuris või edasiseks lahjendamiseks.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific katalooginr 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
Ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr
99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse
tsentrifuugi tuubi.
b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit
steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage
- (edasine lahjendamine ei ole vajalik
- STOCK SOLUTION on 90%)
b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS:
Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist
kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku
proovi.)
Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks
tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja
tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile.
ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule
ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma
äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides
gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate® kontsentraat
•Irvine Scientific katalooginr 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta
endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90%
kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone,
mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille
järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise
töölahusega.
ÜLDINE PROTSEDUUR
Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust
gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur
Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori
eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud
seemnevedelik, kolmekihiline gradient).
1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st
37°C.
2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL
ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse
tsentrifuugituubi.
3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI
peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige
pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda.
Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti
otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina
ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes.
4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d
seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks
uut steriilset pipetti.
5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20
minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas
ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise
teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude
steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel.
*Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja
määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta
spermaproovi kvaliteeti.
Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust
ja aega korrigeerida vastavalt proovi
kvaliteedite.
6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL
sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium
(IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi
nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige
isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures
8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda
sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant
ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades
selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd
analüüsimiseks valmis.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS
Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril
2 º... 8 ºC.
Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori
temperatuurile (37°C).
Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte.
ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud
tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud
tingimustes.
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks
tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava
koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud
kasutuse alal.
ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul
normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata
osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus).
ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema
tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s.
Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega
proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege
vahendeid aseptilist tehnikat kasutades.
Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada.
Palun visake ära või tagastage tootjale, kes
selle asendab.
ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus
piirab seadme müüki ning see võib toimuda
üksnes arsti poolt või arsti korraldusel.
ISolate®
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze
bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn
gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan
in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level
(SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen
bij een konijnpyrogeentest.
GEBRUIKSAANWIJZING
C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE
CONCENTRATIES (50% en 90%)
A.Voorgestelde materialen:
ISolate
• Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of
100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
• Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul
van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik.
Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in
de productbijsluiter.
Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION
90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een
enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific catalogusnr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200
- 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de
“BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren
of de pellet direct te verwijderen en over te brengen
naar een nieuw steriel centrifugebuisje.
*Opm.: de kwaliteit van het spermamonster
dient te worden beoordeeld en in aanmerking
te worden genomen bij het bepalen van de
juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze
moeten worden aangepast aan de individuele
monsterkwaliteit zodat een optimale
procedure wordt verkregen.
6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een
geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS
catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr.
90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de
geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8
-10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze
stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af
en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van
het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT
Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C.
Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of
incubatortemperatuur (37 °C).
Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen.
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE
Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in
dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer
en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter
bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan
kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die
op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate® concentraat
•Irvine Scientific catalogusnr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 4,5 ml in een
steriel centrifugebuisje
b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig
3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE
in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en
10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking
van ca. 5 semen monsters.)
Opm.: de aanduidingen 50% en 90%
vertegenwoordigen geen werkelijke
concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve
concentraties gebaseerd op de vorige
nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van
Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende,
isotone oplossing
ALGEMENE PROCEDURE
Hieronder wordt een algemene procedure beschreven
voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma
en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden
aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv.
minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt).
op
2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de
“ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch
wegwerpcentrifugebuisje.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen
voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van
een nieuw steriel pipet.
Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het
stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker
van de doos en fles is vermeld.
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr.
99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
(catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van
de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een
dop - (Geen verdere verdunningen
noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%)
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE
PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.:
10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn
voldoende voor de bewerking van ca. 5
semenmonsters.)
1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n
omgevingstemperatuur of 37 °C.
ROMÂNĂ
POLSKI
NEDERLANDS
PRODUCTBESCHRIJVING
ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is
om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van
de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem
vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals
dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het
resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma.
3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume
van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste
gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden
bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE
LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden
met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE
LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse
spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te
draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt.
ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product.
Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes
bevat of besmet is (niet-uniform troebel).
ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als
het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen
te vermijden.
Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica
of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om
besmettingsproblemen te vermijden.
Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren
of terugsturen naar de fabrikant voor een
vervanging.
VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse
federale wetgeving mag dit product alleen
door of op voorschrift van een arts worden
verkocht.
OPIS PRODUKTU
ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną
do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu
nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest
skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych,
takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe
zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie
ruchliwe plemniki.
ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie
przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu,
stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym
krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny
poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został
przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy
użyciu testu króliczych pirogenów.,
WSKAZÓWKI UŻYCIA
Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA
KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W
DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%)
A. Sugerowane materiały:
ISolate
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml
lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania
nasienia
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne,
jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z
gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia.
Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej
ulotki o leku.
Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR
ZAPASOWY
Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w
jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania.
A. Sugerowane materiały:
ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr
katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do
sterylnej probówki wirówkowej
b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza
nie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA
SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej
i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne
dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR
ZAPASOWY jest 90%)
b) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml
warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy
na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY
Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania
na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze
i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®.
STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem
50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce.
Każde laboratorium może przygotować swoje własne
roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod
względem ich skuteczności.
A. Sugerowane materiały:
Stężony roztwór ISolate®
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid
(nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 azy, aby umożliwić dokładne
wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4
razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10
ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej
wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Uwaga: Terminy 50% i 90% nie
odpowiadają
właściwym stężeniom. 50% i 90% są
odpowiadającymi stężeniami opartymi na
porzedniej nomenklaturze, która
definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu
Percoll®
jako równe z 100% pracującym, roztworem
izotonicznym.
PROCEDURA OGÓLNA
Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej
separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i
stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z
preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie
zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy).
1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej
lub 37 °C.
2.
Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml
„DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej,
stożkowej probówki wirówkowej.
3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową
objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ
WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie
końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY”
z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ
WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem
końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem
wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu
„GÓRNEJ WARSTWY”.
4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na
„GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej
pipety.
5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około
200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez
zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub
bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej
sterylnej probówki.
*Uwaga: Jakość próbki nasienia należy
zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania
odpowiedniego czasu i szybkości wirowania.
Należy je dopasować zgodnie z jakością
indywidualnej próbki w celu optymalizacji
procedury.
6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml
odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm
Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified
HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka.
Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg)
przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap
w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie
zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej
pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI
Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce
o temperaturze 2º C do 8 ºC.
Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37
°C) przed użyciem.
Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich
temperatur.
ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności
wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy
przechowywany zgodnie z instrukcją.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego
produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której
widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie
(nierównomierne zmętnienie).
ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania
inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH.
Ten produkt nie zawiera środków konserwujących,
antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć
próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym
produktem należy stosować technikę aseptyczną.
Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy
wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu
dokonania wymiany.
U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w
Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego
urządzenia tylko przez lub na polecenie
lekarza.
DESCRIEREA PRODUSULUI
ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie
destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din
lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce
contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă,
leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin
predominant spermatozoizi mobile.
ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care
conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate
prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată
HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de
(SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure
şi găsit apirogen .
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA
S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă
CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%)
A. Materiale propuse:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL,
50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu
gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă.
Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful
utilizarea produsului.
Catalog # 99275 STOCK SOLUTION
Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în
prima treaptă sau pentru diluări ulterioare.
A. Materiale propuse:
ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate
•Irvine Scientific Catalog #99275
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă
sterilă
b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi
realiza amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub
steril de centrifugă cu capac - (nu este
necesară diluţia ulterioară - soluţia
STOCK are concentraţia de 90%)
b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi
10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Catalog # 99306 CONCENTRATE
Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a
densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi
aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate®
CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de
50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la
90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la
diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate.
A. Materiale propuse:
ISolate® Concentrat
•Irvine Scientific Catalog #99306
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306)
şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de
centrifugă
b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza
amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete
de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă
b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid
(Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată
cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea
completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10
ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă
concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt
concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară
care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® ,
identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru.
PROCEDURI GENERALE
Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume
de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul
şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele
fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea
spermei, gradient în trei straturi.)
1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura
camerei sau 37°C.
2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din
“STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă
conică de unică folosinţă.
3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un
volum egal cu cel situat între cele două semne care
delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta
este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI
JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi
cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a
vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa
cum “STRATUL DE SUS” se ridică.
4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml
de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului.
EESTI
SVENSKA
5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ
200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin
aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE
JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea
lor într-un tub steril de centrifugă.
*Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids
trebuie să fie evaluată şi luată în considerare
când se determină timpul şi viteza proprie
pentru centrifugare. Acestea trebuie
ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei
individuale în vederea optimizării procesului
de prelucrare.
6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml
mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS
Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126)
cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate.
Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi
supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua
spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi
granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat.
Mostra acum este gata pentru analiză.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI
STABILITATE
Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate
la 2º to 8ºC.
Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator
la temperatură (37°C) înainte de a utilliza.
Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari.
ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta
de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare.
PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs.
Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule
sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă)
ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se
foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale
nivelurilor de pH.
Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau
suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de
contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice.
Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă
rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului
pentru a fi înlocuit.
AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA)
nu permit vânzarea acestui aparat numai
la comanda unui medic sau pe bază de
comanadă.
PRODUKTBESKRIVNING
ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att
separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska.
Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt
förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda
spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande
provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier.
ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad
kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF.
Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3.
ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits
negativ för pyrogener.
BRUKSANVISNING
Katalognr 99264 - KOLLOIDAL
KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I
TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %)
A. Rekommenderat material:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL,
50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och
bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet
ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel.
Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION
90 % densitetsgradient-medium för användning i en
procedur i ett steg eller för ytterligare spädning.
A. Rekommenderat material:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och
pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock
Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut
- (ingen ytterligare spädning krävs - Stock
Solution är på 90 %)
b) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och
10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover).
Katalognr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till
densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma
densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna
50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa
gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas
för effektivitet.
A. Rekommenderat material:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific katalognr 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4
gånger så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel.
Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte
en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är
relativa koncentrationer baserade på tidigare
nomenklatur som definierade en 1:9-spädning
av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 %
fungerande, isoton lösning.
ALLMÄNT FÖRFARANDE
Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska.
Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa
det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient,
kryopreserverad sperma, treskiktsgradient).
1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller
37 °C.
2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av
“BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör
för engångsbruk.
3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym
“TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs
genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret
sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt
“TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral
runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand
som “TOPPSKIKT”-nivån ökar.
4.
Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på
“TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett.
5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.*
Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen
suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom
att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt
centrifugrör.
*Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas
och tas i beaktande vid bestämning av korrekt
centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör
justeras i enlighet med det enskilda provets
kvalitet, för optimering av förfarandet.
6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL
lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium
(IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr
90126) med proteinsupplement. Resuspendera den
isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10
minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta
steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och
resuspendera pelleten med användning av en adekvat
volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC.
Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur
före användning.
Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer.
ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges
på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt
anvisningarna.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna
produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller
partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn
grumlighet).
ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en
CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks.
Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel,
antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik
vid hantering, så att kontamination undviks.
Om produkten är skadad får den inte
användas. Kassera den eller returnera den
till tillverkaren för utbyte.
OBS! Enligt federal (USA) lag får denna
produkt endast säljas av eller på ordination
av läkare.
TOOTE KIRJELDUS
ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud
liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust.
Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt
rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude
ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov
sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide.
ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis
membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste
kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse
silaaniga.
Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku
pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on
pürogeenide suhtes negatiivne.
KASUTUSJUHEND
Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS
KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES
KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%)
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate
• Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või
100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed,
ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
• Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise
gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake
toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION
90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises
protseduuris või edasiseks lahjendamiseks.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific katalooginr 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
Ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr
99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse
tsentrifuugi tuubi.
b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit
steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage
- (edasine lahjendamine ei ole vajalik
- STOCK SOLUTION on 90%)
b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS:
Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist
kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku
proovi.)
Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks
tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja
tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile.
ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule
ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma
äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides
gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate® kontsentraat
•Irvine Scientific katalooginr 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta
endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90%
kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone,
mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille
järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise
töölahusega.
ÜLDINE PROTSEDUUR
Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust
gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur
Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori
eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud
seemnevedelik, kolmekihiline gradient).
1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st
37°C.
2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL
ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse
tsentrifuugituubi.
3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI
peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige
pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda.
Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti
otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina
ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes.
4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d
seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks
uut steriilset pipetti.
5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20
minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas
ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise
teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude
steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel.
*Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja
määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta
spermaproovi kvaliteeti.
Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust
ja aega korrigeerida vastavalt proovi
kvaliteedite.
6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL
sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium
(IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi
nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige
isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures
8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda
sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant
ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades
selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd
analüüsimiseks valmis.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS
Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril
2 º... 8 ºC.
Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori
temperatuurile (37°C).
Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte.
ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud
tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud
tingimustes.
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks
tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava
koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud
kasutuse alal.
ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul
normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata
osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus).
ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema
tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s.
Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega
proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege
vahendeid aseptilist tehnikat kasutades.
Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada.
Palun visake ära või tagastage tootjale, kes
selle asendab.
ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus
piirab seadme müüki ning see võib toimuda
üksnes arsti poolt või arsti korraldusel.
ISolate®
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze
bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn
gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan
in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level
(SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen
bij een konijnpyrogeentest.
GEBRUIKSAANWIJZING
C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE
CONCENTRATIES (50% en 90%)
A.Voorgestelde materialen:
ISolate
• Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of
100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
• Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul
van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik.
Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in
de productbijsluiter.
Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION
90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een
enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific catalogusnr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200
- 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de
“BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren
of de pellet direct te verwijderen en over te brengen
naar een nieuw steriel centrifugebuisje.
*Opm.: de kwaliteit van het spermamonster
dient te worden beoordeeld en in aanmerking
te worden genomen bij het bepalen van de
juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze
moeten worden aangepast aan de individuele
monsterkwaliteit zodat een optimale
procedure wordt verkregen.
6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een
geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS
catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr.
90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de
geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8
-10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze
stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af
en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van
het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT
Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C.
Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of
incubatortemperatuur (37 °C).
Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen.
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE
Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in
dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer
en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter
bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan
kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die
op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate® concentraat
•Irvine Scientific catalogusnr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 4,5 ml in een
steriel centrifugebuisje
b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig
3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE
in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en
10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking
van ca. 5 semen monsters.)
Opm.: de aanduidingen 50% en 90%
vertegenwoordigen geen werkelijke
concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve
concentraties gebaseerd op de vorige
nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van
Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende,
isotone oplossing
ALGEMENE PROCEDURE
Hieronder wordt een algemene procedure beschreven
voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma
en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden
aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv.
minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt).
op
2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de
“ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch
wegwerpcentrifugebuisje.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen
voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van
een nieuw steriel pipet.
Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het
stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker
van de doos en fles is vermeld.
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr.
99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
(catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van
de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een
dop - (Geen verdere verdunningen
noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%)
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE
PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.:
10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn
voldoende voor de bewerking van ca. 5
semenmonsters.)
1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n
omgevingstemperatuur of 37 °C.
ROMÂNĂ
POLSKI
NEDERLANDS
PRODUCTBESCHRIJVING
ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is
om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van
de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem
vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals
dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het
resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma.
3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume
van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste
gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden
bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE
LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden
met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE
LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse
spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te
draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt.
ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product.
Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes
bevat of besmet is (niet-uniform troebel).
ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als
het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen
te vermijden.
Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica
of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om
besmettingsproblemen te vermijden.
Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren
of terugsturen naar de fabrikant voor een
vervanging.
VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse
federale wetgeving mag dit product alleen
door of op voorschrift van een arts worden
verkocht.
OPIS PRODUKTU
ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną
do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu
nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest
skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych,
takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe
zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie
ruchliwe plemniki.
ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie
przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu,
stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym
krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny
poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został
przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy
użyciu testu króliczych pirogenów.,
WSKAZÓWKI UŻYCIA
Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA
KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W
DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%)
A. Sugerowane materiały:
ISolate
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml
lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania
nasienia
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne,
jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z
gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia.
Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej
ulotki o leku.
Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR
ZAPASOWY
Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w
jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania.
A. Sugerowane materiały:
ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr
katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do
sterylnej probówki wirówkowej
b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza
nie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA
SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej
i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne
dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR
ZAPASOWY jest 90%)
b) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml
warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy
na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY
Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania
na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze
i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®.
STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem
50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce.
Każde laboratorium może przygotować swoje własne
roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod
względem ich skuteczności.
A. Sugerowane materiały:
Stężony roztwór ISolate®
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid
(nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 azy, aby umożliwić dokładne
wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4
razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10
ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej
wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Uwaga: Terminy 50% i 90% nie
odpowiadają
właściwym stężeniom. 50% i 90% są
odpowiadającymi stężeniami opartymi na
porzedniej nomenklaturze, która
definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu
Percoll®
jako równe z 100% pracującym, roztworem
izotonicznym.
PROCEDURA OGÓLNA
Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej
separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i
stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z
preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie
zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy).
1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej
lub 37 °C.
2.
Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml
„DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej,
stożkowej probówki wirówkowej.
3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową
objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ
WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie
końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY”
z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ
WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem
końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem
wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu
„GÓRNEJ WARSTWY”.
4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na
„GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej
pipety.
5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około
200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez
zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub
bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej
sterylnej probówki.
*Uwaga: Jakość próbki nasienia należy
zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania
odpowiedniego czasu i szybkości wirowania.
Należy je dopasować zgodnie z jakością
indywidualnej próbki w celu optymalizacji
procedury.
6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml
odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm
Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified
HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka.
Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg)
przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap
w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie
zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej
pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI
Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce
o temperaturze 2º C do 8 ºC.
Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37
°C) przed użyciem.
Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich
temperatur.
ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności
wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy
przechowywany zgodnie z instrukcją.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego
produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której
widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie
(nierównomierne zmętnienie).
ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania
inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH.
Ten produkt nie zawiera środków konserwujących,
antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć
próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym
produktem należy stosować technikę aseptyczną.
Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy
wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu
dokonania wymiany.
U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w
Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego
urządzenia tylko przez lub na polecenie
lekarza.
DESCRIEREA PRODUSULUI
ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie
destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din
lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce
contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă,
leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin
predominant spermatozoizi mobile.
ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care
conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate
prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată
HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de
(SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure
şi găsit apirogen .
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA
S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă
CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%)
A. Materiale propuse:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL,
50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu
gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă.
Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful
utilizarea produsului.
Catalog # 99275 STOCK SOLUTION
Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în
prima treaptă sau pentru diluări ulterioare.
A. Materiale propuse:
ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate
•Irvine Scientific Catalog #99275
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă
sterilă
b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi
realiza amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub
steril de centrifugă cu capac - (nu este
necesară diluţia ulterioară - soluţia
STOCK are concentraţia de 90%)
b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi
10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Catalog # 99306 CONCENTRATE
Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a
densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi
aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate®
CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de
50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la
90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la
diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate.
A. Materiale propuse:
ISolate® Concentrat
•Irvine Scientific Catalog #99306
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306)
şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de
centrifugă
b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza
amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete
de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă
b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid
(Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată
cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea
completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10
ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă
concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt
concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară
care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® ,
identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru.
PROCEDURI GENERALE
Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume
de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul
şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele
fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea
spermei, gradient în trei straturi.)
1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura
camerei sau 37°C.
2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din
“STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă
conică de unică folosinţă.
3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un
volum egal cu cel situat între cele două semne care
delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta
este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI
JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi
cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a
vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa
cum “STRATUL DE SUS” se ridică.
4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml
de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului.
EESTI
SVENSKA
5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ
200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin
aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE
JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea
lor într-un tub steril de centrifugă.
*Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids
trebuie să fie evaluată şi luată în considerare
când se determină timpul şi viteza proprie
pentru centrifugare. Acestea trebuie
ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei
individuale în vederea optimizării procesului
de prelucrare.
6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml
mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS
Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126)
cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate.
Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi
supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua
spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi
granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat.
Mostra acum este gata pentru analiză.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI
STABILITATE
Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate
la 2º to 8ºC.
Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator
la temperatură (37°C) înainte de a utilliza.
Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari.
ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta
de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare.
PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs.
Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule
sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă)
ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se
foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale
nivelurilor de pH.
Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau
suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de
contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice.
Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă
rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului
pentru a fi înlocuit.
AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA)
nu permit vânzarea acestui aparat numai
la comanda unui medic sau pe bază de
comanadă.
PRODUKTBESKRIVNING
ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att
separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska.
Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt
förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda
spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande
provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier.
ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad
kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF.
Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3.
ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits
negativ för pyrogener.
BRUKSANVISNING
Katalognr 99264 - KOLLOIDAL
KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I
TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %)
A. Rekommenderat material:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL,
50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och
bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet
ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel.
Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION
90 % densitetsgradient-medium för användning i en
procedur i ett steg eller för ytterligare spädning.
A. Rekommenderat material:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och
pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock
Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut
- (ingen ytterligare spädning krävs - Stock
Solution är på 90 %)
b) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och
10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover).
Katalognr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till
densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma
densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna
50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa
gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas
för effektivitet.
A. Rekommenderat material:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific katalognr 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4
gånger så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel.
Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte
en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är
relativa koncentrationer baserade på tidigare
nomenklatur som definierade en 1:9-spädning
av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 %
fungerande, isoton lösning.
ALLMÄNT FÖRFARANDE
Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska.
Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa
det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient,
kryopreserverad sperma, treskiktsgradient).
1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller
37 °C.
2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av
“BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör
för engångsbruk.
3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym
“TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs
genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret
sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt
“TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral
runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand
som “TOPPSKIKT”-nivån ökar.
4.
Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på
“TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett.
5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.*
Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen
suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom
att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt
centrifugrör.
*Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas
och tas i beaktande vid bestämning av korrekt
centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör
justeras i enlighet med det enskilda provets
kvalitet, för optimering av förfarandet.
6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL
lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium
(IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr
90126) med proteinsupplement. Resuspendera den
isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10
minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta
steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och
resuspendera pelleten med användning av en adekvat
volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC.
Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur
före användning.
Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer.
ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges
på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt
anvisningarna.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna
produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller
partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn
grumlighet).
ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en
CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks.
Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel,
antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik
vid hantering, så att kontamination undviks.
Om produkten är skadad får den inte
användas. Kassera den eller returnera den
till tillverkaren för utbyte.
OBS! Enligt federal (USA) lag får denna
produkt endast säljas av eller på ordination
av läkare.
TOOTE KIRJELDUS
ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud
liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust.
Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt
rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude
ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov
sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide.
ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis
membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste
kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse
silaaniga.
Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku
pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on
pürogeenide suhtes negatiivne.
KASUTUSJUHEND
Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS
KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES
KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%)
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate
• Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või
100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed,
ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
• Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise
gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake
toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION
90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises
protseduuris või edasiseks lahjendamiseks.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific katalooginr 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
Ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr
99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse
tsentrifuugi tuubi.
b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit
steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage
- (edasine lahjendamine ei ole vajalik
- STOCK SOLUTION on 90%)
b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS:
Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist
kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku
proovi.)
Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks
tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja
tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile.
ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule
ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma
äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides
gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate® kontsentraat
•Irvine Scientific katalooginr 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta
endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90%
kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone,
mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille
järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise
töölahusega.
ÜLDINE PROTSEDUUR
Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust
gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur
Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori
eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud
seemnevedelik, kolmekihiline gradient).
1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st
37°C.
2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL
ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse
tsentrifuugituubi.
3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI
peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige
pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda.
Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti
otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina
ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes.
4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d
seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks
uut steriilset pipetti.
5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20
minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas
ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise
teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude
steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel.
*Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja
määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta
spermaproovi kvaliteeti.
Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust
ja aega korrigeerida vastavalt proovi
kvaliteedite.
6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL
sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium
(IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi
nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige
isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures
8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda
sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant
ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades
selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd
analüüsimiseks valmis.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS
Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril
2 º... 8 ºC.
Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori
temperatuurile (37°C).
Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte.
ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud
tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud
tingimustes.
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks
tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava
koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud
kasutuse alal.
ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul
normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata
osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus).
ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema
tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s.
Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega
proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege
vahendeid aseptilist tehnikat kasutades.
Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada.
Palun visake ära või tagastage tootjale, kes
selle asendab.
ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus
piirab seadme müüki ning see võib toimuda
üksnes arsti poolt või arsti korraldusel.
ISolate®
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze
bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn
gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan
in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level
(SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen
bij een konijnpyrogeentest.
GEBRUIKSAANWIJZING
C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE
CONCENTRATIES (50% en 90%)
A.Voorgestelde materialen:
ISolate
• Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of
100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
• Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul
van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik.
Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in
de productbijsluiter.
Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION
90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een
enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific catalogusnr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200
- 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de
“BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren
of de pellet direct te verwijderen en over te brengen
naar een nieuw steriel centrifugebuisje.
*Opm.: de kwaliteit van het spermamonster
dient te worden beoordeeld en in aanmerking
te worden genomen bij het bepalen van de
juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze
moeten worden aangepast aan de individuele
monsterkwaliteit zodat een optimale
procedure wordt verkregen.
6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een
geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS
catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr.
90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de
geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8
-10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze
stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af
en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van
het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT
Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C.
Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of
incubatortemperatuur (37 °C).
Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen.
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE
Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in
dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer
en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter
bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan
kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die
op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate® concentraat
•Irvine Scientific catalogusnr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 4,5 ml in een
steriel centrifugebuisje
b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig
3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE
in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en
10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking
van ca. 5 semen monsters.)
Opm.: de aanduidingen 50% en 90%
vertegenwoordigen geen werkelijke
concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve
concentraties gebaseerd op de vorige
nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van
Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende,
isotone oplossing
ALGEMENE PROCEDURE
Hieronder wordt een algemene procedure beschreven
voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma
en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden
aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv.
minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt).
op
2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de
“ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch
wegwerpcentrifugebuisje.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen
voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van
een nieuw steriel pipet.
Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het
stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker
van de doos en fles is vermeld.
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr.
99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
(catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van
de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een
dop - (Geen verdere verdunningen
noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%)
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE
PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.:
10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn
voldoende voor de bewerking van ca. 5
semenmonsters.)
1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n
omgevingstemperatuur of 37 °C.
ROMÂNĂ
POLSKI
NEDERLANDS
PRODUCTBESCHRIJVING
ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is
om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van
de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem
vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals
dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het
resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma.
3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume
van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste
gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden
bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE
LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden
met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE
LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse
spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te
draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt.
ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product.
Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes
bevat of besmet is (niet-uniform troebel).
ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als
het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen
te vermijden.
Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica
of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om
besmettingsproblemen te vermijden.
Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren
of terugsturen naar de fabrikant voor een
vervanging.
VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse
federale wetgeving mag dit product alleen
door of op voorschrift van een arts worden
verkocht.
OPIS PRODUKTU
ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną
do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu
nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest
skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych,
takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe
zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie
ruchliwe plemniki.
ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie
przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu,
stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym
krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny
poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został
przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy
użyciu testu króliczych pirogenów.,
WSKAZÓWKI UŻYCIA
Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA
KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W
DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%)
A. Sugerowane materiały:
ISolate
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml
lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania
nasienia
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne,
jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z
gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia.
Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej
ulotki o leku.
Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR
ZAPASOWY
Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w
jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania.
A. Sugerowane materiały:
ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr
katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do
sterylnej probówki wirówkowej
b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza
nie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA
SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej
i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne
dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR
ZAPASOWY jest 90%)
b) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml
warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy
na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY
Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania
na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze
i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®.
STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem
50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce.
Każde laboratorium może przygotować swoje własne
roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod
względem ich skuteczności.
A. Sugerowane materiały:
Stężony roztwór ISolate®
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid
(nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 azy, aby umożliwić dokładne
wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4
razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10
ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej
wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Uwaga: Terminy 50% i 90% nie
odpowiadają
właściwym stężeniom. 50% i 90% są
odpowiadającymi stężeniami opartymi na
porzedniej nomenklaturze, która
definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu
Percoll®
jako równe z 100% pracującym, roztworem
izotonicznym.
PROCEDURA OGÓLNA
Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej
separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i
stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z
preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie
zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy).
1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej
lub 37 °C.
2.
Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml
„DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej,
stożkowej probówki wirówkowej.
3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową
objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ
WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie
końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY”
z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ
WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem
końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem
wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu
„GÓRNEJ WARSTWY”.
4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na
„GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej
pipety.
5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około
200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez
zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub
bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej
sterylnej probówki.
*Uwaga: Jakość próbki nasienia należy
zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania
odpowiedniego czasu i szybkości wirowania.
Należy je dopasować zgodnie z jakością
indywidualnej próbki w celu optymalizacji
procedury.
6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml
odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm
Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified
HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka.
Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg)
przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap
w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie
zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej
pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI
Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce
o temperaturze 2º C do 8 ºC.
Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37
°C) przed użyciem.
Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich
temperatur.
ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności
wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy
przechowywany zgodnie z instrukcją.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego
produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której
widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie
(nierównomierne zmętnienie).
ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania
inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH.
Ten produkt nie zawiera środków konserwujących,
antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć
próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym
produktem należy stosować technikę aseptyczną.
Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy
wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu
dokonania wymiany.
U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w
Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego
urządzenia tylko przez lub na polecenie
lekarza.
DESCRIEREA PRODUSULUI
ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie
destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din
lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce
contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă,
leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin
predominant spermatozoizi mobile.
ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care
conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate
prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată
HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de
(SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure
şi găsit apirogen .
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA
S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă
CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%)
A. Materiale propuse:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL,
50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu
gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă.
Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful
utilizarea produsului.
Catalog # 99275 STOCK SOLUTION
Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în
prima treaptă sau pentru diluări ulterioare.
A. Materiale propuse:
ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate
•Irvine Scientific Catalog #99275
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă
sterilă
b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi
realiza amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub
steril de centrifugă cu capac - (nu este
necesară diluţia ulterioară - soluţia
STOCK are concentraţia de 90%)
b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi
10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Catalog # 99306 CONCENTRATE
Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a
densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi
aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate®
CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de
50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la
90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la
diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate.
A. Materiale propuse:
ISolate® Concentrat
•Irvine Scientific Catalog #99306
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306)
şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de
centrifugă
b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza
amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete
de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă
b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid
(Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată
cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea
completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10
ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă
concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt
concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară
care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® ,
identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru.
PROCEDURI GENERALE
Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume
de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul
şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele
fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea
spermei, gradient în trei straturi.)
1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura
camerei sau 37°C.
2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din
“STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă
conică de unică folosinţă.
3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un
volum egal cu cel situat între cele două semne care
delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta
este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI
JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi
cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a
vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa
cum “STRATUL DE SUS” se ridică.
4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml
de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului.
EESTI
SVENSKA
5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ
200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin
aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE
JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea
lor într-un tub steril de centrifugă.
*Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids
trebuie să fie evaluată şi luată în considerare
când se determină timpul şi viteza proprie
pentru centrifugare. Acestea trebuie
ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei
individuale în vederea optimizării procesului
de prelucrare.
6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml
mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS
Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126)
cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate.
Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi
supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua
spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi
granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat.
Mostra acum este gata pentru analiză.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI
STABILITATE
Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate
la 2º to 8ºC.
Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator
la temperatură (37°C) înainte de a utilliza.
Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari.
ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta
de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare.
PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs.
Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule
sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă)
ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se
foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale
nivelurilor de pH.
Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau
suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de
contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice.
Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă
rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului
pentru a fi înlocuit.
AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA)
nu permit vânzarea acestui aparat numai
la comanda unui medic sau pe bază de
comanadă.
PRODUKTBESKRIVNING
ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att
separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska.
Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt
förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda
spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande
provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier.
ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad
kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF.
Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3.
ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits
negativ för pyrogener.
BRUKSANVISNING
Katalognr 99264 - KOLLOIDAL
KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I
TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %)
A. Rekommenderat material:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL,
50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och
bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet
ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel.
Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION
90 % densitetsgradient-medium för användning i en
procedur i ett steg eller för ytterligare spädning.
A. Rekommenderat material:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och
pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock
Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut
- (ingen ytterligare spädning krävs - Stock
Solution är på 90 %)
b) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och
10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover).
Katalognr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till
densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma
densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna
50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa
gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas
för effektivitet.
A. Rekommenderat material:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific katalognr 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4
gånger så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel.
Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte
en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är
relativa koncentrationer baserade på tidigare
nomenklatur som definierade en 1:9-spädning
av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 %
fungerande, isoton lösning.
ALLMÄNT FÖRFARANDE
Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska.
Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa
det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient,
kryopreserverad sperma, treskiktsgradient).
1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller
37 °C.
2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av
“BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör
för engångsbruk.
3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym
“TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs
genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret
sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt
“TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral
runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand
som “TOPPSKIKT”-nivån ökar.
4.
Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på
“TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett.
5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.*
Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen
suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom
att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt
centrifugrör.
*Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas
och tas i beaktande vid bestämning av korrekt
centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör
justeras i enlighet med det enskilda provets
kvalitet, för optimering av förfarandet.
6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL
lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium
(IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr
90126) med proteinsupplement. Resuspendera den
isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10
minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta
steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och
resuspendera pelleten med användning av en adekvat
volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC.
Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur
före användning.
Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer.
ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges
på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt
anvisningarna.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna
produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller
partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn
grumlighet).
ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en
CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks.
Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel,
antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik
vid hantering, så att kontamination undviks.
Om produkten är skadad får den inte
användas. Kassera den eller returnera den
till tillverkaren för utbyte.
OBS! Enligt federal (USA) lag får denna
produkt endast säljas av eller på ordination
av läkare.
TOOTE KIRJELDUS
ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud
liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust.
Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt
rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude
ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov
sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide.
ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis
membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste
kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse
silaaniga.
Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku
pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on
pürogeenide suhtes negatiivne.
KASUTUSJUHEND
Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS
KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES
KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%)
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate
• Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või
100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed,
ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
• Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise
gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake
toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION
90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises
protseduuris või edasiseks lahjendamiseks.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific katalooginr 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
Ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr
99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse
tsentrifuugi tuubi.
b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit
steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage
- (edasine lahjendamine ei ole vajalik
- STOCK SOLUTION on 90%)
b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS:
Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist
kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku
proovi.)
Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks
tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja
tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile.
ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule
ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma
äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides
gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate® kontsentraat
•Irvine Scientific katalooginr 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta
endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90%
kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone,
mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille
järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise
töölahusega.
ÜLDINE PROTSEDUUR
Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust
gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur
Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori
eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud
seemnevedelik, kolmekihiline gradient).
1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st
37°C.
2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL
ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse
tsentrifuugituubi.
3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI
peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige
pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda.
Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti
otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina
ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes.
4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d
seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks
uut steriilset pipetti.
5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20
minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas
ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise
teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude
steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel.
*Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja
määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta
spermaproovi kvaliteeti.
Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust
ja aega korrigeerida vastavalt proovi
kvaliteedite.
6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL
sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium
(IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi
nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige
isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures
8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda
sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant
ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades
selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd
analüüsimiseks valmis.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS
Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril
2 º... 8 ºC.
Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori
temperatuurile (37°C).
Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte.
ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud
tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud
tingimustes.
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks
tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava
koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud
kasutuse alal.
ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul
normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata
osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus).
ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema
tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s.
Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega
proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege
vahendeid aseptilist tehnikat kasutades.
Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada.
Palun visake ära või tagastage tootjale, kes
selle asendab.
ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus
piirab seadme müüki ning see võib toimuda
üksnes arsti poolt või arsti korraldusel.
ISolate®
Catalog No. 99264
12 x 6 mL, 2 x 50 mL, 2 x 100 mL
Ready to Use Density Gradient
Medium at Two Concentrations
Catalog No. 99275
Stock Solution
100 mL
Catalog No. 99306 Concentrate
100 mL
REFERENCES
Adaniya GK, Jackson KV: Comparison of Percoll®
and ISolate® in the Preparation of Semen for
use in Assisted Reproductive Technologies. 53rd
Annual Meeting of the American Society for Reproductive
Medicine, Cincinnati, Ohio; 0-113, 1997.
Symbols:
Catalog Number
Lot Number
Tarchala SM, Fahy MM, Hauserman HM, Kallmann K,
Volentine K, Radwanska E, Binor Z, Molo MW, Rawlins RG:
ISolate® As a New Method of Sperm Separation.
53rd Annual Meeting of the American Society for Reproductive Medicine, Cincinnati, Ohio; P-116, 1998.
Miller, KF, Fry KL, Arciaga RL, Falcone T: Semen
preparation for in-vitro fertilization using ISolate® results in sperm recovery, fertilization and
pregnancy outcomes that are indistinguishable
from those obtained with Percoll®. 14th Embryology,
Goteborg, Sweden; P-116, 1998.
Tarchala SM, Volentine KK, Rawlins RG: A comparison
of sperm processing using ISolate® and Pure
Sperm™. 14th Annual Meeting of the European Society
of Human Reproduction and Embryology, Goteborg,
Sweden; R-041, 1998.
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution:See instructions
for use
European Representative
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
See instructions
for use.
Storage Temperature
CE Mark
0050
0050
ISolate is a Registered Trademark of Irvine Scientific
®
Percoll ® is a Registered Trademark of Pharmacia
Biotech, AB Sweden
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ISolate is een membraangefilterde, op aseptische wijze
bewerkte colloïdale suspensie van silicadeeltjes die zijn
gestabiliseerd met covalent gebonden, hydrofiel silaan
in HEPES-gebufferde HTF. Het Sterility Assurance Level
(SAL) is 10-3. ISolate is negatief gebleken voor pyrogenen
bij een konijnpyrogeentest.
GEBRUIKSAANWIJZING
C a t a l o g u s n r. 9 9 2 6 4 - K A N T- E N KLAAR COLLOÏDAAL SILICA IN TWEE
CONCENTRATIES (50% en 90%)
A.Voorgestelde materialen:
ISolate
• Irvine Scientific catalogusnr. 99264 (6ml, 50ml of
100 ml ampulkit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
• Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Geen voorafgaande verdunningen noodzakelijk. Elke ampul
van bovenste en onderste laaggradiënt is klaar voor gebruik.
Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE in
de productbijsluiter.
Catalogusnr. 99275 - STOCK SOLUTION
90% dichtheidsgradiëntmedium voor gebruik in een
enkelvoudige procedure of voor verdere verdunning.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific catalogusnr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
5. Centrifugeer gedurende 10-20 minuten bij ca. 200
- 300xg.* Stel de pellet voorzichtig bloot door de
“BOVENSTE” en “ONDERSTE LAGEN” te aspireren
of de pellet direct te verwijderen en over te brengen
naar een nieuw steriel centrifugebuisje.
*Opm.: de kwaliteit van het spermamonster
dient te worden beoordeeld en in aanmerking
te worden genomen bij het bepalen van de
juiste centrifugeersnelheid en -tijd. Deze
moeten worden aangepast aan de individuele
monsterkwaliteit zodat een optimale
procedure wordt verkregen.
6. Voeg met een nieuw steriel pipet 2,0 - 3,0 ml van een
geschikt wasmiddel zoals Sperm Washing Medium (IS
catalogusnr. 9983) of Modified HTF (IS catalogusnr.
90126) met eiwitsupplement toe. Resuspendeer de
geïsoleerde pellet. Centrifugeer (~200xg) gedurende 8
-10 minuten en verwijder het supernatant. Herhaal deze
stap voor een tweede wasbeurt. Voer het supernatant af
en resuspendeer de pellet met een geschikt volume van
het juiste medium. Het monster is nu klaar voor analyse.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT
Bewaar de ongeopende containers gekoeld bij 2 °C tot 8 °C.
Vóór gebruik opwarmen tot omgevingstemperatuur of
incubatortemperatuur (37 °C).
Niet invriezen of blootstellen aan hoge temperaturen.
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
Catalogusnr. 99306 - CONCENTRATE
Colloïdaal silicaconcentraat voor verdere verdunning in
dichtheidsgradiënten; geformuleerd in een isotone buffer
en benadert de dichtheid van onverdund Percoll®. ISolate®
CONCENTRATE werd beoordeeld volgens deze bijsluiter
bij een gradiënt van 50% en 90%. Elke laboratorium kan
kiezen voor gradiënten bij verschillende concentraties die
op effectiviteit dienen te worden gecontroleerd.
A.Voorgestelde materialen:
ISolate® concentraat
•Irvine Scientific catalogusnr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific catalogusnr. 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific catalogusnr. 9983
Steriele, conische wegwerpcentrifugebuisjes
•Irvine Scientific catalogusnr. IS-325
Pasteurpipetten, steriel
Centrifugeren
Incubator, 37 °C
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 4,5 ml in een
steriel centrifugebuisje
b) Voeg 5,5 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze voorzichtig
3-4 keer om zodat de inhoud goed wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Neem het CONCENTRATE (catalogusnr.
99306) en pipetteer 8,1 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 1,9 ml Modified Human Tubal
Fluid (catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE PROCEDURE
in de productbijsluiter. (OPM.: 10 ml bovenste laag en
10 ml onderste laag zijn voldoende voor de bewerking
van ca. 5 semen monsters.)
Opm.: de aanduidingen 50% en 90%
vertegenwoordigen geen werkelijke
concentraties. De 50% en 90% zijn relatieve
concentraties gebaseerd op de vorige
nomenclatuur waarbij een 1:9 oplossing van
Percoll® gelijk staat aan een 100% werkende,
isotone oplossing
ALGEMENE PROCEDURE
Hieronder wordt een algemene procedure beschreven
voor een tweestaps gradiëntscheiding van motiel sperma
en semen. Het volume en de concentratie kunnen worden
aangepast aan de voorkeur van elk laboratorium (bijv.
minigradiënt, cryopreservatiesemen, drielaagse gradiënt).
op
2. Breng met een steriel pipet 1,5 - 2,0 ml van de
“ONDERSTE LAAG” over naar een steriel, conisch
wegwerpcentrifugebuisje.
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40558 Rev.10
4. Plaats 1,5 - 2,0 ml van het vloeibaar geworden semen
voorzichtig op de “BOVENSTE LAAG” met behulp van
een nieuw steriel pipet.
Als ISolate zoals voorgeschreven wordt bewaard, is het
stabiel tot aan de houdbaarheidsdatum die op de sticker
van de doos en fles is vermeld.
B. Gradiëntpreparatie:
Er zijn twee oplossingen nodig voor de
gradiëntspermascheidingsmethode: een bovenste laag
en een onderste laag.
1. Oplossing bovenste laag - 50%:
a) Neem de STOCK SOLUTION (catalogusnr.
99275) en pipetteer 5,6 ml in een steriel
centrifugebuisje
b) Voeg 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
(catalogusnr. 90126) toe
c) Draai de dop op het buisje en keer deze
voorzichtig 3-4 keer om zodat de inhoud goed
wordt gemengd
b) Plak een sticker met de tekst “BOVENSTE
LAAG” op het buisje
2. Oplossing onderste laag - 90%:
a) Vul een steriel centrifugebuisje met 10 ml van
de STOCK SOLUTION en sluit dit af met een
dop - (Geen verdere verdunningen
noodzakelijk - STOCK SOLUTION is 90%)
b) Plak een sticker met de tekst “ONDERSTE
LAAG” op het buisje
3. Ga door naar het gedeelte ALGEMENE
PROCE DURE in de productbijsluiter. (OPM.:
10 ml bovenste laag en 10 ml onderste laag zijn
voldoende voor de bewerking van ca. 5
semenmonsters.)
1. B r e n g a l l e m e d i a c o m p o n e n t e n
omgevingstemperatuur of 37 °C.
ROMÂNĂ
POLSKI
NEDERLANDS
PRODUCTBESCHRIJVING
ISolate® is een dichtheidsgradiëntmedium dat ontworpen is
om het motiele gedeelte van het sperma te scheiden van
de spermavloeistof. Als een tweelaags gradiëntsysteem
vermindert het effectief celverontreinigende stoffen zoals
dood sperma, witte bloedcellen en ander afval. Het
resulterende monster bevat voornamelijk motiel sperma.
3. Breng met een nieuw steriel pipet een gelijk volume
van de “BOVENSTE LAAG” over naar het bovenste
gedeelte van de “ONDERSTE LAAG”. Dit kan worden
bereikt door het oppervlak van de “ONDERSTE
LAAG” tegen de zijkant van het buisje te houden
met de punt van het pipet. Pipetteer de “BOVENSTE
LAAG” voorzichtig door de pipetpunt in een opwaartse
spiraalbeweging rondom de omtrek van het buisje te
draaien als het niveau van de “BOVENSTE LAAG” stijgt.
ISolate zal er opaak uitzien. Dit is normaal voor dit product.
Gebruik geen ampullen met een medium dat (vaste) deeltjes
bevat of besmet is (niet-uniform troebel).
ISolate dient goed met een dop te worden afgesloten als
het wordt gebruikt in een CO2-incubator om pH-wijzigingen
te vermijden.
Dit product bevat geen conserveringsmiddelen, antibiotica
of eiwitsupplementen. Gebruik aseptische methoden om
besmettingsproblemen te vermijden.
Niet gebruiken indien beschadigd. Afvoeren
of terugsturen naar de fabrikant voor een
vervanging.
VOORZICHTIG: volgens de Amerikaanse
federale wetgeving mag dit product alleen
door of op voorschrift van een arts worden
verkocht.
OPIS PRODUKTU
ISolate® jest pożywką z gradientem gęstości, stworzoną
do rozdziału frakcji plemników ruchliwych od płynu
nasiennego. Ten system o dwupoziomowym gradiencie jest
skuteczny w redukowaniu zanieczyszczeń komórkowych,
takich jak martwe plemniki, białe ciałka krwi i szczątkowe
zanieczyszczenia. Powstała próbka zawiera głównie
ruchliwe plemniki.
ISolate jest to filtrowana membranowo, aseptycznie
przetwarzana zawiesina krzemionkowa cząsek krzemu,
stabilizowana kowalentnie związanym hydrofilowym
krzemem w HTF zbuforowanym HEPES. Bezpieczny
poziom sterylności (SAL) wynosi 10 -3. ISolate został
przetestowany i reagował negatywnie na pirogeny, przy
użyciu testu króliczych pirogenów.,
WSKAZÓWKI UŻYCIA
Nr katalogowy: 99264 – KRZEMIONKA
KOLOIDALNA GOTOWA DO UŻYCIA W
DWÓCH STĘŻENIACH (50% i 90%)
A. Sugerowane materiały:
ISolate
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99264 (6ml, 50ml
lub 100 ml zestaw fiolek) Pożywka do przemywania
nasienia
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983 Sterylne,
jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
• Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Nie są konieczne wstępne rozcieńczenia. Każda fiolka z
gradientem górnej i dolnej warstwy jest gotowa do użycia.
Kontynuować według części PROCEDURA OGÓLNA tej
ulotki o leku.
Nr katalogowy: 99275 – ROZTWÓR
ZAPASOWY
Pożywka o gradiencie gęstości 90% do użycia w
jednoetapowej procedurze lub do dalszego rozcieńczania.
A. Sugerowane materiały:
ISolate ROZTWÓR ZAPASOWY
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99275
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR ZAPASOWY (nr
katalogowy: 99275) i odpipetować 5,6 ml do
sterylnej probówki wirówkowej
b) Dodać 4.4 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 razy, aby umożliwić dokładne wymiesza
nie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wydzielić 10 ml alikwot ROZTWORU ZAPA
SOWEGO do sterylnej probówki wirówkowej
i zamknąć zatyczką – (nie jest konieczne
dalsze rozcieńczanie – ROZTWÓR
ZAPASOWY jest 90%)
b) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10 ml
warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej wystar czy
na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Nr katalogowy: 99306 - ROZTWÓR STĘŻONY
Stężona krzemionka koloidalna do dalszego rozcieńczania
na gradienty gęstości; sporządzona w izotonicznym buforze
i zbliżona do gęstości nierozcieńczonego roztworu Percoll®.
STĘŻONY ROZTWÓR ISolate® badany był z gradiantem
50% i 90% zgodnie z informacją podaną w niniejszej ulotce.
Każde laboratorium może przygotować swoje własne
roztwory o różnych stężeniach, które będą badane pod
względem ich skuteczności.
A. Sugerowane materiały:
Stężony roztwór ISolate®
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 99306
Zmodyfikowany Ludzki Płyn Jajowodowy
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 90126
Pożywka do przemywania nasienia
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: 9983
Sterylne, jednorazowe, stożkowe probówki wirówkowe
•Nr w Katalogu Irvine Scientific: IS-325
Sterylne pipety Pasteura
Wirówka
Inkubator, 37 °C
B. Przygotowanie roztworu:
Następujące dwa roztwory są wymagane do
przeprowadzenia metody rozdziału nasienia wg gradientu:
Górna warstwa i dolna warstwa.
1. Górna warstwa roztworu - 50%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 4.5 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 5.5 ml do Modified Human Tubal Fluid
(nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać
3-4 azy, aby umożliwić dokładne
wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „GÓRNA
WARSTWA”
2. Dolna warstwa roztworu - 90%:
a) Wziąć ROZTWÓR STĘŻONY (nr katalogowy:
99306) i odpipetować 8.1 ml do sterylnej
probówki wirówkowej
b) Dodać 1.9 ml do Modified Human Tubal
Fluid (nr katalogowy: 90126)
c) Zamknąć probówkę i delikatnie odwracać 3-4
razy, aby umożliwić dokładne wymieszanie.
d) Oznakować probówkę jako „DOLNA
WARSTWA”
3. Kontynuować według części PROCEDURA
OGÓLNA tej ulotki o leku. (UWAGA: 10
ml warstwy górnej i 10 ml warstwy dolnej
wystarczy na przygotowanie 5 próbek nasienia).
Uwaga: Terminy 50% i 90% nie
odpowiadają
właściwym stężeniom. 50% i 90% są
odpowiadającymi stężeniami opartymi na
porzedniej nomenklaturze, która
definiowała rozcieńczenie 1:9 roztworu
Percoll®
jako równe z 100% pracującym, roztworem
izotonicznym.
PROCEDURA OGÓLNA
Poniżej podana jest ogólna procedura dla dwustopniowej
separacji plemników ruchliwych od nasienia. Objętość i
stężenie mogą być zmodyfikowane w celu zgodności z
preferencjami laboratorium (tzn.: mini-gradient, nasienie
zabezpieczone kriogeniczne, roztwór trzywarstwowy).
1. Podgrzać wszystkie podłoża do temperatury pokojowej
lub 37 °C.
2.
Przy użyciu sterylnej pipety, przenieść 1,5 – 2,0 ml
„DOLNEJ WARSTWY” do sterylnej, jednorazowej,
stożkowej probówki wirówkowej.
3. Przy użyciu nowej sterylnej pipety, przenieść jednakową
objętość „GÓRNEJ WARSTWY” na wierzch „DOLNEJ
WARSTWY”. Jest to wykonane przez dotknięcie
końcówką pipety powierzchni „DOLNEJ WARSTWY”
z boku probówki. Ostrożnie odebrać „GÓRNĄ
WARSTWĘ” poprzez poruszanie spiralnym ruchem
końcówki pipety po obwodzie probówki ruchem
wznoszącym, podczas podnoszenia się poziomu
„GÓRNEJ WARSTWY”.
4. Ostrożnie umieścić 1,5 – 2,0 ml płynnego nasienia na
„GÓRNEJ WARSTWIE” przy użyciu nowej sterylnej
pipety.
5. Wirować przez 10-20 minut, przy użyciu siły około
200 - 300xg.* Ostrożnie odsłonić pelet poprzez
zaaspirowanie „GÓRNEJ ” i „DOLNEJ WARSTWY” lub
bezpośrednie zebranie peletu i przeniesienie do nowej
sterylnej probówki.
*Uwaga: Jakość próbki nasienia należy
zbadać i wziąć pod uwagę podczas określania
odpowiedniego czasu i szybkości wirowania.
Należy je dopasować zgodnie z jakością
indywidualnej próbki w celu optymalizacji
procedury.
6. Przy użyciu nowej, sterylnej pipety dodać 2,0 – 3,0 ml
odpowiedniej pożywki przemywającej, jak np.: Sperm
Washing Medium (nr katalogowy IS: 9983) lub Modified
HTF (nr katalogowy IS: 90126) z dodatkiem białka.
Ponownie zawiesić odebrany pelet. Zwirować (~200xg)
przez 8-10 minut i usunąć nadsącz. Powtórzyć ten etap
w drugim przepłukiwaniu. Odebrać nadsącz i ponownie
zawiesić pelet w odpowiedniej objętości właściwej
pożywki. Teraz próbka jest gotowa do analizy.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚCI
Przechowywać w nieotwartych pojemnikach, w chłodziarce
o temperaturze 2º C do 8 ºC.
Podgrzać do temperatury otoczenia lub inkubatora (37
°C) przed użyciem.
Nie zamrażać ani nie poddawać działaniu wysokich
temperatur.
ISolate jest stabilny do upłynięcia daty ważności
wydrukowanej na pudełku i etykiecie butelki, gdy
przechowywany zgodnie z instrukcją.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
ISolate będzie nieprzejrzysty. To jest normalne dla tego
produktu. Nie używać żadnej fiolki z pożywką, w której
widoczne są cząsteczki materii lub zanieczyszczenie
(nierównomierne zmętnienie).
ISolate należy zamknąć szczelnie w przypadku używania
inkubatora CO2, aby uniknąć zmian pH.
Ten produkt nie zawiera środków konserwujących,
antybiotyków ani dodatków białkowych. Aby uniknąć
próblemów z zanieczyszczeniem, posługując się tym
produktem należy stosować technikę aseptyczną.
Nie używać w przypadku uszkodzenia. Należy
wyrzucić lub zwrócić do producenta w celu
dokonania wymiany.
U WA G A : P r a w o f e d e r a l n e ( S t a n ó w
Zjednoczonych) zezwala na sprzedaż tego
urządzenia tylko przez lub na polecenie
lekarza.
DESCRIEREA PRODUSULUI
ISolate® este un mediu cu un gradient de concentraţie
destinat să separe fracţiunile de spermatozoizi mobili din
lichidul seminal Ca şi un sistem gradual pe 2 straturi, reduce
contaminarea celulară de exemplu cu spermă moartă,
leucocite sau alte reziduuri. Rezultă mostre care conţin
predominant spermatozoizi mobile.
ISolate este filtrat prin membrană, prelucrat aseptic care
conţine particule de silicat în suspensie coloidală, stabilizate
prin legături covalente hidrofilice silane solutia tamponată
HEPES- HTF . Nivelul de sterilitate asigurat este de
(SAL)10-3. ISolate a fost testat cu test pirogen de iepure
şi găsit apirogen .
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Catalog #99264- GATA PENTRU FOLOSIREA
S I L I C AT U L U I C O L O I D A L L A D O U Ă
CONCENTRAŢII ( 50 % ŞI 90%)
A. Materiale propuse:
ISolate
• Irvine Scientific Catalog #99264 (kit fiolă de 6mL,
50mL sau 100 mL ) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
• Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Nu este necesară diluarea preliminară. Fiecare fiolă cu
gradientul stratului de sus şi jos este gata pentru folosinţă.
Continuaţi cu PROCEDURI GENERALE, paragraful
utilizarea produsului.
Catalog # 99275 STOCK SOLUTION
Se utilizează 90% din densitatea gradientului de mediu în
prima treaptă sau pentru diluări ulterioare.
A. Materiale propuse:
ISolate STOCK SOLUTION stoc de soluţie ISolate
•Irvine Scientific Catalog #99275
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi STOCK SOLUTION (Catalog #99275)
şi pipaaţi de 5.6 ml într-un tub de centrifugă
sterilă
b) Adăugaţi 4.4 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi
realiza amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Alicot în 10 ml de soluţie STOCK într-un tub
steril de centrifugă cu capac - (nu este
necesară diluţia ulterioară - soluţia
STOCK are concentraţia de 90%)
b) Etichetaţi tubul “ STRATUL DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi
10 ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Catalog # 99306 CONCENTRATE
Concentratul de silicat coloidal pentru mai multă diluare a
densităţii gradientului ; formulat în tamponare isotonică şi
aproximează densitatea nediluată al Percoll®-ului. ISolate®
CONCENTRATE a fost evaluat conform concentraţiei de
50% şi 90%, înscrisă pe pachet gradient de la 50% până la
90%). Fiecare laborator îşi poate alege să facă gradienţii la
diferite concentraţii, care ar trebui evaluat pentru eficacitate.
A. Materiale propuse:
ISolate® Concentrat
•Irvine Scientific Catalog #99306
Lichid uman tubal modificat
•Irvine Scientific Catalog #90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Catalog #9983
Tuburi conice sterile de centrifugă de unică folosinţă
•Irvine Scientific Catalog #IS-325
Pipetă sterilă Pasteur
Centrifugă
Incubator, 37ºC
B. Prepararea Gradientului:
Două soluţii sunt necesare pentru a executa procedeul de
separare a spermatozoizilor Stratul de sus şi stratul de jos.
1. Soluţie stratul de sus -50%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306)
şi pipete de 4.5 ml într-un tub steril de
centrifugă
b) Adăugaţi 5.5 ml de Modified Human Tubal
Fluid (Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare
efectuată cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza
amestecarea completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE SUS”
2. Soluţie stratul de jos -90%.
a) Luaţi CONCENTRATE (Catalog #99306) şi pipete
de 8.1 ml într-un tub steril de centrifugă
b) Adăugaţi 1.9 ml de Modified Human Tubal Fluid
(Catalog# 90126)
c) Puneţi capacul tubului şi prin răsturnare efectuată
cu grijă de 3-4 ori, veţi realiza amestecarea
completă.
d) Etichetaţi tubul ca şi “ STRAT DE JOS”
3. Continuaţi la procedurile generale din instrucţiunile
de folosire. (NOTĂ: 10 ml din stratul de sus şi 10
ml din stratul de jos, va prelucra aproximativ
5 mostre de spermă).
Notă: Termeni de 50% şi 90% nu reprezintă
concentraţia actuală. Cele de 50% şi 90% sunt
concentraţii bazate pe nomenclatura anterioară
care defineşte o diluţie de 1:9 de Percoll® ,
identică în totalitate cu soluţia izotonică de lucru.
PROCEDURI GENERALE
Urmează a doua treaptă de procedură generală şi anume
de separare a spermatozoidului mobil din spermă. Volumul
şi concentraţia pot fi modificate în funcţie de preferinţele
fiecărui laborator. (ex: mini-gradient, crioconservarea
spermei, gradient în trei straturi.)
1. Aduceţi toţi componenţii mediului la temperatura
camerei sau 37°C.
2. Folosind pipetă sterilă, transferaţi 1.5 - 2.0 ml din
“STRATUL DE JOS” într-un tub steril de centrifugă
conică de unică folosinţă.
3. Cu ajutorul unei pipete noi sterile, transferaţi un
volum egal cu cel situat între cele două semne care
delimitează “stratul de sus” şi “stratul de jos”. Aceasta
este făcută prin contactul cu suprafaţei “STRATULUI
JOS” de la marginea tubului cu vârful pipetei. Preparaţi
cu grijă “STRATUL DE SUS” prin învârtirea spiralată a
vârfului pipetei în sus, în jurul circumferinţei tubului aşa
cum “STRATUL DE SUS” se ridică.
4. Cu ajutorul unei pipete sterile puneţi cu blândeţe 1,5-2 ml
de spermă lichefiată până la “nivelul de sus” a tubului.
EESTI
SVENSKA
5. Centrifugaţi timp de 10-20 de minute, la aproximativ
200- 300 xg.* Granulele vor fi expuse cu grijă prin
aspirarea “ STRATULUI DE SUS” şi a “STRATULUI DE
JOS” sau prin scoaterea directă a acestora şi mutarea
lor într-un tub steril de centrifugă.
*Notă: Calitatea mostrei de spermatozoids
trebuie să fie evaluată şi luată în considerare
când se determină timpul şi viteza proprie
pentru centrifugare. Acestea trebuie
ajustate în concordanţă cu calitatea mostrei
individuale în vederea optimizării procesului
de prelucrare.
6. Folosind o pipetă sterilă nouă, adăugaţi 2.0 - 3.0 ml
mediu de spălare utilizând Sperm Washing Medium (IS
Catalog# 9983) sau Modified HTF (IS Catalog #90126)
cu adaos de proteine. Resuspendaţi granulele izolate.
Centrifugaţi (~200xg) pentru 8-10 minute şi îndepărtaţi
supernatantul. Repetaţi această treaptă pentru a doua
spălare. Îndepărtaţi supernatantul şi resuspendaţi
granula folosind un volum potrivit de mediu adecvat.
Mostra acum este gata pentru analiză.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
INSTRUCŢIUNI PENTRU PĂSTRARE ŞI
STABILITATE
Păstraţi sticlele sau containerele nedeschise refrigerate
la 2º to 8ºC.
Încălziţi la temperatura mediului ambiant sau la incubator
la temperatură (37°C) înainte de a utilliza.
Nu congelaţi sau expuneţi la temperaturi mari.
ISolate este stabil până la data expirării înscrise pe eticheta
de pe cutie dacă sunt respectate condiţiile de depozitare.
PRECAUŢII ŞI AVERTISMENTE
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
ISolate va apărea opac. Este normal pentru acest produs.
Nu utilizaţi fiole cu mediu care prezintă reziduuri de particule
sau semne de contaminare (înceţoşare neuniformă)
ISolate ar trebui să fie închis ermetic atunci când se
foloseşte în incubator cu CO2 pentru a evita schimbări ale
nivelurilor de pH.
Acest produs nu conţine conservanţi, antibiotice, sau
suplemente de proteină. Pentru a evita probleme de
contaminare, mânuiţi folosind tehnici aseptice.
Nu se utilizează în caz de deteriorare. Vă
rugăm aruncaţi sau înapoiaţi producătorului
pentru a fi înlocuit.
AVERTISMENT: Legile Federale în (SUA)
nu permit vânzarea acestui aparat numai
la comanda unui medic sau pe bază de
comanadă.
PRODUKTBESKRIVNING
ISolate® är ett densitetsgradientmedium framtaget för att
separera den rörliga spermiefraktionen från sädesvätska.
Detta gradientsystem med två skikt minskar effektivt
förekomsten av cellulära kontaminanter, såsom döda
spermier, vita blodkroppar och annat skräp. Det resulterande
provet innehåller huvudsakligen rörliga spermier.
ISolate är en membranfiltrerad, aseptiskt behandlad
kolloidal suspension av kiselpartiklar stabiliserade med
kovalent bundet hydrofilt silan i HEPES-buffrad HTF.
Sterilitetsnivån (SAL, sterility assurance level) är 10 -3.
ISolate har testats med pyrogentest på kanin och befunnits
negativ för pyrogener.
BRUKSANVISNING
Katalognr 99264 - KOLLOIDAL
KISELDIOXID, FÄRDIG ATT ANVÄNDA, I
TVÅ KONCENTRATIONER (50 % och 90 %)
A. Rekommenderat material:
ISolate
• Irvine Scientific katalognr 99264 (sats med 6 mL,
50mL eller 100 mL ampuller) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Inga förspädningar krävs. Varje ampull med topp- och
bottengradient är färdig att användas. Fortsätt till avsnittet
ALLMÄNT FÖRFARANDE i produktens bipacksedel.
Katalognr 99275 - STOCK SOLUTION
90 % densitetsgradient-medium för användning i en
procedur i ett steg eller för ytterligare spädning.
A. Rekommenderat material:
ISolate Stock Solution
• Irvine Scientific katalognr 99275
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta STOCK SOLUTION (katalognr 99275) och
pipettera 5,6 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 4,4 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Häll en alikvot på 10 mL av Stock
Solution i ett sterilt centrifugrör och förslut
- (ingen ytterligare spädning krävs - Stock
Solution är på 90 %)
b) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel. (OBS! 10 mL toppskikt och
10 mL bottenskikt räcker till cirka 5 spermaprover).
Katalognr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidalt kisel-koncentrat för ytterligare spädning till
densitetsgradienter; i isoton buffert och med ungefär samma
densitet som ospädd Percoll®. ISolate® CONCENTRATE
har utvärderats enligt denna bipacksedel vid gradienterna
50 % och 90 %. Varje laboratorium kan välja att framställa
gradienter i andra koncentrationer, som bör utvärderas
för effektivitet.
A. Rekommenderat material:
ISolate® Concentrate
• Irvine Scientific katalognr 99306
Modified Human Tubal Fluid
• Irvine Scientific katalognr 90126
Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalognr 9983
Sterila, konformade centrifugrör för engångsbruk
• Irvine Scientific katalognr IS-325
Pasteurpipetter, sterila
Centrifug
Inkubator, 37 °C
B. Gradientberedning:
Två lösningar krävs för att utföra spermieseparation med
gradientmetoden: En toppskikts- och en bottenskiktslösning.
1. Toppskiktslösning - 50 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 4,5 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 5,5 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4
gånger så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “TOPPSKIKT”
2. Bottenskiktslösning - 90 %:
a) Ta CONCENTRATE (katalognr 99306) och
pipettera 8,1 mL i ett sterilt centrifugrör
b) Tillsätt 1,9 mL Modified Human Tubal Fluid
(katalognr 90126)
c) Förslut röret och vänd det varligt 3-4 gånger
så att innehållet blandas fullständigt
d) Märk röret med “BOTTENSKIKT”
3. Fortsätt till avsnittet ALLMÄNT FÖRFARANDE i
produktens bipacksedel.
Obs! Termerna 50 % och 90 % anger inte
en faktisk koncentration. 50 % och 90 % är
relativa koncentrationer baserade på tidigare
nomenklatur som definierade en 1:9-spädning
av Percoll ® såsom likvärdig med en 100 %
fungerande, isoton lösning.
ALLMÄNT FÖRFARANDE
Följande är en generell procedur för en tvåstegsgradientseparation av rörliga spermier från sädesvätska.
Volymen och koncentrationen kan modifieras för att passa
det enskilda laboratoriets preferenser (dvs. minigradient,
kryopreserverad sperma, treskiktsgradient).
1. Låt alla mediekomponenter uppnå rumstemperatur eller
37 °C.
2. Använd en steril pipett och överför 1,5 - 2,0 mL av
“BOTTENSKIKTET” till ett sterilt, konformat centrifugrör
för engångsbruk.
3. Använd en ny steril pipett och överför en lika stor volym
“TOPPSKIKT” ovanpå “BOTTENSKIKTET” . Detta görs
genom att vidröra ytan på “BOTTENSKIKTET” vid röret
sida med pipettens spets. Dispensera omsorgsfullt
“TOPPSKIKTET” genom att vrida pipettspetsen i spiral
runt rörets omkrets i en uppåtriktad rörelse efterhand
som “TOPPSKIKT”-nivån ökar.
4.
Placera försiktigt 1,5 - 2,0 mL likvifierad sperma på
“TOPPSKIKTET” med användning av en ny, steril pipett.
5. Centrifugera i 10 - 20 minuter vid cirka 200 - 300 x g.*
Exponera pelleten omsorgsfullt genom att antingen
suga av “TOPP-” och “BOTTENSKIKTEN”, eller genom
att ta upp pelleten och föra över den till ett nytt, sterilt
centrifugrör.
*Obs! Spermaprovets kvalitet skall bedömas
och tas i beaktande vid bestämning av korrekt
centrifugeringshastighet och -tid. Dessa bör
justeras i enlighet med det enskilda provets
kvalitet, för optimering av förfarandet.
6. Använd en ny steril pipett och tillsätt 2,0 - 3,0 mL
lämpligt tvättmedium såsom Sperm Washing Medium
(IS katalognr 9983) eller Modified HTF (IS katalognr
90126) med proteinsupplement. Resuspendera den
isolerade pelleten. Centrifugera (~200xg) i 8 - 10
minuter och avlägsna supernatanten. Upprepa detta
steg för en andra tvätt. Kassera supernatanten och
resuspendera pelleten med användning av en adekvat
volym lämpligt medium. Provet är nu klart för analys.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Oöppnade behållare skall förvaras i kylskåp vid 2 - 8 ºC.
Värm till omgivnings- eller inkubator(37 °C)-temperatur
före användning.
Får ej frysas eller exponeras för höga temperaturer.
ISolate är hållbart fram till det utgångsdatum som anges
på kartongen och flasketiketterna, vid förvaring enligt
anvisningarna.
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
ISolate är ogenomskinligt. Detta är normalt för denna
produkt. Använd inga ampuller med medium som innehåller
partiklar eller företer tecken på kontamination (ojämn
grumlighet).
ISolate skall vara ordentligt förslutet vid användning i en
CO2-inkubator så att pH-förändringar undviks.
Denna produkt innehåller inga konserveringsmedel,
antibiotika eller proteinsupplement. Använd aseptisk teknik
vid hantering, så att kontamination undviks.
Om produkten är skadad får den inte
användas. Kassera den eller returnera den
till tillverkaren för utbyte.
OBS! Enligt federal (USA) lag får denna
produkt endast säljas av eller på ordination
av läkare.
TOOTE KIRJELDUS
ISolate® on tihedusgradiendi lahus, mis on koostatud
liikuva sperma eraldamiseks seemnevedelikust.
Kahekihilise gradiendi süsteem vähendab tõhusalt
rakuliste saasteainete, sh surnud sperma, valgevererakkude
ja mitmesuguste jäätmete hulka. Sellest saadud proov
sisaldab peamiselt liikuvaid spermatosoide.
ISolate on HEPESiga puhverdatud HTFis
membraanfiltreeritud ja aseptilised töödeldud räniosakeste
kolloiodne suspensioon kovalentselt seotud hüdrofiilse
silaaniga.
Garanteeritud steriilsustase (SAL) on 10 -3. Küüliku
pürogeenitesti tegemisega on leitud, et ISolate on
pürogeenide suhtes negatiivne.
KASUTUSJUHEND
Kataloogi nr 99264 - KASUTAMISVALMIS
KOLLOIDNE RÄNIMULD KAHES
KONTSENTRATSIOONIS (50% ja 90%)
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate
• Irvine Scientific katalooginr 99264 (6mL, 50mL või
100mL viaaliga komplekt) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific katalooginr 9983 Steriilsed,
ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
• Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Eelnevat lahjendamist ei ole vaja. Iga ülemise ja alumise
gradiendi kihti sisaldav viaal on kasutamiseks valmis. Jätkake
toote pakendi infolehel toodud ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Kataloogi nr 99275 - STOCK SOLUTION
90%-ne tihedusgradiendi sööde kasutamiseks üheetapilises
protseduuris või edasiseks lahjendamiseks.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific katalooginr 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
Ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke STOCK SOLUTION (kataloogi nr
99275) ja pipettige 5,6 mL steriilsesse
tsentrifuugi tuubi.
b) Lisage 4.4 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Alikvootige 10 mL STOCK SOLUTIONit
steriilsesse tsentrifuugi tuubi ja korgistage
- (edasine lahjendamine ei ole vajalik
- STOCK SOLUTION on 90%)
b) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA. (MÄRKUS:
Kogusega 10 mL ülemist kihti ja 10 mL alumist
kihti on võimalik töödelda umbes 5 eemnevedeliku
proovi.)
Kataloogi nr 99306 - CONCENTRATE
Kolloidse ränimulla kontsentraat edasiseks lahjendamiseks
tihedusgradientideks; valmistatud isotoonilises puhvris ja
tiheduse poolest on lähedane lahustamata Percoll®-ile.
ISolate® analüüsiti vastavalt pakendi infolehes toodule
ning leiti gradiendid 50% ja 90%. Iga labor võib oma
äranägemisel valmistada erinevates kontsentratsioonides
gradiente, mille tõhusust tuleb hinnata.
A. Soovitatavad materjalid:
ISolate® kontsentraat
•Irvine Scientific katalooginr 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalooginr 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific katalooginr 9983
Steriilsed, ühekordsed koonilised tsentrifuugi tuubid
•Irvine Scientific katalooginr IS-325
Pasteuri pipetid, steriilsed
Tsentrifuug
Inkubaator, 37°C
B. Gradiendi valmistamine:
Sperma eraldamise gradientmeetodi jaoks on vaja kaks
lahust: ülemine kiht ja alumine kiht.
1. Ülemise kihi lahus - 50%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 4.5 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 5.5 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ÜLEMINE KIHT”
2. Alumise kihi lahus - 90%:
a) Võtke CONCENTRATE (kataloogi nr 99306)
ja pipettige 8.1 mL steriilsesse tsentrifuugi
tuubi.
b) Lisage 1.9 mL lahust Modified Human Tubal
Fluid (kataloogi nr 90126)
c) Katke katsut korgiga ja keerake 3...4 korda
põhi õrnalt üles-alla, et sisu täielikult
seguneks
d) Märkige katsutile “ALUMINE KIHT”
3. Jätkake toote pakendi infolehel toodud
ÜLDPROTSEDUURIDEGA.
Märkus: Nimetusele lisatud 50% ja 90% ei kujuta
endast tegelikku kontsentratsiooni. 50% ja 90%
kujutavad endast relatiivseid kontsentratsioone,
mis põhinevad varasemal nomenklatuuril, mille
järgi Percoll’i® 1:9 lahus võrdus 100% isotoonilise
töölahusega.
ÜLDINE PROTSEDUUR
Järgnevalt on toodud liikuva sperma seemnevedelikust
gradiendiga eraldamise kahe-etapiline üldprotseduur
Mahtu ja kontsentratsiooni võib muuta vastavalt labori
eelistustele (st minigradient, külmutatult säilitatud
seemnevedelik, kolmekihiline gradient).
1. Tooge kõik söötme komponendid toatemperatuurile, st
37°C.
2. Kasutades steriilset pipetti, viige 1,5...2,0 mL
ALUMIST KIHTI steriilsesse, ühekordsesse, koonilisse
tsentrifuugituubi.
3. Kasutades uut steriilset pipetti, viige ALUMISE KIHI
peale võrdne kogus ÜLEMIST KIHTI. Selleks viige
pipeti ots katsuti seinal vastu ALUMISE KIHI pinda.
Ettevaatlikult dispenseerige ÜLEMINE KIHT pipeti
otsaga spiraalselt mööda katsuti sisemist seina
ülespoole tõmmates ÜLEMISE KIHI pinna tõustes.
4. Õ r n a l t a s e t a g e 1 , 5 . . . 2 , 0 m L v e d e l d a t u d
seemnevedelikku ÜLEMISSE KIHTI, kasutades selleks
uut steriilset pipetti.
5. Tsentrifuugige umbes 200...300 g juures 10...20
minutit.* Ettevaatlikult tooge välja settetombuke, kas
ÜLEMISE ja ALUMISE KIHI pealt ära aspireerimise
teel või settetombukese otseselt välja võtmise ja uude
steriilsesse tsentrifuugi tuubi sisse kandmise teel.
*Märkus: Tsentrifuugimiskiiruse ja -aja
määramisel tuleb hinnata ja arvesse võtta
spermaproovi kvaliteeti.
Protseduuri optimeerimiseks tuleb kiirust
ja aega korrigeerida vastavalt proovi
kvaliteedite.
6. Kasutades uut steriilset pipetti, lisage 2,0...3,0 mL
sobivat pesemisvahendit nagu Sperm Washing Medium
(IS kataloogi nr 9983) või Modified HTF (IS kataloogi
nr 90126) koos proteiinilisandiga. Resuspendeerige
isoleeritud settetombuke. Tsentrifuugige ~200 g juures
8...10 minutit ja eemaldage supernatant. Korrake seda
sammu teistkordseks pesemiseks. Visake supernatant
ära ja resuspendeerige settetombuke, kasutades
selleks sobiva söötme vastavat kogust. Proov on nüüd
analüüsimiseks valmis.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
SÄILITAMISJUHISED JA STABIILSUS
Hoidke avamata anumad külmkapis temperatuuril
2 º... 8 ºC.
Enne kasutamist soojendage ümbritseva õhu või inkubaatori
temperatuurile (37°C).
Ärge külmutage ega jätke kõrgete temperatuuride kätte.
ISolate on stabiilne karbi ja pudeli etiketile märgitud
tähtpäevani, kui seda on säilitatud juhendis ettenähtud
tingimustes.
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks
tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava
koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud
kasutuse alal.
ISolate on läbipaistmatu. See on selle toote puhul
normaalne. Ärge kasutage söödet viaalist, milles on märgata
osakesi või saastumist (st ebaühtlane hägusus).
ISolate peab CO2 inkubaatoris kasutamise korral olema
tihedalt korgistatud vältimaks muutusi pH-s.
Toode ei sisalda säilitusaineid, antibiootikume ega
proteiinilisandeid. Saastamise vältimiseks käsitsege
vahendeid aseptilist tehnikat kasutades.
Kahjustuste ilmnemise korral mitte kasutada.
Palun visake ära või tagastage tootjale, kes
selle asendab.
ETTEVAATUST: Riiklik (USA) seadusandlus
piirab seadme müüki ning see võib toimuda
üksnes arsti poolt või arsti korraldusel.
LIETUVIŲ K.
MAGYAR
TERMÉKLEIRÁS
Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a
sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól
való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens
rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket,
mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más
törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan
mozgékony spermiumot tartalmaz.
Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt,
aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens
kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty
Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt.
HASZNÁLATI UTASITÁS
Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA
KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT
KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%)
A. Javasolt anyagok:
ISolate
• Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml
vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
• Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg
gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a
termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél.
Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION
90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban,
vagy további higításra való alkalmazásra.
A. Javasolt anyagok:
ISOLATE STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg.
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám:
99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril
centrifugacsőbe.
b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril
centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem
szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os)
b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső
Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta
feldolgozására elegendő)
Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE
Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség
gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és
megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate®
CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve
ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok
készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket
értékelni kell hatékonyság szempontjából.
A. Javasolt anyagok:
ISolate® koncentrátum
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél.
Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem
jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50%
és 90% relatív koncentrációk egy korábbi
nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású
Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás
oldatként.
ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS
A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának
az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A
térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az
egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens,
krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens)
1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre,
vagy 37 C°-ra.
2.
Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az
„ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos,
kúpos centrifuga-csőbe.
3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG”
–ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére.
Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán
az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja
a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális
mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a
„FELSŐ RÉTEG” emelkedik.
4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a
„FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva.
5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.*
Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ
RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy
közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril
centrifugacsőbe való átvitelével.
*Megjegyzés: A sperma minta minőségét
értékelni kell, és figyelembe kell venni a
megfelelő centrifugálási sebesség és idő
meghatározásánál. Ezeket az egyes minta
minősége szerint kell módosítani az eljárás
optimalizálása érdekében.
6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml
megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing
Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified
HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel.
Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja
(~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót.
Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra.
Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra
a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával.
A minta most kész az analízisre.
E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért
minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra
speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi
eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.
TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS
Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között.
Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy
az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra.
Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek.
Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett
lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak
megfelelően történt.
ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK
Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz
tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban
kiképzett személyzet által történjen.
A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a
terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami
részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem
egyenletes zavarosság).
Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2
inkubátorban használják a pH változások elkerülésére.
Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem
fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák
elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával
kezelje.
Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy
juttassa vissza a gyártóhoz, cserére.
VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény
korlátozza ennek az eszköznek az
értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi
utasításra történhet.
Türk
PRODUKTO APRAŠYMAS
ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto
atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių
gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius
teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir
įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia
susideda iš judrių spermatozoidų.
3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus
perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo
kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO
SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai
išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami
pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus,
kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla.
ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai
apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija,
stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu
hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje.
Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų
nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo
nesukėlė.
4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos
atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO.
NAUDOJIMO NURODYMAI
Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI
KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ
KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%)
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate
• Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml
arba 100 ml buteliukų rinkinys)
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
• Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
• Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio
sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau
žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI
PROCEDŪRA.
Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION
(pradinis tirpalas)
90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai
arba tolesniam skiedimui.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr.
99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite
į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid
alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir
uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK
SOLUTION yra 90% koncentracijos).
b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE
(koncentratas)
Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam
skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame
buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos
Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE
koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais
metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija.
Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų
koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate® koncentratas
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai
susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių
BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia
konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra
santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti
ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9
santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip
lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui.
BENDROJI PROCEDŪRA
Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų
grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos.
Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos
poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla,
trisluoksnis gradientas).
1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba
37 °C temperatūros.
2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO
SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį
centrifūgavimo mėgintuvėlį
5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300
x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami
VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba
granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų
centrifuginį mėgintuvėlį.
Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai
atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir
laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia
pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę.
6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos
plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing
Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified
HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais.
Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10
minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą.
Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite
supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame
reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas
analizei.
Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena
laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir
metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus
pagal atskiros medicininės programos nuostatas.
LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS
Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC
temperatūroje.
Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus
(37 °C) temperatūros.
Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos
temperatūros.
Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka
stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio
etiketėse.
ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI
Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,
apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso
taikymu pagal numatytą paskirtį.
ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra
normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei
skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis
drumstumas).
Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai
uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra.
Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir
baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu
reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų.
Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite.
Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad
pakeistų.
PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius
(JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti
parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu.
ÜRÜN TANIMI
ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan
ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur.
İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri
ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır.
Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir.
ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal
silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu
HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla
stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür.
ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere
karşı negatif olduğu bulunmuştur.
KULLANIM YÖNERGELERİ
Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON
HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR
KOLLOİDAL SİLİKA
A. Önerilen Materyaller:
ISolate
• Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya
100 mL viyal kiti)
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983;
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın
her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL
PROSEDÜR bölümüne geçin.
Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON
Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için
kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum.
A. Önerilen Materyaller:
ISolate Stok Solüsyon
• Irvine Scientic Katalog #99275
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril
bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
4.4 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj
tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon
gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır)
b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
(NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık
5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.)
Katalog #99306 – KONSANTRAT
Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal
silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve
seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate®
KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık
gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini
değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar
yapmak isteyebilir.
A.
Önerilen Materyaller:
ISolate® Konsantrat
• Irvine Scientic Katalog #99306
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
5.5 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
1.9 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil
etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100
çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki
nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır.
GENEL PROSEDÜR
Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı
bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim
ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak
şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve
semen, üç-katmanlı gradyan).
1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a
getirin.
2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0
mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne
aktarın.
3.
Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST
KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT
KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına
temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında
yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek
“ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın.
4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça
1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin.
5.
Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.*
Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da
doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne
aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın.
Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun
santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde
bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna
yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır.
6.
Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama
Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş
HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir
miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti
yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca
santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci
bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve
uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti
yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için
hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar
için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel
olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi
laboratuar prosedürlerine ve protokollerine
başvurmalıdır.
SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE
Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi
ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin.
Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın.
ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi
üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir.
ÖNLEMLER VE UYARILAR
Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da
kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel
tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate
opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde
veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren
herhangi bir medyum viyali kullanmayın.
Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya
protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili
sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın.
Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya
değiştirmek için üreticiye iade edin.
Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın
bir doktor tarafından satılması veya sipariş
edilmesi sınırlamasını getirmektedir.
LIETUVIŲ K.
MAGYAR
TERMÉKLEIRÁS
Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a
sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól
való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens
rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket,
mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más
törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan
mozgékony spermiumot tartalmaz.
Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt,
aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens
kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty
Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt.
HASZNÁLATI UTASITÁS
Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA
KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT
KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%)
A. Javasolt anyagok:
ISolate
• Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml
vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
• Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg
gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a
termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél.
Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION
90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban,
vagy további higításra való alkalmazásra.
A. Javasolt anyagok:
ISOLATE STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg.
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám:
99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril
centrifugacsőbe.
b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril
centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem
szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os)
b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső
Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta
feldolgozására elegendő)
Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE
Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség
gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és
megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate®
CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve
ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok
készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket
értékelni kell hatékonyság szempontjából.
A. Javasolt anyagok:
ISolate® koncentrátum
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél.
Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem
jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50%
és 90% relatív koncentrációk egy korábbi
nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású
Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás
oldatként.
ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS
A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának
az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A
térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az
egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens,
krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens)
1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre,
vagy 37 C°-ra.
2.
Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az
„ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos,
kúpos centrifuga-csőbe.
3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG”
–ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére.
Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán
az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja
a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális
mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a
„FELSŐ RÉTEG” emelkedik.
4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a
„FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva.
5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.*
Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ
RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy
közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril
centrifugacsőbe való átvitelével.
*Megjegyzés: A sperma minta minőségét
értékelni kell, és figyelembe kell venni a
megfelelő centrifugálási sebesség és idő
meghatározásánál. Ezeket az egyes minta
minősége szerint kell módosítani az eljárás
optimalizálása érdekében.
6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml
megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing
Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified
HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel.
Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja
(~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót.
Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra.
Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra
a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával.
A minta most kész az analízisre.
E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért
minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra
speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi
eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.
TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS
Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között.
Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy
az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra.
Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek.
Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett
lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak
megfelelően történt.
ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK
Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz
tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban
kiképzett személyzet által történjen.
A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a
terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami
részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem
egyenletes zavarosság).
Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2
inkubátorban használják a pH változások elkerülésére.
Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem
fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák
elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával
kezelje.
Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy
juttassa vissza a gyártóhoz, cserére.
VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény
korlátozza ennek az eszköznek az
értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi
utasításra történhet.
Türk
PRODUKTO APRAŠYMAS
ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto
atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių
gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius
teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir
įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia
susideda iš judrių spermatozoidų.
3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus
perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo
kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO
SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai
išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami
pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus,
kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla.
ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai
apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija,
stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu
hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje.
Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų
nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo
nesukėlė.
4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos
atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO.
NAUDOJIMO NURODYMAI
Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI
KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ
KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%)
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate
• Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml
arba 100 ml buteliukų rinkinys)
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
• Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
• Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio
sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau
žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI
PROCEDŪRA.
Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION
(pradinis tirpalas)
90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai
arba tolesniam skiedimui.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr.
99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite
į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid
alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir
uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK
SOLUTION yra 90% koncentracijos).
b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE
(koncentratas)
Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam
skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame
buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos
Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE
koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais
metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija.
Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų
koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate® koncentratas
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai
susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių
BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia
konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra
santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti
ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9
santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip
lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui.
BENDROJI PROCEDŪRA
Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų
grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos.
Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos
poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla,
trisluoksnis gradientas).
1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba
37 °C temperatūros.
2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO
SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį
centrifūgavimo mėgintuvėlį
5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300
x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami
VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba
granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų
centrifuginį mėgintuvėlį.
Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai
atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir
laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia
pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę.
6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos
plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing
Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified
HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais.
Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10
minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą.
Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite
supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame
reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas
analizei.
Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena
laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir
metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus
pagal atskiros medicininės programos nuostatas.
LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS
Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC
temperatūroje.
Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus
(37 °C) temperatūros.
Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos
temperatūros.
Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka
stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio
etiketėse.
ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI
Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,
apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso
taikymu pagal numatytą paskirtį.
ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra
normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei
skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis
drumstumas).
Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai
uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra.
Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir
baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu
reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų.
Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite.
Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad
pakeistų.
PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius
(JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti
parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu.
ÜRÜN TANIMI
ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan
ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur.
İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri
ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır.
Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir.
ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal
silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu
HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla
stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür.
ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere
karşı negatif olduğu bulunmuştur.
KULLANIM YÖNERGELERİ
Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON
HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR
KOLLOİDAL SİLİKA
A. Önerilen Materyaller:
ISolate
• Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya
100 mL viyal kiti)
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983;
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın
her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL
PROSEDÜR bölümüne geçin.
Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON
Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için
kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum.
A. Önerilen Materyaller:
ISolate Stok Solüsyon
• Irvine Scientic Katalog #99275
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril
bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
4.4 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj
tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon
gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır)
b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
(NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık
5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.)
Katalog #99306 – KONSANTRAT
Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal
silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve
seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate®
KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık
gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini
değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar
yapmak isteyebilir.
A.
Önerilen Materyaller:
ISolate® Konsantrat
• Irvine Scientic Katalog #99306
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
5.5 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
1.9 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil
etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100
çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki
nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır.
GENEL PROSEDÜR
Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı
bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim
ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak
şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve
semen, üç-katmanlı gradyan).
1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a
getirin.
2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0
mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne
aktarın.
3.
Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST
KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT
KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına
temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında
yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek
“ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın.
4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça
1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin.
5.
Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.*
Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da
doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne
aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın.
Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun
santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde
bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna
yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır.
6.
Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama
Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş
HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir
miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti
yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca
santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci
bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve
uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti
yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için
hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar
için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel
olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi
laboratuar prosedürlerine ve protokollerine
başvurmalıdır.
SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE
Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi
ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin.
Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın.
ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi
üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir.
ÖNLEMLER VE UYARILAR
Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da
kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel
tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate
opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde
veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren
herhangi bir medyum viyali kullanmayın.
Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya
protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili
sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın.
Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya
değiştirmek için üreticiye iade edin.
Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın
bir doktor tarafından satılması veya sipariş
edilmesi sınırlamasını getirmektedir.
LIETUVIŲ K.
MAGYAR
TERMÉKLEIRÁS
Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a
sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól
való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens
rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket,
mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más
törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan
mozgékony spermiumot tartalmaz.
Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt,
aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens
kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty
Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt.
HASZNÁLATI UTASITÁS
Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA
KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT
KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%)
A. Javasolt anyagok:
ISolate
• Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml
vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
• Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg
gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a
termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél.
Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION
90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban,
vagy további higításra való alkalmazásra.
A. Javasolt anyagok:
ISOLATE STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg.
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám:
99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril
centrifugacsőbe.
b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril
centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem
szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os)
b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső
Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta
feldolgozására elegendő)
Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE
Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség
gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és
megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate®
CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve
ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok
készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket
értékelni kell hatékonyság szempontjából.
A. Javasolt anyagok:
ISolate® koncentrátum
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél.
Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem
jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50%
és 90% relatív koncentrációk egy korábbi
nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású
Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás
oldatként.
ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS
A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának
az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A
térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az
egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens,
krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens)
1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre,
vagy 37 C°-ra.
2.
Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az
„ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos,
kúpos centrifuga-csőbe.
3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG”
–ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére.
Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán
az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja
a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális
mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a
„FELSŐ RÉTEG” emelkedik.
4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a
„FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva.
5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.*
Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ
RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy
közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril
centrifugacsőbe való átvitelével.
*Megjegyzés: A sperma minta minőségét
értékelni kell, és figyelembe kell venni a
megfelelő centrifugálási sebesség és idő
meghatározásánál. Ezeket az egyes minta
minősége szerint kell módosítani az eljárás
optimalizálása érdekében.
6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml
megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing
Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified
HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel.
Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja
(~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót.
Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra.
Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra
a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával.
A minta most kész az analízisre.
E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért
minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra
speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi
eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.
TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS
Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között.
Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy
az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra.
Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek.
Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett
lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak
megfelelően történt.
ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK
Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz
tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban
kiképzett személyzet által történjen.
A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a
terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami
részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem
egyenletes zavarosság).
Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2
inkubátorban használják a pH változások elkerülésére.
Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem
fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák
elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával
kezelje.
Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy
juttassa vissza a gyártóhoz, cserére.
VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény
korlátozza ennek az eszköznek az
értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi
utasításra történhet.
Türk
PRODUKTO APRAŠYMAS
ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto
atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių
gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius
teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir
įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia
susideda iš judrių spermatozoidų.
3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus
perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo
kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO
SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai
išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami
pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus,
kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla.
ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai
apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija,
stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu
hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje.
Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų
nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo
nesukėlė.
4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos
atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO.
NAUDOJIMO NURODYMAI
Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI
KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ
KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%)
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate
• Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml
arba 100 ml buteliukų rinkinys)
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
• Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
• Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio
sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau
žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI
PROCEDŪRA.
Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION
(pradinis tirpalas)
90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai
arba tolesniam skiedimui.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr.
99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite
į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid
alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir
uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK
SOLUTION yra 90% koncentracijos).
b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE
(koncentratas)
Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam
skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame
buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos
Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE
koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais
metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija.
Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų
koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate® koncentratas
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai
susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių
BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia
konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra
santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti
ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9
santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip
lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui.
BENDROJI PROCEDŪRA
Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų
grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos.
Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos
poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla,
trisluoksnis gradientas).
1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba
37 °C temperatūros.
2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO
SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį
centrifūgavimo mėgintuvėlį
5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300
x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami
VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba
granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų
centrifuginį mėgintuvėlį.
Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai
atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir
laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia
pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę.
6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos
plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing
Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified
HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais.
Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10
minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą.
Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite
supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame
reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas
analizei.
Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena
laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir
metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus
pagal atskiros medicininės programos nuostatas.
LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS
Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC
temperatūroje.
Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus
(37 °C) temperatūros.
Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos
temperatūros.
Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka
stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio
etiketėse.
ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI
Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,
apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso
taikymu pagal numatytą paskirtį.
ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra
normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei
skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis
drumstumas).
Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai
uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra.
Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir
baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu
reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų.
Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite.
Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad
pakeistų.
PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius
(JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti
parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu.
ÜRÜN TANIMI
ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan
ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur.
İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri
ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır.
Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir.
ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal
silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu
HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla
stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür.
ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere
karşı negatif olduğu bulunmuştur.
KULLANIM YÖNERGELERİ
Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON
HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR
KOLLOİDAL SİLİKA
A. Önerilen Materyaller:
ISolate
• Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya
100 mL viyal kiti)
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983;
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın
her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL
PROSEDÜR bölümüne geçin.
Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON
Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için
kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum.
A. Önerilen Materyaller:
ISolate Stok Solüsyon
• Irvine Scientic Katalog #99275
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril
bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
4.4 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj
tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon
gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır)
b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
(NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık
5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.)
Katalog #99306 – KONSANTRAT
Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal
silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve
seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate®
KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık
gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini
değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar
yapmak isteyebilir.
A.
Önerilen Materyaller:
ISolate® Konsantrat
• Irvine Scientic Katalog #99306
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
5.5 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
1.9 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil
etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100
çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki
nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır.
GENEL PROSEDÜR
Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı
bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim
ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak
şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve
semen, üç-katmanlı gradyan).
1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a
getirin.
2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0
mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne
aktarın.
3.
Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST
KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT
KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına
temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında
yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek
“ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın.
4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça
1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin.
5.
Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.*
Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da
doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne
aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın.
Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun
santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde
bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna
yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır.
6.
Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama
Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş
HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir
miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti
yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca
santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci
bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve
uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti
yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için
hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar
için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel
olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi
laboratuar prosedürlerine ve protokollerine
başvurmalıdır.
SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE
Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi
ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin.
Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın.
ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi
üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir.
ÖNLEMLER VE UYARILAR
Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da
kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel
tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate
opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde
veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren
herhangi bir medyum viyali kullanmayın.
Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya
protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili
sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın.
Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya
değiştirmek için üreticiye iade edin.
Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın
bir doktor tarafından satılması veya sipariş
edilmesi sınırlamasını getirmektedir.
LIETUVIŲ K.
MAGYAR
TERMÉKLEIRÁS
Az ISolate ® egy sűrűség gradiens médium, amit a
sperma mozgékony frakciójának az ondófolyadéktól
való elválasztására terveztek. Egy kétrétegű gradiens
rendszerként hatékonyan csökkenti a sejtszennyezéseket,
mint pl. a holt spermát, fehér vérsejteket és más
törmelékeket. Az eredményként kapott minta túlnyomóan
mozgékony spermiumot tartalmaz.
Az ISolate a szilika részecskéknek egy membránszűrt,
aszeptikusan készült kolloid szuszpenzója, kovalens
kötéssel kapcsolódó hidrofil szilánnal stabilizálva, HEPESel pufferolt HTF-ben. A sterilitás biztonsági szint (Sterilty
Assurance Level (SAL ))10-3. Az ISolate nyúl pirogénteszttel megvizsgálva pirogénekre negativ volt.
HASZNÁLATI UTASITÁS
Katalógusszám: 99264- FELHASZNÁLÁSRA
KÉSZ KOLLOID SZILIKA KÉT
KONCENTRÁCIÓBAN (50% és 90%)
A. Javasolt anyagok:
ISolate
• Irvine Scientific Katalógusszám: 99264 (6ml, 50ml
vagy 100ml fiola kit) Sperm Washing Medium
• Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
• Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
Előzetes higítások nem szükségesek. A felső és alsó réteg
gradiens minden fiolája kész a használatra. Folytassa a
termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS részénél.
Katalógusszám: 99275 - STOCK SOLUTION
90% sűrűség gradiens médium egy-lépéses eljárásban,
vagy további higításra való alkalmazásra.
A. Javasolt anyagok:
ISOLATE STOCK SOLUTION
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges: Egy felső réteg és egy alsó réteg.
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a STOCK SOLUTION-t (katalógusszám:
99275) és pipettázzon 5,6 ml–t egy steril
centrifugacsőbe.
b) Adjon hozzá 4.4 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Mérjen 10ml STOCK SOLUTION-t egy steril
centrifugacsőbe, és zárja le. (További higítás nem
szükséges, a -STOCK SOLUTION 90%-os)
b) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG” ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél. (MEGJEGYZÉS: 10ml Felső
Réteg és 10ml Alsó Réteg körülbelül 5 ondó minta
feldolgozására elegendő)
Katalógusszám: 99306- CONCENTRATE
Kolloid szilika koncentrátum további higításra sűrűség
gradiensekre; izotóniás pufferben formulázott, és
megközelíti a higítatlan Percoll® sűrűségét. Az ISolate®
CONCENTRATE 50% és 90% gradiensnél volt értékelve
ennek a csomag betétlapnak megfelelően. A laboratóriumok
készithetnek más koncentrációju gradienseket, amelyeket
értékelni kell hatékonyság szempontjából.
A. Javasolt anyagok:
ISolate® koncentrátum
•Irvine Scientific Katalógusszám: 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific Katalógusszám: 90126
Sperm Washing Medium
•Irvine Scientific Katalógusszám: 9983
Steril, egyszer használatos, kúpos centrifugacsövek
•Irvine Scientific Katalógusszám: IS-325
Pasteur-pipetták, steril
Centrifuga
Inkubátor, 37 C°
B. Gradiens készítés:
A gradiens sperma elválasztási módszer végrehajtásához
két oldat szükséges. Egy felső réteg és egy alsó réteg
1. Felső réteg oldat-50%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 4.5 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 5.5 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekev eredjen.
d) Címkézze meg a csövet „FELSŐ RÉTEG” ként
2. Alsó Réteg oldat-90%
a) Vegye a CONCENTRATEt (Katalógusszám: 99306)
és pipettázzon 8.1 ml-t egy steril centrifugacsőbe.
b) Adjon 1.9 ml Modified Human Tubal Fluidot
(Katalógusszám: 90126)
c) Dugaszolja be a csövet és fordítsa fel óvatosan
3-4-szer, hogy teljesen összekeveredjen.
d) Címkézze meg a csövet „ALSÓ RÉTEG”-ként
3. Folytassa a termékismertető betétlap ÁLTALÁNOS
ELJÁRÁS részénél.
Megjegyzés: Az 50% és 90% kifejezések nem
jelentenek tényleges koncentrációt. Az 50%
és 90% relatív koncentrációk egy korábbi
nomenklatúra alapján, amely az 1:9 higítású
Percoll® –t definiálja 100% működő, izotóniás
oldatként.
ÁLTALÁNOS ELJÁRÁS
A következő egy általános eljárás a mozgékony spermának
az ondóból történő két-lépéses gradiens elválasztására. A
térfogat és koncentráció változtatható, hogy megfeleljen az
egyes laboratóriumok preferenciáinak (pl. mini-gradiens,
krioprezervált ondó, három-rétegű gradiens)
1. Hozzon minden médium alkotót szobahőmérsékletre,
vagy 37 C°-ra.
2.
Steril pipettát használva, vigyen át 1,5-2,0 ml-t az
„ALSÓ RÉTEG”-ből egy steril, egyszer használatos,
kúpos centrifuga-csőbe.
3. Új, steril pipettát használva, vigyen a „FELSŐ RÉTEG”
–ből egyenlő térfogatot az „ALSÓ RÉTEG” tetejére.
Ezt tegye úgy, hogy a pipetta hegyével a cső oldalán
az „ALSÓ RÉTEG” felszínét érinti.Óvatosan adagolja
a „FELSŐ RÉTEGET” a pipetta hegyének spirális
mozgatásával a cső külső szélénél felfelé, ahogy a
„FELSŐ RÉTEG” emelkedik.
4. Óvatosan helyezzen 1,5-2,0 ml elfolyósodott ondót a
„FELSŐ RÉTEGRE” egy új steril pipettát használva.
5. Centrifugálja 10-20 percig körülbelül 200-300x g-vel.*
Óvatosan tegye szabaddá a pelletet, vagy a „FELSŐ
RÉTEG” és az „ALSÓ RÉTEG” elszívásával, vagy
közvetlenül, a pellet eltávolításával és egy új steril
centrifugacsőbe való átvitelével.
*Megjegyzés: A sperma minta minőségét
értékelni kell, és figyelembe kell venni a
megfelelő centrifugálási sebesség és idő
meghatározásánál. Ezeket az egyes minta
minősége szerint kell módosítani az eljárás
optimalizálása érdekében.
6. Egy új steril pipettát használva adagoljon 2,0-3,0 ml
megfelelő mosómédiumot, például Sperm Washing
Mediumot, (IS Katalógusszám: 9983), vagy Modified
HTF –t (IS Katalógusszám:90126) fehérje kiegészítővel.
Szuszpendálja újra az izolált pelletet. Centrifugálja
(~200xg)-vel 8-10 percig, majd távolítsa el a felülúszót.
Ismételje meg ezt a lépést egy második mosásra.
Szabaduljon meg a felülúszótól és szuszpendálja újra
a pelletet a megfelelő médium alkalmas térfogatával.
A minta most kész az analízisre.
E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért
minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra
speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi
eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.
TÁROLÁSI UTASITÁSOK ÉS STABILITÁS
Tárolja a bontatlan konténereket hűtve, 2° és 8 C° között.
Használat előtt melegítse a környezeti hőmérsékletre vagy
az inkubátor hőmérsékletére (37 C°)-ra.
Ne fagyassza, ne tegye ki magas hőmérsékletnek.
Az ISolate stabil a doboz és az üveg címkéjén feltüntetett
lejárati időpontig, amennyiben tárolása az utasításoknak
megfelelően történt.
ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK
Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz
tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban
kiképzett személyzet által történjen.
A ISolate opálosnak fog tűnni. Ez normális ennél a
terméknél. Ne használja a médium olyan fioláját, ami
részecskék jelenlétét, vagy szennyezés jelét mutatja (nem
egyenletes zavarosság).
Az ISolate-nek szorosan lezártnak kell lennie, amikor CO2
inkubátorban használják a pH változások elkerülésére.
Ez a termék nem tartalmaz tartósítót, antibiotikumot sem
fehérje kiegészítőt. A szennyezéssel járó problémák
elkerülése érdekében, aszeptikus technikák alkalmazásával
kezelje.
Ha sérült, ne használja. Dobja el, vagy
juttassa vissza a gyártóhoz, cserére.
VIGYÁZAT: A Szövetségi (US) törvény
korlátozza ennek az eszköznek az
értékesítését, csak orvos által, vagy orvosi
utasításra történhet.
Türk
PRODUKTO APRAŠYMAS
ISolate® yra tankio gradiento terpė, skirta iš sėklos sekreto
atskirti judriąją spermatozoidų frakciją. Ši dviejų sluoksnių
gradientinė sistema veiksmingai sumažina ląstelinius
teršalus, tokius kaip negyvi spermatozoidai, leukocitai ir
įvairios dalelių atplaišos. Galutinis mėginys daugiausia
susideda iš judrių spermatozoidų.
3. Nauja sterilia pipete ant APATINIO SLUOKSNIO viršaus
perkelkite tokį patį VIRŠUTINIO SLUOKSNIO tirpalo
kiekį. Tai atliekama pipetės antgaliu paliečiant APATINIO
SLUOKSNIO paviršių prie mėgintuvėlio šono. Atsargiai
išlašinkite VIRŠUTINĮ SLUOKSNĮ spirališkai sukdami
pipetės antgalį aplink mėgintuvėlio kraštą link viršaus,
kai VIRŠUTINIO SLUOKSNIO lygis kyla.
ISolate yra membraninį filtrą naudojant filtruota, aseptiškai
apdorota koloidinė silicio dioksido dalelių suspensija,
stabilizuota kovalentinėmis jungtimis prisijungusiu
hidrofiliniu silanu HEPES buferintame HTF skystyje.
Sterilumo užtikrinimo lygis (SAL) yra 10-3. Atlikus pirogenų
nustatymo bandymą su triušiais, ISolate karščiavimo
nesukėlė.
4. Nauja sterilia pipete 1,5–2,0 ml suskystėjusios spermos
atsargiai užlašinkite ant VIRŠUTINIO SLUOKSNIO.
NAUDOJIMO NURODYMAI
Katalogo Nr. 99264 – PARUOŠTAS NAUDOTI
KOLOIDINIS SILICIO DIOKSIDAS, DVIEJŲ
KONCENTRACIJŲ (50% ir 90%)
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate
• Irvine Scientific katalogo Nr. 99264 (6 ml, 50ml
arba 100 ml buteliukų rinkinys)
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
• Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
• Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Iš anksto praskiesti nereikia. Visi viršutinio ir apatinio
sluoksnio gradiento buteliukai yra paruošti naudoti. Toliau
žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI
PROCEDŪRA.
Katalogo Nr. 99275 – STOCK SOLUTION
(pradinis tirpalas)
90% tankio grandientinė terpė, skirta vieno etapo procedūrai
arba tolesniam skiedimui.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate STOCK SOLUTION (pradinis tirpalas)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99275
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę STOCK SOLUTION (katalogo Nr.
99275), 5,6 ml pradinio tirpalo pipete įlašinkite
į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 4.4 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) 10 ml STOCK SOLUTION pradinio tirpalo atid
alinkite į sterilų centrifuginį mėgintuvėlį ir
uždenkite (daugiau skiesti nereikia – STOCK
SOLUTION yra 90% koncentracijos).
b) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
virš utinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Katalogo Nr. 99306 – CONCENTRATE
(koncentratas)
Koloidinio silicio dioksido koncentratas, skirtas tolesniam
skiedimui pagal tankio gradientą; paruoštas izotoniniame
buferiniame tirpale, tankis apytikriai atitinka neskiestos
Percoll ® terpės tankį. ISolate ® CONCENTRATE
koncentratą ištyrus šiame pakuotės lapelyje nurodytais
metodais, nustatyta 50% ir 90% gradientų koncentracija.
Kiekviena laboratorija gali pasigaminti skirtingų
koncentracijų gradientus, kurių veiksmingumą reikia įvertinti.
A. Rekomenduojamos medžiagos:
ISolate® koncentratas
•Irvine Scientific katalogo Nr. 99306
Modified Human Tubal Fluid
•Irvine Scientific katalogo Nr. 90126
Sperm Washing Medium (spermos plovimo terpė)
•Irvine Scientific katalogo Nr. 9983
Sterilūs, vienkartiniai kūginiai centrifuginiai mėgintuvėliai
•Irvine Scientific katalogo Nr. IS-325
Pastero pipetės, sterilios
Centrifuga
Inkubatorius, 37 °C temperatūra
B. Gradiento paruošimas:
Taikant gradientinį spermatozoidų atskyrimo metodą,
naudojami du tirpalai: viršutinio sluoksnio tirpalas ir apatinio
sluoksnio tirpalas.
1. Viršutinio sluoksnio tirpalas – 50%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 4.5 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 5.5 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai
susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite VIRŠUTINIS SLUOK
SNIS;
2. Apatinio sluoksnio tirpalas – 90%:
a) Paėmę CONCENTRATE (katalogo Nr.
99306), 8.1 ml koncentrato pipete įlašinkite į
sterilų centrifuginį mėgintuvėlį;
b) Pridėkite 1.9 ml Modified Human Tubal Fluid
terpės (katalogo Nr. 90126);
c) Mėgintuvėlį uždenkite ir atsargiai 3–4 kartus
apverskite, kad jo turinys visiškai susimaišytų;
d) Mėgintuvėlį pažymėkite APATINIS SLUOK
SNIS;
3. Toliau žiūrėkite produkto pakuotės lapelio skyrių
BENDROJI PROCEDŪRA. (PASTABA: 10 ml
viršutinio sluoksnio tirpalo ir 10 ml apatinio
sluoksnio tirpalo kiekis yra skirtas apdoroti
apytikriai 5 spermos mėginius.)
Pastaba: 50% ir 90% dydžiai neapibrėžia
konkrečios koncentracijos. 50% ir 90% yra
santykinės koncentracijos dydžiai, pagrįsti
ankstesne nomenklatūra, kuri apibrėžė 1:9
santykiu praskiestą Percoll ® preparatą kaip
lygiavertį 100% darbiniam izotoniniam tirpalui.
BENDROJI PROCEDŪRA
Toliau aprašyta bendroji procedūra dviejų etapų
grandientiniam judrių spermotozoidų išskyrimui iš spermos.
Tūrį ir koncentraciją galima keisti pagal atskiros laboratorijos
poreikius (t. y., minigradientas, kriokonservuota sėkla,
trisluoksnis gradientas).
1. Visus terpės komponentus atšildykite iki kambario arba
37 °C temperatūros.
2. Sterilia pipete perkelkite 1,5–2,0 ml APATINIO
SLUOKSNIO tirpalo į sterilų vienkartinį kūginį
centrifūgavimo mėgintuvėlį
5. Centrifuguokite 10–20 minučių esant apytikriai 200–300
x g režimui.* Atsargiai išskirkite granulę įsiurbdami
VIRŠUTINIO ir APATINIO SLUOKSNIO tirpalo arba
granulę tiesiai išsiurbdami ir perkeldami į naują sterilų
centrifuginį mėgintuvėlį.
Pastaba: Reikia įvertinti spermos mėginio kokybę ir į tai
atsižvelgiant numatyti tinkamą centrifugavimo greitį ir
laiką. Procedūros optimizavimui, juos reikia
pakoreguoti atsižvelgiant į atskiro mėginio kokybę.
6. Nauja sterilia pipete įlašinkite 2,0–3,0 ml atitinkamos
plovimo terpės, tokios kaip Sperm Washing
Medium (IS katalogo Nr. 9983) arba Modified
HTF (IS katalogo Nr. 90126) su baltyminiais priedais.
Izoliuotą granulę resuspenduokite. Centrifuguokite 8–10
minučių (~200 x g režimu) ir pašalinkite supernatantą.
Pakartokite šį etapą antrojo plovimo metu. Išmeskite
supernatantą, o granulę resuspenduokite tinkamame
reikiamos terpės kiekyje. Dabar mėginys yra paruoštas
analizei.
Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena
laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir
metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus
pagal atskiros medicininės programos nuostatas.
LAIKYMO SĄLYGOS IR STABILUMAS
Neatidarytas talpykles laikykite šaldytuve 2 ºC–8 ºC
temperatūroje.
Prieš naudojimą atšildykite iki aplinkos arba inkubatoriaus
(37 °C) temperatūros.
Negalima užšaldyti, būtina saugoti nuo aukštos
temperatūros.
Laikant pagal nurodymus, ISolate produktas išlieka
stabilus iki tinkamumo datos, pažymėtos dėžutės ir butelio
etiketėse.
ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI
Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,
apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso
taikymu pagal numatytą paskirtį.
ISolate išvaizda yra matinė. Tai šiam produktui yra
normalu. Negalima naudoti jokio terpės buteliuko, jei
skystyje matyti kietųjų dalelių ar užterštumo (nevienalytis
drumstumas).
Laikant CO 2 inkubatoriuje, ISolate reikia sandariai
uždengti, kad nepasikeistų pH pusiausvyra.
Šio produkto sudėtyje nėra konservantų, antibiotikų ir
baltymų priedų. Norint išvengti užkrėtimo, naudojimo metu
reikia laikytis metodinių aseptikos reikalavimų.
Jei produktas pažeistas, jo nenaudokite.
Išmeskite arba grąžinkite gamintojui, kad
pakeistų.
PERSPĖJIMAS: Pagal federalinius
(JAV) įstatymus, šis prietaisas gali būti
parduodamas tik gydytojų arba jų užsakymu.
ÜRÜN TANIMI
ISolate® spermin motil fraksiyonunu seminal sıvıdan
ayırmak için tasarlanmış bir yoğunluk aşamalı medyumdur.
İki katmanlı bir sistem olarak ölü hücre, beyaz kan hücreleri
ve debris gibi hücre kontaminantlarını etkili bir şekilde azaltır.
Elde edilen örnek, baskın olarak motil sperm içerir.
ISolate membran filtreli, aseptik olarak işlenmiş bir kolloidal
silika partikülleri süspansiyonudur. HEPES-tamponlu
HTF’deki eşdeğerli bir şekilde bağlanmış hidrofilik silanla
stabilize edilmiştir. Sterilite güvence düzeyi 10-3’tür.
ISolate test edilmiştir ve tavşan pirojeni testinde pirojenlere
karşı negatif olduğu bulunmuştur.
KULLANIM YÖNERGELERİ
Katalog #99264 – İKİ KONSANTRASYON
HALİNDE (%50 ve %90) KULLANIMA HAZIR
KOLLOİDAL SİLİKA
A. Önerilen Materyaller:
ISolate
• Irvine Scientic Katalog #99264 (6mL , 50 mL veya
100 mL viyal kiti)
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983;
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Hiçbir ön dilüzyon gerekmez. Üst ve alt katman gradyanın
her bir viyali kullanıma hazırdır. Ürün broşürünün GENEL
PROSEDÜR bölümüne geçin.
Katalog #99275 - STOK SOLÜSYON
Tek adımlı bir prosedürde veya daha fazla dilüsyon için
kullanıma yönelik %90 yoğunluk aşamalı medyum.
A. Önerilen Materyaller:
ISolate Stok Solüsyon
• Irvine Scientic Katalog #99275
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) STOK SOLÜSYON’u alın (Katalog #99275) ve steril
bir santrifüj tüpüne 5.6 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
4.4 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) STOK SOLÜSYON’un 10 mL’sini steril bir santrifüj
tüpüne alikotlayın ve tıpalayın (Başka dilüsyon
gerekmez; Stok Solüsyon %90’dır)
b) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
(NOT: 10 mL Üst Katman ve 10 mL Alt Katman yaklaşık
5 semen örneğinin işlenmesini sağlar.)
Katalog #99306 – KONSANTRAT
Yoğunluk aşamalarına daha fazla dilüsyon için kolloidal
silika konsantratı; izotonik bir tamponda formüle edilmiştir ve
seyreltilmemiş Percoll®’un yoğunluğuna yakındır. ISolate®
KONSANTRAT bu paket proşürüne göre %50 ve %90’lık
gradyanlarda değerlendirilmiştir. Her laboratuar, etkililiğini
değerlendirmek üzere farklı konsantrasyonlarda gradyanlar
yapmak isteyebilir.
A.
Önerilen Materyaller:
ISolate® Konsantrat
• Irvine Scientic Katalog #99306
Modifiye İnsan Tübal Sıvısı
• Irvine Scientic Katalog #90126
Sperm Yıkama Medyumu
• Irvine Scientic Katalog #9983
Steril, tek kullanımlık konik santrifüj tüpleri
• Irvine Scientic Katalog #IS-325
Pastör Pipetleri, steril
Santrifüj
İnkübatör, 37°C
B. Gradyan Hazırlama:
Gradyan sperm ayırma yöntemini uygulamak için iki
solüsyon gerekir: bir üst katman ve bir alt katman.
1. Üst Katman solüsyonu - %50:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 4.5 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
5.5 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ÜST KATMAN” diye etiketleyin
2. Alt Katman solüsyonu - %90:
a) KONSANTRATI (Katalog #99306) alın ve steril bir
santrifüj tüpüne 8.1 mL pipetleyin
b) Modifiye İnsan Tübal Sıvısından (Katalog #90126)
1.9 mL ekleyin
c) Tüpü tıpalayın ve tam karışma için 3-4 kez nazikçe
ters çevirin
d) Tüpü “ALT KATMAN” diye etiketleyin
3. Ürün broşürünün GENEL PROSEDÜR bölümüne geçin.
NOT: %50 ve %90 terimleri gerçek konsantrasyonu temsil
etmez. %50 ve %90, Percoll®’un 1:9 dilüsyonunu %100
çalışan, izotonik bir solüsyona eşit olarak tanımlayan önceki
nomenklatüre dayalı göreli konsantrasyonlardır.
GENEL PROSEDÜR
Aşağıda, motil spermi semenden ayırmaya yönelik iki adımlı
bir gradyan ayırma genel prosedürü sunulmaktadır. Hacim
ve kontrasyon, her bir laboratuarın tercihini karşılayacak
şekilde değiştirilebilir (yani mini-gradyan kriyoprezerve
semen, üç-katmanlı gradyan).
1. Tüm medya bileşenlerini oda sıcaklığına veya 37°C’a
getirin.
2. Steril bir pipet kullanarak “ALT KATMAN”ın 1.5-2.0
mL’sini steril, tek kullanımlık, konik bir santrifüj tüpüne
aktarın.
3.
Yeni bir steril pipet kullanarak eşit hacimde “ÜST
KATMAN”ı “ALT KATMAN”ın üzerine aktarın. Bu, “ALT
KATMAN”ın yüzeyinin pipet ucuyla tüpün yan tarafına
temas ettirilmesiyle sağlanır. Pipet ucunu tüp etrafında
yukarı doğru bir hareketle spiral şekilde hareket ettirerek
“ÜST KATMAN”ı dikkatli bir şekilde aktarın.
4. Yeni bir steril pipet kullanarak “ÜST KATMAN”a nazikça
1.5-2.0 mL sıvı semen yerleştirin.
5.
Yaklaşık 200 - 300xg ile 10-20 dakika santrifüjleme yapın.*
Ya “ÜST” ve “ALT KATMANLARI” çıkararak, ya da
doğrudan pelleti çıkarıp yeni bir steril santrifüj tüpüne
aktararak pelleti dikkatli bir şekilde ortaya çıkarın.
Not: Sperm örneğinin kalitesi değerlendirilmeli ve uygun
santrifüjleme hızı ve zamanı belirlenirken göz önünde
bulundurulmalıdır. Bunlar, prosedürün optimizasyonuna
yönelik örnek kalitesine göre ayarlanmalıdır.
6.
Yeni bir steril pipet kullanarak, Sperm Yıkama
Medyumu (IS Katalog #9983) veya Modifiye Edilmiş
HTF’den (IS Katalog #90126) 2.0 - 3.0 mL’lik bir
miktarı protein takviyesiyle birlikte ekleyin. İzole pelleti
yeniden süspanse edin. 8-10 dakika boyunca
santrifüjleme (~200xg) yapın ve üst fazı çıkarın. İkinci
bir yıkama için bu adımı tekrarlayın. Üst fazı atın ve
uygun medyumdan uygun bir hacim kullanarak pelleti
yeniden süspanse edin. Örnek şimdi analiz için
hazırdır. Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar
için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel
olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi
laboratuar prosedürlerine ve protokollerine
başvurmalıdır.
SAKLAMA TALİMATLARI VE STABİLİTE
Açılmamış kapları 2°-8°C’da saklayın. Kullanım öncesi
ortam sıcaklığıan veya inkübatör (37°C) sıcaklığına getirin.
Dondurmayın veya yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın.
ISolate bu şekilde saklandığında, kutu ve şişe etiketi
üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir.
ÖNLEMLER VE UYARILAR
Bu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da
kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel
tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır. ISolate
opak görünür. Bu ürün için bu normaldir. Partikülat madde
veya kontaminasyon (tektip olmayan bulanıklık) kanıtı içeren
herhangi bir medyum viyali kullanmayın.
Bu üründe hiçbir koruyucu madde, antibiyotik veya
protein takviyesi bulunmamaktadır. Kontaminasyonla ilgili
sorunlardan sakınmak için aseptik teknikler kullanın.
Hasar durumunda kullanmayın. Atın veya
değiştirmek için üreticiye iade edin.
Dikkat: Federal (ABD) yasalar bu cihazın
bir doktor tarafından satılması veya sipariş
edilmesi sınırlamasını getirmektedir.