ANALISIS CLINICO - Udabol Virtual
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA RED NACIONAL UNIVERSITARIA UNIDAD ACADÉMICA DE SANTA CRUZ FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD BIOQUÍMICA Y FARMACIA NOVENO SEMESTRE SYLLABUS DE LA ASIGNATURA ANÁLISIS CLÍNICO Elaborado por: M.Sc. Vivian Antezana Rodriguez Gestión Académica I/2013 U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 1 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA UDABOL UNIVERSIDAD DE AQUINO BOLIVIA Acreditada como PLENA mediante R.M. 288/01 VISIÓN DE LA UNIVERSIDAD Ser la Universidad líder en calidad educativa. MISIÓN DE LA UNIVERSIDAD Desarrollar la Educación Superior Universitaria con calidad y Competitividad al servicio de la sociedad. Estimado(a) estudiante: El Syllabus que ponemos en tus manos es el fruto del trabajo intelectual de tus docentes, quienes han puesto sus mejores empeños en la planificación de los procesos de enseñanza para brindarte una educación de la más alta calidad. Este documento te servirá de guía para que organices mejor tus procesos de aprendizaje y los hagas mucho más productivos. Esperamos que sepas apreciarlo y cuidarlo. Fecha: marzo de 2013 Aprobado por: SELLO Y FIRMA JEFATURA DE CARRERA U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 2 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA SYLLABUS Asignatura: Código: Requisito: Carga Horaria: Horas Teóricas: Horas Prácticas Créditos: ANÁLISIS CLÍNICO LBF – 921 BCL – 621 240 80 160 28 I. OBJETIVOS GENERALES DE LA ASIGNATURA. Proporcionar al estudiante las técnicas y procedimientos necesarios para la atención de laboratorio clínico, en el área de orina y sistema renal. Identificar e interpretar de los resultados inherentes al análisis. Describir con exactitud los principios fundamentales del trabajo de laboratorio, tomando en cuenta los principios de bioseguridad. Determinar procedimientos esenciales para casos especiales, dentro de la atención al paciente. II. PROGRAMA ANALÍTICO DE LA ASIGNATURA. UNIDAD I. ANÁLISIS CLÍNICO TEMA 1. ANÁLISIS CLÍNICO. GENERALIDADES 1.1. Las relaciones entre el médico y el laboratorio 1.2. Solicitud de exámenes de laboratorio 1.3. Concepto de valores “normales” o “de referencia” 1.4. ¿Qué espera el paciente con respecto a las pruebas de laboratorio? 1.5. ¿Qué espera el médico del laboratorio? 1.6. ¿Qué espera el laboratorio del médico? 1.7. Etapas de intervención 1.8. Fase Pre-analítica 1.8.1. Factores que intervienen en la fase Pre-analítica 1.8.2. Factores modificables 1.8.3. Factores relacionados con el personal de salud 1.8.4. La solicitud de análisis 1.9. Fase Analítica 1.10. Fase Post-analítica 1.11. Conceptos básicos sobre control de calidad 1.11.1. Sensibilidad 1.11.2. Especificidad 1.11.3. Valor predictivo de un resultado positivo 1.11.4. Eficiencia de una prueba 1.12. Programa de garantía de calidad 1.12.1. Control de las muestras U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 3 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 1.12.2. Control de los equipos 1.12.3. Control de los reactivos 1.12.4. Control de las instalaciones 1.12.5. Control de la calidad del agua 1.12.6. Control del proceso 1.13. Recomendaciones para la selección de un método 1.14. Realizar el control de calidad 1.14.1. Desviación estándar 1.14.2. Coeficiente de variación (CV %) 1.14.3. Linealidad 1.14.4. Gráficas 1.14.5. Interpretación UNIDAD II. ANÁLISIS DE ORINA TEMA 2. EXAMEN DE ORINA 2.1. Generalidades - concepto 2.2. Aparato urinario 2.3. Fisiología 2.4. Causas de enfermedad Glomerular y Tubular 2.5. Formación de la orina en riñones 2.6. Aspectos organolépticas de la orina 2.7. Recolección de la muestra y conservación 2.8. Utilidad de las pruebas de orina. Pruebas de laboratorio importantes 2.8.1. Examen completo de orina 2.8.2. Examen parcial de orina TEMA 3. EXAMEN FÍSICO 3.1. Alteraciones referidas a las características físicas 3.2. Pruebas físicas: Alteraciones patológicas 3.3. Color 3.3.1. Cambios en el color de la orina debido a los fármacos más comunes 3.4. Aspecto (claridad carácter) 3.4.1. Quiluria 3.4.2. Lipiduria 3.5. Olor 3.6. Volumen 3.6.1. Aumento del volumen de orina 3.6.1.1. Regulación hormonal de la homeostasis del volumen defectiva 3.6.1.2. Absorción renal defectiva de sales/agua 3.6.1.3. Diuresis osmótica 3.6.2. Disminución del volumen de orina 3.6.2.1. Prerrenal, Posrenal 3.6.2.2. Enfermedad renal parenquimatosa 3.7. Peso específico y osmolalidad 3.7.1. Peso específico 3.7.1.1. Tiras reactivas 3.7.1.2. Refractómetro 3.7.1.3. Urinómetro U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 4 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 3.7.1.4. Método de caída de gota 3.7.2. Osmolalidad 3.7.2.1. Métodos TEMA 4. ANÁLISIS QUÍMICO 4.1. Recomendaciones para las tiras reactivas 4.2. pH 4.2.1. Valores de referencia 4.2.2. Significación clínica de los hallazgos en orina 4.2.3. Alteraciones patológicas más frecuentes 4.2.4. Características de orina ácida 4.2.5. Características de orina alcalina 4.2.6. Métodos 4.2.6.1. Tiras reactivas 4.2.6.2. Peachímetro 4.2.6.3. Acidez titulable de la orina 4.2.7. Interpretación 4.3. Características, causas y significación clínica. Técnicas de examen 4.4. Proteinuria por producción excesiva 4.4.1. Cuantificación de la proteinuria 4.4.1.1. Proteinuria severa (>4g/día) 4.4.1.2. Proteinuria moderada (1,0 g/día a 4,0 g/día) 4.4.1.3. Proteinuria mínima (<1,0 g/día) 4.4.1.4. Categorías cualitativas de la proteinuria 4.4.1.5. Proteinuria de Bence Jones 4.5. Microalbuminuria 4.5.1. Tiras reactivas 4.5.2. Método del ácido sulfosalicílico. Cualitativo 4.5.3. Determinación cuantitativa de proteínas y métodos confirmatorios 4.5.4. Microalbuminuria. Métodos de determinación 4.5.5. Métodos de determinación de proteinuria Bence Jones 4.6. Glucosa y otros azúcares en orina. Glucosuria 4.6.1. Otras causas de glucosuria 4.6.2. Otros azúcares en orina 4.6.2.1. Tiras reactivas 4.6.2.2. Pruebas de reducción del cobre 4.6.2.3. Otras pruebas para azúcares 4.7. Cetonas en orina 4.7.1. Cetonuria diabética 4.7.2. Cetonuria no diabético 4.7.3. Acidosis láctica 4.7.3.1. Tiras reactivas 4.7.3.2. Tabletas de nitroprusiato 4.7.4. Otras pruebas para cetonas 4.8. Sangre en la orina, hemoglobina, hemosiderina y mioglobina, causas 4.8.1. Hematuria 4.8.2. Hemoglobinuria 4.8.3. Hemosiderina en orina 4.8.4. Mioglobinuria 4.8.5. Tiras reactivas para compuestos hemo (hemoglobina y mioglobina) U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 5 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 4.8.6. Otras pruebas para hemoglobina y mioglobina 4.8.7. Pruebas cuantitativas para mioglobina 4.8.8. Detección de hemosiderina en orina 4.9. Bilirrubina en orina 4.9.1. Tiras reactivas 4.9.2. Pruebas de confirmación para bilirrubina 4.10. Urobilinógeno en orina 4.10.1. Tiras reactivas 4.10.2. Otras pruebas de urobilinógeno y porfobilinógeno 4.10.2.1. Prueba de Ehrlich en tubo 4.10.2.2. Prueba de diferenciación de Watson-Schwartz 4.10.2.3. Prueba de cribado de Hoesch para porfobilinógeno 4.11. Pruebas indirectas para infecciones del tracto urinario 4.11.1. Nitritos 4.11.1.1. Tiras reactivas 4.11.2. Estearasa leucocitaria 4.11.2.1. Tiras reactivas TEMA 5. EXÁMEN MICROSCÓPICO. TÉCNICAS DE EXAMEN 5.1. Examen del sedimento microscópico 5.2.1 Elementos presente 5.2.1. Células: Eritrocitos, Leucocitos, Eosinofilos 5.2.2. Células epiteliales 5.2.3. Cilindros: características e importancia: Cilindro hialino, granuloso, graso cerúleos, cristalinos, celulares, eritrocitarios, leucocitarios, pigmentados 5.2.4. Cristales 5.2.4.1. Cristales encontrados en orina ácida normal 5.2.4.2. Cristales encontrados en orinas alcalina normal 5.2.4.3. Cristales que se encuentran en orina anormal 5.2.5. Estructuras diversas: bacterias, hongos, espermatozoides, filamentos de moco, cuerpos grasos 5.2.6. Parásitos: Trichomonas Vaginalis 5.2.7. Contaminantes y artefactos TEMA 6. EXAMENES ESPECIALES DE ORINA 6.1. Examen citopatológico de la orina 6.2. Análisis de orina automatizado 6.3. Técnicas especiales de ensayo y monitorización 6.3.1. Cálculos urinarios 6.3.2. Hipercalciuria y piedras de calcio 6.3.3. Hiperoxaluria 6.3.4. Hiperuricuria 6.3.5. Piedras de cistina 6.3.6. Cálculos raros 6.4. Pruebas de laboratorio para investigar la formación de piedras 6.5. Examen radiológico 6.6. Búsqueda en la orina de enfermedades metabólicas hereditarias 6.7. Recuento de Addis 6.8. Prueba de depuración de creatinina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 6 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA UNIDAD III. CITOMETRÍA HEMÁTICA TEMA 7. HEMOGRAMA 7.1. Toma de muestra 7.2. Hematocrito (Hto) 7.3. Concentración de hemoglobina (Hb) 7.4. Velocidad de sedimentación globular (VSG) 7.5. Volumen corpuscular medio (VCM) 7.6. Hemoglobina corpuscular media (HbCM) 7.7. Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHbM) 7.8. Formula leucocitaria 7.9. Recuento de eritrocitos 7.10. Recuento de leucocitos 7.11. Recuento de plaquetas TEMA 8. PRUEBAS DE COAGULACIÓN 8.1. Tiempo de coagulación 8.2. Tiempo de sangría 8.3. Tiempo de protrombina+IRN (TP) 8.4. Tiempo de tromboplastina parcial activada (APPT) 8.5. Fibrinógeno 8.6. Retracción del coagulo UNIDAD IV. QUÍMICA SANGUÍNEA TEMA 9. METABOLITOS 9.1. Glucosa sanguínea 9.1.1 Importancia 9.1.2. Variaciones de la glucosa 9.2. Curva de tolerancia de la glucosa 9.3. Glicemia posprandial 9.4. Fructosamina 9.5. Hemoglobina glicosilada TEMA 10. PRUEBAS FUNCIONALES RENALES 10.1. Urea 10.1.1 Importancia 10.1.2. Variaciones 10.1.3. Pruebas relacionadas a su alteración 10.2. Creatinina 10.2.1 Importancia 10.2.2. Variaciones 10.2.3. Pruebas relacionadas a su alteración 10.3. Acido úrico 10.3.1. Importancia 10.3.2. Variaciones U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 7 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 10.3.3. Pruebas relacionadas a su alteración TEMA 11. PRUEBAS FUNCIONALES RELACIONADAS AL PERFIL LIPIDICO 11.1. Colesterol 11.2.1 Importancia 11.2.2. Variaciones 11.2. Lípidos totales 11.1.1 Importancia 11.3. Fracciones de colesterol 11.3.1. HDL 11.3.2. LDL 11.4. Triglicéridos 11.2.1 Importancia 11.2.2. Variaciones TEMA 12. ELECTROLITOS 12.1. Composición de los líquidos corporales 12.2. Sodio 12.3. Potasio 12.4. Calcio 12.5. Cloruros 12.6. Magnesio 12.7. Fósforo TEMA 13. PROTEÍNAS 13.1. Importancia y clasificación 13.2. Variaciones de las proteínas 13.2.1. Disproteinemias 13.3. Electroforesis de proteínas 13.4. Pruebas relacionadas a su alteración 13.5. Determinación de Hierro 13.6. Método e interpretación TEMA 14. ENZIMOLOGÍA CLÍNICA 14.1. Medida de la actividad Enzimática 14.2. Métodos cinéticos 14.3. Métodos de punto final 14.4. Métodos de puntos múltiples 14.5. Origen y libración de las enzimas 14.6. Metodología analítica 14.7. Técnicas colorimétricas y cinéticas TEMA 15. PRUEBAS FUNCIONALES HEPATICAS 15.1. Generalidades 15.2. Test hepatobiliares 15.2.1. Transaminasas U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 8 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 15.2.1.1. Predominio de ALT 15.2.1.2. Predominio de AST 15.2.2.3. Elevaciones de transaminasas 15.2.2. Fosfatasa alcalina 15.2.3. Gammaglutamiltranspeptidasa 15.2.4. Bilirrubina 15.2.4.1 Elevación de bilirrubina conjugada 15.2.4.2. Hiperbilirrubinemia 15.3. Test de función hepática 15.3.1. Albúmina 15.3.2. Tiempo de protrombina 15.3.3. Marcadores Virales 15.3.3.1. Hepatitis A 15.3.3.2. Hepatitis B 15.3.3.3. Hepatitis C 15.3.3.4. Hepatitis D 15.4. Patologías relacionadas al funcionamiento hepático 15.4.1. Hemocromatosis 15.4.2 Cirrosis biliar 15.4.3. Hepatocarcinoma TEMA 16. PERFIL CARDIACO 16.1. Infarto agudo de miocardio IAM 16.1.1. Cuadro clínico 16.2. Marcadores bioquímicos cardíacos 16.3. Marcadores de daño miocárdico 16.4. Mioglobina 16.5. Creatina Kinasa 16.6. CK-MB 16.7. Troponinas 16.8. Lactato Deshidrogenada LDH TEMA 17. PRUEBAS FUNCIONALES PANCREATICAS 17.1. Generalidades 17.1.1.Función del páncreas 17.1.2. Enzimas pancreáticas 17.1.2.1. Amilasa 17.1.2.2. Lipasas 17.1.2.3. Insulina 17.2. Amilasa 17.2.1. Variaciones 17.3. Lipasa 17.3.1. Variaciones TEMA 18. DETERMINACIÓN DE GASES SANGUINEOS 18.1. Importancia 18.2. Toma de muestra U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 9 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 18.3. Valores normales 18.4. Regulación de las bases sanguíneas 18.5. Desequilibrios ácido-base 18.6. Acidosis metabólica y respiratoria 18.7. Alcalosis metabólica y respiratoria TEMA 19. LÍQUIDOS DE PUNCIÓN 19.1. Generalidades 19.2. Líquido cefalorraquídeo 19.2.1. Recolección de muestra 19.2.2. Aspecto 19.2.3. Recuento celular 19.2.4. Características normales del LCR 19.2.5. Interpretación clínica del aumento del número de células en el LCR 19.2.6. Interpretación clínica del incremento de las proteínas del LCR 19.2.7. Determinaciones bioquímicas en LCR 19.2.8. Marcadores tumorales 19.2.9. Pruebas inmunológicas 19.2.10. Estudio microbiológico: Examen microscópico, cultivo 19.3. Líquido sinovial 19.3.1. Recolección de muestra 19.3.2. Aspecto 19.3.3. Determinaciones bioquímicas 19.3.4. Estudio microbiológico 19.4. Liquido peritoneal 19.4.1. Recolección de muestra 19.4.2. Aspecto 19.4.3. Determinaciones bioquímicas 19.4.4. Estudio microbiológico 19.5. Liquido pleural 19.5.1. Recolección de muestra 19.5.2. Trasudados 19.5.3. Exudados 19.5.4. Examen macroscópico 19.5.5. Examen microscópico 19.6. Liquido pericárdico 19.6.1. Recolección de muestra 19.6.2. Examen macroscópico 19.4.3. Determinaciones bioquímicas 19.4.4. Examen microbiológico 19.7. Líquido seminal 19.7.1. Espermograma UNIDAD V: HORMONAS TEMA 20. GENERALIDADES 20.1. Introducción 20.2. Generalidades 20.3. Almacenamiento y secreción de hormonas U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 10 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 20.3.1. Control feedback negativo 20.4. Tiroides: 20.4.1. T3, T4 y TSH 20.5. Hormona de crecimiento 20.5.1. Generalidades 20.5.2. Funciones fisiológicas 20.5.3. Efectos metabólicos 20.5.4. Interpretación de la prueba 20.5.5. Falsos resultados 20.6. Hormonas sexuales femeninas y masculinas 20.6.1. Estradiol 20.6.2. Testosterona 20.6.3. Gonadotropina coriónica humana 20.6.4. Hormonas de la fertilidad III. ACTIVIDADES A REALIZAR DIRECTAMENTE EN LA COMUNIDAD. i. Tipo de asignatura Asignatura de Especialidad ii. Resumen de los resultados del diagnóstico realizado para la detección de los problemas a resolver en la comunidad. La detección de valores elevados de urea y creatinina en suero de pacientes diabéticos, es el estigma principal que evidencia una disfunción renal severa. Al ser estos dos productos bioquímicos impropios del torrente sanguíneo, su tolerancia en el mismo es de una mínima cantidad la cual ha sido catalogada como valor normal. El hallar valores elevados en el suero de un paciente diabético, sería de gran ayuda al médico para encaminarlo hacia el diagnostico precoz de IR, promoviendo cierto nivel de prevención y alerta que podrían influir en una mejoría del estilo de vida del paciente. La presencia de urea o de creatinina elevada en suero ocurre solamente cuando el riñón ha perdido más de 50% de su capacidad funcional.” (abcdelasalud.com, 2010) La Insuficiencia Renal (IR) es una enfermedad crónica que constituye un verdadero agravante del estado de salud del ya convaleciente paciente diabético de nuestro país. Por una parte La Diabetes es una enfermedad endócrina no transmisible que causa niveles altos de glucosa (azúcar) en la sangre. Y que ha adquirido importancia por su morbilidad y mortalidad, al igual que por los efectos incapacitantes que afectan la calidad de vida de quienes la padecen. iii. Nombre del proyecto al que tributa la asignatura. “Determinación de valores de úrea y creatinina, como diagnóstico de insuficiencia renal en pacientes diabéticos que acuden al laboratorio de Análisis Clínico de la UDABOL, en el periodo de mayo a junio del 2013” iv. Contribución de la asignatura al proyecto. De acuerdo al contenido programático de la carrera y la vinculación de la asignatura con todas las áreas, la relación entre estas dos determinaciones de análisis permitirá al estudiante hacer una evaluación y análisis del estudio a realizar poniendo en práctica sus conocimientos acumulados en las diferentes asignaturas y los adquiridos en la materia de análisis clínico. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 11 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA v. Actividades a realizar durante el semestre para la implementación del proyecto. Trabajo a realizar por los estudiantes Organización de actividades del proyecto Localidad, aula o laboratorio Aula Toma de muestras, procesamiento y obtención de los resultados Laboratorio de la universidad Análisis de los resultados obtenidos y Elaboración de material educativo: Determinación de valores de úrea y creatinina, como diagnóstico de insuficiencia renal en pacientes diabéticos Realización de una Campaña de educación en salud a cerca de la Determinación de valores de úrea y creatinina, como diagnóstico de insuficiencia renal en pacientes diabéticos Elaboración del trabajo final con los datos obtenidos Aula Incidencia social Fecha. Socialización de los alcances del proyecto con los estudiantes. 08 al 13 de abril Estudiantes preparados en la etapa pre-analítica, analítica y postanalítica de la determinación de glucosa, urea y creatinina en pacientes diabéticos Socialización de los resultados obtenidos y de la importancia de la determinación de estos análisis y contar con material de orientación en salud. 02 de mayo al 29 de junio 24 al 29 de junio En diferentes centros de salud de Santa Cruz Concienciación sobre la necesidad 15 al 19 de de conocer medidas que ayuden en julio la mejor calidad de vida en pacientes diabeticosl. Aula Estudiantes mejor preparados en la realización y presentación de informes. 15 al 19 de julio IV. EVALUACIÓN DE LA ASIGNATURA. ● PROCESUAL O FORMATIVA. Se evaluarán como actividades procesuales: la participación en clases prácticas y teóricas, exposiciones, repasos cortos, trabajos grupales, interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico de patologías, además de los trabajos de brigada realizados en las áreas seleccionadas. Independientemente de la cantidad de actividades realizada por cada estudiante, se tomarán como evaluación procesual calificándola entre 0 y 50 puntos, equivaliendo al 50% de la nota de la asignatura. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 12 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA ACTIVIDAD EVALUATIVA Preguntas orales y escritas Participación en clases Interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico Prácticas de laboratorio PARÁMETROS PONDERACIÓN FECHA Conocimiento del tema Participación en aula 5 puntos En todas las clases Defensa y Presentación 5 puntos 5, 11, 15, 17 semana evaluación y defensa de casos clínicos Presentación de GIP`s Exactitud de los conocimientos y Destreza en la práctica 10 puntos 5, 11 y 17 semana se realizarán evaluaciones prácticas y escritas de aplicación de conocimientos de las pruebas de laboratorio en las diferentes patologías Pre - internado 30 puntos TOTAL 50 puntos ● DE RESULTADOS DE LOS PROCESOS DE APRENDIZAJE O SUMATIVA (examen parcial o final) Se realizarán 2 evaluaciones parciales con contenido teórico y práctico sobre 50 puntos cada una. El examen final consistirá en un examen escrito con un valor del 30% y un examen con tribunal con un valor de 20% de la nota dando el total del 50 %. V. BIBLIOGRAFÍA BIBLIOGRAFÍA BÁSICA Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. C. Fernández y D. Mazziotta. 2005. “Gestión de la Calidad en el Laboratorio Clínico”. Editorial Panamericana. G. Ruiz Reyes. 2005. “Fundamentos de Interpretación Clínica de los Exámenes de Laboratorio”. Editorial Panamericana. G. Ruiz Reyes. 2010. “Fundamentos de Interpretación Clínica de los Exámenes de Laboratorio”, 2ª Edición, Editorial Panamericana. García-Conde J. y Col. 2003. “Hematología”. 1ª Edición. Madrid – España. Graff. “Análisis de orina. Atlas de orina”. Editorial Panamericana. Human. Diagnostica en todo el mundo. “Técnicas de laboratorio”. Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. Lluis V. Joan, Lluis A. Joseph. 2001. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. 2ª Edición. Barcelona – España. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 13 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. Pagana. “Guías de pruebas diagnóstico y laboratorio”. Editorial Elsevier. 2008. Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. “Análisis de orina y de los líquidos corporales”, 5ta. Edición, Editorial médica Panamericana. V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina. VI. PLAN CALENDARIO SEMANA ACTIVIDADES ACADÉMICAS OBSERVACIONES 1ra. Avance de materia UNIDAD I Tema 1 2da. Avance de materia UNIDAD I Tema 1 Preguntas orales y escritas 3ra. Avance de materia UNIDAD II Tema 2 Preguntas orales y escritas 4ta. Avance de materia UNIDAD II Tema 3 5ta. Avance de materia Actividades de Brigadas 6ta. Avance de materia UNIDAD II Tema 4 Preguntas orales y escritas Preguntas orales y escritas, GIP´s 1ra. incursión Primera Evaluación 7ma. Avance de materia UNIDAD II Tema 4 y 5 8va. Avance de materia Actividades de Brigadas 9na. Avance de materia UNIDAD II Tema 6 Primera Evaluación Preguntas orales y escritas, 2da. Incursión Preguntas orales y escritas 10ma. Avance de materia UNIDAD III Tema 7 y 8 11va. Avance de materia Actividades de Brigadas 12va. Avance de materia UNIDAD IV Tema 9, 10 y 11 13va. Avance de materia UNIDAD IV Tema 12, 13 y 14 14va. Avance de materia UNIDAD IV Tema 15 y 16 15va. Avance de materia UNIDAD IV Tema 17 y 18 16va. Avance de materia Actividades de Brigadas 17va. Avance de materia UNIDAD IV y V Tema 19 y 20 18va. 19va. 20va. 4ta. incursión Preguntas orales y escritas, GIP`s Preguntas orales y escritas Presentación del proyecto Informe final Presentación de notas a Dirección Académica Examen de segunda instancia DE Segunda Evaluación Preguntas orales y escritas, Preguntas orales y escritas GIP`s Avance de materia Evaluación final Avance de materia Evaluación final U N I V E R S I D A D Preguntas orales y escritas Preguntas orales y escritas,, GIP`s 3ra. incursión Segunda Evaluación A Q U I N O 14 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA VII. WORK PAPER´S y GIP PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD WORK PAPER # 1 UNIDAD I: Tema 2 TÍTULO: Orinas FECHA DE ENTREGA: 4ta semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 5ta semana de clases La orina se forma a partir del ultrafiltrado del plasma que tiene lugar en el glomérulo. Este ultrafiltrado se modifica a lo largo de la nefrona mediante procesos de reabsorción de agua solutos y secreción de electrolitos. La orina así generada se expele a través de las vías urinarias contribuyendo a la eliminación de productos del metabolismo nitrogenado y al equilibrio del medio interno, por tanto el examen de orina no solo diagnostica enfermedades del aparato urogenital. CUESTIONARIO DEL WORK PAPER 1. Explique la importancia de un análisis general de orina 2. ¿Cómo se forma la orina? 3. Describa: - importancia de realizar el examen físico de la orina - importancia de realizar el examen microscópico de la orina 4. Describa brevemente las pruebas funcionales renales 5. Explique la importancia diagnóstica de la Depuración de Creatinina 6. En la Depuración de la Creatinina ¿qué se debe hacer si la diuresis es de 2 horas? 7. Calcular la Depuración de Creatinina, con la siguiente información: Volumen de orina en 24 hrs: 950 ml; Creatinina en suero: 2,2 mg/dl; Creatinina en orina: 195 mg/dl 8. ¿Qué importancia tiene el examen de orina en el diagnóstico de insuficiencia renal? 9. Describa como se realiza el Control de Calidad para el examen general de orina - Interno (CCI) - Externo (CCE) 10. Paciente ambulatorio de sexo femenino con síntomas de infección urinaria, trae consigo una muestra de orina. Los resultados del análisis habitual realizado en esta muestra son: Color: Amarillo Proteína: Negativo Microscópico: Aspecto: Turbio Glucosa: Negativo Células: Epiteliales escamosas moderada cantidad Densidad: 1.015 Cetonas: Negativo Eritrocitos: 1-3 /campo pH: 9 Sangre: Escasa cantidad Leucocitos: 8-10 /campo Bilirrubina: Negativo Gran cantidad de bacterias Urobilinógeno: Normal Nitrito: Negativo Leucocitos: ++ U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 15 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA a) ¿Qué discrepancias existen entre los resultados de las pruebas bioquímicas y los del examen microscópico? b) Mencione una razón para las diferencias c) Identifique un resultado químico en el análisis de orina que confirme la razón de las discrepancias d) ¿Qué debe realizar el laboratorio para obtener resultados exactos para esta paciente? 11. Embarazada de 25 años de edad llega al consultorio externo con síntomas de dolor lumbar, polaquiuria y disuria. Su embarazo ha sido normal hasta este momento. Se le da un recipiente estéril y se le pide que recolecte una muestra limpia del chorro medio. Los resultados del análisis de orina de rutina son los siguientes: Color: Amarillo Proteína: Trazas Microscópico: Aspecto: Turbio Glucosa: Negativo Células: Epiteliales escamosas moderada cantidad Densidad: 1.015 Cetonas: Negativo Eritrocitos: 6-10 /campo pH: 8 Sangre: Escasa cantidad Leucocitos: 40-50 /campo Bilirrubina: Negativo Gran cantidad de bacterias Urobilinógeno: Normal Nitrito: Positivo Leucocitos: ++ a) ¿Cuál es el diagnostico mas probable de esta paciente? b) ¿Cuál es la correlación entre el color y la densidad? c) ¿Cuál es el significado de las pruebas de sangre y de proteínas? d) ¿Qué otra población presenta un riego alto de desarrollar esta enfermedad? e) ¿Qué trastorno puede desarrollarse si no se trata esta enfermedad? 12. Buscar la interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico de: - Síndrome nefrótico (nefritis) - Nefritis aguda (glomerulonefritis) - Riñón poliquístico - Tuberculosis renal - Cáncer renal - Pielonefritis - Litiasis renal - Rechazo del trasplante renal U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 16 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD WORK PAPER # 2 UNIDAD IV: Tema 9 y 11 TÍTULO: Diabetes y Perfil lipídico FECHA DE ENTREGA: 10ma semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 11va semana de clases La glucosa es un azúcar simple formado por seis átomos de carbono. Su metabolismo oxidativo proporciona la mayor parte de la energía utilizada por el organismo, por lo que existe distintos mecanismos de control homeostáticos para mantener unas concentraciones constantes que oscilan entre 70 y 110 mg/dl en ayunas. Para su medición antiguamente se utilizaban sistemas de detección de glucosa en sangre total que hoy en día han sido sustituidos por métodos enzimáticos más exactos que realizan la determinación de glucosa en suero. El uso de glucómetros portátiles es un avance en el autocontrol de los valores de glucosa en diabéticos, pero existen discrepancias con los valores de laboratorio por la diferencia en el tipo de muestra. Un perfil lipídico es un grupo de pruebas solicitadas generalmente de forma conjunta para determinar el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria. Las pruebas que conforman este perfil han mostrado ser buenos indicadores de la posibilidad de presentar un ataque cardiaco o apoplejía provocados por obstrucción de los vasos sanguíneos (endurecimiento de las arterias). El perfil lipídico incluye el colesterol total, el HDL-colesterol (denominado a menudo “colesterol bueno”), el LDL-colesterol (denominado a menudo “colesterol malo”) y los triglicéridos. Algunas veces, el informe incluirá valores adicionales calculados como la relación HDL/colesterol o cálculos basados en los resultados del perfil lipídico, edad, sexo y otros factores de riesgo. El perfil lipídico se utiliza como guía para decidir como debe ser tratada una persona en situación de riesgo. Sus resultados son considerados conjuntamente con otros factores de riesgo conocidos de la enfermedad cardiaca para proporcionar un plan de tratamiento y seguimiento. CUESTIONARIO DEL WORK PAPER 1. ¿Cuál la importancia de la determinación de la glucosa en sangre? 2. Describa brevemente a las hormonas que regulan la glucosa en sangre? 3. ¿Qué pruebas de laboratorio ayudan a diagnosticar y controlar la diabetes, explique cada una de ellas? 4. Describa en un cuadro los tipos de diabetes, sus diferencias y su importancia 5. Mencione la clasificación en períodos de la diabetes, según la OMS 6. ¿Qué es el umbral renal? y mencione su valor de referencia 7. ¿Qué es la hemoglobina glicosilada? interprete un resultado 8. ¿Qué es la fructosamina y cuál es la importancia para su determinación? U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 17 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA 9. Interprete los valores de referencia de la glicemia postprandial 10. ¿Qué es el test de O´Sullivan? 11. Buscar la interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico de: - Diabetes insípida - Pancreatitis aguda - Pancreatitis crónica - Carcinoma de páncreas 12. Buscar la interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico de: - Aterosclerosis (arteriosclerosis) - Dislipidemia - Colelitiasis U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 18 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD WORK PAPER # 3 UNIDAD IV: Tema 15 TÍTULO: Función hepática FECHA DE ENTREGA: 14va semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 15va semana de clases Las pruebas de función hepática son una serie de test que pueden alterarse en las distintas enfermedades hepatobiliares. Algunas de ellas no son específicas y pueden alterarse también en otras situaciones patológicas distintas de las enfermedades hepáticas; además, debe tenerse enguanta que los rangos de normalidad de estas pruebas corresponden a los valores que tienen el 95% de las personas sanas. CUESTIONARIO DEL WORK PAPER 1. ¿Qué importancia tiene el análisis de un perfil hepático? 2. ¿Qué patologías pueden alterar un perfil hepático? 3. Describa en un cuadro como se transmiten las diferentes hepatitis 4. En la hepatitis viral ¿Cuál es la bilirrubina que aumenta? 5. Defina - Ictericia - Ictericia neonatal - Kernicterus 6. Mencione el diagnóstico diferencial de las ictericias 7. Explique ¿por qué a la prueba del Tiempo de Protrombina (TP), se la considera dentro de las pruebas de función hepática? 8. Describa el metabolismo de las bilirrubinas 9. ¿Qué tipo de bilirrubina se elimina por la orina? 10. Buscar la interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico de: - Hepatitis alcohólica aguda - Hepatitis aguda (ictericia parenquimatosa o hepatocelular) - Hepatitis crónica - Hepatitis autoinmune - Enfermedad de Gilbert (hiperbilirrubinemia constitucional) - Ictericia obstructiva - Cirrosis hepática - Hemocromatosis (cirrosis pigmentaria) - Enfermedad de Wilson o degeneración hepatocelular - Cirrosis biliar primaria - Cirrosis biliar o colestásica segundaria - Hematoma primario (carcinoma hepático) - Cáncer hepático secundario (metástasis hepáticas) U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 19 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD WORK PAPER # 4 UNIDAD V: Tema 20 TÍTULO: Hormonas FECHA DE ENTREGA: 16va semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 17va semana de clases Las funciones del cuerpo están reguladas por dos sistemas principales de control: 1) el nervioso y 2) hormonal, o sistema endocrino. En general, el sistema hormonal se realcita principalmente con la diversas funciones metabólicas de la economía y controla la intensidad de funciones químicas en las células. Rigen el transporte de substancias a través de las membranas celulares y otros aspectos del metabolismo de las células, como crecimiento y secreción. Algunos efectos hormonales se producen en segundo, otros requieren varios días para iniciarse y luego duran semanas, meses incluso años Las hormonas presentan ciertas peculiaridades en si secreción, transporte, mecanismos de acción, metabolismo, vida media y eliminación, haciendo necesario tomar medias al momento de hacer un estudio hormonal, para alcanzar así el grado máximo de fiabilidad diagnostica. CUESTIONARIO DEL WORK PAPER 1. Realiza un cuadro de clasificación de las hormonas 2. ¿Qué hormonas comprende un perfil tiroideo? 3. ¿Cuáles son y qué importancia tienen las hormonas de fertilidad? 4. Buscar la interpretación de análisis, pruebas funcionales y cuadro biológico de: - Síndrome de Schwartz – Bartter o SIADH (Hiperfunción o secreción inadecuada antidiurética) - Acromegalia - Hipertiroidismo (Enfermedad de Graves – Basedow) - Mixedema (hipotiroidismo) - Hipotiroidismo congénito - Cáncer de tiroides - Hipoparatoroidismo (Tetánia, Insuficiencia paratoroidea) - Síndrome climatérico (Menopausia) U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 20 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRÁCTICA - GIP # 1 UNIDAD I: Tema 1 TÍTULO: Bioseguridad en laboratorio FECHA DE ENTREGA: 1ra semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 2da semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA En el sentido etimológico Bioseguridad significa “seguridad de vida” lo cual evoca el concepto de protección de vida y que en gran parte puede lograrse evitando accidentes, deberá estar diseñado en el marco de una estrategia de disminución de riesgos. El inadecuado manejo de los desechos hospitalarios puede causar diversos tipos de daños entre los que están: heridas pinchazos, sensibilización a medicamentos, infecciones, intoxicaciones, alergias, cáncer, etc. II. PRÁCTICA OBJETIVO - Aplicar las normas básicas sobre las medidas de bioseguridad a cumplir en el interior del laboratorio. - Promover por parte de los estudiantes las medidas de bioseguridad en los laboratorios de la carrera. - Concienciar a los estudiantes sobre la importancia de las medidas de bioseguridad. MATERIALES. - Video sobre bioseguridad de los diferentes niveles Video sobre lavado de manos Video de aislamiento hospitalario Multimedia Pizarra Marcadores acrílicos de colores PROCEDIMIENTO. - Ver ambos videos en el lapso de durante 40 minutos - Realizar mesa redonda - Presentación sobre los puntos más importantes de la bioseguridad en el laboratorio RESULTADOS. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 21 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. Indique la clasificación de los agentes biológicos por grupo de riesgo mencionando ejemplos 2. ¿Cuáles son los niveles de bioseguridad para los laboratorios? 3. Describa brevemente la clasificación de las Cabinas de Seguridad Biológica CSB según el tipo de nivel y el grado de protección 4. Describa la cadena de infección 5. Mencione los factores que intervienen en un accidente ocupacional 6. ¿Cuál es la importancia del lavado de manos? 7. Mencione razones por las que el personal de salud no se lava las manos 8. Mencione las precauciones estándar en el laboratorio 9. Calcular la cantidad de Hipoclorito de sodio y agua necesarios para preparar una solución al 0,1 % de Hipoclorito de sodio de volumen final de 500 ml 10. ¿Qué cantidad de Hipoclorito de sodio al 5 % se necesita para preparar 3 Lt de una solución al 1 % 11. Esquematice el programa de inmunización del personal de salud 12. Describa el procedimiento en caso de ocurrir un derrame en el laboratorio 13. Del reglamento para la aplicación de la Norma de Bioseguridad para establecimientos de Salud NB 63001-63006 (Lineamientos de gestión, Hospitales, Laboratorios, Consultorios Odontológicos y Veterinarios), describa los Objetivos y resumen de la 63001 a la 63004 14. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE del lavado de manos BIBLIOGRAFÍA. - Norma de Bioseguridad para establecimientos de Salud NB 63001-63006 - Organización Mundial de la Salud (OMS). Manual de Bioseguridad. 2005. - Reglamento municipal. Reglamento de residuos sólidos de establecimientos de salud. 2005. - Swisscontact. Manual para el manejo de residuos sólidos en establecimientos de salud. 2003. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 22 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRÁCTICA - GIP # 2 UNIDAD II: Tema 2 TÍTULO: Orinas FECHA DE ENTREGA: 2da semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 3ra semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA La orina se forma a partir del ultrafiltrado del plasma que tiene lugar en el glomérulo. Este ultrafiltrado se modifica a lo largo de la neurona mediante procesos de reabsorción del agua, solutos y secreción de electrolitos. La orina así generada se expele a través de las vías urinarias, contribuyendo a la eliminación de productos del metabolismo nitrogenado y al equilibrio del medio interno. Por tanto cualquier variación en su estado físico químico o microscópico puede deberse a alguna alteración, siendo este análisis de gran importancia al momento del diagnóstico del paciente. Se deben recibir los envases de orinas siempre limpios, lo ideal es que el frasco para la muestra sea entregado por el laboratorio el que deberá cumplir con todas las condiciones de esterilidad II. PRÁCTICA OBJETIVO Analizar dos orinas patológicas y otra normal en base a exámenes químicos físico. MATERIALES. - Tubos cónicos - Gradilla para tubos - Marcador para vidrio - Tiras reactivas para orina PROCEDIMIENTO. - La muestra deberá estar correctamente identificada y codificada de acuerdo a los registros de laboratorio, no olvidar el tipo de servicio al que pertenece el paciente. - La muestra debe ser agitada completamente en el frasco antes de iniciar el examen físico. - Identificar tubos cónicos de centrífuga y colocar aproximadamente 10 - 12 ml. - Realizar el examen físico de la orina, anotar las características - Para el examen químico, sumergir rápidamente una tira reactiva, cuidando de no dejarla mucho tiempo en la orina - Escurrir la tira en las paredes del tubo, tener cuidado de que toda la tira se impregne con la muestra U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 23 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Realizar la lectura de cada unos de los tacos reactivos, anotando rápidamente uno por uno de lo observado y comparando con el examen físico realizado RESULTADOS. EXAMEN DE ORINA Paciente……………………………………………………………………... Reg…………………………………………… Sexo…………………… Edad………………………………………………………………………….. Medico……………………………............................................................. Fecha…………………………………………………………………………. PRUEBAS DE LABORATORIO RESULTADOS EXAMEN FISICO Volumen Color Olor Aspecto Densidad pH ……………………………………. ……………………………………. …………………………….…….… …………………………………..… …………………………………….. …………………………………….. EXAMEN QUÍMICO Proteínas Glucosa Cetonas Hemoglobina S. Biliares Pigmentos Biliares Urobilinógeno Nitritos …………………………………… ……………………………………. ……………………………………. …………………………………… ……………………………………. ……………………………………. ……………………………………. ……………………………………. RESULTADOS CONCLUSIONES EVALUACIÓN. 1. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de la toma de muestra para el examen de orina 2. Describa el procedimiento para la recolección de muestra de orina para prueba de drogas 3. ¿En cuál de las siguientes situaciones el bioquímico del laboratorio solicita una nueva muestra de orina? Coincidencias y discrepancias con las decisiones: a) Muestra de color verde-amarillo con resultados negativos para las pruebas de glucosa y bilirrubina b) Muestra de color amarillo oscuro que produce gran cantidad de espuma blanca c) Orina turbia con olor intenso a amoniaco d) Muestra brumosa con densidad mayor de 1.035, determinada por un refractómetro BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 24 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Graff. “Análisis de orina. Atlas de orina”. Editorial Panamericana. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. “Análisis de orina y de los líquidos corporales”, 5ta. Edición, Editorial médica Panamericana. PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRÁCTICA - GIP # 3 UNIDAD II: Tema 5 TÍTULO: Orinas microscopia FECHA DE ENTREGA: 4ta semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 5ta semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA El examen microscópico de la orina junto con el método de análisis químico de tiras permite la detección de enfermedades renales y del tracto urinario. Por medio del microscopio se pueden detectar los elementos celulares y no celulares de la orina que no sufren reacciones químicas características. La microscopia también sirve como prueba confirmatoria en algunas circunstancias (p.ej. eritrocitos, leucocitos y bacterias) Clasificación: Elementos no organizados: - Orinas ácidas: Cristales de ácido úrico, uratos amorfos, oxalatos de calcio, leucina, tirosina, uratos de amonio, cristales de sulfas - Orinas alcalinas: cristales de calcio, fosfatos triples de amonio y magnesio, fosfato de calcio y fosfatos amorfos - Orinas Neutras: Cristales de orina ácida y alcalina Elementos organizados: - Células epiteliales: planas redondas, piriformes, etc. - Leucocitos, piocitos, eritrocitos, cilindros: hialino, granuloso, céreo, leucocitario, eritrocitario, epitelial, etc. - Estructuras diversas: Corpúsculos de grasa, espermatozoides, fibras vegetales, parásitos intestinales, almidón, tricomonas OBJETIVO. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 25 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Identificar y analizar orinas patológicas y normales en base a exámenes químicos físicos y microscópicos MATERIALES. - Tubos cónicos Gradilla para tubos Marcador para vidrio Tiras reactivas para orina Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio Centrífuga PROCEDIMIENTO. - La muestra deberá estar correctamente identificada y codificada de acuerdo a los registros de laboratorio, no olvidar el tipo de servicio al que pertenece el paciente. - La muestra debe ser agitada completamente en el frasco antes de iniciar el examen físico. - Identificar tubos cónicos de centrífuga y colocar aproximadamente 10 - 12 ml. - Realizar el examen físico de la orina, anotar las características - Realizar el examen químico de la orina, anotar las características - Llevar los tubos a centrifugar a 1500 - 2000 rpm por 5 minutos - Colocar una gota del sedimento de orina sobre el portaobjetos y colocar el cubreobjetos, realizar la visión lo más rápido posible para evitar que se seque el sedimento - Observar el sedimento con el objetivo de 10X inicialmente para buscar cilindros y luego realizar el recuento de elementos con 40X (En caso de observar partículas de talco agregarles unas gotas de lugol y estas se manifestaran de azul) RESULTADOS. EXAMEN DE ORINA Paciente……………………………………………………………………... Reg…………………………………………… Sexo…………………… Edad………………………………………………………………………….. Medico……………………………............................................................. Fecha…………………………………………………………………………. PRUEBAS DE LABORATORIO RESULTADOS EXAMEN FISICO EXAMEN QUÍMICO EXAMEN MICROSCOPICO Células redondas Células poligonales Leucocitos Eritrocitos .................................................... .................................................... .....................................x campo .....................................x campo U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 26 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Cilindros: Hialinos Cilindros: granulosos Cristales: Uratos amorfos Cristales: Acido úrico Cristales: Oxalato de Cálcio Cristales: Fosfato Triple Cristales: Fosfato Amorfo Otros cristales ................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .................................................... .................................................... OBSERVACIONES ............................................................................................................................................................. Cristales frecuentes hallados en orinas ácidas Sulfato de Calcio Ácido úrico Oxalato de calcio Cistina Partículas de urato amorfo Uratos de sodio Ác. hipúrico Leucina Colesterol Tirosina Cristales frecuentes hallados en orinas alcalinas Fosfato triple Carbonato de Calcio Biurato de amonio Partículas de fosfato amorfo de amonio U N I V E R S I D A D Fosfato de Calcio DE A Q U I N O 27 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE del examen de orina 2. Como bioquímico de laboratorio, una de sus tareas es revisar los resultados de la sección de análisis de orina. Determine por qué le preocuparían los siguientes resultados o por qué no le importarían: a) La presencia de cristales céreos y proteína negativa en orina de una niña de 6 meses b) El aumento del número de células epiteliales de transición en una muestra obtenida después de una cistoscopia c) Cristales de tirosina en una muestra con resultado negativo en la prueba de bilirrubina d) Cristales de cistina en una muestra de un paciente con gota e) Cristales de colesterol en orina con densidad mayor de 1.040 f) Trichomonas vaginalis en una muestra de orina de un hombre g) Cristales de uratos amorfos y de carbonato de calcio en una muestra con pH 6 3. Hombre de 40 años de edad desarrolla graves dolores de espalda y abdominales después de la cena. El dolor disminuye durante la noche pero se repite en la mañana y visita a su médico de familia. Los resultados de un recuento completo de sangre y de la amilasa son normales. Los resultados de los análisis de orina son los siguientes: Color: Amarillo Proteína: Trazas Microscópico: Aspecto: Turbio Glucosa: Negativo Células: Epiteliales escamosas escasa cantidad Densidad: 1.030 Cetonas: Negativo Eritrocitos: 15-20 /campo (aparecen crenados) pH: 5 Sangre: Moderada Leucocitos: 0-2 /campo Bilirrubina: Negativo Urobilinógeno: Normal Nitrito: Positivo Leucocitos: Negativo a) ¿Qué trastorno podrían representar estos resultados de los análisis de orina y los síntomas del paciente? b) ¿Cuáles serían las causas de la presencia de eritrocitos crenados? c) ¿Existe una correlación entre el color y la densidad de orina y los síntomas del paciente? d) Sobre la base de la sustancia principal que causa esta enfermedad, ¿Qué tipo de cristales podrían estar presentes? e) ¿Qué cambios en el estilo de vida se le recomiendan al paciente para evitar futuras apariciones? BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Graff. “Análisis de orina. Atlas de orina”. Editorial Panamericana. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. “Análisis de orina y de los líquidos corporales”, 5ta. Edición, Editorial médica Panamericana. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 28 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 4 UNIDAD III: Tema 7 TÍTULO: Hemograma manual FECHA DE ENTREGA: 5ta semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 6ta semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA La interpretación correcta de la citometría hemática (medición de las células de la sangre) supone el análisis detallado de cada uno de los datos que informa, los cuales pueden dividirse en tres grupos: datos de la serie roja, de la serie blanca y de la serie trombocítica. II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar hematocrito, hemoglobina, VSG, recuento de glóbulos blancos y cálculos de índices hematimétricos de muestras normales y patológicas de sangre MATERIALES. - Tubos capilares Microcentrífuga Plastilina Lector de Microhematocrito Pipetas de 5 ml Micropipetas de 20 ul Espectrofotómetro Reactivo de para la determinación de la Hb (método de la cianometahemoglobina) Tubos de ensayo Gradillas Pipetas de Westergren Gradillas para pipetas de Westergren Reloj Succionador o propipeta Líquido de Turk Cámara de Neubauer Guantes PROCEDIMIENTO. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 29 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Hematocrito La determinación del hematocrito debe realizarse por duplicado. - Homogenizar correctamente el tubo con la muestra, invirtiendo este suavemente mínimo de 8 a 10 veces - Llenar el capilar por el extremo sin la marca hasta tres cuartas partes de la capacidad del tubo (aproximadamente 5 cm.), con sangre total - Limpiar el exceso de sangre de las paredes del tubo capilar y sellar el extremo de el llenado con plastilina - Colocar el tubo capilar lleno en los huecos radiales de la centrífuga con el extremo sellado hacia fuera, lejos del centro - Asegurar la parte superior de la centrífuga, para evitar que los capilares se quiebren - Centrifugar durante 5 minutos de 10.000 a 15.000 rpm. - Terminada la centrifugación, comprobar que no se haya producido salida de sangre del capilar y extraerlo de la centrífuga - Observar en el capilar, las 3 separaciones - Colocar el tubo con el extremo sellado en la parte inferior del lector de hematocrito - Hacer coincidir la línea inicial de la columna de glóbulos rojos con el principio del lector (0) - Medir la longitud de la columna de eritrocitos hasta la línea de separación plasma/eritrocitos - Fijar el número de la escala el cual, será el valor en % de Hematocrito Hemoglobina - Homogenizar correctamente el tubo con la muestra, invirtiendo este suavemente mínimo de 8 a 10 veces. - En dos tubos debidamente identificados, como estándar (S) y desconocido (D) colocar: S 2,5 ml 10 ul Diluyente Muestra (sangre entera) Estándar D 2,5 ml 10 ul - - Mezclar por agitación suave y esperar 3 minutos para que se produzca la hemólisis total y se complete la transformación de toda la hemoglobina en cianometahemoglobina - Leer la absorbancia del D y S a 540 nm o fotocolorímetro con filtro verde (520 – 550), llevando el aparato a cero con reactivo Hemoglobina (g/dl) = D x Factor Factor = estándar (g/dl) S VSG - Homogenizar correctamente el tubo con la muestra, invirtiendo este suavemente mínimo de 8 a 10 veces - Llenar la pipeta de Westergren mediante una propipeta o cualquier otro sistema de succión mecánica hasta que la sangre alcance el enrase o marca de 0 mm - Limpiar el exceso de sangre de las paredes de la pipeta - Colocar la pipeta en el soporte procurando que quede estrictamente en posición vertical - Se debe vigilar algunos factores capaces de modificar la VSG, tales como temperatura, vibraciones o la incidencia directa a la luz U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 30 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - La pipeta debe permanecer en dicha posición durante un tiempo exacto de 60 minutos - Transcurrido este tiempo, se lee la distancia desde la señal “0” hasta el punto mas alto de la columna de eritrocitos - El valor de esta distancia, expresado en milímetros, corresponde al de la VSG durante la primera hora (mm/hora) Recuento de glóbulos blancos Realizar una dilución: 1/20 1. Preparar la dilución con un volumen final de 1 ml (1000 ul) 2. 950 ul del reactivo de dilución (liquido de Turk) y 50 ul de sangre anticoagulada 3. Mezclar suavemente hasta la homogenización completa, dejando actuar por 5 minutos 1. 2. 3. 4. 5. Llenado de la Cámara cuentaglobulos La cámara debe estar limpia y seca Colocar el cubreobjeto sobre los prismas laterales Proceder al llenado por la parte superior del retículo con una micropipeta de volumen regular Se debe evitar los revalses por los surcos laterales y transversales Una vez llena, se debe dejar reposar por lo menos 2 a 3 minutos para que se asienten los elementos formes Recuento 1. Utilizando un microscopio, observar con objetivo x40 y bajando ligeramente el condensador 2. Contar los leucocitos que se depositan sobre 4 cuadrados grandes de las esquinas de cualquiera de los retículos 3. Cada cuadrado grande incluye un volumen de 1/10 mm3 4. La suma total de los leucocitos contados, el factor de dilución, y el volumen de cada cuadrado deberá utilizarse para efectuar los cálculos Factor = 10 x 20 4 = 50 10 = volumen de cada cuadrado 20 = Factor de dilución 4 = Cuadrados grandes contados U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 31 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Índices hematimétricos VCM (femtolitros; fl) = MCH (Picogramos; pg) = MCHC (%) = Hematocrito (HCT) Conteo de eritrocitos (RBC) x 10 Hemoglobina (HGB) Conteo de eritrocitos (RBC) Hemoglobina (HGB) Hematocrito (HCT) x 10 x 100 RESULTADOS. CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Hematocrito y responder lo siguiente: - Describa los factores naturales o fisiológicos que determinan la diferencia de los valores de referencia de un hematocrito 2. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Hemoglobina y responder lo siguiente: - Describa las formas y lugares en los que se encuentra la hemoglobina en nuestro organismo - ¿Por qué se prefiere la valoración de la hemoglobina en vez del hematocrito en e proceso de evaluación de una anemia? 3. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de VSG y responder lo siguiente: - Explique ¿cuáles son las limitantes de la valoración de la VSG? 4. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Recuento de glóbulos blancos 5. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Índices hematimétricos BIBLIOGRAFÍA. - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - García-Conde J. y Col. 2003. “Hematología”. 1ª Edición. Madrid – España. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lluis V. Joan, Lluis A. Joseph. 2001. “Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología”. 2ª Edición. Barcelona – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 32 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 5 UNIDAD III: Tema 7 TÍTULO: Formula leucocitaria, recuento de reticulocitos FECHA DE ENTREGA: 6ta semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 7ma semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA La interpretación correcta de la citometría hemática (medición de las células de la sangre) supone el análisis detallado de cada uno de los datos que informa, los cuales pueden dividirse en tres grupos: datos de la serie roja, de la serie blanca y de la serie trombocítica. II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar el recuento de la formula leucocitaria, reticulocitos, recuento de plaquetas de muestras normales y patológicas de sangre MATERIALES. - Pipetas de 5 ml y 10 ml Tubos de hemólisis Gradillas para tubos Guantes Reloj o cronómetro Marcador para vidrio May Grunwald – Giemsa Micropipetas de 20 ul y 1000 ul Cámara de Neubauer Caja petri Algodón Papel absorbente Reactivo de Rees (reactivo de dilución) PROCEDIMIENTO. Formula leucocitaria Tinción May – Grunwald – Giemsa U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 33 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA A partir de una extensión de sangre preparada lo más inmediatamente posible, se procede a realizar la coloración 1. Colocar el portaobjetos en una bandeja de tinción, con el frotis o extensión hacia arriba 2. Cubrir la totalidad del portaobjetos con solución May – Grunwald, durante 2 minutos 3. Retirar el colorante y lavar la extensión, cubriendo el portaobjeto con agua destilada 1 minuto, vaciar todo el líquido 4. Cubrir la totalidad de la extensión con solución Giemsa diluido, durante 10 minutos 5. Lavar la extensión con abundante agua de grifo 6. Secar la extensión al aire, una vez seca, esta lista para su observación mediante el microscopio Tinción Panóptico rápido Solución n° 1: Solución alcohólica de triarilmetano. Solución n° 2: Solución tamponada de xanteno Solución n° 3: Solución tamponada de tiamina. A partir de una extensión de sangre preparada lo más inmediatamente posible, se procede a realizar la coloración 1. En tres cubetas de Wertheim o similares se disponen los colorantes solución n°1, n°2 y n°3 2. Colocamos los frotis en el cestillos para porta objetos y lo sumergimos en la cubeta con la solución n° 1 durante 1 segundo. Repetimos la inmersión cuatro veces (en total 5 segundos). 3. Sumergimos a continuación otras cinco veces, cada una de un segundo de duración, en la cubeta con la solución n°2. Dejamos escurrir. 4. Finalmente, sumergimos otras cinco veces de un segundo cada una en la cubeta con la solución n°3. 5. Lavamos con agua destilada y dejamos secar, una vez seca, esta lista para su observación mediante el microscopio Método Visual o Manual 1. Una buena extensión presentará tres áreas de diferente grosor y con distribución distinta de leucocitos. Zona excesivamente gruesa (Origen), Zona excesivamente fina (cola) y Zona ideal (cuerpo). 2. Debe iniciarse con una primera observación mediante un objetivo de poco aumento (10X), apreciando la calidad de la tinción, explorando el área de cómputo, los bordes laterales y extremos donde los monocitos, neutrófilos y grandes células anormales tienden a situarse. 3. Luego con un objetivo de mayor aumento (100X) hacer un recorrido sobre la zona elegida (Cuerpo), procurando realizar el conteo de 100 células distribuidas entre la zona central (50%) y en las zona periférica o bordes (50%), evitando contar dos veces las mismas células 4. A medida que se cuenta cada leucocito, se clasifica, utilizando de manera practica un tabulador electrónico o mecánico 5. Normalmente la formula visual se valora en tantos por cien (%) y se realiza en base a la observación microscópica de 100 leucocitos 6. También se debe informar la morfología o alguna variación de la misma, de eritrocitos, leucocitos y plaquetas U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 34 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Recuento de plaquetas Realizar una dilución: 1/100 1. En un tubo de plástico colocar: 2. 990 ul del reactivo de dilución (reactivo de Rees), previamente filtrado y 10 ul de sangre anticoagulada 3. Mezclar suavemente hasta la homogenización completa, dejando actuar por 5 minutos 1. 2. 3. 4. 5. Llenado de la Cámara cuentaglobulos La cámara debe estar limpia y seca Colocar el cubreobjeto sobre los prismas laterales Proceder al llenado por la parte superior del retículo con una micropipeta de volumen regular Se debe evitar los revalses por los surcos laterales y transversales Una vez llena, se debe dejar reposar en una caja petri con algodón o papel absorbente embebido en agua (cámara húmeda), 20 minutos Recuento 1. Utilizando un microscopio, observar con objetivo 40X y bajando ligeramente el condensador y moviendo el micrométrico 2. Contar las plaquetas que se depositan sobre 16 cuadritos medianos que existen en unos de los 4 cuadrantes de recuento de glóbulos blancos 3. La suma de plaquetas están presentes en un volumen de 0,1 mm3 (1mm2 x 0,1mm), este numero para que tenga valor de 1mm3, debe ser multiplicado por 10 y por 100 que corresponde al factor de dilución 4. Finalmente este resultado multiplicar por 106, para expresarlo en 1 litro (L) según el SI de unidades (plaquetas/ul) Recuento de reticulocitos - - - - - Este método usa como colorante el azul de metileno nuevo: 1 g cada 100 ml de solución citratada (1 vol de citrato de sodio 30 g/L y 4 vol de ClNa 9 g/L) Mediante una pipeta Pasteur se añaden a un tubo de hemólisis tres gotas de solución colorante y tres gotas de sangre total bien homogeneizada. En caso de valores muy bajos de hematocrito debe colocarse doble cantidad de sangre total que de solución colorante La suspensión sangre/colorante se agita suavemente e incubar por 15 minutos en baño María a 37 ºC, transcurrido este tiempo, mezclar bien el contenido del tubo, tomar una pequeña gota de la suspensión y se extiende sobre un portaobjetos (realizar 2 extendidos en lamina), una vez seca identificar con lápiz. Agregar una gota de aceite de inmersión, colocar el extendido sobre la platina del microscopio y enfocar en bajo poder (10X) para localizar el área donde los glóbulos rojos que no estén superpuestos. Pasar al objetivo de 100X cuidadosamente e iniciar el conteo. Las células rojas toman una coloración grisácea verdosa. El RNA presente en los reticulocitos se colorea de azul intenso. Contar todas las células rojas presentes en el campo seleccionado y luego enumere los reticulocitos existentes, localizar un segundo campo y continuar hasta que todos los reticulocitos existentes en 1000 células rojas hayan sido contadas. Se cuentan aproximadamente 1.000 hematíes y se saca el promedio de Reticulocitos. Es necesario realizar el recuento sobre un mínimo de 500 eritrocitos. El recuento se efectúa contando en donde los eritrocitos estén distribuidos homogéneamente. Se cuentan tantos campos como sean necesarios para alcanzar la cifra de eritrocitos requerida, siendo 100-125 el número optimo de hematíes por campo de los cuales distinguimos cuales son Reticulocitos para U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 35 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - luego expresar el resultado como porcentaje, siendo el 100 % el número total de hematíes contado. Este valor será válido si se trata de una concentración normal de eritrocitos en sangre total. En casos en que el hematocrito sea bajo se debe corregir el número total de Reticulocitos. Por ello, cuando disminuye el número de eritrocitos como suele suceder en la anemia, el valor porcentual debe corregirse según el hematocrito empleando la siguiente fórmula: Reticulocitos corregidos = % de Reticulocitos observados X Hto del paciente 45 (Hto ideal) Cálculo 500 células observadas -----------> 100 % Nº Reticulocitos observados -----------> X X = % (Valor de Reticulocito) RESULTADOS. CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Formula leucocitaria y responder lo siguiente: - ¿Cuáles son las desventajas de realizar un frotis mal realizado? - Existe diferencia en la lectura realizada entre un frotis sanguíneo con sangre + anticoagulante con el sangre entera? 2. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Recuento de plaquetas 3. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de Recuento de reticulocitos BIBLIOGRAFÍA. - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - García-Conde J. y Col. 2003. “Hematología”. 1ª Edición. Madrid – España. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lluis V. Joan, Lluis A. Joseph. 2001. “Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología”. 2ª Edición. Barcelona – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 36 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 6 UNIDAD IV: Tema 9 TÍTULO: Determinación de Glucosa Sanguínea FECHA DE ENTREGA: 7ma semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 8va semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnostico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tiene por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los síntomas resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado. Dado que existen múltiples factores de hiper o hipo glicemia, debe considerarse en cada caso la condición fisiológica y/o patología presentes en el paciente en cuestión. Fundamento del método: El esquema de reacción es el siguiente: GOD Glucosa + O2 + H2O ______________ ACIDO GLUCORONICO + H2O2 POD 2H2O2 + 4- AF + FENOL _________________ QUINONA COLOREADA + 4H2O II. PRÁCTICA OBJETIVO Determinación de glucosa en sangre en muestra normal y patológica MATERIALES. - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados - Tubos de ensayo - Gradillas - Guantes - Baño de agua a 37 °C - Reloj o cronometro - Marcador para vidrio - Frasco de vidrio color caramelo - Espectrofotómetro Reactivo de trabajo U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 37 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA De acuerdo al volumen de trabajo colocar en una probeta 500 partes de agua destilada, 50 partes de reactivo 4-AF, 50 partes de reactivo fenol y llevar a 1000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes de GOD/POD previamente homogeneizadas. Mezclar por inversión, sin agitar. Rotular y fechar. Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones antedichas. Es importante además respetar el orden de agregado de los reactivos y asegurar una perfecta homogenización de los mismos, a fin de que el reactivo Fenol no deteriore el reactivo de trabajo. Precauciones: Los reactivos son para uso in vitro, el fenol es tóxico e irritante. PROCEDIMIENTO En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco) S (Standard) y D (Desconocido) colocar: B 2.5 ml Standard Muestra Reactivo de Trabajo S 25 ul 2.5 ml D 25 ul 2.5 ml Incubar 10 minutos en baño de agua a 37°C. Luego leer en espectrofotómetro a 505 nm en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco Estabilidad de la mezcla de reacción final: El color de reacción final es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de este tiempo Calculo de los resultados Glucosa g/l = D x F donde F = 1,00 g/l S Valores de referencia Suero o plasma: 70 - 110 mg/dl Linealidad: La reacción lineal hasta 4,5 g/l. Para valores superiores, diluir ½ la solución coloreada final con el reactivo de trabajo y repetir la lectura multiplicando el resultado final por 2 CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de glicemia 2. ¿Cuál es la función que cumple la glucosa en nuestro organismo? 3. Defina: - Glucólisis - Gluconeogénesis 4. ¿En qué consiste la Curva de Tolerancia a la Glucosa? 5. Describa lo que es la diabetes y cuantos tipos de diabetes existen? 6. ¿Qué importancia tiene la linealidad en esta prueba de diagnostico? BIBLIOGRAFÍA U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 38 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 39 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 7 UNIDAD IV: Tema 10 TÍTULO: Determinación de Urea FECHA DE ENTREGA: 8va semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 9na semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA La urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la mayoría de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a través de los riñones. Una elevación de la concentración sérica de urea, se interpreta generalmente como una posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores séricos de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en estas variables se traducirá en un cambio de la concentración de urea en suero. Fundamento del método: La ureasa descompone específicamente a la urea produciendo dióxido de carbono y amoníaco; éste reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de indofenol que se determina colorimétricamente. II. PRÁCTICA OBJETIVO Determinación de urea en suero normal y patológico MATERIALES. - Espectrofotómetro - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados - Baño de agua a 37 ºC - Reloj o cronómetro - Tubos de ensayo - Gradillas - Marcador para vidrio - Guantes REACTIVOS Reactivo 1: disolver el contenido del frasco con agua destilada de acuerdo con las indicaciones del rótulo. Mezclar por inversión hasta disolución completa. Fechar. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 40 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Reactivo 2: diluir el contenido del frasco con agua destilada de acuerdo con las indicaciones del rótulo y mezclar por inversión. Colocar fecha de preparación. Standard: listo para usar. Precauciones: Los reactivos son para uso in vitro. El fenol es tóxico e irritante. PROCEDIMIENTO. Uremia: En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar una o dos gotas de agua y agregar: Standard Suero o plasma Ureasa B ----1 gota S 20 ul --1 gota D --20 ul 1 gota Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37ºC. Luego agregar: Reactivo 1 Reactivo 2 B 1 ml 1 ml S 1 ml 1 ml D 1 ml 1 ml Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37ºC. Luego agregar: Agua destilada B 10ml S 10ml D 10ml Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 10 minutos leer en fotocolorímetro con filtro verde (510-550 nm) o en espectrofotómetro a 540 nm, llevando a cero con el Blanco. Urea en orina: Se sigue la misma técnica que para sangre utilizando orina diluida con agua o solución fisiológica. Como el contenido de urea está relacionado con la densidad, es conveniente diluir según el siguiente esquema: Densidad hasta 1,015................................. diluir 1/10 Densidad de 1,016 a 1,025......................... diluir 1/20 Densidad mayor de 1,025........................... diluir 1/40 Como la orina contiene cantidades variables de amoníaco debe efectuarse un Blanco de orina (BD). Este Blanco se ejecuta igual que el Blanco de Reactivo (B), con la diferencia que, luego de agregar el Reactivo 1 y antes del 2, se agregan 20 ul de la dilución de orina. Llevar el aparato a cero con el Blanco de Reactivos (B) y leer el Standard (S), el Blanco de orina (BD) y el Desconocido (D). Estabilidad de la mezcla de reacción final: El color de la reacción final es estable 12 horas, por lo que la absorbancia debe ser leída en ese lapso. Cálculo de los resultados: SUERO O PLASMA Urea (g/l) = D x factor factor = 0,60 g/l S BUN (g/l) = D x factor ORINA factor = 0,28 g/l S Urea (g/l) = (D-BD) x 0,60 x dilución S U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 41 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Valores de referencia: Suero o plasma: Sobre un total de 1700 individuos de ambos sexos, con edades comprendidas entre los 20 y 45 años, concurrentes al consultorio externo de un servicio hospitalario en la zona de Rosario (Argentina) sin patología renal manifiesta (con control de diuresis y densidad urinaria), el 95% de los valores de uremia en suero estuvo comprendido entre 0,20 g/l y 0,45 g/l. Orina: Normalmente, la eliminación de urea está sujeta a grandes variaciones dependientes de la dieta. Por término medio, y con una dieta mixta corriente, se excretan unos 30 g en 24 horas, con oscilaciones comprendidas entre 20 g y 40 g. Limitaciones del procedimiento: Evitar contaminaciones con amoníaco provenientes del ambiente (humo de cigarrillo, vapores amoniacales). Rango dinámico: cuando el resultado obtenido sobrepasa los 1,5 g/l de urea, debe diluirse la solución final 1/3 empleando como diluyente Blanco de Reactivos y efectuando la lectura luego de 10 minutos de efectuada la dilución. El resultado obtenido debe multiplicarse por la dilución efectuada. CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. 2. 3. 4. 5. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de la determinación de urea ¿Cuál es la función que cumple la urea en nuestro organismo? ¿Qué relación tiene la urea con la creatinina sérica? ¿En qué situaciones patológicas se observa modificada las concentraciones de urea séricas? ¿Qué relación existe entre la urea sérica y la eliminada por orina? BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 42 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 8 UNIDAD IV: Tema 10 TÍTULO: Determinación de Creatinina FECHA DE ENTREGA: 9na semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 10ma semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA Compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtración renal. Su determinación en suero, así como el clearence de creatinina endógena constituyen parámetros importantes para el diagnostico de diversas afecciones renales. Sin embargo, debido a los problemas prácticos inherentes a la determinación del clearence, la determinación de creatinina sérica es más utilizada como índice de funcionalismo renal. Fundamento del método: La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacción de Jaffe) produciendo un cromógeno rojo. La velocidad de esta reacción, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentración de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reacción cinética de primer orden para la creatinina. Por otra parte se ha demostrado que los cromógenos nocreatinina que interfieren la mayor parte de las técnicas convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la reacción. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reacción, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina. II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar la cuantificación de creatinina en un paciente normal y uno con insuficiencia renal MATERIALES. - Espectrofotómetro o fotocolorímetro Tubos de khan y de fotocolorímetro Micropipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados Reloj o cronometro Marcador para vidrio Guantes REACTIVOS. - Reactivo 1: acido pícrico 41.4 mmol/l - Reactivo 2: buffer glicina /NaOH 1 mol/l, pH final 12.4 U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 43 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Standard: solución de creatinina 20 mg/l PROCEDIMIENTO. Equilibrar el reactivo de trabajo a la temperatura de reacción (25 ºC). Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada. En dos cubetas espectrofotométricas marcadas S (Standard) y D (Desconocido), colocar: S 1,2 ml 0,2 ml -- Reactivo de trabajo Standard Muestra D 1,2 ml -0,2 ml Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronómetro y proseguir la incubación. A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubación. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos después de la primera lectura). Longitud de onda 500 nm Técnica para orina: realizar una dilución 1:50 de la misma en agua desionizada. Calculo de los resultados Creatinina en suero (mg/dl)= (D2 – D1) x F f= 20 mg/l S2 – S1 Creatinina en orina (g/24hrs) = D2 – D1 x V S2 – S1 Siendo: V= volumen de la diuresis expresado en litros/24hrs La formula surge de: Creatinina en orina (g/24hrs) = D2 – D1 x 0,020 g/l x 50 x V S2 – S1 Donde: 0.0.20 g/l = concentración del Standard 50= factor de dilución Depuración de creatinina endogena (D.C.E): D.C.E ml/min= Creatinina en orina (g/24hrs) X 694 ml/min. Creatinina en suero (mg/l) Donde: 694 ml/min. g24hrs = 1000 mg x 1000 ml = 1.000.000 ml mg/l 1 mg x 1440 min. 1440 min. Valores de referencia Suero: Hombres: 0.7 a 1,3 mg/dl U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 44 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Mujeres: 0,6 – 1,1 mg/dl Orina: Hombre: 14 - 26 mg/Kg/24 hs Mujer : 11 – 20 mg/Kg/24 hs D.C.E: Hombre: 94 – 140 ml/min/1,73 m2 Mujer : 72 – 110 ml/min/1,73 m2 CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de la determinación de creatinina 2. ¿En qué situaciones patológicas se incrementa la concentración de creatinina sérica? 3. ¿En qué consiste la depuración de creatinina? 4. ¿Cuál la importancia de la creatinina en sangre en relación a la función renal? 5. ¿Qué otras pruebas de laboratorio se asocian a una creatinina alterada en sangre? BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 45 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUIA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 9 UNIDAD IV: Tema 10 TÍTULO: Determinación del ácido úrico FECHA DE ENTREGA: 10ma semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 11ra semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA El ácido úrico es el producto de desecho final del catabolismo de los ácidos nucleicos y las purinas en humanos. El ácido úrico deriva de tres fuentes 1) catabolismo de nucleoproteínas ingeridas, 2) catabolismo de nucleoproteínas endógenas y 3) transformación directa de nucleótidos purínicos endógenos. La formación de ácido úrico ocurre solo en tejido que contiene la enzima xantinaoxidasa. La mayoría del ácido úrico del organismo es sintetizado en el hígado y en la mucosa intestinal. Al alrededor de dos tercios del urato es excretado por el riñón, y el tercio restante es eliminado por vía intestinal. Un adulto medio, con una dieta baja en proteínas, excreta aproximadamente de 275 mg a 600 mg de acido úrico en 24 horas. Fundamento del método: UOD Ácido úrico + 2 H2O + O2 alantoína + H2O2 + CO2 2H2O2 + 4-AF + clorofenol 4-(p-benzoquinona monoimino) fenazona + 4 H2O II. PRÁCTICA OBJETIVO Determinar ácido úrico en suero normal y patológico MATERIALES. - Espectrofotómetro o fotocolorímetro Tubos de ensayo y de fotocolorímetro Micropipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados Reloj o cronometro Marcador para vidrio Guantes U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 46 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA REACTIVOS. - Reactivo: Uricasa, peroxidasa, clorofenol, 4 –aminofenazona y fosfatos para lãs siguientes reacciones finales UOD mayor o igual a 26 U/l 4-AF: 6 mM POD mayor o igual a 200 U/l pH: 7,3 ± 0,1 Clorofenol: 2,4 mM fosfatos: 25 mM - Standard: solución de ácido úrico 100 mg/l PROCEDIMIENTO. En tres tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas marcados B (Blanco), S (Standard), D (Desconocido), colocar: Standard Muestra Reactivo de trabajo B ----2.5 ml S 50 ul --2.5 ml D --50 ul 2.5 ml Mezclar suavemente e incubar 15 minutos en baño de agua a 37 ºC o 30 minutos a temperatura ambiente (18 – 25 ºC) Retirar, enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490 – 530 nm), llevando el aparto a cero con el Blanco Estabilidad de la mezcla de reacción final: El color de reacción final es estable 45 minutos, por lo que la absorbancia puede ser leída dentro de este lapso Cálculo de los resultados Ácido úrico mg/dl = D x f Donde f = 100 mg/l S Valores de referencia Hombres: 25 – 60 mg/l Mujeres: 20 – 50 mg/l RESULTADOS. CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de la determinación de ácido úrico BIBLIOGRAFÍA. - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 47 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s #10 UNIDAD IV: Tema 11 TÍTULO: Determinación del Colesterol y Triglicéridos FECHA DE ENTREGA: 11 ra semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 12da semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA Colesterol La determinación de colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnostica limitada. Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formación de ateromas dado que las complicaciones arterioscleróticas prevalecen en individuos hipercolesterolémicos. Estudios epidemiológicos demuestran que el riesgo de contraer enfermedad cardiaca coronaria para individuos de mas de 40 años con colesterolemia menor a 2.10 g/l es 3 veces menor que entre individuos con mas de 2.30 g/l y 6 veces menor que entre individuos con mas de 2.60 g/l. Fundamento del método: El esquema de reacción es el siguiente: Ésteres de colesterol lipasa colesterol + ácidos grasos Colesterol +O2 CHOD colesten –3 ona +H2 O2 H2 O2 + 4-AF + fenol POD quinona coloreada + H2O Triglicéridos Los triglicéridos son lípidos absorbidos en la dieta y también producidos en forma endógena a partir de los carbohidratos. Su medición es importante en el diagnóstico y manejo de las dislipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen genético o ser secundarias a otras tales como nefrosis, U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 48 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA diabetes mellitus y disfunciones endócrinas. El aumento de triglicéridos se ha identificado como un factor de riesgo en enfermedades ateroscleróticas. Fundamentos del método: El esquema de reacción es el siguiente: Triglicéridos lipoprotein lipasa> glicerol + ácidos grasos Glicerol + ATP glicerol kinasa> glicerol-1-P + ADP glicerol-1-fosfato + O2 GPO > H2O2 + dihidroxiacetonafosfato 2 H2O2 + 4-AF + clorofenol POD> quinonimina roja II. PRÁCTICA OBJETIVOS - Determinar la concentración de colesterol en un paciente normal y uno patológico - Determinar la concentración de triglicéridos en un paciente normal y uno patológico MATERIAL - Espectrofotómetro o fotocolorímetro Micropipetas, pipetas y material volumétrico adecuados Frasco de vidrio color caramelo Tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas Baño de agua a 37°C Reloj o cronometro Marcador para vidrio Guantes REACTIVOS. Colesterol Standard: Solución de colesterol 2 g/l Enzimas: Suspensión conteniendo lipasa fungal 300 U/ml, colesterol peroxidasa (POD) 20 U/ml. Reactivo 4 –AF: solución de 4- aminofenazona 25 mmol/l. Reactivo Fenol: solución de fenol 55 mmol/l. oxidasa (CHOD) 3U/ml y Triglicéridos Reactivo de trabajo: - 10 x 20 ml: agregar 20 ml de Buffer a un vial de Enzimas. Mezclar hasta disolución completa. Homogeneizar y fechar. - 4 x 50 ml: reconstituir el contenido de un vial de Enzimas - El Reactivo de Trabajo puede presentar una coloración rosada que no afecta su funcionamiento. Lecturas del Blanco superiores a 0,160 D.O. o lecturas del Standard anormalmente bajas, son indicios de deterioro del Reactivo. En tal caso, desechar. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 49 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROCEDIMIENTO. Colesterol En tres tubos de fotocolorimetro o cubetas espectrofotométricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: Standard Muestra Reactivo de trabajo B ----2 ml S 20 ul --2 ml D --20 ul 2 ml Cálculos de los resultados Colesterol g/l = D x f donde f= 2.00 g/l S Valores de referencia Hombres: 1.72 a 2.48 g/l Mujeres: 1.75 a 2.40 g/l n=63 n=68 Edad: 35-a 62 años Edad: 30- a 60 años Triglicéridos Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos. En tres tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar: B S D Standard 10 ul Muestra 10 ul Reactivo de Trabajo 1 ml 1 ml 1 ml Mezclar, incubar 5 minutos a 37ºC o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25ºC). Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato a cero con agua destilada. Estabilidad de la mezcla de reacción final. El color de reacción final es estable 60 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de este lapso. Cálculo de los resultados: Corregir las lecturas con el Blanco de reactivos y usar las lecturas corregidas para los cálculos. TG g/l = D x factor factor = 2 g/l S Valores de referencia Deseable: < 1,50 g/l Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l Elevado: 2,00 - 4,99 g/l Muy elevado: > 5,00 g/l No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos o valores de referencia. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 50 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Linealidad: la reacción es lineal hasta 10 g/l de triglicéridos. Para valores superiores, repetir la determinación con muestra diluida 1:2 con solución fisiológica. Multiplicar el resultado obtenido por la dilución efectuada. CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. Realizar el Procedimiento operativo estandarizado POE de la determinación de colesterol y responder lo siguiente: - ¿Cuáles son las funciones que cumple el colesterol en nuestro organismo? - Describa el metabolismo del Colesterol - ¿Defina lo que es dislipidemia, cuál es su efecto en nuestro organismo? - ¿En qué patologías se elevan los niveles de colesterol? 2. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE de la determinación de triglicéridos y responder lo siguiente: - ¿Qué relación tienen los lípidos con las enfermedades cardiovasculares? - ¿Cuál es función que cumplen los triglicéridos en nuestro organismo? - ¿En qué situaciones patológicas se observa modificada las concentraciones de triglicérido sérico? - ¿La elevación de Triglicéridos con qué otras pruebas de laboratorio está relacionada? BIBLIOGRAFÍA. - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 51 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 11 UNIDAD IV: Tema 11 TÍTULO: Determinación de HDL y LDL colesterol FECHA DE ENTREGA: 12da semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 13ra semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA HDL colesterol: El desarrollo de los estudios epidemiológicos sobre los ECC y la arterioesclerosis, ha llevado a la identificación de diversos factores que por promover el desarrollo de las mismas, han sido denominados factores de riesgo. Entre ellos figuran la hipertensión, obesidad, inactividad física, dislipidemias, etc. Analizando con el mismo criterio los valores de HDL colesterol, se determinó que es un factor de riesgo negativo por lo que su correlación con las ECC es inversa, su importancia es pronóstica. LDL colesterol: El exceso del LDL colesterol debe ser considerado como factor de riesgo para el desarrollo de enfermedad cardiaca coronaria, considerando que el efecto protector de las HDL solo parece tener relevancia dentro del rango de concentraciones del colesterol circulante. Fundamento del método: Las lipoproteínas de alta densidad HDL se separan precipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de sulfato de dextrán de pm 500000 en presencia de iones de Mg++. En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la determinación del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema enzimático colesterol oxidasa/peroxidasa con colorimetría según Trinder (fenol 4-aminofenazona). Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) se separan del suero precipitándolas selectivamente mediante agregado de polímeros de alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas (HDL y VLDL) el colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema enzimático colesterol oxidasa/peroxidasa con colorimetría según trinder (fenol/4-AF). Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante se obtiene el colesterol unido a las LDL II. PRÁCTICA OBJETIVO - Realizar la determinación del HDL colesterol en suero - Realizar la determinación del LDL colesterol en suero MATERIALES. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 52 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Espectrofotómetro o fotocolorímetro Micropipetas, pipetas y material volumétrico adecuados Tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas Gradilla Baño de agua a 37°C Reloj o cronometro Marcador para vidrio Guantes REACTIVOS. HDL Reactivo precipitante: solución de ácido fosfotúngstico 0,44 mmol/l y cloruro de magnesio 20 mmol/l LDL Reactivo precipitante: solución 10 g/l de Sulfato de polivinilo disuelto en polietilenglicol (pm 600) al 25 % pH 6,7 PROCEDIMIENTO. HDL En tubo de Kahn medir 200 ul de muestra y agregar 500 ul de reactivo precipitante Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 10 minutos en reposo a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3000 rpm o 2 minutos a 12000 rpm. Usar el sobrenadante límpido con muestra. En tres tubos de fotocolorímetro marcados B, S y D, colocar: B ----2 ml Sobrenadante Standard Reactivo de trabajo S --20 ul 2 ml D 200 ul --2 ml Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC si se usa el reactivo de trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 minutos a 37 ºC cuando se usa el de Colestat enzimático. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotómetro o en colorímetro con filtro verde (490 – 530 nm), llevando a cero con el Blanco Estabilidad de la reacción final: El color de reacción final es estable 2 horas por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso Cálculos de los resultados HDL Colesterol (g/l) = D x f f= 0,762 S 0,762 = 2 g/l x VFE x VRE x VS VM VRS VE Donde: VFE = volumen final de extracto = 0,7 ml VM = volumen de muestra procesada = 0,2 ml VRE = volumen de reacción con extracto = 2,2 ml VRS = volumen de reacción con Standard = 2,02 ml U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 53 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA VS = volumen de Standard en la reacción = 0,020 ml VE = volumen de extracto en la reacción = 0,2 ml Si se emplean volúmenes de reactivo diferentes de 2 ml el factor 0,762 varía y debe ser calculado nuevamente, reemplazado en la fórmula VRE y VRS Valores de referencia El panel de expertos del Nacional Colesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de HDL colesterol: 0,40 – 0,60 g/l LDL En un tubo de Kahn colocar 200 ul de muestra y 100 ul de reactivo precipitante, homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 15 minutos enun baño de agua a 20 – 25 ºC. Centrifugar 15 minutos a 3000 rpm. Separar inmediatamente el sobrenadante. Usar el sobrenadante como muestra para el ensayo colorimétrico. En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: Sobrenadante Standard Reactivo de trabajo B ----2 ml S --20 ul 2 ml D 100 ul --2 ml Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC si se usa el reactivo de trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 minutos a 37 ºC cuando se usa el de Colestat enzimático. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotómetro o en colorímetro con filtro verde (490 – 530 nm), llevando a cero con el Blanco Cálculos de los resultados LDL Colesterol (g/l) = Colesterol total (*) - (D x f) Dx f f= 0,624 S (*) valor obtenido con colestat enzimatico o colestat enzimático AA/líquida El valor 0,624 surge de: 0,624 = 2 g/l x VFE x VRE x VS VM VRS VE Donde: VFE = volumen final de extracto = 0,3 ml VM = volumen de muestra procesada = 0,2 ml VRE = volumen de reacción con extracto = 2,1 ml VRS = volumen de reacción con Standard = 2,02 ml VS = volumen de Standard en la reacción = 0,020 ml VE = volumen de extracto en la reacción = 0,1 ml Si se emplean volúmenes diferentes el factor 0,624 varía y debe ser calculado nuevamente Valores de referencia El panel de expertos del Nacional Colesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de LDL colesterol en relación al riesgo de contraer enfermedad cardiaca coronaria (ECC): - Riesgo bajo o nulo (sujetos normales): valores de LDL colesterol menores de 1,29 g/l U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 54 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Riesgo moderado a elevado (individuos con probabilidad de contraer (ECC): valores entre 1,30 y 1,89 g/l - Riesgo muy elevado (individuos sospechosos de padecer ECC): valores de LDL colesterol ≥ 1,90 g/l RESULTADOS. CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de HDL 2. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de LDL BIBLIOGRAFÍA. - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 55 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 12 UNIDAD IV: Tema 12 TÍTULO: Determinación de Calcio en suero FECHA DE ENTREGA: 14ta semana de clases PERIODO DE EVALUACIÓN: 15ta semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA El calcio es esencial en la mayoría de las reacciones de la coagulación sanguínea y en la regulación de la excitabilidad de las fibras musculares. Su concentración en suero esta regulada por la acción de factores tales como niveles de parathormona, vitamina D y fósforo, observándose de fluctuaciones fisiológicas debidas a edad, sexo, embarazo, actividad física, cambios estacionales (por acción de la luz solar). La hipercalcemia esta relacionada con distintas patologías: hiperparatiroidismo, neoplasias óseas, intoxicaciones con vitamina D. La hipocalcemia se asocia con desordenes tales como hipoparatiroidismos, deficiencia de vitamina D, mala absorción. Fundamento del método:El calcio reacciona con la cresolftaleina complexona (cfx) a pH 11, dando un complejo de adición color magenta que se mide fotocolorimetricamente a 570nm. II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar la determinación de calcio en suero MATERIALES. - Espectrofotómetro o fotocolorímetro Micropipetas, pipetas y material volumétrico adecuados Tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas Gradilla Baño de agua a 37°C Reloj o cronometro Marcador para vidrio Guantes REACTIVOS. Reactivo Cfx: solución de cresolftalein complexona 3,7mmol/l Buffer: solución de amnometil propanol (AMP) 0,2mol/l en metanol 35% V/V para pH final 11 Standard: solución de calcio 10mg/dl U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 56 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROCEDIMIENTO. Se aconseja trabajar directamente en tubos de fotocolorímetro de manera de poder determinar un Blanco interno para cada ensayo, condición indispensable para controlar las trazas de calcio que pudiera haber escapado al proceso de lavado de material. En dos tubos de fotocolorímetro marcados S (Standard) y D (Desconocido) colocar: Reactivo Cfx Buffer S 50 ul 3.5 ml D 50 ul 3.5 ml Mezclar con la varilla provista y leer la absorbancia de ambos tubos (blancos internos: BS Y BD) en espectrofotómetro a 570 nm en fotocolorímetro con filtro rojo (560 –590 nm) llevando el aparador a cero con agua destilada. Luego agregar: Standard Muestra S 20 ul --- D ---20 ul Mezclar inmediatamente, luego de 10 minutos, volver a leer (S ° y D°). Calculo de los resultados Corregir las lecturas restando los Blancos internos correspondientes: S°- BS= S D°- BD= D 1) Calcio serico (mg/dl)= Dx F F= 10 mg/dl S Valores de referencia Suero. 8.5-10.5 mg/dl CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de Calcio 2. ¿Cuál es la función del calcio en nuestro organismo? 3. ¿Qué es la osteosporosis? y mencione sus causas 4. ¿Qué cuidados se debe tener al realizar la determinación técnica de calcio sérico? 5. ¿En qué patologías el calcio se eleva? 6. ¿Qué es la osteoporosis, cuál su relación en referencia al calcio? BIBLIOGRAFÍA. - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 57 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 13 UNIDAD IV: Tema 13 TÍTULO: Determinación de proteínas totales y albúmina FECHA DE ENTREGA: 15ta semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 16ta semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. La proteína más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso. La concentración de albúmina en plasma influye notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que estaría relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran carga neta. En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de diversos orígenes, se observan hiperproteinemias. En general, ambas situaciones se ven acompañadas también por hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con deshidratación que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma. Fundamento del método Determinación de proteínas totales: U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 58 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Los enlaces peptídico de las proteínas reaccionan con el ión cúprico, en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra. Determinación de albúmina: La albúmina reacciona específicamente -sin separación previa-con la forma aniónica de la 3,3', 5,5'tetrabromo cresolsulfon fenoftaleína (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra. II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar la determinación de los niveles de proteína y albúmina sérica MATERIALES. - Espectrofotómetro o fotocolorímetro - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados - Tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas - Baño de agua a 37 ºC (para Proteínas Totales) - Reloj o cronometro - Tubos de Khan - Marcador para vidrio - Guantes REACTIVOS. Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquilaril poliéter (AAP) Reactivo BCF: solución de 3,3', 5,5'-tetrabromo cresolsulfon fenoftaleína (en polioxietilén lauril éter) Suero Patrón: solución de albúmina y globulinas en estado Prot. 2 PROCEDIMIENTO Proteínas totales: En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: Agua destilada Suero Patrón Muestra Reactivo EDTA/Cu B 50 ul ----3,5 ml S --50 ul --3,5 ml D ----50 ul 3,5 ml Mezclar con varilla. Incubar 15 minutos a 37 ºC. Leer en espectrofotómetro a 540 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (520-560 nm) llevando a cero con el Blanco de Reactivo. Estabilidad de la mezcla de reacción final: El color de la reacción es estable durante 12 horas por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 59 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Albúmina: En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: Suero Patrón Muestra Reactivo BCF B ----3,5 ml S 10 ul --3,5 ml D --10 ul 3,5 ml Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28 ºC durante 10 minutos. Leer en espectrofotómetro a 625 nm o en fotocolorímetro con filtro rojo (620-650 nm) llevando a cero con el Blanco de reactivo Estabilidad de la mezcla de reacción final: El color es estable 20 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso Cálculo de los resultados Empleando el Suero Patrón tal como se indica en PROCEDIMIENTO, los cálculos se realizan como sigue: Proteínas Totales (g/dl) = D x f f =S Albúmina (g/dl) = D x f f =S Globulinas = P.T. (g/dl) - Alb. (g/dl) Relación A/G = Albúmina (g/dl)/Globulinas Valores de referencia Proteínas totales: 6,1 a 7,9 g/dl Albúmina: 3,5 a 4,8 g/dl Relación A/G: 1,2 a 2,2 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. Linealidad: la reacción es lineal hasta 12 g/dl para Proteínas Totales y hasta 6 g/dl para Albúmina CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de Proteínas totales y responder lo siguiente: - ¿Cuál es función que cumplen las proteínas séricas en nuestro organismo? - ¿Cuál es función que cumplen las albúminas en nuestro organismo? - ¿En qué situaciones patológicas se observa modificada las concentraciones de proteínas séricas? - ¿Mencione las proteínas más importantes presentes en suero? - Qué otras pruebas se puede asociar una elevación de proteínas y en qué patologías? 2. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de Albúmina BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 60 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 14 UNIDAD IV: Tema 15 TÍTULO: Determinación de Bilirrubinas FECHA DE ENTREGA: 16ta semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 17ma semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA La Bilirrubina es un compuesto de degradación de la hemoglobina, es captada por el hígado para su conjugación y excreción en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido es una patología provocada por incompatibilidad materno-fetal en la que se produce una destrucción excesiva de glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina sérica con el consecuente riesgo de difusión del pigmento al sistema nervioso central, por lo que la determinación de la bilirrubina en estos niños recién nacidos resulta sumamente importante. Fundamento del método: La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violácea (azo-bilirrubina) que se mide a 530 nm. Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso que posibilite su reacción. De forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción. II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar determinación de las bilirrubinas en una muestra de suero normal y una ictérica U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 61 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA MATERIAL - Espectrofotómetro o fotocolorímetro Micropipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes indicados Reloj o cronometro Gradillas Tubos de Khan Marcados para vidrio Guantes REACTIVOS. Desarrollador: solución acuosa de benzoato de cafeína 0.13 mol/l, tamponada y estabilizada. Nitritos de Sodio: solución de nitrito de sodio 0.07mmol/l y ácido clorhídrico 0.17mol/l. PROCEDIMIENTO 1. Técnica para el suero: En tres tubos fotocolorímetro marcados B (Blanco), D (Directa) y T (Total) Colocar: Muestra (suero) Agua destilada Desarrollador Reactivo Sulfanílico Diazorreactivo B 200 ul 2.5 ml --200 ul --- D 200 ul 2.5 ml ----200 ul T 200 ul --2.5 ml --200 ul Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos, leer en espectrofotómetro a 530 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (520-550 nm), llevando el aparato a cero con agua destilada. Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto para la bilirrubina directa que debe leerse a los 5 minutos exactos. Si se lee antes, habrá valoración previa de los resultados por reacción incompleta. Si se lee después, habrá nueva valoración porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre. Sueros Ictéricos: debe emplearse la técnica descrita pero con menores cantidades de muestra, de acuerdo a la severidad de la ictericia. De tal forma, en caso de ictericia moderada se usaran 50 ul de suero mientras que frente a una ictericia intensa se requiere solo 20 ul multiplicar los resultados obtenidos por 3.79 y 9.38 respectivamente. Cálculo de los resultados Bilirrubina total (mg/l)= (T-B) * F Bilirrubina directa (mg/l)= (D-B) * F Bilirrubina libre= Bilirrubina total- Bilirrubina directa El factor colorimétrico (F) debe calcularse con el Estándar de Bilirrubina. Valores de referencia Bilirrubina en suero o plasma ADULTOS: Directa: hasta 2 mg/l Total : hasta 10 mg/l RECIÉN NACIDOS: U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 62 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Sangre de cordón Hasta las 24 hrs Hasta las 48 hrs. Del 3° al 5° día Nacidos a termino 25 mg/l 60 mg/l 75 mg/l 120 mg/l Prematuros ................. 80 mg/l 120 mg/l 240 mg/l Después del nacimiento los valores comienzan a disminuir para alcanzar el nivel promedio del adulto al mes de nacimiento. En los prematuros, los niveles de bilirrubina tardan mas en alcanzar la normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hepática. CONCLUSIONES EVALUACIÓN 1. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de Bilirrubina 2. Describa las funciones que cumple las bilirrubinas en nuestro organismo 3. ¿En qué ocasiones se presenta la llamada ictericia neonatal? 4. ¿En que otras patologías se encuentra aumentada la concentración de bilirrubina? 5. Describa de que manera afecta la concentración de bilirrubinas en una hepatitis viral 6. A qué otro tipo de muestra se puede realizar Bilirrubina? 7. Qué cuidados se debe tener con la muestra para procesar Bilirrubina? BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 63 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRACTICA - GIP’s # 15 UNIDAD IV: Tema 15 TÍTULO: Determinación de la GOT y GPT FECHA DE ENTREGA: 17ma semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 18va semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA GOT: Método UV optimizado para la determinación de aspartato aminotransferrasa en suero o plasma, expresando el resultado en U/L. La AST es una enzima bilocular (citoplasmática y mitocondrial) ampliamente difundida. Se encuentra en mayor concentración en hígado y corazón. Cualquier alteración de estos tejidos produce un aumento en los niveles de AST circulante. La determinación de AST adquiere importancia diagnostica cuando sus valores se comparan con los de otras enzimas de similar origen tisular. GPT: Método UV para la determinación de alanino aminotransferrasa en suero o plasma, expresando el resultado en U/L. Una destrucción o cambio de permeabilidad de las membranas celulares provoca la liberación de ALT a la circulación sanguínea. Los mayores aumentos de actividad ALT en suero, se producen como consecuencia de alteraciones hepáticas, por lo cual deben analizarse conjuntamente otras enzimas de similar origen tisular, para evaluar el grado de la lesión a nivel hepático. Fundamento del método GOT Basado en el siguiente esquema reaccionante: GOT L-aspartato + α-oxoglutarato ------------------------> glutamato + oxalacetato GPT Basado en el siguiente esquema reaccionante: GPT L-alanina + α-oxoglutarato ------------------------> glutamato + piruvato II. PRÁCTICA OBJETIVO - Realizar la determinación de GOT en suero normal e ictérico U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 64 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Realizar la determinación de GPT en suero normal e ictérico MATERIALES. - Micro pipetas de 200 ul, 100 ul - Pipetas de 2 ml, 1 ml - Tubos de fotocolorímetro - Gradillas - Reloj o cronómetro - Marcador para vidrio REACTIVOS. Transaminasas GOT 200 provee: Sustrato GOT: solución con 100 mM de L-aspartato y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4 Transaminasas GPT 200 provee: Sustrato GPT: solución con 200 mM de dl-alanina y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4 Ambos equipos proveen: Reactivo 2,4-DNFH: solución conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina en ácido clorhídrico 1 mol/l Diluyente para enzimas concentrado: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l Standard: solución de piruvato de sodio 2 mmol/l. Para efectuar la curva de calibración PROCEDIMIENTO. En dos tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco) y D (Desconocido), Colocar: B D Sustrato (GOT o GPT) 0,5 ml 0,5 ml Colocar en baño de agua a 37 ºC ± 0,5 ºC unos minutos Suero --100 ul Agua destilada 100 ul --Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar: Reactivo 2,4-DNFH 0,5 ml 0,5 ml Mezclar, dejar 10 minutos a 37 ºC, luego agregar: Diluyente para enzimas 5 ml 5 ml Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 minutos leer en fotocolorímetro con filtro verde (500 – 550 nm), en espectrofotómetro a 505 nm o Hg 546, llevando el aparato a cero D.O con agua destilada Estabilidad de la reacción final: El color de la reacción es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de este lapso. Cálculo de los resultados Empleando tablas de conversión Empleando curva de calibración Valores de referencia U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 65 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA Se consideran valores de transaminasas (GOT y GPT) hasta 12 U/l. Si bien se han hallado individuos normales con valores hasta 18 U/l, los niveles de transaminasas que se encuentren entre 12 y 18 U/l deben considerarse sospechosos. RESULTADOS. CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de GOT 2. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de GPT BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 66 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRÁCTICA - GIP’s # 16 UNIDAD IV: Tema 17 TÍTULO: Determinación de Fosfatasa y Amilasa sérica FECHA DE ENTREGA: 18va semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 19na semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA Fosfatasa alcalina: es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. En el adulto proviene en parte del hígado (fracción termoestable) y en la parte del hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (fracción termolábil), dando lugar a distintas isoenzimas. La actividad sérica de fosfatasa alcalina ósea, en condiciones normales, alcanza su mayor actividad sérica de fosfatasa alcalina ose, en condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos. Entre las patologías que afectan la actividad sérica de fosfatasa alcalina, se pueden citar: carcinomas metastásicos en hígado y en hueso, colestasis biliar, fenómenos osteoblásticos, trastornos de mala absorción acompañados de lesiones ulcerosas, e incluso lesiones en vías de reparación tales como infarto agudo de miocardio, infarto pulmonar o renal. Amilasa: producida en el páncreas exócrino y en la glándulas salivales, escinde de los enlaces ax 1-4 glucosídicos de los polisacáridos (almidón y glucógeno). Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pancreatitis aguda, alcanzando los valores mas elevadas entre las 24 y 30 horas posteriores al ataque las 24 horas y 48 horas siguientes. También se ve aumentando ene este caso la excreción urinaria de la enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 días, luego de que la actividad sérica ha alcanzado los niveles normales. Las parotiditis bacterianas y paperas se asocian también con elevaciones en los niveles de amilasa sérica. Fundamento del método: La fosfatasa alcalina: del suero hidroliza el sustrato de fenilfosfato de sodio en medio alcalino a pH 9.8 liberando fenol. Este último reacciona con el diazo reactivo de Gomori y el color desarrollado, medido a 490nm, es directamente proporcional a la actividad enzimática. Amilasa: el sustrato, almidón tamponado, se incuba con la muestra, produciéndose la hidrólisis enzimática. Esta de detiene por el agregado de reactivo del yodo, que al mismo tiempo produce color con el remanente de almidón no hidrolizado. La disminución de color respecto de un sustrato color. (Sin muestra) es la medida de la actividad enzimática, que se expresa en Unidades Amilolíticas. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 67 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA II. PRÁCTICA OBJETIVOS - Determinar los niveles séricos de fosfatasa alcalina en una muestra normal y una patológica - Determinar los niveles séricos de amilasa en una muestra normal y una patológica MATERIALES. - Espectrofotómetro o fotocolorimetro. Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados. Tubos de ensayo y de fotocolorimetro Baño de agua a 37 ºC Reloj o cronometro Marcador para vidrio Guantes REACTIVOS Fosfatas alcalina - Sustrato: Comprimidos contenido cada uno 21.6 umol de fenilfosfato de sodio en buffer carbonato de pH 9.8 - Reactivo diazo: comprimidos contenidos cada uno 4.5 mg de naftalen – 1.5 –disulfonato de la sal de diazonio del 5- nitro –2 aminoasinol Amilasa - Sustrato 1: solución de almidón 500 mg/l, tamponada a pH 7 con buffer fosfatos 0.1 mol/l en CINa 0.15 MOL/L - Reactivo de yodo 2: solución 0.01 eq/l de yodo. En ácido clorhídrico 0.02 mol/l PROCEDIMIENTO. Fosfatasa alcalina: En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar: B S D Sustrato 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml Preincubar en baño de agua a 37 °C unos minutos Suero --50 ul Standard -50 ul -Mezclar, incubar exactamente 10 minutos (cronómetro) y agregar: Reactivo de color 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del baño y leer es espectrofotómetro a 520 nm o en fotocolorímetro con filtro verde, llevando el aparato a cero de absorbancia con agua destilada. Amilasa: En dos tubos de fotocolorímetro marcados C (Control) y D (Desconocido) colocar: U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 68 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA C SUSTRATO 1 1 ml Dejar unos minutos en baño de agua a 37°C y agregar: MUESTRA -----Incubar a 37°C .A los 7 minutos y medio exactos, agregar: REACTIVO DE IODO 2 1 ml Mezclar por agitación suave, retirar los tubos del baño y agregar: AGUA DESTILADA 8 ml D 1 ml 20 ul 1ml 8 ml Mezclar por inversión. Leer en fotocolorímetro con filtro rojo o en espectrofotómetro alrededor de 640 nm, llevando a cero el aparato con agua destilada. Estabilidad de la mezcla de reacción final: El color de la reacción es estable durante 1 hora por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso. Si la temperatura ambiente es superior a 25 °C, la lectura deberá efectuarse dentro de los 20 minutos. Cálculo de los resultados Fosfatasa alcalina UI/l = factor x (D-B) factor= 200 UI/l S-B Amilasa Amilasa (UA/dl) = C - D X 1000 C Unidades: Una unidad Amilolítica (UA) es la cantidad de enzima contenida en 10 ml de muestra, que puede hidrolizar 10mg de almidón en 30 minutos, en las condiciones de la reacción. En esta técnica se incuban 20ul de muestra con 0.5mg de almidón contenidos en 1ml se Sustrato 1 durante 7minutos y medio, lo que equivale a incubar 100ml de suero con 10.000mg de almidón durante 30minutos. Para obtener las unidades de actividad amilasica, la fracción de almidón digerido se multiplica por 1000. Valores de referencia Fosfatasa alcalina: Adultos: 68 – 240 UI/l Niños: 100 – 400 UI/l Amilasa: CONDICIÓN CLÍNICA SUERO (UA/dl) Normal 120 Pancreatitis aguda 300 a 12.000 Pancreatitis crónica hasta 200 Parotiditis 200-350 Parotiditis c/complicación mas de350 Procesos abdominales normal agudos (sin pancreatitis) ORINA (UA/hora) 260 mas de 900 mas de 300 350-750 mas de750 normal CONCLUSIONES U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 69 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA EVALUACIÓN 1. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de la determinación de Fosfatasa Alcalina y responder lo siguiente: - ¿Porqué en los niños los valores de fosfatasa alcalina son mas elevados que en los adultos? - ¿Cuál es el valor diagnóstico de la fosfatasa alcalina? - ¿Qué otras pruebas de laboratorio contribuyen al diagnostico del daño hepático? 2. Realizar el procedimiento operativo estándar POE de la determinación de Amilasa y responder lo siguiente: - ¿Cuál es el comportamiento de la amilasa en una pancreatitis? - ¿Qué otras pruebas químicas se relacionan con un aumento de amilasa? - ¿En un ataque de pancreatitis hasta qué tiempo se puede tomar la muestra para que tengan valor los resultados? - ¿Cómo influye la pancreatitis en el metabolismo de la glucosa? - Sobre ¿qué enlaces glucosídicos actúa la amilasa? BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 70 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD GUÍA DE INVESTIGACIÓN PRÁCTICA - GIP’s # 17 UNIDAD V: Tema 19 TÍTULO: Líquido cefalorraquídeo FECHA DE ENTREGA: 19na semana de clases PERÍODO DE EVALUACIÓN: 20ra semana de clases I. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA El líquido cefalorraquídeo (LC) se forma por una filtración del plasma en lo plexos coroideos de cerebro. Este evento no es de simple filtración, sino que requiere la secreción activa por parte de las células de los plexos coroideos. El LC normal es completamente transparente. Con una densidad entre 1003 -1008 normalmente el contenido en proteínas es bajo 20 – 45 mg/100ml Con una relación albúmina/globulina de 3:1 patológicamente hay un característico aumento de las proteínas, especialmente de la globulina. En las meningitis: el contenido de proteínas puede elevarse a 125 mg o a más de 1 g/100ml. Diversos padecimientos cerebrales muestran elevaciones de proteínas por encima de los normal, que fluctúan entre 20 y 30 mg/100ml. La prueba de globulina de Pandy y la prueba de oro coloidal de lange son pruebas diagnosticas que se basan en las alteraciones de las proteínas del líquido cefalorraquídeo. El azúcar en LC es un poco menor que en la sangre 50 – 85 mg/100ml se encuentra elevado en la encefalitis. En la sífilis del sistema nerviosa central, en los abscesos y en los tumores. Está disminuido en las meningitis purulentas. Normalmente la concentración de cloruros es de 700 – 750 mg/100ml o de 120 – 130 mEq/litro. Por lo general se encuentran disminuidos en las meningitis y no muestran alteraciones en la sífilis, en las encefalitis, en la poliomielitis y en otras enfermedades del sistema nervioso central. Los cloruros son especialmente bajos en las meningitis tuberculosas. La concentración de calcio en el LC humano normal es de 2043 +/- 0.005 mEq/ litro, la del magnesio es de 2.40 +/- 0.14 mEq/l. Como se ve, el contenido en calcio del LC es considerablemente menor que el del suero, mientras que el contenido en magnesio es ligeramente mayor, Se ha encontrado que la relación entre calcio y el magnesio es de 1.01+/- 0.06 II. PRÁCTICA OBJETIVO Realizar los exámenes físico, químico, citológico y bacteriológico. MATERIALES. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 71 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Frasco con tapa Tira reactiva Tubos de ensayo Pipetas Gradillas Baño Maria Probeta Espectrofotómetro Micropipeta Cámara de Neubauer Centrífuga Tubos de hemólisis REACTIVOS. - Reactivo para glucosa Reactivo para proteínas Ácido acético Agua destilada Liquido de Turk Giemsa Alcohol Reactivo para tinción de Gram Reactivo para tinción de Ziehl Neelsen PROCEDIMIENTO. Se entregará un formato al estudiante RESULTADOS. CONCLUSIONES. EVALUACIÓN. 1. ¿Qué características físicas son importantes en la muestra? 2. En caso de accidente traumático que es lo que esperamos encontrar? 3. Una alteración de un LC con qué patologías se puede asociar? 4. Cómo se presenta un LC normal? 5. Realizar el Procedimiento operativo estándar POE para Liquido cefalorraquídeo BIBLIOGRAFÍA - Angel, M. Angel, M. “Interpretación Clínica del Laboratorio”. Quinta edición. Editorial Panamericana. Argentina. 2000. Signatura topográfica COD 616.075 8 M47 c.2 - Balcells Alfonso “La clínica y el laboratorio” Ed. Masson. España 2001. Signatura topográfica COD 616.075 8 B18 c.4 BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA - Chernecky Berger.1999. “Pruebas de Laboratorio y Procedimientos Diagnósticos”, 2ª Edición, Mexico–DF. U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 72 DE B O L I V I A FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA - Ergurta Collao, J. “Técnicas de Laboratorio Clínico”. Tercera edición. Editorial Urquizo. La Paz Bolivia. 1986. - Jhon B. Henry. 2005. “El laboratorio en el Diagnostico Clínico”, 1ª Edición Madrid – España. - Lynch, M. “Métodos de Laboratorio”. Segunda edición. Editorial Interamericana. México. 1988. - Susan King S. y Marjorie Schaub D. 2008. “Análisis de orina y de los líquidos corporales”, 5ta. Edición, Editorial médica Panamericana. - V. Fattorusso y O. Ritter. 2001. “Vademécum clínico del diagnóstico al tratamiento”. Editorial El Ateneo. - Wallach Jacques. 2007. “Interpretación clínica de pruebas diagnósticas”. 8va. Edición. USA. - WIENER. “Técnicas de Laboratorio”. Buenos Aires Argentina U N I V E R S I D A D DE A Q U I N O 73 DE B O L I V I A