HIPORREACTIVIDAD DEL PLASMA RICO EN PLAQUETAS FREN

Rev Cubana Angiol y Cir Vasc 2001;2(1):68-72
Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular
HIPORREACTIVIDAD DEL PLASMA RICO EN PLAQUETAS FRENTE AL COLÁGENO: UN POSIBLE MARCADOR DE LA
ATEROSCLEROSIS
Dra. Milagros García Mesa,1 Dr. Arquímedes Díaz Batista2 y José I. Fernández Montequín3
RESUMEN: Las plaquetas tienen una participación importante en la aterogénesis y la formación del trombo arterial, de ahí que el estudio de su funcionalidad parezca potencialmente útil como
marcador de aterotrombosis. Con el objetivo de evaluar la reactividad plaquetaria en sujetos con
diferentes manifestaciones clínicas de aterosclerosis, se compararon 63 pacientes con macroangiopatía
diabética, 54 pacientes no diabéticos con diferentes manifestaciones clínicas de aterosclerosis y 68
voluntarios sanos con respecto a la agregación plaquetaria inducida en el plasma rico en plaquetas
por diferentes concentraciones de difosfato de adenosina (ADP) y de colágeno. No hubo diferencia
entre los grupos con respecto a la reactividad plaquetaria al ADP, pero la respuesta al colágeno
estuvo de forma significativa disminuida en ambos grupos de pacientes. Los resultados sugieren que
la hiporrespuesta del plasma rico en plaquetas frente al colágeno pudiera ser útil como marcador de
aterosclerosis.
DeCS: AGREGACION PLAQUETARIA/efectos de drogas; ATEROSCLEROSIS; COLAGENO; ADENOSINA
DIFOSFATO.
aterosclerosis.1 Esto sugiere la posibilidad
de emplear la reactividad plaquetaria como
marcadora de la ateros-clerosis.
El cumplimiento de este propósito, sin
embargo, ha tenido dificultades, ya que se
trata de un tipo de célula susceptible a la
activación por el contacto con superfi-
No existe ninguna duda de la participación de las plaquetas en la aterogénesis y los eventos trombóticos arteriales,
prueba de ello es el incremento de los
niveles de constituyentes de los gránulos plaquetarios en los plasmas de sujetos con manifestaciones clínicas de
1
2
3
Doctora en Ciencias Biológicas. Investigadora Titular.
Doctor en Ciencias Médicas. Investigador Titular.
Especialista de II Grado en Angiología. Investigador Auxiliar.
68
cies o por agitación, por lo que la presencia
en el plasma de los productos de la reacción de liberación plaquetaria, no es un indicador lo suficientemente específico como
para ser utilizado en la práctica clínica como
marcador de aterosclerosis.2
La detección de plaquetas circulantes
portadoras de P selectina en su superficie
pudiera tener valor diagnóstico,3 pero se
trata de una metodología costosa accesible
sólo a un número reducido de laboratorios.
El método turbidimétrico de Born4 se
ha utilizado durante mucho tiempo en los
laboratorios de Hemostasia para medir la
funcionalidad de las plaquetas así como
para caracterizar el comportamiento de estas células en pacientes con las manifestaciones clínicas de la aterosclerosis.5-9 Estas
investigaciones han tenido resultados diversos, de los cuales resulta difícil extraer
conclusiones. En esto puede haber influido el hecho de que se han empleado diferentes niveles de concentración de los
agonistas de la agregación plaquetaria y/o
a factores genéticos.
Hace algunos años en nuestro laboratorio se realizó la evaluación de la
reactividad plaquetaria de los plasmas ricos en plaquetas de pacientes ateroscleróticos,10 sin embargo, en esa ocasión
no se evaluó la respuesta al colágeno y se
utilizó una concentración única de difosfato
de adenosina (ADP). El presente trabajo fue
realizado con el objetivo de evaluar la
reactividad del plasma rico en plaquetas de
pacientes ateroscleróticos diabéticos y no
diabéticos frente a diferentes concentraciones de ADP y colágeno.
mujeres, edad 53,1 ± 58 años), provenientes del servicio de Macroangiopatía Diabética del Instituto Nacional de Angiología y
Cirugía Vascular (INACV) y 54 pacientes
no diabéticos con historia de diferentes manifestaciones de aterotrombosis (21 hombres y 33 mujeres, 59,6 ± 61 años) provenientes de la consulta de hipercoagulabilidad del INACV.
Los controles fueron 68 sujetos sanos
(23 hombres y 45 mujeres, 60,8 ± 71 años),
que participaban en chequeo médico laboral.
Los sujetos dieron su consentimiento a
participar en el estudio después de conocer
las características del mismo. Todos negaron
haber consumido algún antiagregante
plaquetario u otros fármacos que modifican
la agregación plaquetaria al menos 2 semanas antes de acudir al laboratorio.
En el laboratorio se obtuvieron muestras de sangre de una vena antecubital con
el empleo de jeringuillas plásticas desechables, en el horario de 7:30 a 09:00 a.m.,
después de 12 a 14 h de ayuno. La sangre
fue vertida en tubos plásticos que contenían 0,1 volumen de citrato de sodio 3,8 %
y centrifugada 5 min a 150 × G para obtener
el plasma rico en plaquetas (PRP). El resto
fue centrifugado 15 min a 1 000 × G para
obtener el plasma pobre en plaquetas (PPP).
La agregación plaquetaria fue determinada por el método turbidimétrico de Born.3
En cubetas de un agregómetro Elvi 840, se
vertieron 200 µL de PRP que contenían 200
a 250 plaquetas/ × 109 /L , previo ajuste con
PPP autólogo. Se indujo la agregación
plaquetaria por adición de 20 µL de una
solución de colágeno o ADP (Sigma Chem),
después de 2 minutos de incubación a 37 °C
con agitación a 1 000 rev./min. El cambio de
la transmisión de luz a través de la muestra
fue recogida en un registrador Omni-Scribe,
calibrado mediante el empleo del PRP (0 cm
en la escala de deflección) y PPP (16 cm en
Métodos
Participaron en este estudio 63 pacientes diabéticos tipo II con macroangiopatía
y sin lesiones externas (22 hombres y 41
69
la escala de deflección), equivalentes a 0 y
100 % de agregación plaquetaria respectivamente. Los resultados fueron expresados
en porcentaje de agregación como medida
relativa de la amplitud (cm) del incremento
en la transmisión de luz a través del PRP.
Como parte del análisis estadístico se
realizó la comparación entre los 3 grupos
de sujetos mediante el análisis de varianza.
Se consideraron significativas las diferencias con p < 0,05.
colágeno fue dependiente de la concentración en el grupo control de una manera creciente entre 0,3 y 3,0 mg/mL.
En los grupos de pacientes diabéticos
y no diabéticos, la respuesta de agregación
plaquetaria fue marcadamente inferior con
respecto a la ocurrida en los controles en
las 3 concentraciones empleadas.
Como puede observarse en la tabla, a
diferencia de los controles sanos, la respuesta a las concentraciones 0,3 y 1,0 mg/mL fue
similar en los dos grupos de pacientes.
Resultados
Discusión
Se emplearon 3 concentraciones de
ADP y 3 de colágeno con el objetivo de
evaluar la influencia de la enfermedad
aterosclerótica diabética y no diabética sobre la reactividad de las plaquetas frente a
diferentes magnitudes de estímulo.
La agregacion plaquetaria inducida por
ADP fue dependiente de la concentración
los tres grupos de sujetos estudiados y no
hubo diferencia significativa entre los grupos a ninguna de las concentraciones.
La agregación plaquetaria inducida por
El ADP y el colágeno son estímulos
fisiológicos para la agregación plaquetaria,
pero difieren en su ubicación tisular, en los
receptores de la membrana plaquetaria que
estimulan y los mecanismos mediante los
cuales activan a estas células. Una revisión sobre el tema ha sido realizada por
García y Coma.11
En la investigación realizada previa-
TABLA. Agregación plaquetaria en plasma rico en plaquetas de
controles sanos, pacientes con macroangiopatía diabética y pacientes con otras manifestaciones ateroscleróticas
Estímulo
Control
N = 68
Grupos
Diabéticos
N = 54
No diabéticos
N = 63
ADP (µmol/L)
X ± DS
X ± DS
X ± DS
P
16,0 ± 17,1
35,3 ± 24,2
44,0 ± 22,2
16,9 ± 22,0
32,4 ± 24,2
55,0 ± 2,3
0,2557
0,4087
0,1732
4,1 ± 10,1
7,2 ± 14,5
20,2 ± 23,5
4,7 ± 13,3
4,7 ± 14,0
20,2 ± 23,0
0,0006
0,0108
0,0004
0,2
1,0
3,0
13,8 ± 15,8
33,6 ± 28,0
54,0 ± 27,8
Colágeno (µg/mL)
0,3
1,0
3,0
13,6 ± 10,4
20,2 ± 22,7
5 7 ± 32,9
70
mente en nuestro laboratorio,10 la respuesta de agregación plaquetaria inducida con
la concentración de ADP de 2,7 µmol/L en
pacientes con enfermedades estenooclusivas de miembros inferiores, estuvo dentro de los límites de referencia para este laboratorio, sin embargo, se encontró un incremento del malondialdehido formado por
plaquetas estimuladas por N etilmaleimida,
que ocurre por activación de la fosfolipasa
A2 en la membrana plaquetaria.12 Esto sugiere la existencia de modificaciones a nivel
de la membrana celular.
Los resultados de la actual investigación demuestran que la reactividad plaquetaria al ADP en los sujetos con diferentes manifestaciones clínicas de la aterosclerosis, no difere
de los sujetos sanos, resultado que concuerda
con el estudio anterior, mas encontramos
una hiporrespuesta plaquetaria al colágeno
en los pacientes, fueran diabéticos o no, lo
que sugiere que estamos en presencia de
un fenómeno relacionado con la aterosclerosis. Existen 3 alternativas para explicar
este resultado:
menor cantidad de receptores para el
colágeno en su membrana externa.
• Las membranas externas de las
plaquetas de los pacientes poseen receptores de membrana con menor afinidad por el colágeno.
La aterosclerosis trae como consecuencia la reducción de la supervivencia
plaquetaria y, por ende, el incremento del
recambio celular. Esto pudiera influir en
la composición de la población celular con
el predominio de plaquetas de menor volumen, que son menos reactivas. 13,14 Esta
pudiera ser otra explicación al resultado
obtenido y, aunque en principio debiera
afectar por igual a la reactividad plaquetaria frente a los 2 agonistas, no debe olvidarse la influencia que puede tener el
hecho de que, según se ha planteado, la
agregación inducida por ADP en plasma
citratado es un fenómeno inespecífico.15
En el futuro deben realizarse investigaciones para comprobar la veracidad de
las hipótesis propuestas, no obstante, los
resultados sugieren que la hiporrespuesta
del plasma rico en plaquetas frente al
colágeno pudiera ser útil como marcador
de aterosclerosis.
• El plasma de los pacientes contiene un
elemento que inhibe selectivamente el
mecanismo de activación plaquetaria
que desencadena el colágeno.
• Las plaquetas de los pacientes tienen
SUMMARY: Platelets have an important participation in the atherogenesis and formation of
the arterial thrombus and that’s why the study of their funcional capacity seems potentially useful
as a marker of atherothrombosis. In order to evaluate the platelet reactivity in subjects with
different clinical manifestations of atherosclerosis, 63 patients with diabetic macroangiopathy, 54
non-diabetic patients with different clinical manifestations of atherosclerosis and 68 sound volunteers
were compared as regards the platelet aggregation induced in platelet-rich plasma by different
concentrations of adenosine diphosphate (ADP) and of collagen. No difference was observed between
the groups in relation to the platelet reactivity to ADP, but the response to collagen was significantly
reduced in both groups of patients. The results suggest that the hyporesponse of the platelet-rich
plasma to collagen may be useful as a marker of atherosclerosis.
Subject headings: PLATELET AGGREGATION/drug effects; ATHEROSCLEROSIS, COLLAGEN; ADENOSINE
DIPHOSPHATE.
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Recibido: 26 de septiembre del 2000. Aprobado: 2
de noviembre del 2000.
Dra. Milagros García Mesa. Instituto Nacional de
Angiología y Cirugía Vascular.
Calzada del Cerro No. 1551, esq. Domínguez, Cerro, Ciudad de La Habana, Cuba.
Teléfono: 57 6493.
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