ME_711_02_053_v1_det_colorantes_liposolubles

DETERMINACIÓN DE COLORANTES
ARTIFICIALES LIPOSOLUBLES
Método Cromatografía en capa fina
Sección Química de
Alimentos y Nutrición
1.
ME-711.02-053
Emisión:
21.03.2012
Versión: 1
Actualización:
23-06-2014
Página 1 de 6
OBJETIVO
Determinar cualitativamente colorantes artificiales liposolubles en muestras de alimentos.
2.
CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
El método es aplicable a aceites, oleorresinas de pimentón, margarinas, mayonesas y otros
alimentos con alto contenido de materia grasa.
3.
FUNDAMENTO
Se basa en la saponificación de la materia grasa y posterior extracción de la fracción
insaponificable que contiene los colorantes con solvente orgánico. Dicho extracto se somete a
cromatografía en capa fina para su identificación.
4.
DOCUMENTOS DE REFERENCIAS
Circular Farmacéutica N° 277 Barcelona, España, 1982.
5.
TERMINOLOGÍA
Colorante liposoluble: Aditivo alimentario utilizado para otorgar o restituir el color a un
alimento. Es de carácter lipofílico.
6.
6.1
REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS
REACTIVOS
6.1.1
Estándares de colorantes liposolubles (Sudan 1, Sudan 2, Sudan 3, Sudan 4, Sudan
Black, Sudan Red 7B, entre otros).
6.1.2
Hidróxido de potasio
6.1.3
Etanol p.a.
6.1.4
Hexano p.a.
6.1.5
Sulfato de sodio anhidro p.a.
6.1.6
Benzeno p.a.
6.1.7
Éter de petróleo p.a.
6.1.8
Éter etílico p.a.
6.1.9
Ácido acético p.a.
DUEÑO DE PROCESO:
Encargado de Laboratorio
de Nutrientes, Aditivos y
Contaminantes
ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA INTRANET
O IMPRESO SIN TIMBRE DE “DOCUMENTO
CONTROLADO” SE CONSIDERA COPIA NO
CONTROLADA
APROBADO:
Jefe Subdepartamento
Alimentos y Nutrición
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INSUMOS
6.2.1
Cápsula de porcelana.
6.2.2
Placas de cromatografía en capa fina con silicagel G como adsorbente (20x20)
activada en estufa a 100-110 °C.
6.2.3
Lápiz grafito y regla de 30 centímetros
6.3
EQUIPOS
6.3.1
Baño de agua termorregulado o manta calefactora.
6.3.2
Equipo para calentamiento a reflujo.
6.3.3
Cámara cromatográfica.
6.3.4
Embudo de decantación de 250 mL.
6.3.5
Material de rutina de laboratorio.
7.
DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES
7.1
Muestreo/Muestra
El ingreso de la muestra para su análisis debe cumplir con el instructivo de
aceptación o rechazo de muestras IT 711-02-065
7.2
Preparación de Reactivos
7.2.1
Estándares
Realizar soluciones de los estándares individualmente a concentración aproximada
de 1%.
7.2.2
Soluciones
7.3

Solución de hidróxido de potasio al 10% en etanol: pesar 10 gramos de KOH en un vaso
precipitado, agregar aproximadamente 50 mL de etanol y disolver bajo campana. Una
vez disuelto, trasvasijar a un matraz aforo de 100 mL y llevar a volumen con etanol.

Etanol al 50% (v/v): para 100 mL, mezclar 50 mL de etanol con 50 mL de agua
desionizada.

Fase móvil, éter de petróleo: éter etílico: amoníaco (70:30:1): para 100 mL, mezclar 70
mL de éter de petróleo com 30 mL de éter etílico y agregar 1 mL de amoníaco.
Preparación de curva de calibración
No aplica.
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7.4
Preparación de controles
No aplica.
7.5
Preparación de la muestra o etapas previas a realizar la medición.
7.5.1
Pesar 10 g de muestra anotarlo en el registro correspondiente (RG-711.00-132),
saponificar con 100 mL de la solución alcohólica de hidróxido de potasio, calentando
a ebullición a reflujo durante 30 min.
Enfriar a temperatura ambiente y agregar 100 mL de agua.
Extraer el insaponificable en un embudo de decantación con 3 pociones de 30 mL de
hexano, eliminando la capa acuosa inferior.
Lavar los extractos de n-hexano reunidos con 2 porciones de 25 mL de etanol al 50%
descartando la capa inferior (fase acuosa).
Filtrar a través de sulfato de sodio anhidro para eliminar el agua, en una capsula de
porcelana previamente marcada con la identificación de la muestra.
Llevar a sequedad (evitando que se queme el extracto de la muestra) en cápsula al
baño de agua hirviente y redisolver con gotas de n-hexano.
Trazar una línea en la placa de sílice (con un lápiz grafito) a 2 cm del extremo inferior
y otra a 2 centímetros del extremo superior de la placa.
Aplicar con un capilar de al menos 10 µL, el extracto en hexano en la línea trazada
del extremo inferior de la placa cromatográfica, las veces necesarias para obtener
una mancha visible al ojo desnudo, dejando secar después de cada aplicación.
Hacer lo mismo con las soluciones de colorantes patrones.
Colocar la placa en la cámara cromatográfica, previamente saturada con la fase
móvil. Dejar bien tapada.
Dejar ascender el líquido por capilaridad hasta la línea superior trazada en la placa.
Retirar la placa cromatográfica de la cámara y evaporar el solvente de la placa
cromatografíca de silica a temperatura ambiente.
7.5.2
7.5.3
7.5.4
7.5.5
7.5.6
7.5.7
7.5.8
7.5.9
7.5.10
7.5.11
Nota: En el caso de muestras de ají de color, pimentón, u otro extracto extraer directamente
con hexano o éter de petróleo, filtrar y efectuar la cromatografía en capa fina descrita
anteriormente en el desarrollo.
7.6
Realización de la medición.
Utilizando una regla, determinar los Rf (factor de retención) de las bandas
observables en las muestras y en los patrones utilizados, midiendo la distancia
desde la línea trazada inferiormente.
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Distancia de migración del frente de solvente
Distancia de migración de la banda coloreada
7.7
Cálculo de Resultados:
El Rf se calcula como:
Rf = migración de la banda de interés (cm)
migración de la línea de fase móvil (cm)
7.7.1
Si los Rf de un estándar de colorante y el de una banda coloreada presente en una
muestra son similares, se sospecha presencia del compuesto.
7.7.2
Verificar si el compuesto persiste, exponiendo la placa a la luz por al menos 48
horas.
7.7.3
Si el compuesto persiste, es atribuible a que se trata de un compuesto artificial,
excepto algunos extractos como el de cúrcuma u otros que también pueden persistir
por una carga muy alta del compuesto en la cromatografía.
7.7.4
Si observó una persistencia, se recomienda repetir la cromatografía, y si observa
resultados similares puede informar con mayor seguridad “presencia del colorante”.
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Observaciones
El método no es aplicable si quedan restos de materia grasa en el extracto, ya que
ésta impide el desarrollo de la cromatografía.
Si lo que se desea es la confirmación del analito sospechoso, debe recurrir a una
metodología de carácter confirmatoria.
7.8
Aseguramiento de la calidad del ensayo.
En cada placa sembrar solución de estándar puro y si la muestra en duplicado.
7.9
8.
Expresión de los Resultados.
Los resultados del análisis se informan como detectado ó no detectado.
CONTROL DE REGISTROS
ALMACENAMIENTO
IDENTIFICACION
RG-711.00-132
Registro de
análisis químico
en alimentos
9.
RESPONSABLE
Encargado de
Laboratorio de
Nutrientes,
Aditivos y
Contaminantes
TIEMPO
5 años
MEDIO
SOPORTE
Papel
LUGAR
RESPONSABLE/
RECUPERACION
DISPOSICION
Laboratorio de
nutrientes, Aditivos y
Contaminantes./
Libro anillado y con
hojas foliadas
Luego de 5
años,
eliminación a
basura
común o
reciclaje de
papel blanco.
CONTROL DE CAMBIOS
VERSION
FECHA
PRINCIPALES
PUNTOS
MODIFICADOS
0
23-06-2014
Todos
0
23-06-2014
7.5
RESUMEN DE MODIFICACIONES
Cambio de Formato. El documento pasa de PRT711.02-053 a ME-711.02-053
Se incorpora el código del registro.
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10.
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CUADRO DE RESPONSABILIDADES
Ejecuta el método
Técnico de Laboratorio
Encargado de Laboratorio
Nutrientes Aditivos y
Contaminantes
11.
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ANEXOS
No Aplica.
Elabora el informe de
resultados
Profesional encargado del
Laboratorio
Aprueba el informe de
resultados
Jefatura de Sub
departamento Alimentos y
Nutrición