Lab N°1 – tinciones simples y compuestas

I PARCIAL
Ruby N. Gutiérrez
5.1
Lab N°1 – tinciones simples y compuestas
- Tinciones
o Simples
 1 sólo tinte
 Morfología
 Violeta cristal; Azul de metileno o Carbol fucsina
o Compuestas
 2 ó más reactivos o tintes
 Clasificar bacterias según características especiales.
- Bacterias (morfología)
o Individual
o Agrupación
 Cocos
 Racimos (Staphylos)
 Bacilos
 Cadenas (streptos)
 Espiroquetas
 Pares (diplococos)
 Espirilos
 Tétradas
 Cocobacilo = bacilo que
tiende a ser esférico
- Tinción de Gram: (+) = Púrpura x el violeta cristal;
(-) = Rojo
o Extender, secar y fijar con calor
o Violeta cristal (tiñe las bacterias)
o Yodo de Gram (fija la tinción en gram positivas)
o Alcohol acetona (decolora en gram negativas)
o Safranina (colorante de contraste)
- Tinción de Moeller (esporas): esporas tiñen de rojo, bacilos de celeste  Bacillus subtilis
o Carbol fuchina  mechero (esperar vapores, no hervir!!) =permite q entre el colorante
o Enjuagar
o Ácido sulfúrico 1%
o Enjuagar
o Azul de metileno
o Secar
- Tinción de Anthony (cápsula): Tinción negativa: lo q queremos ver no se tiñe, se tiñe el medio 
Klebsiella pneumoniae; Bacillus anthracis
o Leche descremada al 20%
o Frotis  secar al aire
o Violeta cristal 1%
o Lavar con sulfato de cobre  secar
o Observar principalmente los bordes
Lab N° 2 – Cultivo de bacterias y morfología colonial
- Clasificación de los medios según características físicas:
o Líquidos (caldos)
o Sólidos
 Tubos
 Inclinado (en pico de flauta)
 Profundo e inclinado (aguja)
 Platos Petri  método de estrías = + utilizado para aislar colonias
o Semisólidos: para obtener motilidad  inocular con aguja
 Si se observa turbiedad = la bacteria posee movimiento
 En forma de aguja = la bacteria no se mueve (vertical)
- Según características químicas (depende de la composición de los medios de cultivo)
o Nutritivos: para bacterias poco exigentes; posee lo mínimo que necesita una bacteria para
crecer.
 BHI (Brain Heart Infusion)
o Enriquecidos: medio nutritivo + nutriente específico
 Agar sangre
 Agar chocolate (sangre hervida)

Thayer Martin = Agar chocolate + antibióticos  suprime bacterias que no queremos
q crezcan
o Diferenciales
 MacConkey
 EMB
o Selectivos
 Thayer Martin (Neisseria gonnorrohoeae)
 MacConkey: contiene violeta cristal y rojo neutro (indicador de cuando cambia el pH)
 Gram (-)
- Características a evaluar en las colonias
o Tamaño
o Elevación
o Forma
o Consistencia
o Borde
o Color
Resultados
- MacConkey: Klebsiella pneumoniae (+)
- Agar sangre: Staphylococcus aureus  B hemólisis
- Agar nutritivo: Bacillus subtilis
- Agar inclinado: Staphylococcus aureus y Escherichia coli
- Agar profundo: Klebsiella pneumoniae
- Caldos: Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae  líquido más turbio
- Semisólido: Escherichia coli  se mueve
El conteo de colonias es importante para conocer la velocidad de reproducción de la bacteria y gracias a
esto elegir así el antibiótico adecuado para su tratamiento
LAB N°3 – EFECTO DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE
LAS BACTERIAS
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Muerte o destrucción de los microorganismos = pérdida de la capacidad de multiplicarse en
conjunto de condiciones conocidas
Ausencia de crecimiento no es igual a esterilidad
Esterilidad: destrucción de todas las formas vivientes
Pasteurización: utilización del calor para matar las formas vegetativas de las bacterias
Desinfección: empleo de agentes químicos (superficies)
Antiséptico: sobre tejidos vivos (cuerpo)
Asepsia: evita q lleguen a un ambiente protegido
Antibiótico: natural
Antimicrobiano: artificial
Métodos físicos (agentes externos)
o Calor húmedo (autoclave  Parámetros: 15 lbs, 15 min, 121°C) = desnaturalización rápida
de las proteínas
o Calor seco (horno)
o Filtración
o Rayos UV  exposición directa: daño directo al ADN formando dímeros de timina; pérdida
de la capacidad para replicarse.
Métodos químicos
o Se clasifican según su composición de alcoholes, peróxido de oxígeno, yodóforos, fenólicos,
glutaraldehído y compuestos de amonio cuaternario.
o Antibióticos
Resultados
o Mejor desinfectante: clorox 10%, Lysol, fenol
o Luz UV (sin tapa): Bacillus subtilis  esporas; Serratia marcescens  pigmento rojo = se
produce al exponerse a factores adversos.
o Difusión en plato: cualitativo. Medio más empleado = Müeller Hinton
 Antibiograma
 Turbidez = 0,5 de la escala de McFarland
 Pseudomona aeruginosa (bacilo gram -); Enterococcus faecalis (coco gram +)
o Método de dilución: cuantitativo.

o
CIM = Concentración Inhibitoria Mínima (poco crecimiento bacteriano). Es la utilizada
en el paciente.
 CMB = Concentración Bactericida Mínima = no hay crecimiento.
E-Test: cuantitativo. No vemos CBM
 punto donde convergen = CIM
LAB N°4 – MICROORGANISMOS DE FLORA NORMAL Y DEL AMBIENTE
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Factores para poder colonizar
o Cantidad y tipo de nutrientes
o pH
o potencial óxido-reducción
o resistencia a sustancias antibacteriales locales como la bilis y lisozimas
Áreas con mayor cantidad de microorganismos de flora normal
o Cavidad oral
o Intestino
o Piel
Atacan cuando hay un desequilibrio
Beneficios de la flora normal
o Síntesis de vitamina K y B12
o Absorción de nutrientes
o Evitan la colonización de patógenos  mantienen el sistema inmune alerta
Biopelícula: complejo de agregación de microorganismos marcado por la excreción de una matriz
adhesiva protectora.
LAB N°5 – COCOS GRAM POSITIVOS
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Staphylococcus = racimos  crecen muy bien en medio de agar sangre bajo incubación aerobia
Streptococcus = cadenas  crecen mejor en medios enriquecidos (Agar sangre), bajo condiciones
aerobias o anaerobias (facultativos)
S. aureus
o Principal causante de infecciones purulentas agudas
o Sobrevive a la desecación
o Causante de intoxicaciones alimentarias
Streptococcus
 pyogens = bacteria carnívora  faringoamigdalits estreptocóccica, q puede producir
fiebre reumática y cardiopatía
 agalactiae = sepsis neonatal
 pneumoniae = neumococo  causante de neumonías y meningitis n cualquier edad.
o Pueden clasificarse según su hemólisis en alfa, beta y gamma hemolíticos
Enterococcus
 faecalis
 faecium
o infección en personas hospitalarias o con imunodeficiencia
Grupo de Lancefield
o Streptococcus B-hemolíticos del grupo B = S. agalactiae
o Streptococcus B-hemolíticos del grupo A = S. pyogens
o Streptococcus B-hemolíticos del grupo D = Enterococcus faecalis
Resultados
o CAMP  punta de flecha = S. agalactiae: produce factor CAMP
o MRSA (Staphylococcus aureus resistente a la meticilina)  uso de vancomicina
o S. aureus
 Osteomielitis
 Gastroenteritis
 Síndrome de piel escaldada
 Shock tóxico
o Infecciones prenatales = Streptococcus agalactiae (grupo B)



Septicemia
Faringitis estreptocócica
Neumonía
LAB N°6 – BACILOS GRAM POSITIVOS
- Corinebacterias (no esporulados)
 Pequeñas
 Pleomórficas  formaciones tipo letras chinas o empalizadas
 Crecen en agar sangre  ambiente aerobio
o Corynebacterium diphteriae: difteria
o Listeria monocytogenes: causa esporádica de meningitis y otras infecciones en fetos, neonatos y
huéspedes inmunosuprimidos
 Nacimiento del producto muerto o sepsis neonatal fulminante
 Crece a temperatura ambiente
 Gram positivos
 Adultos = fiebre y malestar general
- Bacilos
 Anaerobios o facultativos
 Formadores de esporas
 Saprófitos  excepto Bacillus anthracis
o Bacillus anthracis
 Cadenas largas
 Causante del carbunco (lesión en la piel)
 Arma biológica (2001)
o Bacillus cereus
 Intoxicación alimentaria
- Resultados
o L. monocytogenes  Medio SIM = crece en forma de paraguas xq busca oxígeno
o Medio SIM
 Sulfuro – Indol – Motilidad
 Mide la motilidad de la bacteria
 Medio semisólido
 Amarillo
o Gelatina = determinar la presencia de gelatinasa
 +  al enfriar, no se endurece = la bacteria posee las enzimas para licuar la gelatina
o Otros microorganismos como armas biológicas = Francisella tularensis
o Muestras para carbunco sintomático
 Sangre
 Esputo
 Muestras de pus y líquido local (tejidos afectados)
o Antimicrobianos contra Listeria
 Ampicilina
 Penicilina G
 Trimetropin / Sulfamethoxazol
LAB N°7 – INFECCIONES DE TRANSMISIÓN SEXUAL
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No son ETS xq podemos estar infectados, más no enfermos x un mismo microorganismo
Bacterias
o Neisseria gonorrhoeae (Gonococo, GC) = gonorrea
o Treponema pallidum = sífilis  úlcera: chancro duro (indolora y regular)
o Chlamydia trachomatis = Linfogranuloma vénereo, uretritis inespecífica
o Mycoplasma hominis = uretritis inespecífica
o Ureaplasma urealiticum = uretritis inespecífica
o Gardnerella vaginalis = vaginosis bacteriana
o Haemophilus ducryii = chancro blando (úlcera irregular y con dolor)
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Virus
o HPV = papiloma
o HV II = herpes (úlceras)
o HBV = hepatitis B
o HCV = hepatitis C
o HIV = SIDA
Hongos = Candida albicans (candidiasis)
Parásitos = Trichomonas vaginalis (tricomoniasis)
N. gonorrhoeae  gram negativo
o Diplococo
o Se encuentra dentro de los PMN
o Patogenicidad = fimbrias
o Es más común y fácil de diagnosticar ya q se puede cultivar en Thayer Martin (ambiente
microaerofílico)
C. trachomatis: requiere células McCoy para su crecimiento
Micoplasmas y Ureaplasmas  colonias vistas bajo el microscopio
Resultados
o Lactobacillus = Gram positivos
o Nugent
 0
ausencia del morfotipo
 Células guías
 1+
1
 Lactobacillus = altas [ ]  normal
 2+
de 1 a 4
 Bacilos gram corto variables (Moviluncus)
 3+
de 5 a 30
 Gram negativos curvos
 4+
de 30 en adelante
o Treponema pallidum = espirilos  color oscuro (chocolate) en tinción argéntica
o Fases de la sífilis y pruebas diagnósticas
 Primaria (chancro duro) = microscopía de campo oscuro
 Secundaria (pápulas) = test serológico de sífilis (TSS)  +
 Latente = TSS reagínico y treponémico  +
 Terciaria = TSS  +
o Pruebas diagnósticas para C. trachomatis
 Cultivo celular
 Análisis de orina
 Tinción de Gram
 Técnicas de inmunofluorescencia
o Pruebas treponémicas
 Fluorescencia de absorción de anticuerpos treponímico
 Inmovilización de T. pallidum
o Pruebas no treponémicas
 Prueba rápida de reagina plasmática
 Prueba del lab.de investigación de enf. Venéreas
MICROSCOPIO
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Distancia focal (punto focal) = distancia entre el eje óptico del lente y el foco
Poder de magnificación = relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del
objeto
Magnificación total = aumento del objetivo x aumento del ocular
Poder de resolución = distancia minima entre 2 puntos para q aparezcan separados
Poder de definición = nitidez de las imágenes obtenidas sobre todo respecto a sus contornos
ML > resolución (200nm)
- ME 2nm
o Muestras vivas
o Muestras muertas
o < costo
o > aumento 300 000 veces
o Fuente de luz
o Haces de electrones
o Fijadores de rutina
o Tinciones de rutina
o Aumento 2 500 veces
M. fluorescencia  clínica = inmunofluorescencia  identificación de un microorganismo unidos a
anticuerpos x marcadores  se tiñe la muestra con una sustancia fluorescente que absorbe la energía
de las ondas cortas de luz y emite a longitud de ondas más largas.
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Apertura numérica = capacidad de captación de la luz x las lentes del microscopio. Estos valores son
constantes.
BACTERIAS
GRAM POSITIVAS
- Staphylococcus aureus
- S. epidermidis
- Bacillus subtilis
- Streptococcus pneumoniae
- S. pyogenes
- S. agalactiae
- Enterococcus faecalis
- Corynebacterium diphteriae
Sensibilidad a antibióticos
- Enterococcus faecalis  penicilina
- Pseudomona aeruginosa  Fosfocil, Imipenem
GRAM NEGATIVAS
- Escherichia coli
- Pseudomona aeruginosa
- Neisseria gonorrhoeae
- N. meningitidis
- Klebsiella pneumoniae