El microscopio óptico

Microscopía, la herramienta central de la Biología.
Desde que fuera construido el primer microscopio, alrededor del año1659 por los hermanos Hans
y Zacarías Hansen, en Holanda; este instrumento óptico de aumento ha experimentado
importantes avances, tanto así, que los más modernos ya no utilizan lentes, sino sistemas
electrónicos y están integrados con medios computacionales.
Hay dos razones por las que a nivel de enseñanza media, no contamos con este moderno sistema
de microscopía: tiene un muy elevado costo y su manejo es realmente de alta complejidad.
El no tener el instrumento no significa que no podamos aprovechar sus valiosos aportes, desde
sus inicios, la microscopía electrónica ha tenido asociada la capacidad de realizar fotografías del
material en observación. Los siguientes documentos fotográficos permitirán iniciar un trabajo que
para el estudiante de biología se hace cotidiano, es decir, obtener información significativa a
partir de fotografías de microscopía electrónica (M.E.) o microfotografías.
Antes de realizar el trabajo, un antecedente clave, existe hasta ahora dos grandes tipos de
microscopio electrónico, el de transmisión (M.E.T.) que da imágenes planas de cortes realmente
muy delgados de la estructura que se está observando, y el microscopio electrónico de barrido
(M.E.B.) que aporta imágenes tridimensionales de la superficie de la estructura en observación.
Ambos aún presentan una limitante, que sigue siendo lograda por la antigua e irremplazable
microscopía óptica, la microscopía electrónica requiere muestras deshidratadas y por ello sin
vida.
Utilizando la información anterior, se debe identificar el tipo de microscopio mediante el cual se
logró cada una de las siguientes imágenes
Fig. 2 Células musculares prenatales, en proceso
de multiplicación
Fig. 1 Células epiteliales de la
mucosa bucal humana (x 120)
núcleo
Fig. 3 Célula de glándula salival de laucha (84.000X)
Fawcett 1966.
Observando atentamente la cubierta del núcleo o
carioteca se puede contestar las siguientes preguntas:
¿La carioteca es una doble membrana o es simple?
¿Se comunica con el citoplasma que la rodea? ¿En qué
forma? ¿Qué nombre recibe el organelo citoplasmático
con forma de múltiples y pequeños gránulos? ¿Y el
organelo formado por canalitos membranosos?
El microscopio óptico
La lupa es de uso frecuente en distintas actividades, se trata de una lente de vidrio (las plásticas se
rayan con facilidad) montada en un aro, que cuenta con un soporte. El usuario debe acercar o
alejar la lupa del objeto en observación, hasta encontrar el mejor punto de enfoque. ¿Qué
dificultad se presenta después de varios minutos tratando de mantener ese punto de observación?
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¿Qué relación existe entre el poder de aumento de la lupa y la distancia entre el lente y el objeto?
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¿Qué sucede con el poder de definición o nitidez, al aumentar la distancia entre la lente y el
objeto?
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Microscopio compuesto
Es un instrumento óptico de aumento que tiene dos sistemas de lentes, cada uno con capacidad
para agrandar la imagen (el valor del aumento total se obtiene multiplicando el aumento que da
uno, por el aumento que da el otro). Se utiliza para el estudio de detallado de objetos que por su
tamaño son invisibles o confusos, formando de ellos imágenes aumentadas reales e invertidas.
Antes de usar un microscopio, debemos conocer sus partes y la forma correcta de manipularlas,
utilizando el siguiente dibujo reconoce sus partes, nombres y función.
1. Lente ocular
2. Tubo
3. Revolver
4. Asa
5. Lentes objetivos
6. Pinza
7. Apertura para el paso de la luz
8. Carro, pinza y tornillos
9. Condensador
10. Diafragma iris
11. Anillo porta filtro
12. Tornillo del condensador
13. Tornillo macro micrométrico (enfoque)
14. Lámpara
15. Base o pié
Práctico de microscopía
Esta es la primera actividad práctica del año, con ella se pretende alcanzar tres metas importantes:
1. que cada integrante del curso, logre comportarse en forma eficiente y sin riesgos en el
laboratorio
2. que cada alumno aprenda a utilizar en forma adecuada el microscopio
3. que todos los alumnos observen células vegetales como las del alga de agua dulce Elodea
chilensis y una de sus propias células.
Requisitos:
Prepararse individualmente, una semana antes del práctico, con el apoyo de su apoderado en el
hogar. Llegar al laboratorio el día del práctico con los materiales y la guía leída. Saber antes del
práctico todo lo que va ha realizar. La experiencia nos muestra que generalmente los grupos no
lograr cumplir la meta, por desorganización. Conviene llegar a trabajar (las personas que
improvisan hacen perder el tiempo, rompen todo a su paso)
Consideraciones previas
Todo aquello que pretendemos escudriñar con el microscopio debe ser tan delgado y
transparente como la tela más delgada de la cebolla. Es recomendable practicar el hacer
“muestras microscópicas a fresco”, colocando trozos de más o menos medio cm2 de tela de
cebolla estirada sobre un vaso, del mismo grosor colocar cutícula transparente de al menos tres
tipos de hojas, raspar en forma delicada la capa interna de la cavidad bucal, utilizando un palo de
helado pre lavado con agua con cloro diluido (como el que se usa para desinfectar verduras); la
muestra de saliva se arrastra como una delgada película sobre el vaso (en el laboratorio lo vamos
a teñir antes de llevarlo al microscopio, ahí estarán tus células. Esta técnica se conoce como
“hacer un frotis”)
Todo lo que se observa mediante el microscopio, debe ser representado mediante un dibujo tan
fiel como sea posible (y en ello va la mayor parte de la calificación). Obviamente se debe contar
con hojas blancas, lápiz grafito, goma, lápices de colores mina (¡jamás pasta o tinta para dibujar!)
A continuación un ensayo, el siguiente documento es una fotografía tomada mediante
microscopio óptico de un corte a través de tejido nervioso y junto a ella está el dibujo
correspondiente, pero incompleto. ¿Qué debe hacer el alumno?
¿Qué hay que hacer?
Bien, una de las complicaciones en esta actividad, es la poca eficiencia del alumno para enfocar
la preparación o muestra microscópica, pero todo tiene su técnica y se logra a través de pasos
ordenados:
1. Sacar el cobertor del microscopio y colocarlo doblado en un lugar seco.
2. Verificar la fuente de luz (espejo o lámpara), si corresponde enchufarlo y prender la lámpara
para comprobar que este buena. Cuando usa espejo se debe mirar por el lente ocular y mover
el espejo para lograr una intensidad de luz adecuada.
3. No cambiar de lugar el microscopio, se desplazan las personas hacia el instrumento y no a la
inversa.
4. Colocar el porta objetos con la muestra o preparación sobre la platina, siempre con el cubre
objetos correspondiente. Preocuparse por limpiar excedente de colorantes y en otros casos
mantener la muestra húmeda.
5. Comprobar que la muestra quede ubicada en línea con el haz de luz.
6. Girar el tornillo de enfoque hasta llevar el lente ocular a la máxima distancia de la
preparación. Recién ahora se aplica el ojo sobre el lente ocular y de mueve el tornillo de
enfoque muy, muy lentamente. En algún momento se verá un parpadeo, desde entonces se
mueve el tornillo micrométrico, hasta lograr un enfoque perfecto.
7. Recorre la muestra, escudriña sus detalles, busca algo más de lo que es evidente, mueve el
tornillo muy suavemente adelante y atrás, así podrás establecer la profundidad de la muestra.
8. Elige un sector que represente la mejor visión de la preparación y dibújala.
9. Ante cualquier duda o complicación que se presente, recurre de inmediato a tu profesora o al
ayudante.
¿Qué tal está tu habilidad para comunicar lo aprendido en forma oral?
Para ejercitar este importante aspecto de tu formación, deberás explicarle en forma oral a una
persona, como se puede lograr en poco tiempo, un buen enfoque con el microscopio.
Para rendir tu informe en los prácticos de microscopía se utiliza un formato muy ágil y resumido,
lo encuentras al final de este material y será necesario que lo fotocopies varias veces.
El informe se entrega al término de la misma clase
Actividad 1: Observar una muestra de mucosa bucal humana
Material
Palo de helado desinfectado
1 porta objetos
1 cubre objetos
Microscopio
Colorante (azul de metileno o fucsina)
1 rollo de toalla de papel absorbente
Procedimiento
Usando el costado del palo de helado raspe suavemente y sin presionar, contra la cara interna de
su mejilla, el raspado tendrá solo aspecto de saliva. Arrástrelo formando una película sobre un
porta objetos muy limpio (técnica de hacer frotis). Agregue una gota de colorante, evapore por
ventilación y aplique el cubre. Seque excedentes de colorante que puedan manchar las lentes y
observe con el microscopio. Dibuje con el lente de mayor aumento disponible. Complete su
informe.
Actividad 2: Observar una hoja de alga de agua dulce
Material
Elodea chilensis (*)
1 porta objetos
1 cubre objetos
Microscopio
Procedimiento
Retire una hojuela de la rama de alga, colóquela sobre el porta objetos. Cubra sin secar y observe
con el microscopio. Mantenga la muestra húmeda Dibuje con el lente de mayor aumento
disponible. Complete su informe.
(*) Esta alga es muy común y se compra en la tiendas de mascotas, con una sola rama alcanza
para todo el curso. Es recomendable que un alumno de la directiva la compre dos o tres día antes
y la entregue al Sr. Ayudante
Puede ser recomendable que se entrevisten previamente con el Sr. Ayudante, es la persona más
indicada para que nos enseñe la forma de trabajar en el laboratorio.