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bioelisa
bioelisa HBsAg 3.0
LEER CAMBIOS SOMBREADOS
3000-1158
96 tests
3000-1159
480 tests
Test de ELISA para la detección de antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) en suero o plasma
humano para ser utilizado en laboratorios clínicos y como prueba de cribado en bancos de sangre.
Sumario
La hepatitis B es una enfermedad causada por una infección vírica. A lo largo de la infección aparecen varios
1
marcadores serológicos entre los cuales está el HBsAg. En 1964 Blumberg y col. detectaron por primera vez en el
suero de un aborigen australiano un antígeno que reaccionaba con un anticuerpo del suero de un paciente hemofílico
de Nueva York. Posteriormente este antígeno se identificó como el antígeno de superficie de la hepatitis B. El
descubrimiento del HBsAg significó un gran paso para el conocimiento y diferenciación de las hepatitis víricas. La
presencia de HBsAg en suero o plasma constituye el marcador más importante para el diagnóstico de una infección
2
3
por virus de la hepatitis B (HBV). En 1971 Engvall y Perlmann y van Weemen y Schuurs describieron por primera
4,5
vez un enzimoinmunoensayo. El desarrollo posterior de la técnica y la utilización de microplacas por Voller y col. ,
han permitido confeccionar kits de diagnóstico de alta precisión y sensibilidad.
Principio
bioelisa HBsAg 3.0 es un método inmunoenzimático directo, de tipo «sandwich», en el que los pocillos de una
microplaca han sido recubiertos con anticuerpo de cobaya anti-HBs que actúa como anticuerpo de captura y que
utiliza como conjugado anticuerpo de cabra anti-HBs marcado con peroxidasa. La muestra a analizar se incuba en
uno de los pocillos de la microplaca. Si la muestra contiene HBsAg éste se fijará al anticuerpo anti-HBs unido a la
placa. Después de lavar para extraer el material no fijado, se añade el anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado
con peroxidasa, que reaccionará con el posible complejo antígeno-anticuerpo formado en la primera incubación.
Después de esta segunda incubación y posterior lavado se procede a la adición del sustrato enzimático que
contiene un cromógeno, lo que dará como resultado la aparición de color azul si la muestra es positiva para
HBsAg. El color azul cambia a amarillo después de parar la reacción con ácido sulfúrico. La intensidad del color es
proporcional a la concentración de HBsAg en la muestra.
Componentes
1. MCPL MICROPLACA:
12 x 8 pocillos recubiertos con anticuerpo de cobaya anti-HBs. Pocillos separables individualmente.
2.
CONJ 51x CONJUGADO CONCENTRADO:
Anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa. Contiene colorante rojo, proteínas estabilizadoras,
Bronidox al 0,02% y sulfato de gentamicina al 0,001%. A diluir 1/51 con el diluyente del conjugado antes de
usarse.
3.
DIL CONJ DILUYENTE DEL CONJUGADO:
Tampón Tris que contiene colorante amarillo, aditivos, Bronidox al 0,02% y sulfato de gentamicina al 0,001%.
Para diluir el conjugado concentrado.
4.
WASH SOLN 10x SOLUCIÓN DE LAVADO CONCENTRADA:
Tampón fosfato concentrado (10x) que contiene Tween 20 al 1% y mertiolato sódico al 0,01%. Diluir 1/10 con
agua destilada o desionizada antes de usarlo.
5.
SUBS BUF TAMPÓN SUSTRATO:
Tampón citrato-acetato que contiene peróxido de hidrógeno.
6.
SOLN TMB CROMÓGENO:
3,3', 5,5'-Tetrametilbenzidina (TMB) disuelta en dimetilsulfóxido (DMSO). Contiene colorante rojo.
7.
CONTROL + CONTROL POSITIVO:
Suero humano normal diluido en tampón fosfato que contiene HBsAg purificado e inactivado y azida sódica al
0,02%. Contiene colorante verde. Listo para usar.
8.
CONTROL – CONTROL NEGATIVO:
Suero humano negativo para HBsAg diluido en tampón fosfato que contiene azida sódica al 0,02%. Contiene
colorante amarillo. Listo para usar.
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9.
H2SO4 1N SOLUCIÓN DE PARADA (sólo en el kit de 1 placa):
Ácido sulfúrico 1N. Listo para usar.
10. SEALS LÁMINAS ADHESIVAS:
Para cubrir la microplaca durante las incubaciones.
11. BAG BOLSA DE PLÁSTICO:
Para guardar las tiras sin usar.
Precauciones
bioelisa HBsAg 3.0 es sólo para el diagnóstico IN VITRO.
Para uso exclusivo por profesionales.
ATENCIÓN: MATERIAL DE RIESGO BIOLÓGICO.
Todo el material de origen humano utilizado en la preparación de este producto ha sido encontrado negativo a la
presencia de anticuerpos de los virus HIV-1/HIV-2 y HCV, así como a la del antígeno de superficie de la hepatitis B,
utilizando un método comercial aprobado, excepto cuando necesariamente positivo. El HBsAg contenido en el control
positivo ha sido inactivado a 60°C durante 10 horas. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer la total
seguridad de la ausencia de agentes infecciosos, este producto debe manejarse con precaución:
-
-
No permitir que los reactivos entren en contacto con la piel o los ojos; si esto ocurre, lavar con abundante
cantidad de agua.
Usar guantes.
No pipetear ningún reactivo con la boca.
No fumar.
Depositar todos los materiales usados en recipientes adecuados para material biocontaminante. Los restos
de muestras, controles, reactivos aspirados y puntas desechables deben recogerse en un recipiente
destinado al efecto y autoclavarse una hora a 121°C, o tratarse con hipoclorito sódico a una concentración
final del 10%, durante 30 minutos. (Los restos que contengan ácido deben ser neutralizados antes de añadir
el hipoclorito sódico).
Algunos reactivos de este kit contienen azida sódica como conservante. La azida sódica puede reaccionar
con tuberías y desagües de plomo o cobre dando lugar a azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar
los restos de reactivos, deje correr agua abundante.
Precauciones de manejo:
-
Ajustar el lavador al tipo de placa utilizado (fondo plano), para realizar un buen lavado.
No mezclar reactivos procedentes de diferentes lotes.
No usar los reactivos una vez hayan caducado.
No utilice el reactivo si observa algún cambio de apariencia en cualquier componente incluido en el kit.
Deben extremarse las precauciones para evitar contaminaciones microbianas y contaminación cruzada entre
los reactivos.
Utilizar una nueva punta desechable para pipetear cada muestra o reactivo.
Es muy importante preparar la solución de sustrato-TMB justo 5-10 minutos antes de ser empleada.
Mantenerla en un recipiente bien tapado y al abrigo de la luz.
Restos de jabones y/o agentes oxidantes en los recipientes utilizados para la preparación de la solución
sustrato-TMB, pueden interferir en la reacción. En caso de que se utilicen recipientes de vidrio, es
conveniente lavarlos con ácido sulfúrico o clorhídrico 1N, enjuagarlos bien con agua destilada y secarlos
antes de usarlos. Usar preferiblemente material plástico desechable.
Conservación y estabilidad
Los componentes permanecerán inalterados hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se conservan
entre 2-8°C. La bolsa que contiene la microplaca debe llevarse a temperatura ambiente antes de abrirla para evitar
condensación en los pocillos. Una vez abierta la bolsa, la microplaca es estable por 3 meses guardada a 2-8°C en
la bolsa de plástico bien cerrada, con la bolsita de silicagel. La solución de lavado, una vez diluida, es estable
durante dos semanas si se conserva entre 2-8°C. El conjugado, una vez diluido es estable por 7 días a 2-8°C.
Guardar el cromógeno al abrigo de la luz. La solución sustrato-TMB una vez preparada no es estable, por lo que
se deben seguir estrictamente las indicaciones para su utilización.
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Presentaciones disponibles
Kit de 1 placa (96 tests), REF 3000-1158.
Contiene: 1 placa, 1 x 0,4 ml conjugado concentrado, 1 x 16 ml diluyente del conjugado, 2 x 50 ml solución de
lavado concentrada, 1 x 14 ml tampón sustrato, 1 x 1,5 ml cromógeno, 1 x 1,7 ml control positivo,
1 x 5 ml control negativo, 1 x 12 ml solución de parada, 1 bolsa de plástico y láminas adhesivas.
-
Kit de 5 placas (5 x 96 tests), REF 3000-1159.
Contiene: 5 placas, 1 x 1,3 ml conjugado concentrado, 2 x 30 ml diluyente del conjugado, 3 x 100 ml solución
de lavado concentrada, 5 x 14 ml tampón sustrato, 1 x 1,5 ml cromógeno, 1 x 1,7 ml control positivo,
1 x 5 ml control negativo, 1 bolsa de plástico y láminas adhesivas.
Material necesario no incluido
Agua destilada o desionizada.
Pipetas multicanal y micropipetas (100 µl) y puntas desechables.
Incubador (seco o con humedad) a 37°C  1°C.
Cronómetro.
Lector de microplacas con filtro de 450 nm. Recomendable filtro de referencia de 620 ó 630 nm.
Sistema de lavado manual o automático.
Solución de parada (kit de 5 placas): ácido sulfúrico 1N. También puede emplearse ácido sulfúrico 2N ó 4N.
Recolección de la muestra
Usar suero fresco o plasma (citrato/EDTA). Otros anticoagulantes deben ser comprobados antes de utilizarse. Las
muestras pueden ser conservadas durante 3 días entre 2-8°C. Si es por un período de tiempo más largo las
muestras deben ser congeladas (-20°C). Debe evitarse congelar y descongelar las muestras repetidamente.
Partículas en suspensión deben eliminarse por centrifugación. Los sueros o plasmas no deben ser inactivados por
calor, ya que puede conducir a resultados incorrectos.
Procesamiento automático
Esta prueba permite su uso de modo automático o semiautomático en diferentes instrumentos. Es muy importante
validar cualquier sistema automático para demostrar que los resultados obtenidos para las muestras son
equivalentes a los obtenidos empleándose el ensayo manual. Se recomienda que el usuario valide periódicamente
el instrumento. Si encuentra cualquier dificultad en la programación y ajuste de los procesadores automáticos de
Biokit, por favor contacte con su distribuidor.
PROCEDIMIENTO (Ver esquema del procedimiento)
Operaciones previas
Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de empezar el ensayo.
Los reactivos líquidos deben homogeneizarse suavemente antes de usarlos.
Diluir la solución de lavado concentrada 1/10 con agua destilada o desionizada. Para una placa completa mezclar
50 ml de solución de lavado concentrada con 450 ml de agua. En caso de utilizar menos de una placa, preparar la
parte proporcional de solución.
Diluir el conjugado concentrado 1/51 con el diluyente del conjugado. Para una placa, añadir 240 µl del conjugado
concentrado (color rojo) en 12 ml de diluyente del conjugado (color amarillo). Mezclar suavemente. Para menos
de una placa seguir las indicaciones de la tabla 1. LA SOLUCIÓN DE CONJUGADO DE TRABAJO TIENE UN
COLOR NARANJA.
TABLA 1
Tiras requeridas
Diluyente del conjugado ml
Conjugado concentrado µl
1
1,0
20
2
2,0
40
4
4,0
80
6
6,0
120
8
8,0
160
10
10,0
200
12
12,0
240
Monitorización de la adición de muestra y de reactivos
El hecho de que la muestra no requiere predilución y que todos los reactivos y los controles son coloreados permite
la monitorización de su adición en la microplaca por medio de lectura espectrofotométrica. Para ello, después de
dispensar una placa esta debe leerse a 450 nm (sin filtro de referencia). Los valores de absorbancia deben ser:
SUERO / PLASMA / CONTROLES:
CONJUGADO DE TRABAJO (color naranja):
SUSTRATO DE TRABAJO (color rosa):
0
 0,100
 0,500
 0,050
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Si en algún pocillo no se cumplen las especificaciones mencionadas, es indicativo de que ha habido algún
problema durante la dispensación y debe ser investigado posteriormente.
Realización de la prueba
1. Transferir 100 µl de cada uno de los controles positivo y negativo a los pocillos correspondientes. Utilizar
como mínimo 3 pocillos para el control negativo, un pocillo para el control positivo y uno para el blanco de
sustrato en todas las placas o fracción de las mismas cada vez que se realice el ensayo, independiente del
número de muestras a probar. Dejar el pocillo del blanco vacío (se recomienda reservar el pocillo A1 para el
blanco).
2.
Transferir 100 µl de cada una de las muestras a analizar a los pocillos correspondientes.
3.
Cubrir la placa con una lámina adhesiva e incubar durante 60  5 minutos a 37°C.
4.
Desechar la lámina adhesiva. Aspirar el contenido de los pocillos y llenarlos completamente
(aproximadamente 350 µl) con solución de lavado diluida. Repetir el proceso de aspiración lavado 3 veces
más. Asegurarse de que cada columna de pocillos esté en remojo al menos 15 segundos antes del nuevo
ciclo de aspiración. Después del último lavado golpear la placa invertida sobre un papel absorbente para
eliminar cualquier exceso de líquido en los pocillos.
5.
Transferir 100 µl de conjugado diluido a todos los pocillos de la placa, a excepción del pocillo para el blanco
de sustrato.
6.
Cubrir la placa con una lámina adhesiva e incubar 30  2 minutos a 37°C.
7.
Durante los últimos 5-10 minutos de esta incubación, preparar la solución de sustrato-cromógeno. Para una
placa entera añadir 280 µl de la solución de cromógeno (TMB) a un vial de tampón sustrato (14 ml) y mezclar
bien. LA SOLUCIÓN SUSTRATO DE TRABAJO TIENE UN COLOR ROSA, descartar en caso de que se
vuelva azul. Si no se utiliza toda la placa, preparar la cantidad necesaria según indica la tabla 2.
TABLA 2
Tiras requeridas
Tampón sustrato ml
Cromógeno (TMB) µl
NOTA:
1
1,0
20
2
2,0
40
4
4,0
80
6
6,0
120
8
8,0
160
10
10,0
200
12
12,0
240
El TMB está disuelto en DMSO. Dado que la temperatura de fusión del DMSO es de 18°C, el cromógeno
debe alcanzar una temperatura de 20-25°C y agitarse bien antes de usarlo.
8.
Desechar la lámina adhesiva. Aspirar y lavar la placa como en el punto 4.
9.
Añadir 100 µl de sustrato-TMB a todos los pocillos, incluso el blanco.
10. Incubar durante 30  2 minutos a temperatura ambiente (20-25°C).
11. Añadir 100 µl de solución de parada a cada pocillo, guardando la misma secuencia y con los mismos
intervalos observados en la adición del sustrato-TMB.
12. Ajustar el cero del lector con el pocillo del blanco a 450 nm y leer la absorbancia de cada uno de los pocillos
en el plazo máximo de 30 minutos. Se recomienda hacer lectura bicromática utilizando filtro de referencia de
620 - 630 nm.
Control de calidad
Los resultados de un ensayo son válidos si se cumplen los siguientes criterios:
1.
0
Blanco del sustrato.
El valor de absorbancia debe ser inferior o igual a 0,100.
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2.
Valor medio del control negativo (CNx).
Calcular el promedio de los valores de absorbancia obtenidos para el control negativo. Cada uno de los
valores individuales obtenidos debe ser igual o mayor a 0,5 veces CNx e igual o inferior a 1,5 veces CNx. Si
alguno de los valores no entra dentro de los límites debe descartarse y recalcularse la media. Si son dos los
valores fuera de límites, la prueba deberá repetirse.
Ejemplo:
Control negativo
1
2
3
Absorbancia
0,045
0,050
0,049
Total
0,144
0,144
CNx =
= 0,048
3
0,5 x 0,048 = 0,024
1,5 x 0,048 = 0,072
En este ejemplo no existe ningún valor a descartar.
La media de los valores de absorbancia de los controles negativos debe estar por debajo de 0,120 después
de restar el blanco.
CNx  0,120
3.
Control positivo (CP).
El valor de absorbancia obtenido para el control positivo debe ser igual o mayor que 0,700 después de restar
el blanco.
CP  0,700
Si alguno de los criterios arriba no se cumple, el ensayo no es válido y se deberá repetir.
Resultados
La presencia o ausencia de HBsAg en las muestras a analizar se determina relacionando el valor de la
absorbancia de cada muestra con el valor umbral.
1.
Calcular el valor umbral añadiendo 0,040 a la media del control negativo.
Valor umbral = CNx + 0,040
2.
Dividir la absorbancia de la muestra por el valor umbral.
Positivo:
Negativo:
Dudoso:
relación absorbancia/valor umbral  1,0
relación absorbancia/valor umbral  0,9
relación absorbancia/valor umbral  0,9  1,0
Interpretación de los resultados
Un resultado repetidamente positivo para HBsAg es indicativo de la existencia de infección por el virus de la
hepatitis B. Para determinar si se trata de una infección aguda o crónica deben analizarse otros marcadores
serológicos de la hepatitis B estudiando paralelamente el cuadro clínico del paciente.
Limitaciones del procedimiento
Toda muestra que haya dado un resultado positivo o dudoso debe analizarse de nuevo por duplicado. Si el
resultado es repetidamente positivo o dudoso, debería analizarse con otra prueba de características similares.
Aunque la presente prueba esté calificada como un método de tercera generación para la detección de HBsAg,
está reconocido que los métodos actuales existentes para la detección de HBsAg no son lo suficientemente
sensibles para detectar todos los casos posibles de hepatitis B.
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Resultados esperados
La prevalencia de portadores crónicos de HBsAg varía ampliamente en el mundo, de alta (> 8%, ej., África, Asia y
Pacifico Oeste) a intermediaria (2-7%, ej., el sur y este Europeo) y baja (< 2%, ej., Europa occidental, América del
Norte y partes de América del Sur). En Europa occidental el índice de portadores de HBsAg se sitúa entre el 0,1 y
13
el 0,5% y en el sur de Europa la prevalencia de portadores varía entre el 1 y el 5%.
Características funcionales
Sensibilidad analítica
La sensibilidad es, como mínimo, de 0,100 unidades/ml de HBsAg para los subtipos ad y ay, utilizando patrones
de HBsAg referenciados a los del Instituto Paul Ehrlich (PEI-Alemania, ref. 87). Utilizando el Segundo Estándar
Internacional de la Organización Mundial de Salud para HBsAg, subtipo adw2, genotipo A (código NIBSC: 00/588)
la sensibilidad obtenida es como mínimo de 0,125 UI/ml.
Evaluaciones
En un estudio para evaluar el funcionamiento del kit, se probaron 416 muestras presuntamente positivas para
HBsAg y se compararon con un método de referencia. En este estudio se obtuvo una sensibilidad del 100%.
-
200 muestras de pacientes hospitalizados se probaron en comparación con un método de referencia.
196 muestras resultaron negativas con ambos métodos, 3 se confirmaron positivas y 1 fue un resultado falso
positivo. La especificidad obtenida en este estudio fue del 99,5%.
-
Se probaron 440 muestras de suero de un banco de sangre con tres lotes de reactivo y se compararon los
resultados con el método utilizado en rutina para el cribado de HBsAg. Se obtuvo una especificidad del 100%
con dos lotes y del 99,5% con el tercer lote.
-
En un banco de sangre (EFS Centro Atlántico, Francia), 4871 muestras de donantes no seleccionados se
analizaron en paralelo con el método utilizado en rutina para el cribado de HBsAg. De este total, 11 muestras
fueron inicialmente reactivas (0,23%), de las cuáles 3 fueron repetidamente reactivas (0,06%). La
especificidad obtenida fue del 99,94%.
Precisión
Reproducibilidad intra-ensayo:
Los coeficientes de variación obtenidos para los valores de absorbancia de 72 replicados de una muestra positiva
fueron del 2,2%, 2,5% y 2,6% en tres lotes estudiados.
Reproducibilidad inter-ensayo:
El control positivo se probó en 5 días diferentes con 3 lotes diferentes de bioelisa HBsAg 3.0. Los coeficientes de
variación obtenidos para os ratios absorbancia/valor umbral del control con los tres lotes fueron del 1,2%, 1,0% y
2,4% respectivamente.
Interferencias
Interferencia por adición
No se observó interferencia por hemoglobina (2 mg/ml), bilirrubina (0,2 mg/ml) y triglicéridos (13 mg/ml).
Reacciones cruzadas
En un estudio de posibles interferencias, se probaron 144 muestras con un riesgo potencial de producir resultados
falsos positivos. De dichas muestras, 20 eran provenientes de sueros positivos para RPR, 15 eran provenientes de
sueros positivos para mononucleosis, 18 eran positivas para anticuerpos anti-nucleares (ANA), 9 eran positivas
para factor reumatoide (RF), 32 eran de mujeres embarazadas, 20 eran positivas para anticuerpos frente a la
hepatitis C, 20 eran positivas para anticuerpos frente al HIV y 15 eran positivas para anticuerpos frente a la
hepatitis A. Se encontraron 2 muestras positivas que se confirmaron con un test de referencia. Todas las otras
muestras fueron negativas con el bioelisa HBsAg 3.0.
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bioelisa
bioelisa: Guía de problemas
Problema
Posibles causas
Solución
1. Controles fuera de
validación.
1a. Temperatura, incubación
o pipeteo incorrecto.
1b. Preparación incorrecta de
reactivos, error en las
diluciones. Reactivos no
mezclados
correctamente.
1c. Contaminación cruzada
entre controles.
Comprobar el procedimiento.
Repetir el ensayo.
Comprobar el procedimiento.
Repetir el ensayo.
1d.
1e.
1f.
1g.
2. Sin color o poco color al
final del ensayo.
2a.
2b.
2c.
2d.
0
Pipetear cuidadosamente. No
intercambiar los tapones de
los viales. Repetir el ensayo.
Comprobar que el filtro de
Filtro de lectura
lectura sea de 450 nm. Si no
incorrecto.
se usa filtro de referencia de
620 - 630 nm, las
absorbancias aumentan
aproximadamente
50 miliunidades.
Interferencia en el camino Comprobar el lector. Limpiar o
secar el fondo de los pocillos.
óptico.
Comprobar que no haya
burbujas de aire. Repetir la
lectura.
No utilizar componentes de
Se han utilizado
lotes diferentes puesto que
componentes de lotes
están ajustados para cada
diferentes.
lote en particular.
Comprobar la caducidad del
Reactivos caducados.
kit y de sus componentes. No
utilizar un kit o reactivos
caducados.
Comprobar el procedimiento.
Uno o más reactivos no
Repetir el ensayo.
añadidos o añadidos en
secuencia equivocada.
Comprobar si ha habido
Conjugado inactivo:
contaminación, comprobar el
dilución incorrecta,
conservación incorrecta. procedimiento. Repetir el
ensayo.
Mantener siempre las tiras no
Microplaca inactiva:
conservación incorrecta. utilizadas en la bolsa bien
cerrada, con el desecante
dentro. Repetir el ensayo.
Utilizar siempre una dilución
Sustrato inactivo:
fresca de TMB en tampón
conservación o dilución
incorrecta, el contenedor sustrato. Usar contenedores
desechables o lavados con
utilizado afecta la
ácido o etanol y enjuagados
estabilidad del sustrato,
con agua desionizada.
contaminación cruzada
Comprobar el procedimiento.
con la solución de
Repetir el ensayo.
parada.
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bioelisa: Guía de problemas
Problema
Posibles causas
Solución
3. Demasiado color en
todos los pocillos de la
microplaca.
3a. Sustrato contaminado,
oxidado o preparado
incorrectamente.
Comprobar que el sustrato
preparado sea de color rosa,
descártelo si está azul.
Asegúrese que el TMB está
completamente líquido antes
de utilizarlo. Asegurar la
correcta mezcla del TMB en
el tampón sustrato. Utilizar
contenedores desechables o
lavados con ácido o etanol.
Repetir el ensayo.
Comprobar contaminación
(aspecto turbio). Comprobar
diluciones. Repetir el ensayo.
Comprobar la calidad del
agua destilada/desionizada
utilizada para preparar la
dilución. Repetir el ensayo.
Comprobar el lavador. Llenar
los pocillos hasta el tope y
aspirar completamente.
Incrementar el número de
ciclos de lavado y el tiempo
de remojo. Golpear la placa
invertida contra papel
absorbente. Repetir el
ensayo.
Utilizar sólo la solución de
lavado de biokit.
3b. Reactivos contaminados
o preparados
incorrectamente.
3c. Solución de lavado (1x)
contaminada.
3d. Lavado insuficiente o no
consistente: llenado o
aspiración insuficiente o
no uniforme, número de
ciclos de lavado
insuficiente. Lavador
contaminado.
3e. Se ha utilizado solución
de lavado de otro
fabricante.
4. Reproducibilidad pobre o 4a. Problemas de lavado.
elevado número de
4b. Pipetas mal calibradas o
muestras reactivas que
puntas mal encajadas.
no se repiten.
Técnica de pipeteo
incorrecta.
4c. Reactivos y muestra no a
temperatura ambiente o
no correctamente
mezclados antes de usar.
4d. Corrientes de aire sobre
la microplaca durante las
incubaciones.
4e. Demasiado tiempo en la
adición de muestras y/o
reactivos. Inconsistencia
en los intervalos de
tiempo. Burbujas de aire.
4f. Interferencia en el camino
óptico.
0
Ver apartados 3c, 3d, 3e.
Utilizar pipetas calibradas con
puntas bien ajustadas.
Pipetear cuidadosamente sin
burbujas ni salpicaduras.
Repetir el ensayo.
Atemperar muestras y
reactivos y mezclarlos bien
antes de utilizarlos.
Mantener la microplaca
protegida de las corrientes de
aire.
Desarrollar una técnica
uniforme y consistente.
Ver 1e.
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