Revista Sistemas Ambientales, Vol. 4, No 2, 2011, p. 45-54 APLICACIONES BIOTECNOLÓGICAS DE MICROORGANISMOS HALÓFILOS Laura Castillo-Carvajal, Blanca E. Barragán-Huerta, B*. Laboratorio de Residuos Peligrosos. Departamento de Ingeniería en Sistemas Ambientales. Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. Instituto Politécnico Nacional. Av. Wilfrido Massieu s/n, Unidad Profesional Adolfo López Mateos. CP 07738. DF. México e-mail: [email protected] RESUMEN Los microorganismos tienen múltiples aplicaciones industriales; en el caso de los microorganismos halófilos su uso biotecnológico se ve orientada a diferentes campos, por ejemplo en la industria alimentaria en donde se requiere preservar y conservar las características sensoriales de los alimentos, en la industria de plásticos en la que se busca generar nuevas tecnologías amigables con el ambiente y en la industria farmacéutica con la incorporación de principios activos que originan nuevos productos. Se ha demostrado que los microorganismos halófilos presentan una alta capacidad de bioremediación, ya que pueden ser empleados como catalizadores en diversos procesos en donde se requieren condiciones extremas para poder recuperar eficientemente un ambiente contaminado. Palabras clave: Halófilas, Biotecnología, Bioremediación. ABSTRACT Microorganisms have several industrial applications; in case of halophilic microorganisms their biotechnological use is oriented to different fields, for example in food industry where it needs to preserve and maintain the sensory characteristics of the food, in the plastics industry which looks for new friendly environmental technologies and in the pharmaceutical industry with the incorporation of active principles that are the base of new products. It has shown that the halophilic microorganisms have a high capability of bioremediation, due to they can be used as catalysts in different process in which need extreme conditions to recuperate efficiently polluted environments. Key words: Halophilic, Biotechnology, Bioremediation. Revista Sistemas Ambientales, Vol. 4, No 2, 2011, p. 45-56 INTRODUCCIÓN Los ambientes hipersalinos acuáticos en los que la concentración de sal supera la del agua de mar (3.5% de sales totales) pueden ser de origen natural, pero también pueden ser de origen artificial como las salinas construidas por el hombre para la obtención de sal. Por otra parte, la mayoría de las salinas están ubicadas en la costa, ya que la sal se obtiene por la evaporación del agua de mar, tal es el caso de las salinas de Bras del Port en Santa Pola, Alicante (España); existen también salinas terrestres en las que las salmueras o aguas saladas proceden ríos o lagos, un ejemplo de este tipo son las salinas de Maras de la provincia de Urubamba, Cusco (Perú), las cuales son denominadas ―estanque múltiple‖, debido a que las salmueras se distribuyen en un conjunto de balas de evaporación. Este tipo de salinas son útiles para realizar estudios sobre la diversidad de los microorganismos halófilos, ya que en ellas se encuentran multitud de ambientes con distintos grados de salinidad (Meseguer-Soria, 2004). El salar de Uyuni en Bolivia y el de Atacama en Chile son ejemplos muy conocidos por su gran extensión y alto contenido de litio. En México existen algunas salinas que han sido utilizadas desde tiempos prehispánicos para la obtención de sal (Figura 1). Estos ambientes son ricos en microorganismos halófilos con gran potencial biotecnológico poco explorado. Las aplicaciones biotecnológicas de los microorganismos extremófilos halófilos son diversas entre las cuales se pueden citar: producción de alimentos fermentados, producción de salsa de soya, colorantes, extremozimas resistentes a altas concentraciones de sal (amilasas, proteasas, etc.), aditivos utilizados en cosméticos, plásticos biodegradables y producción de agentes gelificantes como exopolisacáridos (EPS). (http://cbt.fcyt.umss.edu.bo/trabajo/verarticulo.ph p?cod_art=5 A B Figura 1. Ambientes Salinos. Salar de Atacama, Chile (A). Zapotitlán de las Salinas, México (B). En la actualidad está creciendo el interés por conocer mejor la diversidad de microorganismos halófilos y cada vez es mayor el número de investigaciones relacionadas con el tema ya que estos organismos producen una amplia variedad de metabolitos secundarios estables que pueden tener aplicaciones prácticas (González-Hernández y Peña, 2002; Podar y Reysenbach, 2006). Generalidades de los Microor-ganismos Halófilos Los microorganismos pertenecientes a la familia Halobacteriaceae abundan en salinas y lagos hipersalinos, ambientes bajo los cuales muy pocos seres vivos pueden crecer. Una característica fundamental de los miembros de esta familia es que son halófilos obligados, necesitando concentraciones de NaCl mayores de 1.5 M para crecer, además, toleran bastante bien las temperaturas elevadas, ya que los ambientes que habitan, por la posición geográfica y por tratarse de aguas estancadas, suelen ser lugares muy cálidos con temperaturas que pueden llegar a mas de 50°C (http://www.lluisvives.com/servlet/SirveObras/01 593741546702713008813/012969_2.pdf). Algunos estudios han demostrado que los microorganismos halófilos cuentan con estrategias que les permiten enfrentar el estrés osmótico manteniendo altas concentraciones intracelulares de sal y sinte- Aplicaciones biotecnológicas de microorganismos halófilos tizando solutos compatibles que les permiten balancear su presión osmótica (GonzálezHernández y Peña, 2002).Las arqueas halófilas son básicamente heterótrofas aerobias, muchas de estas especies pueden crecer en medios inorgánicos con un solo compuesto orgánico como fuente de carbono. Debido a las altas concentraciones de sal y a las elevadas temperaturas de las salinas, la solubilidad de oxígeno es muy baja convirtiéndose Castillo y Barragán en un factor limitante para el desarrollo de estos microorganismos. Un detalle importante que se debe resaltar es que aunque los halófilos son organismos quimioheterótrofos, se han descrito casos de fijación de CO2 (Oren, 2002). En la tabla 1 se presentan algunos de los géneros de los microorganismos considerados como halófilos. TABLA 1. MICROORGANISMOS HALÓFILOS Dominio Arquea Bacteria Género Halobacterium sp. Methanohalobium sp. Methanohalophilus sp. Acetohalobium sp. Halorhodospira sp. Actinopolyspora sp. Salinibacter sp. Halanaerobium sp. Halothermothrix sp. Halocella sp. Halobacteroides sp. Haloanaerobacter sp. Salibacillus sp. Halobacillus sp. Marinococcus sp. Salinococcus sp. Tetragenococcus sp. Halomonas sp. Chromohalobacter sp. Salipiger sp. Palleronia sp. Referencia Oren, 1999 Zhilina y Zavarin, 1987 Paterek y Smith, 1988 Zhilina y Zavarin, 1990 Imhoff y Süling, 1996 Skerman et al., 1980 Antón et al., 2002 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Vreeland et al., 1980 Ventosa et al., 1989 Martínez-Cánovas et al., 2004 Martínez-Checa et al., 2005 Revista Sistemas Ambientales, Vol. 4, No 2, 2011, p. 45-54 Producción de Enzimas Los biotecnólogos han explotado a los extremófilos como fuente de enzimas denominadas extremoenzimas (Hendry, 2006), las cuales ofrecen nuevas oportunidades para biocatálisis y biotransformaciones como resultado de su extrema estabilidad (Hough y Danson, 1999). Las bacterias halófilas moderadas crecen óptimamente en un rango de salinidad de 0.5 a 2.5 M; además producen una serie de enzimas hidrolíticas extracelulares tales como: amilasas, proteasas, lipasas, nucleasas y esterasas (Margesin and Schinner, 2001; Ventosa et al., 2005). En los últimos años, el interés por el estudio de estas enzimas se ha incrementado debido a sus propiedades catalíticas y potencial de aplicación industrial en la formulación de detergentes, elaboración de productos dietéticos, procesamiento de cuero, papel y alimentos cárnicos, así como también en la síntesis de enantiómeros puros de fármacos, biodegradación de residuos tóxicos y contaminantes industriales, entre otros (Ventosa et al., 2005; Sánchez-Porro et al., 2003). Aunque el potencial de las halobacterias para catalizar reacciones bajo condiciones extremas de sal es bien conocido, hasta ahora no hay muchos reportes de su aplicación en forma inmovilizada, debido a que estas células son muy frágiles y se lisan con la disminución de sal en el medio externo; sin embargo, se ha observado que la producción de α-amilasa por parte de microorganismos halófilos se ha logrado mantener durante 45 días, inmovilizando los microorganismos en perlas de alginato y películas de alcohol polivinílico (Bagai and Madamwar, 1996). Las hidrolasas producidas por microorganismos halófilos han sido usadas en la industria farmacéutica para la elaboración de algunos medicamentos como antibióticos, hormonas y pesticidas (Joshi et al., 2000: Sudge et al., 1998), también han sido usadas para el tratamiento de superficies marinas contaminadas con petróleo (Stosz et al., 1995). Algunas celulasas haloestables han sido aisladas de Salinovibrio sp. (Wang, et al, 2009). Por otro lado, se han caracterizado isomerasas termoestables que permiten que la manipulación del DNA sea más conveniente y eficiente; la Peptidil prolil cis-trans isomerasa (PPIasa) ha sido usada para la regeneración de proteínas desnaturalizadas, para la estabilización de proteínas, para la producción de proteínas recombinantes y para la producción de importantes sustancias inmunosupresoras y fisiológicamente activas (Margesin and Schinner, 2001). Producción de Biopolímeros Los microorganismos halófilos tienen la capacidad de producir biopolímeros de diferentes clases ente los cuales encontramos: exopolisacáridos, biosurfactantes, liposomas, lectinas y bioplásticos. Los exopolisacáridos (EPS) son biopolímeros producidos extracelularmente por bacterias halófilas, teniendo aplicaciones en la industria alimentaria, farmacéutica y en procesos de biodegradación (http://cbt.fcyt.umss.edu.bo/trabajo/verarticulo.ph p?cod_art=5). Los exopolisacáridos sulfatados son poco frecuentes entre los exopolisacáridos de origen microbiano, sin embargo, algunos microorganismos halófilos estudiados sintetizan polímeros en cuya composición se detectan grupos sulfato. Una de las ventajas de estos exopolisacáridos es que tienen actividad moduladora de la proliferación de distintos tipos celulares, entre ellos células tumorales y bloquea la entrada de células virales en células hospederas, además, los exopolisacáridos le dan la capacidad a las células bacterianas de formar biofilms permitiéndoles la adhesión a diferentes superficies. Otras de las ventajas que le conceden los exopolisacáridos a las bacterias halófilas es la capacidad de captar metales pesados, su actividad viscozante y emulgente, adicionalmente algunos exopolisacáridos pueden ser fuentes de oligosacáridos ricos en fucosa, presentando potenciales aplicaciones en cosmética y medicina (Mata-Gómez, 2006). El exopolímero poli(γ-D-ácido glutámico) (PGA) puede ser usado como un espesante, humectante, material de liberación sostenida, o portador de medicamentos biodegradable en la industria farmacéutica o alimentaria (Kunioka, 1997). Los biosurfactantes mejoran la remediación de suelo y agua contaminados con aceite, disminuyen la tensión superficial, incrementan la solubilidad y movilidad de hidrocarburos hidrofóbicos, promo- Aplicaciones biotecnológicas de microorganismos halófilos viendo la degradación (Figura 2). Los microorganismos halófilos o halotolerantes productores de biosurfactantes podrían jugar un papel importante en la acelerada remediación de medios ambientes salinos contaminados con aceite (Margesin and Schinner, 2001). Figura 2. Producción de emulsificantes del petróleo por bacterias halófilas aisladas en el Departamento de ISA-ENCB (Foto: Mónica Benítez) Se ha aplicado la gelificación de exopolisacáridos bajo condiciones alcalinas para remover colorantes de efluentes textiles (Margesin and Schinner, 2001). Los liposomas son usados en medicina y cosméticos para el transporte de compuestos a sitios específicos en el cuerpo. Lípidos vinculados al éter de arqueas halófilas tienen una alta estabilidad química y resistencia contra las esterasas y por lo tanto más alto rango de supervivencia que los liposomas basados en derivados de ácidos grasos (Margesin and Schinner, 2001). Castillo y Barragán Biotecnología Alimentaria Los microorganismos halófilos juegan un importante papel en los procesos de fermentación que ocurren en presencia de sal; estos microorganismos catalizan la fermentación y generan los compuestos encargados de dar características de sabor, consistencia y aroma a los productos resultantes, adicionalmente los microorganismos halófilos producen compuestos que pueden servir como control de microorganismos no deseados (Margesin and Schinner, 2001). Los microorganismos halófilos han sido usados para la producción de suplementos alimenticios y colorantes para alimentos; una alternativa promisoria para la producción de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, son las bacterias marinas, las cuales permiten procesos de purificación convencionales, rápidos rangos de producción y buena consistencia del producto y rendimiento. En el caso de los colorantes, los β-carotenos son usados en la industria de alimentos como colorantes naturales, como precursores de la vitamina A, como aditivos en cosméticos, preparaciones multivitamínicas, y productos saludables. Se ha reportado que las bacterias halófilas extremas tienen un óptimo crecimiento y un buen rendimiento en la producción de carotenoides en presencia de 25% de NaCl (Margesin and Schinner, 2001). Las lectinas, proteínas selectivas unidas a azúcar, son herramientas útiles para la investigación de la superficie celular y marcadores celular. Son usadas como marcadores de las modificaciones de la superficie celular para la detección de células malignas (Margesin and Schinner, 2001). Las bacterias halófilas también han sido usadas para la producción de bioplásticos, los polihidroxialcanoatos (PHA) son compuestos bacterianos acumulados intracelularmente. Como plásticos biodegradables podrían reemplazar termoplásticos derivados del aceite en algunos campos (Margesin and Schinner, 2001). Figura 3. Pigmentos naturales en los alimentos Bioremediación Revista Sistemas Ambientales, Vol. 4, No 2, 2011, p. 45-56 La presencia de sodio y condiciones salinas en los suelos, interfiere en el crecimiento adecuado de la mayoría de los cultivos y por lo tanto constituye uno de los problemas más serios que enfrenta la agricultura sostenible en todo el planeta. La FAO y la UNESCO calculan que el área total de suelos salinos en el mundo es de 397 millones de hectáreas y los suelos sódicos corresponden a 434 millones de hectáreas (Oldeman, 1991; Brandt and Thornes, 1996; FAO, 2000; FAO, 2002). La recuperación de los suelos sódicos se ha hecho principalmente cambiando el sodio en complejo coloidal por otro catión, aplicando principalmente sales solubles de calcio ó sales de calcio con baja solubilidad (cal agrícola), siendo esta una opción costosa, Sánchez-Leal y Arguello- Arias, (2006) proponen una alternativa en la cual algunas bacterias halófilas son capaces de capturar sodio in vitro y pueden ser posiblemente utilizadas en un biorreactor para la bioremediación de suelos sódicos y salinos, formando un consorcio entre bacterias autóctonas y bacterias a las cuales se les ha comprobado su capacidad de capturar sodio. Se han aprovechado la habilidad de microorganismos halófilos/ halotolerantes de utilizar aminas aromáticas como una fuente de carbono y energía ( Li et al, 2010) y se ha comprobado que crecen sobre compuestos aromáticos (Cuadros- Orellana et al, 2006; Arulazhagan and Vasudevan, 2009; Li et al 2006; Peyton et al, 2006 ). Asimismo se han desarrollado procesos para el tratamiento biológico eficiente de ecosistemas contaminados con productos del petróleo en presencia de sal (Betancur-Galvis et al, 2006). Existen algunos reportes sobre la capacidad de los microorganismos halófilos para degradar colorantes textiles (Kolekar et al, 2008). En el Laboratorio de Residuos Peligrosos hemos realizado el aislamiento de microorganismos halófilos a partir de ambientes salinos ubicados en Chile y México (Figura 4). Figura 4. Degradación de Naranja II por halófilos aislados en el Departamento de ISA-ENCB (Foto: Laura Castillo). Se han aislado bacterias halófilas capaces de degradar compuestos orgánicos halogenados como tricloroetileno, los cuales son de gran importancia debido a su persistencia y toxicidad (Fuse, 1998). Algunos autores han aislado bacterias halófilas capaces de degradar lindano, DDT y 2,4-D (Oesterhelt et al., 1998; Maltseva et al., 1996). Conclusiones. Los microorganismos halófilos presentan un gran potencial de aplicación en diferentes campos de la biotecnología, el uso de microorganismos para la degradación de contaminantes es un campo de investigación en desarrollo. El uso de microorganismo para la obtención de metabolitos o enzimas presenta ventajas biotecnológicas debido a que las condiciones extremas requeridas para su crecimiento impiden los problemas de contaminación inherentes a los procesos fermentativos. Agradecimientos. Este trabajo forma parte de las actividades enmarcadas en el proyecto SIP 20110775 del Instituto Politécnico Nacional. Aplicaciones biotecnológicas de microorganismos halófilos Referencias Antón, J., Oren, A., Benlloc, S., Rodrpiguez-Valera, F. Amman, R., Roselló-Mora, R. (2002) Salinibacter ruber gen.nov. sp. nov., a novel extremely halophilic member of the Bacteria from saltern crystallizer ponds. Int. J. Syst. Evol. Mocrobiolo. 52: 485-491. Arulazhagan P, Vasudevan N. 2009. Role of a moderately halophilic bacterial consortium in the biodegradation. of polyaromatic hydrocarbons Marine Pollution Bulletin 58 (2009) 256–262 Bagai, R. and Madamwar, D. (1996) Continuous Production of Halophilic α- amylase Through Whole Cell Immobilization of Halobacterium salinarium. Appl. Biochem. Biotechnol. 62: 213-218. Betancur-Galvis L.A, Alvarez-Bernal D,Ramos-Valdivia A.C,. Dendooven L. 2006. Bioremediation of polycyclic aromatic hydrocarbon-contaminated saline–alkaline soils of the former Lake Texcoco. Chemosphere 62:1749– 1760 Brandt, C.J., Thornes, J.B. (1996) Mediterranean Desertification and Land Use. John Willey & Sons, Chihester. 43-86. Cuadros-Orellana S, Pohlschro M, Durrant L, 2006. Isolation and characterization of halophilic archaea able to grow in aromatic compounds. International Biodeterioration & Biodegradation 57: 151–154 FAO (2000) Global Network on Integrated Soil Management for Sustainable Use of SaltAffected Soils. Food and Agriculture Organization, Rome, Italy. FAO (2002) The Salt of the Earth: Hazardous for Food Production. World Food Summit. Food and Agriculture Organization, Rome, Italy. Fuse, H. (1998) Oxidation of organic compounds by bacteria. Patent JP10128385.1998 May 19 González-Hernández, J.C. y Peña, A. (2002) Estrategias de adaptación de microorganismos halófilos y Debaryomyces hansenii. Rev. Latin. Microbiol. 44(3-4): 137-156. Hendry, P. (2006) Extremophiles: there´s more to life. Environ. Chem. 3:75-76. Hough, D. and Danson, M. (1999) Extremozymes. Current Opinion in Chemical Biology. 3: 39-46. Castillo y Barragán Imhoff, J.F., Süling, J. (1996) The phylogenetic relationship among Ectothiorhodospiraceae: a reevaluation of their taxonomy on the basis of 16S rDNA analyses. Arch. Microbiol. 156: 106113. Joshi, R., Ravindranathan, T., Bastawade,K.B., Gkhale, D.V., Kalkote, U.R., Sudge, S.S. (2000) Halophilic Pseudomonas strain having accession no. NCIM 5209 (ATCC 55940) and a process for preparing D(-) Ncarvamovlphenylglycine using said strain. Patent US6121024. 2000. September 19. Kolekar YM, Pawar SP, Gawai KR,. Lokhande PD, Shouche YS, Kodam KM. 2008. Decolorization and degradation of Disperse Blue 79 and Acid Orange 10, by Bacillus fusiformis KMK5 isolated from the textile dye contaminated soil Bioresource Technology 99. 8999–9003. Kunioka, M. (1997) Biosyntesis and chemical reaction of poly (amino acids) from microorganisms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 47: 469.475. Li H, Li U, Luo NY,. Luan TG, Hu J, Wang YZ, Wu PC,. Chen MJ,. Lu JQ. 2006. Biodegradation of benzene and its derivatives by a psychrotolerant and moderately haloalkaliphilic Planococcus sp. strain ZD22. Research in Microbiology 157: 629–636. Li J, Jin Z, Yu B. (2010). Erwinia sp. Strain HSA6 Isolation and characterization of aniline degradation slightly halophilic bacterium. Microbiological Research 165 (2010) 418—426. Maltseva, O., McGowan, C., Fulthorpe, R., Oriel, P. (1996) Degradation of 2,4dichlorophenoxyacetic acid by haloalkalophilic bacteria. Microbiology. 142:1115-1122. Mata-Gómez, J.A. (2006) Caracterización de los exopolisacáridos producidos por microorganismos halófilos pertenecientes a los géneros Halomonas, Alteromonas, Idiomarina, Palleronia y Salipiger. Tesis Doctoral. Universidad de Granada. Margesin, R., Schinner, F. (2001) Potential of halotolerant and halophilic microorganisms for biotechnology. Extremophiles. 5(2): 73-83. Martínez-Cánovas, M.J., Quesada, E., Martínez-Checa, F., del Moral, A., Béjar, V. (2004) Salipiger mucescens gen.nov., sp. nov., a moderately halophilic, exopolysaccharide-producing bacterium isolated from hypersaline soil, belonging to the alpha-Proteobacteria. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 54: 1735-1740. Revista Sistemas Ambientales, Vol. 4, No 2, 2011, p. 45-56 Martínez-Checa, F., Quesada, E., MartínezCánovas, M.J., Llamas, I., Béjar, V. (2005) Palleronia marisminoris gen. nov., sp. nov., a moderately halophilic, exopolysaccharide-producing bacterium belonging to the ―Alphproteobacteria‖, isolated from a saline soil. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 55: 2525-2530. Meseguer-Soria, I. (2004) Los microorganismos halófilos y su potencial aplicado en biotecnología. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Ciencia e Investigación VII (2). Pág. 13-17. Mota, R.R., Márquez, M.C., Arahal, D.A., Mellado, E., Ventosa, A. (1997) Polyphasic taxonomy of Nesterenkonia halobia. Int. J. Syst. Bacteriol. 47: 1231-1235. Oesterhelt, D., Patzelt, H., Kesler, B. (1998) Decomposition of halogenated hydrocarbons by halophilicbacteria. Patent DE19639894.1998. April 9 Oldeman, L.R. (1991) Global extent of soil degradation. International Soil Reference and Informatin Centre. Hinkeloord Agricultural University Wageningen. Oren, A. (1999) Bioenergetics aspects of halophilism. Microbiol. Mol. Rev. 63:334-348. Oren, A. (2002) Molecular ecology of extremely halophilic archaea and bacteria. FEMS Microbiology Ecology. 39:1-7. Paterek, J.R., Smith, P.H. (1988) Methanohalophilus maii gen. nov., sp. nov., a methylotrophic halophilic methanogen. Int. J. Syst. Bacteriol. 38: 122-123. Peyton BM, Wilson T, Yonge D. 2002. Kinetics of phenol biodegradation in high salt solutions. Water Research 36: 4811–4820 diación en suelos salinos-sódicos. Publicación científica. 4(6): 1-114. Nova- Sánchez-Porro, C., Martín, S., Mellado, E., Ventosa, A. (2003) Diversity of moderately halophilic bacteria producing extracellular hydrolytic enzymes. J. Appl. Microbiol. 94(2): 295-300. Skerman, V.B.D., McGowan, V., Sneath, P.H.A. (1980) Approved List of Bacterial Names. Int. J. Syst. Bacteriol. 30:225-240. Stosz, S.K., Weiner, R.M. and Coyne, V.E. (1995) Agarase system from Alteromonas strain 240. Patent U85418156. 1995. May 23 Sudge, S.S., Bastawde, K.B., Gokhale, D.B., Kalkote, U.R., Ravindranathan, T. (1998) Production of D-hydantoinase by halophilic Pseudomonas sp. NCIM 5109. Appl. Microbiol. Biotechnol. 45:594-599. Ventosa, A., Gutiérrez, M.C., García, M.T., Ruíz-Berraquero, F. (1989) Classification of Chromobacterium marismortui in a new genus, Chromohalobacter gen. nov., as Chromohalobacter marismortui comb. nov., nom. Rev. Int. J. Syst. Bacteriol. 39: 382-386. Ventosa, A., Sánchez-Porro, C., Martín, S. and Mellado, E. (2005) Halophilic archea and bacteria as source of extracellular hydrolytic enzymes. In N: Gunde-Cimerman, A. Oren y A, Plemenitas (eds). Adaptation to life at salt concentrations in Archaea, Bacteria and Eukarya, Heildeberg. Spring-Verlag. Vreeland, R.H., Litchfield, C.D., Martin, E.L., Elliot, E. (1980) Halomonas elongata, a new genus and species of extremely salt tolerant bacteria. Int. J. Syst. Bacteriol. 30: 485-495. Podar M, Reysenbach ALouise. 2006. New opportunities revealed by biotechnological explorations of extremophiles. Current Opinion in Biotechnology 17:250–255 Rainey, F.A., Zhilina, T.N., Boulygina, E.S., Stackebrandt, E., Tourova, T.P., Zavarin, G.A. (1995) The taxonomic study of the fermentative halophilic bacteria: description of Haloanaerobiales ord.nov., Halobacteriaceae fam. nov., Orenia gen. nov. and further taxonomic rearrangements at the genus and species level. Anaerobe. 1: 185-199. Sánchez-Leal, L. y Arguello Arias, H. (2006) Capacidad de bacterias halófilas para capturar sodio in Vitro y su posible aplicación en bioreme- Wang CY, Hsieh YRu, Ng CC, Chan H, Lin HT, Tzeng Wh, Shy YT (2009). Purification and characterization of a novel halostable cellulase from Salinivibrio sp. strain NTU-05. Enzyme and Microbial Technology 44 (2009) 373–379 Aplicaciones biotecnológicas de microorganismos halófilos Zhilina, T.N., Zavarin, G.A. (1987) Methanohalobium evestigatus, n. gen., n. sp. The extremely halophilic methanogenic Archaebacterium. Dokl. Akad. Naud SSSR. 293: 464-468. Zhilina, T.N., Zavarin, G.A. (1990) A new extremely halophilic homoacetogen bacteria Acetohalobium arabaticum gen. nov., sp. nov., Dokl. Akad. Naud SSSR. 311: 745-747. Referencias electrónicas http://cbt.fcyt.umss.edu.bo/trabajo/verarticulo.php ?cod_art=5 Ortuño, F., Torres, A., Soto, R., y Ferrufino, E. Bacterias Halófilas Productoras de Exopolisacáridos. Centro de Biotecnología. Universidad Mayor de San Simón <consulta 16 de Agosto de 2011>. http://www.lluisvives.com/servlet/SirveObras/015 93741546702713008813/012969_2.pdf <consulta 16 de Agosto de 2011>. Castillo y Barragán