PROCEDIMIENTO TECNICAS FISH

PROCEDIMIENTO DE SOLICITUD Y ENTREGA DE
TÉCNICA DE HIBRIDIZACIÓN IN SITU
FLUORESCENTE PARA EL GEN HER2 (FISH
HER2) PARA CÁNCER DE MAMA
PROTOCOLO DE TECNICA
Nº Resolución: 1238
26 Agosto de 2011
ELABORADO POR
REVISADO POR
APROBADO POR
DRA. MARIA GRACIELA OLIVARES
TM ANGIE CALFUMÁN
DRA. FANCY GAETE
TM JANNETTE AMARO
TM ANGIE CALFUMÀN
TM RAUL JARA
TM FABIOLA NUÑEZ
DR JULIO MONTT VIDAL
CARGO
MEDICO ANATOMOPATOLOGO
TECNÒLOGO MÈDICO
JEFE UNIDAD
JEFE LABORATORIO
TECNOLOGO MEDICO
TECNOLOGO MEDICO
TECNOLOGO MEDICO
ENCARGADA CALIDAD
DIRECTOR
FECHA
2011
2011
2010
NOMBRE
FIRMA
______________________________________________________________________ 102
HOSPITAL SANTIAGO ORIENTE
DR. LUIS TISNE BROUSSE
Avda. Las Torres Nº 5150 – Comuna Peñalolen – Fono 4725200 – www.hsoriente.cl
PROCEDIMIENTO DE SOLICITUD Y ENTREGA DE
TÉCNICA DE HIBRIDIZACIÓN IN SITU
FLUORESCENTE PARA EL GEN HER2 (FISH
HER2) PARA CÁNCER DE MAMA
PROTOCOLO DE TECNICA
Nº Resolución: 1238
26 Agosto de 2011
Control de Cambios
Versión
1
2
Descripción
Creación
Revisión
Fecha
ABRIL 2011
AGOSTO 2011
______________________________________________________________________ 103
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FLUORESCENTE PARA EL GEN HER2 (FISH
HER2) PARA CÁNCER DE MAMA
PROTOCOLO DE TECNICA
Nº Resolución: 1238
26 Agosto de 2011
PROCEDIMIENTO DE SOLICITUD Y ENTREGA DE TÉCNICA DE
HIBRIDIZACIÓN IN SITU FLUORESCENTE PARA EL GEN HER2 (FISH HER2)
PARA CÁNCER DE MAMA
Al momento de recibir un nuevo caso para FISH HER2, la secretaría de turno
debe:
1. Verificar que el caso presente: taco de inclusión, completo y correcto
llenado de solicitud de FISH, informe de biopsia e inmunohistoquímica.
2. Corroborar que todos los datos de la solicitud concuerden tanto con el taco
de inclusión como con los informes.
3. En caso de haber discordancia, debe dar aviso al TM encargado.
4. Dejar registro en libro de “Ingreso FISH HER2”
5. Dar aviso al TM encargado para iniciar el proceso de ingreso al laboratorio.
Luego el TM de turno debe:
1. Desde el mail del laboratorio, enviar un “Aviso de Recepción en HSO” con
este formato:
Para: mail de servicio de origen especificado en la “Solicitud de FISH
HER2”.
CC: se manda con copia a la Dra. Fancy Gaete y a la secretaria Solange
Cortés a los mails [email protected] y [email protected]
Asunto: Aviso de Recepción en HSO
Mensaje:
Estimados:
Aviso de la recepción de --- taco N°---- de la paciente -------------, Rut: ----------, con solicitud para FISH HER2.
Atte. TM. -------------------------(Al momento de abrir el e-mail, estar atento a la llegada de avisos de envío
de nuevos casos de FISH HER2)
2. Informar al patólogo de turno la recepción de un caso para FISH
______________________________________________________________________ 104
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HER2) PARA CÁNCER DE MAMA
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3. Asignar 2 números en la hoja de Solicitud de FISH, correspondientes al
mismo día de recepción. El primer n° es para IHQ y H/E y el otro n° para
FISH.
4. Observar si el taco está apto para el corte o se debe reincluir.
Si está apto para el corte se deja en el refrigerador en la bolsa de FISH.
5. El número asignado al caso se anota en el libro de “Ingreso FISH HER2” y
el caso se guarda en la carpeta “POR PROCESAR” ubicada en cajón FISH
HER2
En el caso de interconsultas del CRS se debe buscar el H/E y la IHQ HER2
presente en la Unidad y luego es el patólogo de turno quien define conducta a
seguir.
En estos casos no se envía AVISO de recepción por mail, sólo informe a
[email protected] y [email protected]
Una vez finalizada la técnica, el TM de turno debe:
1. Almacenar las láminas en cámara oscura a -20ºC
2. Ingresar los casos al sistema computacional SisGB.
3. Escribir los códigos FONASA en la sección donde están los números
asignados al caso y entregar a secretaria de turno para que las ingrese al
sistema FileMaker.
4. Una vez que la secretaria devuelve el caso al laboratorio, se guardan en la
carpeta “REALIZADOS”, ubicada en cajón FISH HER2.
Ejemplo de cómo colocar las etiquetas:
Solicitud de FISH
IHQ HER2
113555
04 x 1
08 x 1
FISH HER2
113556
11 x 1
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TECNICA DE FISH HER2 PARA CANCER DE MAMA
La tarde anterior a realizar FISH, el TM de turno debe cambiar el kit de FISH
desde -20ªC a a 4°C para que los reactivos no estén congelados al momento de
usar.
DÍA 1
1. Preparar cortes de 3 µm, en el siguiente orden:
Primera lámina para FISH HER2
Segunda lámina para IHQ HER2
Tercera lámina para H/E
2. Secar a 60 °C por mínimo 35 min y no más de 1 hora.
3. Teñir en paralelo láminas de H/E, las cuáles se deben mostrar a patólogo
de turno, quien decidirá si la muestra es apta para realizar FISH. Las IHQ
HER2 serán realizadas por el TM en turno de Inmunohistoquímica.
4. Desparafinar cortes en 2 baños de xilol por 5 min cada uno
5. Hidratar cortes en 4 baños de alcohol, 2 de 96º y 2 de 70º
6. Lavar en Wash buffer por 2 min.
7. Incubar en buffer de pretratamiento (PRETREATMENT BUFFER) por 10
min a 95-99oC, usando el baño termorregulado.
8. Dejar enfriar por 15 min sin tapa a T° ambiente.
9. Lavar 2 veces por 3 min cada vez en WASH BUFFER agitando
suavemente.
10. Eliminar exceso de buffer y secar por el contorno de la muestra en el
portaobjeto (se puede usar bomba de vacío o trozos de papel absorbente
por contacto en cada canto de la lámina). Si es necesario se debe marcar la
zona del tumor con lápiz diamante por el reverso del portaobjetos.
11. Enumerar los portaobjetos por orden en que se aplica el reactivo, ej.: 1.1;
1.2; 1.3; etc.
12. Aplicar PEPSINA RTU fría (5-8 gotas) por 10 minutos a T° ambiente.
13. Lavar 2 veces por 3 min cada vez en wash buffer agitando suavemente.
14. Deshidratar en escala ascendente de alcohol: 70º -85º - 96º por 2 min
cada uno.
15. Dejar secar al aire completamente en lugar seguro.
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Los pasos siguientes se deben realizar en oscuridad:
16. Aplicar 10 µl de PROBE MIX y cubrir con cubreobjetos según tamaño
(18x18 o 22x22), asegurándose que no queden burbujas.
17. Sellar el cubreobjetos por la periferia con COVERSLIP SEALANT.
18. Colocar en hibridizador DAKO toda la noche. Usar Programa N°2, el cuál
realiza:
a. Denaturación: 82°C por 5 minutos
b. Hibridización: 45°C por toda la noche (16 horas)
DÍA 2
1. Se continúa trabajando en oscuridad. Una vez finalizado el proceso de
denaturación-hibridación, el TM de turno debe:
2. Remover sellante con pinzas y dejar que cubreobjeto se desprenda
suavemente en Wash buffer stringent a Tº ambiente.
3. Incubar en stringent wash buffer por 10 minutos a 65ºC
4. Lavar en wash buffer 2 veces por 3 minutos.
5. Deshidratar en escala ascendente de alcoholes: 70º - 85º - 96º por 2
minutos cada uno
6. Dejar secar completamente al aire.
7. Aplicar entre 10-15 µl de FLUORESCENCE MOUNTING MEDIUM
8. Sellar sólo las puntas del cubreobjetos con COVERSLIP SEALANT.
9. Colocar etiquetas con los números, iniciales del TM y fecha
correspondiente.
FISH HER2
113556
AC 07/06/11
Guardarlas en cámara húmeda oscura en freezer -20°C hasta ser leídas por
patólogo.
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