Decontamination of Ethidium Bromide

DESCONTAMINACIÓN DE BROMURO DE ETIDIO
Consideraciones generales
# Solución stock de Bromuro de etidio contiene 10 mg/ml o bien 10 μg/ul
# Por gel de agarosa se adicionan entre 6 y 8 μl de stock = 60 a 80 μg de bromuro etidio.
# Suponiendo que el buffer de corrida tiene un volumen de 1000 ml, se realizan 2
corridas diarias y se cambia todos los lunes, la concentración de bromuro etidio al
final del día viernes sería próxima a 800 μg/1000 ml o bien 0,8 mg/1000 ml.
# Esta concentración (0,8 μg/ml) es 600 veces menor al límite de concentración
mediante la cual se hace la diferencia entre:
- Solución concentrada (más de 0,5 mg/ml de bromuro de etidio)
- Solución diluida (menos de 0,5 mg/ml)
(http://www.research.northwestern.edu/research/ORS/chem/ethid2.htm)
Tratamiento de buffer de electroforesis luego de 10 usos
Método de Quillardet y Hofnung
Soluciones a preparar
a) Preparar una solución conteniendo 2,4 g de permanganato de potasio (KMnO4)
en 30 ml de agua destilada (0,5M).
b) Soluc. de HCl: aprox. 2,5M: medir 21 ml de ácido clorhídrico concentrado y
llevar a 100 ml con agua destilada.
c) Pesar 10 g de hidróxido de sodio (HONa) comercial y llevarlo a 100 ml con
agua destilada (conc. final aprox.: 2,5M).
Procedimiento
1) Colocar el buffer usado en un bidón plástico
2) Adicionar al bidón 3 ml de la solución de permanganato de potasio por cada
litro de buffer usado e inmediatamente 3 ml de la solución 2,5M de ácido
clorhídrico. Hacer este trabajo en la campana.
3) Mezclar con cuidado, apagar la turbina de la campana y dejar en reposo hasta el
día siguiente, a temperatura ambiente, con la tapa del recipiente floja o
directamente destapado.
4) Al otro día agregar despacio 3 ml de solución 2,5M de HONa. Mezclar. El pH
debería estar comprendido entre 5 y 9 (tiras indicadoras de pH).
5) Este líquido puede ser ahora eliminado por la pileta, dejando correr agua.
Tratamiento de geles de agarosa luego de su uso
Procedimiento
1) Colocar los geles usados, con restos de bromuro de etidio, en un bidón plástico
de 4 ó 5 litros con el lomo recortado (10 x 15 cm), dejando intacta la boca del
recipiente.
2) Colocar 1 litro de agua corriente en el bidón y desechar en él hasta 20 geles de
agarosa.
3) Mantener los geles en el bidón hasta pasados 15 días luego del agregado del
último gel a los fines de fluir el bromuro de etidio hacia la fase acuosa.
4) A través de la boca del bidón derramar con cuidado el líquido al bidón de
procesamiento de buffer de electroforesis de manera que no escurran los geles.
Colocar 200 ml de agua sobre los geles, agitar suavemente para enjuagar los
geles y reunir este agua de lavado al resto de líquidos.
5) Los geles así tratados pueden desecharse como material no peligroso.
6) Los líquidos provenientes del tratamiento se procesan como se indicó en el
procedimento para buffer de electroforesis (pasos 1 a 5).
Tratamiento de derrames de soluciones concentradas de bromuro de etidio
Procedimiento
1) Usando guantes de látex absorber la solución derramada con papel absorbente,
arrojándolo al recipiente donde se tratan los geles de agarosa.
2) Repetir la operación 4 veces, ahora empleando papel humedecido con agua
corriente y secar finalmente la superficie con papel seco.
3) Arrojar todos los papeles al recipiente anterior.
4) De acuerdo a la cantidad estimada de bromuro de etidio derramado se realizará
el tratamiento mediante el método descripto para buffer de electroforesis. La
solución a tratar no debe superar la concentración de 0,5 mg BrEtidio/ml. Diluir
con agua de ser necesario. Ejemplo: el derrame de 5 ml de solución stock (10
mg/ml) significaría 50 mg que, diluidos en 1 litro de agua, daría una
concentración de 0,05 mg/ml que cae en el rango de “solución diluida”, y se
deberían tratar con 180 ml de solución de KMnO4. indicada en “Soluciones a
preparar”, sin necesidad de adicionar más agua.
Importante: el derrame de soluciones concentradas de Bromuro de etidio debe ser
obligatoriamente reportado al director del laboratorio.
References
Quillardet, P.; Hofnung, M. Ethidium Bromide and Safety- ReadersSuggest Alternative Solutions. Trends
Genet. 4:89.
http://www.research.northwestern.edu/research/ORS/chem/ethid2.htm