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Aplicaciones HPLC- UFLC - UHPLC Héctor Torres Q.F U.N. Purificación y Análisis de Fluidos Ltda. 1 -INSTRUMENTOS PARA LABORATORIO -MAQUINAS PARA INSPECCION Y ENSAYO -MAQUINAS DE RAYOS X PARA INSPECCIONAR MATERIALES SIN DESTRUIRLOS -BALANZAS -EQUIPAMENTO MEDICO DE ALTA TECNOLOGÍA -EQUIPOS PARA AERONAUTICA -EQUIPO INDUSTRIAL -DISPOSITIVOS OPTICOS Y LASSER -ANALIZADORES DE GASES AMBIENTALES -SOLUCIONES PARA INDUSTRIA FOTOVOLTAICA -ANALISIS DE ALIMENTOS -INSTRUMENTOS PROTEOMICA Y GENOMICA -SOLICIONES PARA LA INDUSTRIA FARMACEUTICA: DESARROLLO DE FARMACOS. 2 Historia En 1875 Genzo Shimadzu (1839-1894) inicia negocios de manufactura de instrumentos físicos y químicos educacionales en Kiyamachi-Nijo en Kyoto. Historia 1934 El primer espectrógrafo es terminado en Japón 1947 Por primera vez en Japón se inicia el desarrollo del microscopio electrónico 1956 El primer Cromatógrafo desarrollado en Japón Introducción 1975 Se establece Shimadzu Scientific Instrument en EU 1989 Shimadzu adquiere Kratos Group PLC Equipos de Rayos X Introducción 1997 Shimadzu Sanjo Adquiere acreditación ISO 14001 1996 Shimadzu Filipinas desarrolla balanzas electrónicas 1998 Shimadzu adquiere Nordiko Ltda Fabricantes de tarjetas electrónicas 2001 Shimadzu Biotech en conjunto con Proteomics System desarrollan sistemas procesadores integrados en gel para identificación de proteínas Sistemas MALDI Sistemas analizadores IT, TOF, MS/MS 2002 koichi Tanaka Premio Nobel Química Grupo de SHIMADZU Identificación de estructuras de macromoléculas Biológicas por métodos de ionizacion suave por desorcion por Espectrometría de Masas( MALDI-QIT-TOF MS) - Casa - Científica - Lab - Instruments - Purificación y - Análisis de - Fluidos Ltda. Aplicaciones HPLC SHIMADZU • Alimentos – – – – – – – – – Industria Azucares - Activos Farma Ac. Orgánicos - Aditivos Triglicéridos - Polimeros Ácidos grasos Amino Ácidos Vitaminas Conservantes Residuos de Pesticidas Iones Ciencia Análisis de azucares INTERCAMBIO DE LIGANTE FÁSE NORMAL INTERCAMBIO IÓNICO FASE ESTACIONARIA POLIESTIRENO SULFONADO Polimero con base amino enlazado químicamente Polimero poroso intercambiador Iónico MODO DE SEPARACION Exclusión por tamaño / Intercambio de ligante Fáse normal Intercambio Aniónico FÁSE MÓVIL Agua Aceto nitrilo / agua Buffer Borato CARACTERISTICAS Separación por tamaño molecular para masa menor a 1.000: Azucares, alcoholes y alcoholes polihidricos Separación por interacción hidrofóbica para sacáridos, azúcar, alcoholes y alcoholes polihídricos Bueno para separación multicomponente Características – Horno de columna Gran capacidad para albergar hasta 3 columnas de 300 mm. Calentamiento por circulacion de aire forzado Hasta 85°C Intercambio de ligante Intercambio de Ligante Intercambio de ligante Intercambio de Ligante Fase Normal Fase Normal Fase normal Oligosacaridos Introduction of Refractive Index Detector RID-20A Shimadzu Corporation 22/11 ３-1. Improved productivity based on excellent basic performance 3.Automation of solvent substitution in reference cell: “AutoPurge” function RID-20A Removing air bubble ON/OFF of Solenoid valve (5minutes） AutoPurge function AutoPurge Sequence Substitution solvent In REF cell 15 minutes (Tunable) Balance adjusting of Optics • Full automatically preparing for analysis by setting AutoPurge command in the start-up method of LabSolutions. Executing from front panet or LabSolutions 7/11 ３-1. Improved productivity based on excellent basic performance 1. Stable baseline by dual-temperature control of optical system 2. 4-partition detector element for all application from analytical to preparative scale 2. The single detector supports all application 1. Excellent baseline stability Influence of room temperature fluctuation (comparison with AT1260) 0.0 ℃ 26 Room temperature 25 RID-20A Temp. control OFF 24 AT 1260 -0.5 Temp. control OFF 23 22 -1.0 RID-20A Temp. control ON 60 120 0 uRIU 0 Linearity evaluation 1000 100 1 180 240 0,01 0,1 -10 RID-20A’s drift is reduced less than 0.5μRIU/h (H/W validation criterion) after 30minutes from power-on. -15 AT 1260 RI -20 P mode A mode 10 0,1 Baseline after power-ON (Comparison with AT1260) -5 -25 10000 μRIU uRIU 0.5 1 10 100 1000 10000 100000 Concentration of sucrose (mg/L) 4-partition detector element Handle wide range of refractive index change by switching between A (Analytical) and P (Preparative) mode to change regions of light receiving element ⇒Wide refractive index range:0.01~5000μRIU. RID-20A 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 min After 30 minutes from power on Wide refractive index range 6/11 Fase normal oligosacaridos Fase Normal Derivatización Sistema con Derivatización Detector de Fluorescencia RF-20A/AXS RF-20A RF-20Axs 228-45147-42 228-45148-42 Cuando se utiliza un detector de Fluorescencia? • compuestos fluorescentes tendrán dobles enlaces conjugados, como fenol • Más enlaces conjugados más • fluorescencia ... hasta un punto • Nota al margen: Clorofila Diferencia entre los modelos • RF-20A – EX y longitud de onda 200-650 nm Rango de EM – S / N de 1200 para el pico Raman de agua • RF-20Axs – EX y longitud de onda 200-750 nm Rango de EM – S / N de 2000 para el pico Raman de agua – Interior de la lámpara Hg para λ verificación de la exactitud – Temperatura de célula de flujo controlado Características – Sensibilidad S/N Pico Raman del agua 2000 2000 Shimadzu RF-10axl 1800 JASCO FP-2025 1600 1200 1400 1200 1000 900 1000 800 600 400 200 0 550 400 450 500 1000 Agilent 1200 Dionex FLD-3100/3400 Hitachi L-2485 / L-2485U Waters 2475 Waters Acquity FLR Shimadzu RF-20A Shimadzu RF-20Axs Características– S/N S / N de 21,5 para la inyección de 10.48fg antraceno Calcular hasta S / N, de 3 para un límite de detección 1.5fg mV 10.48 fg (S/N=21.5) Anthracene アントラセン 12.5 Hitachi L-2485 45fg LOD 10.0 Waters W2475 3.2fg LOD S=12023 7.5 Shimadzu RF-20Axs 1.5fg LOD 5.0 2.5 N=559.5 0.0 0.0 0.5 1.0 High-Sensitivity Analysis of Anthracene アントラセンの高感度分析 1.5 min Características - Control de Temperatura • 1 º C de fluctuación puede dar lugar a un cambio de 5% en su máxima intensidad. la temperatura de celda de flujo controlada con refrigeración With Cell Temperature Control No Cell Temperature Control : Room temperature 25 ºC : Room temperature 25 ºC : Room temperature 30 ºC : Room temperature 30 ºC Area RSD 0.3% Change of Area 0.64% 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 Area RSD 6.3% Change of Area -17.45% min 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 min Derivatización Fluorescencia Ácidos Orgánicos Exclusión Iónica Detección UV Ácidos Orgánicos Exclusión Iónica Detección UV Neutralización Post Columna Mejora la Exclusión Iónica Sistema analizador de ácidos orgánicos patentado Detección Conductividad Neutralización Post Columna Mejora la Exclusión Iónica Sistema analizador de ácidos orgánicos patentado Detección Conductividad Neutralización Post Columna Neutralización Post Columna Neutralización Post Columna FOSFOLIPIDOS Fase normal columna Silica Ácidos grasos Metilación Pre Columna Detección Fluorescencia Características - Detectores Posee una entrada opcional para fibra óptica y una tarjeta A/D en la parte posterior Indice de refraccion Fluorescencia Dispersion de luz AMINOÁCIDOS DOS METODOS: Derivatización pre columna con OPA AMINOÁCIDOS DOS METODOS: Derivatización pre columna con PITC VITAMINAS LIPOSOLUBLES Fase reversa y detección UV VITAMINAS LIPOSOLUBLES Fase reversa y detección UV VITAMINAS LIPOSOLUBLES Fase reversa y detección UV VITAMINAS LIPOSOLUBLES Fase reversa y detección UV VITAMINAS HIDROSOLUBLES Fase reversa y detección UV Excelente estabilidad de línea base en cualquier valor del rango de longitudes de onda UV de medición mas frecuente Razón de desempeño Prominence I vs. otra marca: 1/20 <Analytical conditions> Flow rate: 1.0 mL/min Mobile phase: 50 mmol/L phosphate buffer (pH 6.9) Column: Resistor tube (100 mm L x 0.065 mm I.D.) Column temp.: 40°C Wavelength: 210 nm ℃ 35 mAU 40 30 室温 30 25 Otra Marca 20 About 27.5 mAU 10 20 Prominence-i (UV) About 1.3 mAU 0 0 50 100 150 200 250 300 min VITAMINAS HIDROSOLUBLES Ac.Ascórbico y De Hidro Ascórbico NUCLEÓTIDOS Derivados de la Adenina Indicador de Frescura de Mariscos Conservantes Artificiales Edulcorantes Artificiales Sacarina y Aspartame Edulcorantes Artificiales Stevia Edulcorantes Artificiales Carbamatos Iones Inorgánicos Conductividad Performance Anions Calibration – Based on Peak Height Calibration Curve (Chloride - Sulfate) Response (m V) 1.00E+06 9.00E+05 8.00E+05 7.00E+05 6.00E+05 5.00E+05 Chloride y = 16603x + 31869 R2 = 0.9995 4.00E+05 3.00E+05 2.00E+05 Sulfate y = 7226.1x + 11446 R2 = 0.9991 1.00E+05 0.00E+00 0 10 20 30 Conc. (ppm) 40 50 60 Sistema de doble línea Aniones y cationes simultáneamente APLICACIONES FARMA Características - Automuestreador -Mecanismo de “Acceso Abierto” permite a los usuarios ubicar muestras en el rack incluso durante el analisis OFTALMICOS ANTIGRIPAL HORMONAS Repelente de insectos Bebida Energizante CAPSAICINA MUCHAS GRACIAS
