M-085 - Universidad Nacional del Nordeste

Resumen: M-085
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004
Estimulación de la eritropoyesis
por efecto del ortovanadato de sodio
Aguirre, María V. - Alvarez, Mirta A. - Juaristi, Julián A. - Lucas, Ana G.
Benítez Collante, Cristina - Todaro, Juan - Brandan, Nora C.
Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE.
Moreno 1240. C.P : 3400. Corrientes. Argentina.
Tel-fax:03783-435378. E-mail: [email protected]
Antecedentes:
El vanadio es un oligoelemento de amplio estudio experimental no solo por su participación en el crecimiento y
desarrollo de la masa muscular (1,2) sino también por sus características de potencial biotóxico ambiental (3,4). La
intoxicación crónica con vanadio presenta una variedad de síntomas y signos que afectan el sistema inmunitario y la
hematopoyesis a través de la inhibición de ciertas enzimas, especialmente las involucradas en la síntesis de los ácidos
nucleicos.
Existe información contradictoria del efecto de los compuestos de vanadio sobre el número de eritrocitos circulantes y
la concentración de hemoglobina en murinos (5,6,7), siendo aún muy escaso lo que se conoce con respecto al efecto
agudo de este elemento sobre las etapas proliferativas y madurativas de la eritropoyesis.
El objeto de este estudio ha sido investigar los efectos de una única dosis de ortovanadato de sodio (33 mg/kg, i.p.) en la
eritropoyesis murina durante un período de 0 a 8 días post tratamiento. Para ello se inyectaron lotes de ratones (n = 6)
de la cepa CF-1(hembras adultas de peso promedio 25 g), determinándose a diferentes tiempos del protocolo
experimental (1, 2, 4, 6 y 8 días) diversos parámetros hematologicos en médula ósea y sangre periférica para el
seguimiento de la evolución eritropoyética. Los estudios incluyeron: porcentajes de reticulocitos periféricos y
medulares, hematocrito, eritrocitos circulantes /mm3, porcentajes de captación de Fe59 y medulogramas. Los ensayos se
realizaron por triplicado y los resultados se compararon contra lotes control inyectados con solución fisiológica.
Materiales y Métodos
ANIMALES: Se utilizaron ratones adultos jóvenes isogénicos de la cepa Swiss CF 1(peso aproximado 26-28 g
INBIFAR Fac de Medicina UNNE ) que fueron dadores de médula ósea y sangre periférica.
ADMINISTRACION DE LA DROGA Y OBTENCION DE MUESTRAS: Ortovanadato sódico (10g, Sigma Chemical
Co USA) fue disuelto en PBS (pH 7.4 ) a una concentración de 33 mg /kg ratón y administrado en una única dosis i.p.
Cinco lotes fueron inyectados con la dosis indicada de orto vanadato sódico y otro lote (n = 6 animales) con solución
salina. A los días 1, 2, 4 ,6 y 8 los grupos tratados y el control fueron anestesiados con pentobarbital al 3%
obteniéndose sangre periférica por punción cardíaca y posteriormente sacrificados por dislocación cervical para la
obtención de células de médula ósea.
PARAMETROS HEMATOLOGICOS: A los diferentes días del protocolo experimental, se determinaron glóbulos rojos
totales, hematocrito y reticulocitos (teñidos con azul brillante de cresil al 3% Sigma Co). Los resultados se expresan
como porcentajes (promedio ± SEM).
CONTAJE DIFERENCIAL DE CÉLULAS ERITROIDEAS DE MEDULA OSEA: Se realizaron preparaciones de
extendidos teñidos con May Grunwald-Giemsa, en que los precursores eritroideos se clasificaron como:
proeritroblastos, basófilos, policromatófilos, ortocromáticos, de acuerdo con criterios standard, contando 500 a 1000
células nucleadas por duplicado. Los resultados se expresan como porcentajes promedio ± SEM.
ENSAYO FERROCINETICO: Los animales pretratados con ortovanadato de sodio y los controles fueron inyectados
i.p. con 0,5 µCi de citrato ferroso marcado con Fe59 (CONEA-Argentina). Transcurridas 24 hs se obtuvo la muestra por
punción cardíaca midiéndose la radioactividad captada en sangre periférica, mediante contador Gamma (Alfanuclear).
Se determinó la incorporación de Fe59 en cada muestra. Los resultados se expresan como porcentajes promedio ± SEM.
CALCULOS ESTADISTICOS: Todos los resultados fueron analizados utilizando el Software INSTAT y PRISM
Versión 2.0 (GraphPad Software, San Diego,C.A., USA). Se considera significativo un p< 0.05.
Discusión de Resultados
A nivel periférico el tratamiento con ortovanadato sódico provocó una significativa reducción del número de eritrocitos
circulantes en el día 1 (p<0.01) con un marcado aumento hacia el cuarto día (p<0.01), mientras que los hematocritos
mostraron aumento significativo entre el segundo y cuarto día post inyección (p<0.01). La Figura 1 ilustra lo
anteriormente descrito.
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Figura 2
Figura 1
Reticulocitos periféricos
Eritrocitos periféricos
15000
10000
7500
**
5000
**
3.0
1.5
2500
0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
0.0
9
0
1
Dias post ortovanadato
Porcenta je
Porcentaje
1
2
3
4
5
6
7
4
5
6
7
8
9
**
30
40
0
3
Reticulocitos medulares
40
**
**
2
Dias post ortovanadato
Hematocritos
50
30
**
**
4.5
Porcentaje
Nº GR x 10 3/mm 3
6.0
**
12500
8
20
10
0
9
0
1
Dias post ortovanadato
2
3
4
5
6
7
8
9
Dias post ortovanadato
La determinación de los porcentajes de reticulocitos circulantes y de médula ósea demostró el incremento de la
actividad eritropoyética post-hemolítica debida a la administración del ortovanadato.
Así el porcentaje de reticulocitos en sangre periférica mostró un patrón bifásico, con incremento en los días 2 y 8
(p<0.05), mientras que el de reticulocitos localizados en médula ósea se incrementó significativamente solo al cuarto
día post-tratamiento(p<0.01) como se ilustra en la Figura 2.
Tomando estos resultados parciales , podría suponerse que el sistema eritropoyético compensa el efecto hemolítico
inicial con una aceleración de la proliferación de los pooles de progenitrores eritroblásticos preexistentes en médula.
Estos recomponen rápidamente el número de GR circulantes y posteriormente incrementan la producción eritrocitaria
en un aporte más tardío , liberando reticulocitos neoformados.
Figura 3
Captación periférica de Fe 59
% de incorporación
50
**
**
**
25
0
0
1
2
4
6
8
Dias post ortovanadato
Para confirmar esto se han llevado a cabo estudios de captación de Fe59 y la determinación de los porcentajes de
contribución diferencial de las células precursoras eritrocitarias en médula ósea. Los datos experimentales ilustrados en
las Figuras 3 y 4 respectivamente, muestran incorporación periférica significativa del isótopo a partir del cuarto día
(p<0.01) y aumento de los porcentajes de células precursoras tardías de la línea eritroide (eritroblastos policromatófilos
y ortocromáticos) que justifican la aceleración de la proliferación y diferenciación eritroide.
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Figura 4
Medulogramas serie eritroide
Proeritroblastos
Eritrobl. basófilos
40
Eritrobl. policromatófilos
Ortocromáticos
**
**
Porcentaje
30
*
20
10
**
0
0
1
2
4
6
8
Dias post ortovanadato
Conclusiones:
Los resultados obtenidos permiten sugerir que:
En médula ósea murina, el ortovanadato sódico provoca una disminución transitoria de la eritropoyesis con
inducción de la proliferación y diferenciación de progenitores eritropoyéticos, compensando el efecto hemolítico
inicial provocado.
El efecto estimulatorio del ortovanadato sobre la eritropoyesis, resulta de la movilización y expansión de las
poblaciones eritroides más maduras, fenómeno observable en la captación de Fe59
Bibliografía:
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