Dosis bajas de Calendula officinalis en extracto acuoso disminuye

Dosis bajas de Calendula officinalis en extracto acuoso
disminuye las lesiones preneoplásicas en un modelo de
Hepatocarcinogénesis en rata
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MONICA ANDRADE NAVARRO , VICENTE ROSAS LANDA , LAURENCE MARCHAT
MARCHAU1, SAUL VILLA TREVIÑO2, LUZ MARIA BARAJAS FARIAS1 .
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Escuela Nacional de Medicina y Homeopatía Guillermo Massieu Helguera No. 239 Fracc. La
Escalera Ticoman D.F. C.P. 07320 México D.F. Tels. 5729 60 00 Ext. 55567. Cel 04455 5436
2623. Email: [email protected]
2 Centro de Investigación y de Estudios Avanzados (CINVESTAV)
Av. Instituto Politécnico Nacional No. 2508 Col San Pedro Zacatenco. C.p. 07360, México D.F.
Tel: 5747 3800 Ext. 3993
Inttroducción
El cáncer de hígado ocupa el cuarto lugar por su frecuencia en la población
masculina en México. Existen diferentes subtipos de los cuales el carcinoma
hepatocelular representa el 90%. Calendula officinalis es una planta anual de la
familia de las Compuestas, tiene un tallo de 50 a 70 cm. de alto con flores de
pétalos amarillo-naranja, que cierran en la noche. La planta ha sido usada en
la Medicina tradicional, más de 35 propiedades han sido atribuidas a está
planta, de entre ellas podemos mencionar sus efectos antitumorales (BoucardMaitre1988),
inmunoestímulante,
antiinflamatorio,
antiviral,
propiedades
genotóxicas y antígeno tóxicas (Pérez-Carreón y cols, 2002).
Previamente nosotros hemos reportado un efecto dual dependiente de la dosis,
donde a dosis altas, 40 mg/kg/dia el extracto hidroalcoholico aumenta
considerablemente las lesiones preneoplásicas y por el contrario a razón de 2.5
mg/kg/dia disminuye considerablemente estas lesiones. Es por ello que
nosotros estamos interesados en conocer el efecto del extracto acuoso, ahora
sobre las lesiones preneoplasicas y más aún, queremos conocer el efecto de C.
officinalis cuando las ratas ya presentan tumores cancerosos (Barajas, et al.,
2006).
Materiales y métodos
Animales Se utilizaron ratas Fischer-344 macho con un peso entre 180 y 200
g. Las ratas fueron proporcionadas por la Unidad de Producción y
Experimentación de animales de Laboratorio (UPEAL) del Centro de
Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional
(México, D.F.)
Extracto Acuoso de las flores de Calendula officinalis
C. officinalis fué obtenida de un campo experimental de la Universidad
Autónoma de México. De mayo ha agosto, las flores se desarrollaran, se
colectaran, se lavaran con agua y se deshidrataran en aire a una temperatura
de 60C en un cuarto oscuro. Cinco gramos de pétalos de flores deshidratadas
se agregan a 1000 ml de agua bidestilada a temperatura de ebullición y se
mantuvo en agitación durante 15 minutos se retiró de la fuente de calor y se
dejó enfriar a temperatura ambiente. El material insoluble se removió por
filtración.
Estrategia experimental
Las ratas se mantuvieron en condiciones controladas de temperatura, luz,
antes y durante los experimentos. El alimento y el agua se proporcionó a libre
demanda. Las ratas recibieron pretratamiento con
extracto acuoso (EA) de
Calendula officinalis y durante los siguientes 25 días. A cada grupo se le
administró distinta dosis las cuales fueron de 0.1, 0.5, 2.5, 5, 10, 20, 40 mg/Kg.
Siete días después se administró
200 mg/kg i.p. de DEN un carcinógeno
iniciador, la dietilnitrosamina, los días 7, 8 y 9 día después de la administración
de DEN se les administró el carcinógeno promotor, el 2 acetil aminofluoreno
(2-AAF) por v.o. y al décimo día, como estimulo proliferativo, se hace una
hepatectomia parcial (HP) del 75%. Los animales fueron sacrificados al día 25
después de la administración del DEN, extraídos sus hígados, cortados y
mantenidos a –80oC hasta el análisis de los mismos.
Detección de gamma-glutamiltranspepetidasa (GGT)
Mediante la detección de la GGT se midio el área y número de las lesiones
preneoplásicas. Para esto se realizaron cortes de hígado de 15 µm de diámetro
con un crióstato. Posteriormente se llevó a cabo una histoquímica para la
detección de la enzima GGT. Finalmente las imágenes de los focos positivos a
GGT fueron capturados con una cámara digital y se cuantificaron las lesiones
con un programa de Análisis.
Resultados
En la figura 1 se muestra los cortes representativos del los distintos grupos y se
puede ver una disminución en el número de focos en el grupo de ratas que se
administro el tratamiento de Calendula officinalis a dosis de 2.5 mg/Kg.
Control +
6% Control -
0.5mg/Kg.
2.5mg/Kg.
5mg/Kg.
10mg/Kg.
20mg/Kg.
40mg/Kg.
Figura1.-Histoquímica de hígado de rata. N=10. En la parte superior se
encuentra a la derecha el control negativo, a la izquierda el control positivo. Por
debajo de estos se encuentran los cortes representativos de cada grupo, que
recibió el EA de Calendula officinalis a distintas dosis. Es evidente la
disminución en el número de focos preneoplásicos que recibió dosis de 2.5
mg/Kg. Con respecto al control positivo.
Número de focos
GGT+/cm2
40
30
20
10
g/
Kg
.
m
gK
20
g.
m
g/
40 Kg.
m
g/
Kg
.
m
10
g/
Kg
.
5
m
g/
Kg
.
2.
5
ro
l-
m
0.
5
on
t
C
Co
nt
ro
l
+
0
Figura2.- Grafica que nos muestra en el eje de las Y el número de focos
preneoplasicos y en el eje de las X los distintos grupos de tratamiento.
Calendula officinalis . Al realizar el analisis estadistico aplicando T de Student
se obtuvo una (P=<0.05) en los grupos
% de área GGT +/cm
2
5
4
3
2
1
0.
l
5m g/
Kg
2.
.
5
m
g/
Kg
5
m
g/
10 Kg
m
g
20 /Kg
m
g/
40 Kg.
m
g/
Kg
.
on
tro
C
C
on
t
ro
l
+
0
Figura3.- Grafica del % de área positiva para GGT contra los distintos grupos
tratados con Calendula officinalis a distintas dosis. Se puede observar que al
administrar la dosis de 2.5mg/Kg existe una disminución muy importante en el
% de área positiva a GGT.
Conclusiones
El extracto acuoso de Calendula officinalis administrada a una concentración
de 0.40% durante
las etapas de iniciación y promoción del modelo de
hepatocarcinogenesis inhibió significativamente el desarrollo de lesiones
preneoplásicas y la proliferación celular.
Referencias
Boucad-Maitre Y. Cytotoxic and antitumoral activity of Calendula officinalis
extracts. Pharmazie. 1988 Mar;43(3):220-1.
Perez-Carreon JI, Cruz-Jimenez G, Licea-Vega JA, Arce
Popoca E, Fattel Fazenda S, Villa-Trevino S. Genotoxic and anti-genotoxic
properties of Calendula officinalis extracts in rat liver cell cultures treated
with diethylnitrosamine. Toxicol In Vitro. 2002; 16:253-8.
Barajas-Farias Luz María, Pérez-Carreón JI., Arce-Popoca E., Fattel-Fazenda
S., Alemán-Lazarini L., Hernández-García S., Salcido-Neyoy M., Cruz-Jiménez
FG.,
Camacho J.
and Villa-Treviño S. A Dual and Opposite Effect of
Calendula officinalis Flower Extract: Chemoprotector and Promoter in a
Rat Hepatocarcinogenesis Model. PLANTA MEDICA 72, 217-221, February,
2006