Método colorimétrico directo para determinación de creatinina en

Método colorimétrico directo para determinación de creatinina en suero y orina
La creatinina, producto de degradación de la creatina, es un compuesto sumamente difusible cuya
eliminación del organismo se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por filtración. Por este
motivo, el clearance de creatinina endógena es uno de los métodos más frecuentemente utilizados
como medida de la filtración glomerular. Sin embargo, los problemas prácticos inherentes a la
determinación del clearance han favorecido la difusión de la determinación de creatinina sérica como
índice de funcionalismo renal.
De tal forma, se ha podido observar que ambos parámetros resultan importantes tanto en el
diagnóstico como en el pronóstico de varias afecciones urinarias.
Materiales
● Kit comercial de reactivos, que incluye:
o Standard (solución de creatinina 20mg/l)
o Acido pícrico (41.1mmol/l)
o Buffer/PLE (solución 0.4% de polioxietilén lauril éter DANS 15mmol/l en buffer glicina/NaOH
pH12,4)
o Stopper (ácido acético al 20%)
El reactivo de trabajo se prepara mezclando en un frasco plástico partes iguales de ácido pícrico y
buffer/PLE
● Muestras:
o 0.4ml de orina (recolección de 2hs para cálculo de diuresis en 24hs y dilución 1:50 de una parte
de la muestra)
o 0.4ml de suero (centrifugado de la sangre heparinizada)
● Espectrofotómetro Metrolab y cubetas
● Probetas, pipetas y micropipetas
● Baño termostatizado
● Cronómetro
Procedimiento
1. El procedimiento es igual para ambas muestras
2. Llevar el reactivo de trabajo y las muestras a 25ºC (la temperatura puede oscilar entre 22 y 30ºC,
pero debe ser constante durante todo el procedimiento).
3. Colocar en dos cubetas del espectrofotómetro rotuladas (S y D)
Reactivo de trabajo
Standard
Muestra
S
2ml
0.4ml
-
D
2ml
0.4ml
4. Mezclar inmediatamente, disparando al mismo tiempo el cronómetro y volver a colocar las cubetas
en el baño.
5. A los 30 seg exactos, medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubación.
6. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 min (4 y medio minutos después de la primera
lectura)
Cálculos
Creatinina en suero→ creatinina mg/l= 20mg/l (D2-D1)/(S2-S1)
Creatinina en orina→ creatinina g/24hs= 50 V (0.02g/l) (D2-D1)/(S2-S1)
V: vol. de diuresis en l/24hs
0.02g/l: conc. del Standard
50: factor de dilución
694 ml/min: (g/24hs) / (mg/l)
Depuración de creatinina endógena→ DCE ml/min= Creatinina en orina (g/24hs) . 694 ml/min
Creatinina en suero (mg/l)
Valores de referencia
Suero: 8-14 mg/l
Orina: 0.9-1.5 g/24hs
DCE: 80-140 ml/min (promedio 125ml/min) para adultos de hasta 60 años