practica #2

PRACTICA #2
BACTERIOFAGOS
OBJETIVO DE LA PRACTICA
El alumno aprenderá a manejar los fagos en el laboratorio y conocerá su
importancia en la Microbiología.
INTRODUCCION.
Las bacterias son huéspedes de un grupo especial de virus denominados
bacteriófagos o "fagos". Los fagos constituyen modelos ideales para estudios
sobre la infección a nivel celular, la relación huésped parásito, la multiplicación
viral y, estudios de ingeniería genética. Por otro lado, también son muy útiles en la
tipificación de cepas bacterianas.
1. Fagos lisogénicos, también denominados moderados o temperados:
aquí el genoma del fago se replica sincrónicamente con el cromosoma bacteriano,
pasando a la progenie. En este estado lisógeno, los fagos integrados al
cromosoma bacteriano adquieren genes de la bacteria durante su separación.
Estos genes permiten a la bacteria lisógena expresar nuevas actividades y
producir nuevas proteínas.
El genoma del fago lisógeno puede modificar la estructura del polisacárido
bacteriano y su antigenicidad, o puede codificar la producción de toxinas
bacterianas que causan enfermedades como la difteria, la escarlatina, el
botulismo.
2. Fagos líticos: se replican dentro de la bacteria huésped y la lisan, liberando
nuevos fagos. Los fagos más estudiados hasta ahora son los de Escherichia coli,
mismos que se han designado con la letra T y diferentes números. Los fagos
virulentos al destruir a las bacterias producen placas de lisis que se tornan
evidentes en cultivos de placas de agar.
MATERIALES Y METODOS.
I. Prueba cualitativa.
1. Siembre una placa de agar-cerebro-corazón, depositando en la superficie 0.2
ml de una suspensión de Escherichia coli, que será el huésped específico del
fago.
2. Enseguida distribuya el inóculo homogéneamente con una asa bacteriológica.
3. A continuación, marque 4 puntos separados en el reverso de la misma caja y
en cada uno deje caer una gotita de suspensión del fago T7, usando una pipeta
Pasteur.
4. Incube a 37 C por 24 hs.
5. Observe las áreas circulares sin crecimiento de la bacteria, equivalentes a
zonas de bacterias lisadas por replicación del fago.
II. Prueba cuantitativa por dilución en placa.
1. Haga diluciones de una suspensión del fago en la forma siguiente: En un tubo
estéril coloque 0.5 ml del fago, más 4.5 ml de caldo cerebro corazón (c.c.c.).
2. De ahí transfiera 0.5 ml a otro tubo conteniendo 4.5 ml de solución salina
fisiológica
y continúe haciendo diluciones con s.s.f. hasta obtener una dilución
de 1:1000 000.
3. De cada dilución del fago, transfiera 0.1 ml a tubos conteniendo 0.l ml de
bacteria. Mezcle e incube a 37 C por 20 min.
la
4. Al cabo de este tiempo adicione a cada tubo 4 ml de a.c.c. blando (0.5%),
mezcle y vacíe en cajas de Petri estériles con a.c.c
5. Deje solidificar e incube a 37 C durante 24 hs. Determine las calvas y
cuéntelas.
6. Para calcular el número de partículas virales /ml, cuente el número de placas
líticas en las cajas de cultivo que presenten pocas placas y aplique la siguiente
fórmula:
UFP / ml = PV x FD
PV = número de placas virales
FD = Factor de dilución de la caja de Petri
UFP / ml = unidades formadoras de placas, por ml de suspensión original del
fago.
RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES