microscopía - Colegio Maravillas

PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA COLEGIO MARAVILLAS
© Miguel Conesa 3ªed.
PRÁCTICA 1
EL MICROSCOPIO COMPUESTO
Inventado por los hermanos Zacarías y Johannes Jansen, en Holanda en el año 1590, el
microscopio ha sido y es uno de los instrumentos más utilizados por los estudiosos de
las Ciencias Naturales ya que permite observar con claridad estructuras biológicas que
son imperceptibles para el ojo humano.
En conjunto es una serie de lentes o sistemas de lentes convergentes, de manera que se
obtiene una imagen virtual, invertida y ampliada un número determinado de veces.
PARTE MECÁNICA O SOPORTE
Pie. Soporte del instrumento. Sobre él descansan las lentes y toda la estructura del
microscopio. Normalmente presenta forma de herradura y es bastante pesada.
Columna. Pieza prismática unida al "pie" por una bisagra que recibe el nombre de
"charnela", éste permite la articulación y movilidad de la misma.
Tubo. Cilindro metálico hueco cuyo interior está ennegrecido para evitar innecesarias
reflexiones, está sujeto a la columna y se desliza hacia arriba o hacia abajo gracias a la
cremallera. Los movimientos que pueda hacer "el tubo" pueden ser rápidos o lentos,
dependiendo de que manejemos el tornillo macrométrico o el micrométrico.
Lógicamente el macrométrico se usa para encontrar la preparación y el micrométrico
para enfocar el objeto perfectamente. El macrométrico se encuentra en la parte central
del "tubo", sin embargo el micrométrico puede ser concéntrico al "macro" o bien estar
situado en un anillo junto al pie.
Revolver porta-objetivo: Está situado en la parte inferior del "tubo". Es giratorio y
presenta tres o cuatro orificios donde se enroscan otros tantos objetivos, el que estamos
utilizando en un momento concreto, tiene que disponerse siempre en la vertical del
"tubo".
Platina. Pieza de metal o plástico endurecido, colocada perpendicularmente a la
"columna". Está situada debajo del "tubo" y en su centro lleva un orificio que sirve para
dejar pasar la luz procedente del espejo o foco. Esta estructura puede ser móvil en
algunos microscopios debido a la disposición de dos nonius (lateral y posterior). La
posición de cualquier detalle de la preparación podrá tener (gracias a estos nonius) unas
coordenadas precisas que permitan volver a visualizar lo que resulte de interés.
PARTE ÓPTICA
Lentes. Se agrupan en dos: Oculares y objetivos. Los oculares son lentes o sistemas de
lentes planoconvexas, con la convexidad dirigida hacia el objeto microscópico. La más
cerca del ojo se le llama "ocular" y la más alejada "lente de campo", la cual concentra
los rayos luminosos. En general los oculares amplían la imagen del objetivo. En la parte
superior llevan un número que indican los aumentos que puede ofrecer, es decir, el
número que indica las veces que dicho ocular aumenta la imagen proporcionada por el
objetivo, (10X, 20X etc.)
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Los Objetivos están constituidos por lentes o sistemas de lentes montadas sobre
estructuras metálicas. Presentan varias lentes de las cuales una es frontal de foco corto,
es la lente más cercana a la preparación, las medianas suelen ser de foco más largo y por
último la superior que es más convergente, la distancia focal puede variar de l6mm. a
2mm. con los objetivos de inmersión.
La calidad del microscopio depende casi en su totalidad de los objetivos que posea y
dependiendo de su poder definidor, de su poder penetrante o profundidad focal y de su
poder de resolución (capacidad de dar una imagen nítida de dos puntos muy próximos).
Dentro de las clases de objetivos, podemos citar a los "secos" y a los de inmersión. La
diferencia entre ellos estriba en la disposición entre la preparación y el objetivo de una
gota de agua o de aceite de Cedro.
Aparato de iluminación. Lo constituye el condensador y el espejo o la fuente de luz. El
primero es una pieza situada debajo de la platina. Consta de un sistema de 2-4 lentes de
gran abertura. El condensador concentra la luz del foco luminoso aumentando el cono
de iluminación, este condensador puede subirse o bajarse por el "pié" del microscopio.
El diafragma de "iris" resuelve el problema del exceso de iluminación ya que
cerrándose o abriéndose deja pasar más o menos luz. Siempre es recomendable observar
la preparación con diversas cantidades de luz para encontrar la que ofrezca mejores
resultados. Si en vez de luz incorporada se utiliza un foco ajeno al mismo, se dispondrá
de un espejo cóncavo ya que concentra mejor los haces luminosos, la situación
adecuada del espejo se busca a mano hasta conseguir la orientación correcta.
El haz de rayos se refleja en el espejo, entra en el condensador, lo atraviesa e ilumina la
preparación colocada en la "platina". El objetivo recoge la imagen de la preparación
colocada en la transparencia y dando una imagen real invertida y de un tamaño mayor al
de la preparación microscópica.
El ocular recoge esta imagen y origina una imagen virtual e invertida y de mayor
tamaño, esta última imagen es la que capta nuestra retina.
El cálculo de aumentos a que se observa una preparación se puede hacer de la siguiente
forma:
aumento del microscopio = aumento del objetivo x aumento del ocular
Eu un curso práctico de Ciencias Naturales a este nivel es suficiente con alcanzar los
1000X. La unidad de medida más utilizada es la micra que es la milésima parte de 1mm.
Para un correcto uso del microscopio se deberán tener en cuenta las siguientes
consideraciones:
1. Observar la disposición de las piezas' del microscopio por el exterior para dejar1as en
la misma disposición en la que se encontraban originalmente.
2. Levantar el microscopio por la columna.
3. No mojar con agua las cremalleras y el nonius.
4. Limpiar las lentes con xilol después de usar el instrumento
5. Limpiar la p1atina.
6. No mover el microscopio bruscamente después de una observación prolongada
7. Colocar la funda e introducirlo en el estuche.
8. Comprobar que no faltan ninguno de sus accesorios.
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Para observar las preparaciones al microscopio se tiene que tener en cuenta las
siguientes pautas:
1. Subir el condensador al máximo.
2. Utilizar en primer lugar el objetivo de menor aumento
3. Acercar el objetivo a la p1atina o al revés (según los casos), primero con el
macrométrico y después con el micrométrico.
4. Observar por el ocular, (el ojo que no se utiliza para la observación deberá
permanecer abierto si el microscopio es monocular).
5. Mover la p1atina con el nonius de una forma ordenada barriendo la preparación
horizontalmente de izquierda a derecha. Una vez acabada la fila se sube la preparación y
se barre de derecha a izquierda. Cuando se encuentren campos de interés se apuntarán
sus respectivas coordenadas.
6. Una vez elegido el campo a investigar se situará el mismo en el centro y se enfocará
perfectamente con el micrométrico y diafragmando continuamente hasta conseguir una
imagen óptima.
7. Hacer siempre que sea posible dibujos de lo observado manteniendo siempre las
proporciones relativas.
8. Si las observaciones' son prolongadas resulta muy conveniente ir alternando ambos
ojos. Como las preparaciones microscópicas se observan por transparencia, se tienen
que colocar sobre cristales transparentes (portaobjetos) y además se tienen que cubrir
con un (cubreobjetos, lámina de vidrio de menor espesor que la anterior). Para evitar la
aparición de burbujas se deja caer el "cubre" sobre el "porta" oblicua y suavemente.
Resulta de utilidad rotular una de las esquinas del "porta" con las condiciones de
preparación, (fecha, colorantes, tejidos etc.). Si la preparación es permanente (Bálsamo
de Canadá), se guardará siempre en cajas que permitan la separación entre las
preparaciones.
Normas generales para la observación al microscopio.
1º Colocar el microscopio frente al foco luminoso, colocar el condensador al máximo,
pegándolo por debajo a la platina. Seguidamente poner en el revolver el objetivo de
menor aumento. Acercar el objetivo a la platina o la platina al objetivo según los
modelos, mediante el tornillo macrométrico lentamente. Posteriormente mirar por el
ocular y mover el espejo en todas las direcciones hasta encontrar la idónea.
2° Colocar sobre la platina, la preparación que queremos observar, sujetándola con las
pinzas del nonius.
3° Enfoque de la preparación.
Se comienza el estudio de la preparación con el objetivo de menor aumento. Sin mirar
por el ocular colocar el tubo óptico justo encima de la preparación sin llegar a tocar el
cubreobjetos.
Mirando por el ocular levantar cuidadosamente el tubo hasta enfocar la preparación. Es
conveniente hacerlo primero con el tornillo macrométrico y posteriormente usando el
micrométrico. Seguidamente se estudian varios campos microscópicos hasta encontrar
lo que se está buscando.
Resulta interesante diafragmar constantemente hasta conseguir la nitidez adecuada para
nuestra observación.
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Una vez localizada una zona interesante se sitúa en el centro del campo microscópico
para poder usar otros objetivos de mayor resolución o incluso objetivos con aceite de
inmersión.
Una vez analizada la preparación se procederá a dibujar el campo seleccionado,
guardando siempre la relación de tamaño entre las distintas partes o estructuras. Los
dibujos deberán ser grandes y esquemáticos. Para interpretar los resultados es
conveniente utilizar libros, fotografías o esquemas de textos.
Cuando se usan microscopios monoculares es necesario cambiar de ojo durante las
observaciones. Como norma general es útil dejar los dos ojos abiertos y colocar una
mano cerrada sobre el ojo que no mira por el ocular, de esta forma el cansancio visual
aparecerá más tarde.
Cuando se ha terminado el análisis es conveniente limpiar la platina con agua y secarla
profundamente. Los oculares y los objetivos usados se limpian con alcohol isopropílico.
Cuando la limpieza ha terminado se guardará en su caja una vez que se proteja con una
funda de plástico.
En los microscopios trioculares se usa uno de los tubos oculares para insertar una
cámara digital. Si esta cámara está acoplada a un PC se pueden obtener imágenes que
posteriormente se pueden usar en trabajos científicos. Es conveniente cerrar el
diafragma para conseguir la máxima profundidad de campo. Posteriormente las
imágenes se procesarán con cualquier software de imágenes para obtener la mejor
calidad posible.
Célula en metafase
fotografiada en el Lab. del
Colegio Maravillas
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