extracción de adn de células de la mucosa bucal

EXTRACCIÓN DE ADN DE CÉLULAS DE LA MUCOSA BUCAL PRESENTES
EN LA SALIVA
OBJETIVO
Extraer el ADN de las células de la mucosa bucal y observar su estructura fibrilar y el
alto grado de empaquetamiento que éste tiene dentro del núcleo celular.
FUNDAMENTO
El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido
a proteínas para formar la cromatina. Para poder extraerlo es necesario romper las
células y separar el núcleo para después romper éste y liberar el ADN. Una vez liberado
se debe separar de las proteínas y precipitarlo para su extracción.
MATERIAL
- Alcohol de 96º.
- Un tubo de ensayo.
- Varilla de vidrio.
- Vaso de precipitados de 50 ml
- Solución de detergente al 25%
- Solución de NaCl al 6%
PROCEDIMIENTO
1. Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico de 96º.
2. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante al
menos medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células de
descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva
para eliminar la acción de los enzimas contenidos en ella)
3. En el mismo vaso añadir 20 ml de agua y 1 gramo de NaCl junto a un par de
gotas de detergente de lavavajillas removiendo suavemente sin que se forme
espuma.
4. Expulsar el agua de enjuague en el vaso de precipitados sobre la solución
anterior y remover con la cucharilla suavemente durante varios minutos sin que
se forme espuma.
5. Añadir la solución suavemente al tubo de ensaye que contiene el alcohol
dejándola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, más denso que el
alcohol y algo turbio se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 ó
3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formará un sobrenadante por
encima de la fase acuosa en la que se encuentra el ADN en disolución
provocando que éste precipite.
6. Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-agua
formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un frumo de
aspecto algodonoso.