Universidad de Puerto RicoRecinto Universitario de Mayagüez Colegio de Artes y Ciencias Departamento de Biología Programa de Biología PRONTUARIO OFICIAL BIOL 5045- MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE RASTREO (MER) Scanning Electron Microscopy (SEM) www.uprm.edu/biology/navas Agosto 2004 Profesores: Dra.Vivian. Navas, C-124, (787)832-4040X-3219, F-316 X-3721 [email protected] Dr. Carlos A. Muñoz, C-107 X3277, F-316 X-3721 [email protected] Horas de Oficina: Dra.Vivian. Navas: LWV: 7:30-8:30AM, 9:30-10:30AM C-124 Dr. Carlos Muñoz: Profesores de laboratorio: Vivian Navas, Verónica Meza [email protected] X2510 Q385 Mileidys Broche [email protected] Conferencia : Sec. 161- L y M 4:30-5:30PM C-140 Laboratorios F-316: Lunes (sec101L) Miércoles (sec102L)10:30-1:30, y jueves (sec 077L) 7:30- 10:30AM Horas crédito: Horas contacto: 3 2 horas de conferencia y 3 horas de laboratorio semanales Requisitos previos: Requisitos concurrentes: Ser estudiante graduado o subgraduado avanzado Descripción del curso (español): Aspectos teóricos y prácticos del microscopio electrónico de rastreo (MER), con énfasis en la preparación de muestras, el análisis de imágenes y la detección de los diversos tipos de señales emitidas por el especímen. Se discutirán en detalle la emisión de electrones secundarios y de electrones retrodifundidos. Discusión de la teoría, práctica y aplicaciones del microscopio confocal. Descripción del curso (inglés): Theoretical and practical aspects of the scanning electron microscope (SEM) with emphasis on sample preparation for SEM, detection of the different types of signals emitted by the specimen, and image analysis. Objetivos: Este curso está diseñado para estudiantes graduados y subgraduados de Biología y otros departamentos, interesados en conocer sobre el uso del microscopio electrónico de rastreo y confocal como herramientas de investigación en la Biología y en otras áreas. Objetivos Específicos del Curso: Al finalizar el curso se espera que el estudiante pueda: -aplicar la teoría del microscopio electrónico de rastreo (MER) -preparar diferentes muestras para ser observadas en el MER -operar el MER -aplicar la microscopía electrónica en las diferentes áreas -evaluar la calidad de las micrografías electrónicas -digitalizar y procesar imágenes mediante ADOBE y PAGEMAKER -evaluar los cambios en los resultados obtenidos al variar los parámetros operacionales del MER -aplicar la teoría y la mecánica básica del microscopio con focal Bosquejo del contenido de la conferencia: Temas I. Organización del Curso y Laboratorio Introducción Horas Contacto 1 Dr. Carlos Muñoz II. Historia del Microscopio Electrónico de Rastreo MER 4 III. Tipos Especializados de Microscopía 2 IV. Preparación de muestras biológicas y no-biológicas Fijación Deshidratación Secado de la muestra Secado de Punto Crítico (“A Critical Point Drying”) Montaje Cubierta para la conductividad de la muestra Técnicas Especiales 6 Dra. Vivian Navas V. Operación del MER Fuente de Electrones-Emisión Ópticas del MER (lentes) Sistemas de Vacío VI. Señales del MER Interacciones del haz de electrones con la muestra 6 5 Modos de observar imágenes VII. Técnica de MER Ambiental-MERA “Low Vacuum Environmental SEM” 1 VIII. Microscopía Electrónica de Transmisión (MET) 1 Dr. Carlos Muñoz IX. Fotomicroscopía para el MER Procesamiento de imágenes digitales mediante ADOBE y PAGEMAKER 1 X . Microscopía Confocal 1 XI. Examenes de Conferencia 2 Total de horas 30 (2 créditos) Estrategias instruccionales: conferencia investigación discusión cómputos laboratorio otros, especifique: portafolio Recursos Necesarios: Para el laboratorio, las parejas de trabajo necesitan un Zip Disk, papel fotográfico y tinta para la impresora. En el laboratorio se les dará más información. ________________________________________________________________ Estrategias de evaluación y su peso relativo: Evaluación del Curso (Conferencia y Laboratorio) Conferencia- --------------------------------------- 60% de la nota final 2 exámenes parciales 60% 1 examen final 40% Laboratorio----------------------------------------- 40% de la nota final Examen 35% 100% Pruebas cortas 35% Portafolio 20% Participación 10% pruebas escritas portafolio otros, especifique: participación Sistema de calificación: cuantificable (letras ABCDF) no cuantificable Bibliografía: Fegler, L., W. Heckman Jr., and L. Klomparens. Scanning and Transmission Electron Microscopy: An Introduction. 1993 W.H. Freeman and Company Después de identificarse con el profesor y la institución, los estudiantes con impedimento recibirán acomodo razonable en sus cursos y evaluaciones. Para más información comuníquese con Servicios a Estudiantes con Impedimentos en la Oficina del Decano de Estudiantes (Q-019), 787-265-3862 ó 787-832-4040 x 3250 ó 3258. Incluye anejos: Si No Ejercicios de laboratorio LABORATORIO Ejercicios de laboratorio 1 Introducción, recorrido por el laboratorio y demostración del Microscopio Electrónico de Rastreo (MER) 2y3 Preparación de muestras biológicas y no-biológicas, operación del equipo relacionado al MER (Critical Point Dryer@), ASputter Coater@). Montaje y secado de las muestras. 4y5 Operación del MER - Demostración y Práctica Prender, apagar y cambiar las muestras Calentar el filamento y alinear el haz de electrones Enfocar, magnificar y corregir astigmatismo Toma de fotografías ABackscattered electron image@ ( BSE) Parámetros que afectan la imagen del SEM (voltaje de aceleración (“KV”), “Spot size”, distancia de trabajo (“WD”), aperturas, “BSE/Secondary image@) 6y7 8y9 Procesamiento de imágenes digitales mediante ADOBE y PAGEMAKER 10 MER Ambiental (MERA) – (“Low Vaccuum Environmental SEM”) 11 Microscopía Confocal 12 y 13 Análisis de elementos mediante “WDS” y “EDS” NOTA: Se incorporará en los ejercicios discusión sobre: 1. Efectos sobre los siguientes parámetros: -el grosor de la cubierta, la corriente, la orientación de la muestra (“tilt”) y alineamiento incorrecto del haz 2. Muestras cargadas, astigmatismo y artefactos 3. Estereo microscopía 4. Preparación de muestras para el Microscopio Electrónico de Transmisión (MET)