MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Simbolos:
ε coeficiente de extinción (cm2/µmol)
A absorbancia
∆A cambo de absorbancia
V volumen de ensayo (ml) [volumen total]
v volumen de muestra empleada en el ensayo (ml)
t tiempo
∆t intervalo de tiempo entre medidas (min)
C concentración (µmol/ml)
MW peso molecular de un µmo (µg)
METABOLITOS
De la Ley de Lambert-Beer: A =ε d C (µmol/ml)
Para una reacción química el sustrato se consume y
∆C= C1 – C2 = ∆E (E1 – E2)/ ε d (µmol/ml)
Si hay una conversión completa (se acaba el sustrato): C2= 0
y
∆E
C=
(µmol/ml)
εd
Para determinar la concentración de la muestra, la proporcion V
ensayo/Vmuestra (V/v) debe considerarse:
∆E . V
C=
(µmol/ml)
εd .v
∆E . V . MW
C=
(µg/ml)
εd .v
ACTIVIDADES ENZIMATICAS
En general se utiliza medir la velocidad de conversion de sustrato o acumulación
de producto, esto es, el cambio de concentración por unidad de tiempo (min)
La actividad enzimatica/ml es :
∆E/ε d
Volumen actividad= ∆C/∆t =
(µmol/ml x min) o
∆t
∆E
1000
Volumen actividad=
x
εd
(U/L) en la mezcla de ensayo
∆t
∆E
1000 . V
Volumen actividad=
(U/L)
x
εd.v
∆t
Y la actividad especifica
∆E
V
Actividad especifica =
x
ε d . v .Cproteina
(U/mg)
∆t