Resumen: E-035 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 Titulación potenciométrica de ácido fólico en comprimidos De Asmundis, Cecilia - Sarno, María del C. - Delfino, Mario R. Laboratorio de Química Analítica Instrumental. Facultad de Ciencias Exactas y Nat. y Agrim. UNNE. Av. Libertad 5640 (3400) Corrientes- Argentina TE:03783- 457996 int111/Fax: 03783- 473930/E-mail : [email protected] Antecedentes El ácido fólico ó pteroil- glutámico (Figura 1) es una vitamina del grupo B, hidrosoluble, cuya ingesta ayuda a prevenir malformaciones fetales relacionadas con el cerebro y la médula espinal (defectos del tubo neural, principalmente espina bífida y anencefalia) sólo si ésta tiene lugar antes de la concepción y durante la primera etapa del embarazo. Figura 1: Estructura Química del Ácido Fólico El ácido fólico procedente de los suplementos vitamínicos y alimentos enriquecidos es más fácil de absorber por el organismo que el folato natural de los alimentos. Según el Institute Of Medicine (IOM), el organismo humano absorbe aproximadamente el 50% del folato de los alimentos, mientras que puede absorber el 85% del ácido fólico presente en los alimentos enriquecidos y el 100% del ácido fólico de los suplementos vitamínicos. La cocción y el almacenamiento pueden destruir parte del folato de los alimentos. El IOM y los Centros de prevención y control de enfermedades (CDC: Centers for Disease Control and Prevention) recomiendan que las mujeres que puedan quedar embarazadas consuman 4 a 5 mg al día de la forma sintética del ácido fólico, incrementándose esta dosis en una fase más avanzada del embarazo. El ácido fólico es importante para la producción de glóbulos rojos normales, y las personas con deficiencias de éste a veces desarrollan un tipo de anemia denominada megaloblástica, caracterizada por un número reducido de glóbulos rojos. El informe de los expertos de la FAO/ OMS aconseja una ingesta diaria superior a los 350 µg para mujeres embarazadas, dosis que no han producido ningún efecto tóxico, indicando además que dosis superiores a 1 mg han provocado un estado epiléptico en pacientes con anemia megaloblástica. Asimismo, estudios efectuados en la Universidad de California constataron que el consumo de ácido fólico puede disminuir el riesgo de que una persona desarrolle el mal de Alzheimer. La Planta de Medicamentos de Corrientes (PLAMECOR) elabora comprimidos de 5 mg de ácido fólico, los que son distribuidos para su uso en pacientes que acuden a hospitales y centros de salud de la provincia. El método de referencia propuesto por la Food and Drugs Administration (FDA) para cuantificar el contenido de este principio activo en tabletas es HPLC con detección UV a 254 nm. En el presente trabajo se propone su determinación por un método de bajo costo, sencillo y de fácil automatización como lo es la titulación con amoníaco con punto final potenciométrico. El uso de la primera derivada mejora su detección. Materiales y Métodos Materia prima Principio Activo: Ácido fólico Lote FB/006/03-04. Origen: Dinamarca. Pureza: 98% Comprimidos: de 5mg de ácido fólico. Lote 020. Elaborados por PLAMECOR Reactivos Amoníaco concentrado, p-a. Solución de amoníaco 0,0100 M Solución Buffer pH 7,00 ± 0,02. Solución Buffer pH 4,00 ± 0,02. Resumen: E-035 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 Equipos Celda de titulación de vidrio encamisada p/ termostatización. Volumen útil: 50 mL. PHmetro c/ control automático de temperatura. Agitador magnético Bureta 25 mL c/ robinete de teflón Balanza analítica (± 0,1 mg) Procedimiento a) Principio Activo: Se pesa una masa de patrón de ácido fólico en el rango de 20 a 100 mg, se dispersa en 50 mL de agua destilada y se transfiere a la celda electrolítica. Se sumerge la barra del agitador magnético y el electrodo de vidrio combinado. Se conectan el potenciómetro y el agitador. Desde la bureta se van adicionando pequeños volúmenes de solución 0,0100 M de amoníaco. Para cada agregado se registra el cambio del potencial de la celda electroquímica. Con los datos obtenidos se construyen las gráficas de pH vs. Volumen de titulante y la correspondiente a la primera derivada de la curva de titulación. b) Comprimidos: Se disuelven seis (6) comprimidos de 5 mg de ácido fólico en 50 mL de agua destilada y se repite el procedimiento descrito en a). Discusión de Resultados pH El ácido fólico no es enteramente soluble en agua, aunque la acidifica hasta alcanzar pH cercanos a 3 . Sin embargo, en soluciones alcalinas muestra una disolución progresiva a partir de pH 5,5 aproximadamente, dependiendo de su concentración original. La titulación del ácido fólico con amoníaco conduce a una curva, mostrada en la figura 2, en el transcurso de la cual puede localizarse un punto crítico de disolución por un lado y luego una inflexión poco acentuada. 10 8 6 4 2 0 0 5 10 15 20 25 30 V (mL) Figura 2: Titulación de 25 mg de estándar de ácido fólico con NH3 0,01 M La leve inflexión puede ser bien manifiesta mediante el cálculo de la primera derivada, con la consecuente transformación de estos puntos en máximos, mejorando así su detección (Figura 3) 1 Deriv(pH/V) 0,8 0,6 0,4 Vprom 0,2 0 -0,2 0 10 20 30 V (mL) Figura 3: Primera Derivada de la titulación de 25 mg de estándar de ácido fólico con NH3 0,0100 M Resumen: E-035 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 Los resultados de la titulación potenciométrica de distintas masas de estándar de ácido fólico con amoníaco 0,0100 M se dan en la tabla 1. M ác. Fólico estándar (mg) Mmol amoníaco Consumido 0,0 0,0 26,0 0,081 50,0 0,153 60,0 0,198 75,0 0,261 100,0 0,342 7,10 x 10-3 A= Ord. al origen 3,46 x 10-3 B = Pendiente 0,998 R = Coef. Correl. lineal Tabla 1: Regresión lineal de la Titulación de ácido fólico con amoníaco 0,0100 M Si bien se trata experimentalmente de una simple titulación, los resultados inducen a una estequiometría distinta de la asumida al considerarla únicamente como equilibrio ácido-base. Es por ello que se recurre a una curva de calibrado. La regresión de los valores obtenidos confirma la relación lineal entre el consumo de amoníaco y la masa de ácido fólico. Nº determinación Mmol amoníaco M ácido fólico (mg) La aplicación del método, haciendo uso 1 0,092 28,60 de la curva de calibrado, aplicado a los 2 0,096 29,75 comprimidos de 5 mg de ácido fólico 3 0,098 30,33 elaborados por PLAMECOR condujo a 4 0,092 28,60 los resultados que se dan en la tabla 2. 5 0,099 30,62 Se efectuaron seis repeticiones del 6 0,096 29,75 análisis de un pool de 6 pastillas (30mg Xmedio = 29,608 mg ácido fólico ácido fólico), con la finalidad de estimar S = 0,8506 mg su precisión. DRS % = 2,87% Tabla 2: Determinación de ácido fólico en pool de 6 pastillas de 5 mg por titulación con amoníaco 0,01 M Conclusiones Ensayos realizados con soluciones de hidróxido de sodio, si bien disuelven al ácido fólico en medio acuoso, no condujeron a puntos de inflexión en las titulaciones, lo que demuestra la efectividad del amoníaco para llegar a los resultados expuestos. Los análisis realizados no permitieron demostrar la existencia de una reacción que ayude a interpretar los resultados de los puntos finales de la titulación. Cabe agregar que se ha operado en todos los casos a temperatura ambiente. Los resultados alcanzados permiten la aplicación de esta metodología analítica a preparados farmacéuticos que contengan al ácido fólico como monodroga. Bibliografía Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Folic Acid Now Fact Sheet. www.cdc.gov/doc. Berry, R.J., et al. Prevention of Neural Tube Defects with Folic Acid in China. New England Journal of Medicine, vol. 341, Nº 20, 11/11/99, pag. 1485-1490. Mercereau, P., et al. Spina Bifida and Anencephaly Before and After Folic Acid Mandate – United States, 19951996 and 1999-2000. Morbidity and Mortality Weekly Report, vol. 53, Nº 17, 7/05/04, pag. 362-365. Carter, H.K., et al. Use of Vitamins Containing Folic Acid Among Women of Childbearing Age – United States, 2004. 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