La pared celular

Práctica 3: Identificación
de Componentes de la
Pared Celular Vegetal
Práctica 3
9Contenidos teóricos
ƒ La pared celular
ƒ Modificaciones
9Desarrollo práctico
La Pared Celular
Citosol
Pared celular
Lámina media
Pared celular
Citosol
Membrana plasmática
Micrografía electrónica de transmisión de paredes celulares. La pared primaria
es construida cuando la célula es joven. Las paredes secundarias, más gruesas,
se incorporan cuando las células han dejado de crecer. (x 3000).
Interior
célula 2
Pared celular
primaria
Pared Celular:
Capas
Capas de
pared celular
secundaria
Membrana
celular
Lamela media
Interior
célula 1
Micrografía electrónica de
transmisión de paredes celulares. Se
aprecian las diferentes capas que
forman la pared en una célula adulta.
La pared secundaria, al ser la última
en formarse, aparece pegada a la
membrana plasmática. (x 3000).
Pared celular primaria
Macrofibrillas de celulosa al m.e. (disposición desordenada y entrecruzada)
La matriz de celulosa
Hemicelulosas
Glicoproteínas
Microfibrillas
de celulosa
Moléculas
de celulosa
Pectinas
ácidas
Pectinas
neutras
La Pared Celular:
Modificaciones
•
•
•
•
•
•
Lignificación.
Cutinización.
Suberificación.
Gelificación.
Pigmentación.
Mineralización.
La Pared Celular:
Modificaciones
• Lignificación. Impregnación de la
pared celular con lignina. Se sitúa
entre las capas de celulosa por
intususcepción.
– Responsable de la gran dureza de
algunas paredes.
– Aparece en células conductoras,
mecánicas y de sostén.
– Maderas blandas y maderas duras.
La Pared Celular:
Modificaciones
• Suberificación: superposición (por
aposición) de láminas de suberina
(polímero de ácidos grasos
saturados e insaturados).
– Aparece fundamentalmente en
tejidos derivados del felógeno.
– Confiere gran impermeabilidad y
defensa contra agentes químicos,
microorganismos, etc.
La Pared Celular:
Modificaciones
• Cutinización: acumulación de
cutina por aposición y por
intususcepción.
– Químicamente muy similar a la
suberina.
– Aparece en células en contacto con el
medio externo.
– Forma la cutícula que recubre las
hojas y algunos tallos.
La Pared Celular:
Modificaciones
• Gelificación: solubilización de la pectina
y acumulación de gomas y mucílagos.
– Se da en frutos carnosos maduros.
• Pigmentación: proceso de coloración de
las paredes.
– Debido a sustancias tánicas.
• Mineralización: impregnación con sales
inorgánicas como sílice, carbonato
cálcico, oxalato cálcico, etc.
Identificación de:
9Lignina,
9Suberina y
9Cutina
Detección de la Lignina
9 Hacer cortes finos de tallo de geranio o de
hiedra con el micrótomo de congelación.
9 Colocar un corte sobre un portaobjetos.
9 Secar ligeramente con papel de filtro.
9 Añadir una gota de floroglucina alcohólica al 1% y
dejar secar al aire.
9 Añadir una gota de ClH concentrado.
9 Colocar un cubreobjetos y observar al
microscopio.
9 Los tejidos lignificados adquieren una coloración
rojiza.
Detección de la Suberina
9 Hacer cortes finos de tallo de geranio con el micrótomo
de congelación.
9 Verter los cortes en un cestillo metálico.
9 Sumergir los cortes en alcohol de 70º durante 3 minutos.
9 Sumergir los cortes en Sudan III durante CUT-20
minutos.
9 Sacarlos y lavarlos varias veces con agua destilada.
9 Depositar los cortes ya tratados en una placa Petri con
agua.
9 Colocar en un portaobjetos, poner un cubre y observar.
9 La suberina (en súber) se tiñe de color naranja.
Detección de la Cutina
9 Hacer cortes finos de tallo de hiedra con el
micrótomo de congelación.
9 Verter los cortes en un cestillo metálico.
9 Sumergir los cortes en Sudan III durante CUT20 minutos.
9 Sacarlos y lavarlos varias veces con agua
destilada.
9 Depositar los cortes ya tratados en una placa
Petri con agua.
9 Colocar en un portaobjetos, poner un cubre y
observar.
9 La cutina (en cutícula) se tiñe de color naranja.
Unidad de control
Cuchilla
Micrótomo de
congelación
Platina de
congelación
Indicación del grosor (en
micras) del corte
LIG SUB CUT
Cortes de tallo de geranio
obtenidos con el micrótomo de
congelación
LIG SUB
Colocar uno de los cortes sobre
un portaobjetos con ayuda de un
pincel
LIG SUB
Con ayuda de una tira de papel
de filtro secar el corte
ligeramente
LIG SUB CUT
Añadir un gota de floroglucina
alcohólica al 1% sobre el corte y
dejar que se evapore.
Añadir un gota de HCl
concentrado sobre el corte.
Tapar con un cubreobjetos y
observar al microscopio.
LIG SUB CUT
X 400.
MÉDULA
CAMBIUM
VASCULAR
XILEMA
Paredes secundarias
lignificadas teñidas con
floroglucina
FLOEMA
CORTEZA
CAMBIUM
VASCULAR
CORTEZA
FLOEMA
Paredes secundarias
lignificadas teñidas con
floroglucina
XILEMA
MÉDULA
X 400.
Verter los cortes sobre una
cestilla metálica.
Cestillos metálicos
SUB CUT
Colocar el cestillo metálico con los
cortes en etanol de 70º durante
3 minutos.
Etanol de 70º
Colocar el cestillo metálico con los
cortes en Sudán III durante
CUT-20 minutos.
Sudán III
SUB CUT
Hacer 2 o 3 lavados con agua
destilada hasta que esta salga
incolora.
Agua destilada
SUB CUT
Verter los cortes ya tratados con
Sudán III en una cápsula de Petri
con agua.
Cestillo invertido
Agua destilada
SUB CUT
Con ayuda de un pincel colocar
uno de los cortes tratados encima
de un portaobjetos.
Cortes tratados con
Sudán III
SUB CUT
CORTEZA
SÚBER
TRICOMAS
X 100.
CORTEZA
SÚBER
Paredes celulares
ricas en suberina
X 400.
Cortes de tallo de hiedra
obtenidos con el micrótomo de
congelación
LIG CUT
Verter los cortes de tallo de
hiedra sobre un cestillo metálico.
X 100.
COLÉNQUIMA
FLOEMA.
EPIDERMIS CON
CUTÍCULA.
XILEMA.
MÉDULA.
CORTEZA.
CORTEZA.
COLÉNQUIMA
EPIDERMIS
CUTÍCULA (Capa rica en Cutina).
X 400.
Disposición de las microfibrillas
5
2
4
4
5
2
1
1
3
3
APOSICIÓN
INTUSUSCEPCIÓN
LIG CUT