Técnicas para la evaluación de la respuesta inmune

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOANÁLISIS
CATEDRA DE INMUNOLOGÍA
Introducción al Inmunodiagnóstico.
César Pérez-Maldonado,PhD.
2009.
INMUNIDAD
Mecanismos de Defensa
(Específicos / Inespecíficos)
CELULARES
Linfocitos T
HUMORALES
Síntesis de Anticuerpos. Linfocitos B.
Destrucción / Inactivación de agentes extraños
(no-propio)
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INFECCIÓN
Respuesta
CUANTIFICACION
DETECCION
Antígenos / Anticuerpos
(liquidos biológicos)
Inmunodiagnóstico
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RESPUESTA INMUNE A LA INFECCIÓN
Los linfocitos B sintetizan anticuerpos clase IgG,
IgG IgM,
IgM e IgA
en respuesta a la mayoría de las infecciones.
IgE en reacciones alérgicas.
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DEFINICIÓN
 Técnicas basadas en la reacción antígeno-anticuerpo.
 De utilidad en la detección de antígenos o anticuerpos en diferentes
muestras biológicas (suero, saliva, líquidos biológicos, tejidos, etc.)
 Permite evidenciar infecciones, respuestas inmunes y componentes
biológicos.
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ASPECTOS PRÁCTICOS
 La sensibilidad su capacidad para detectar los analitos en los
casos estudiados.
 La especificidad permite asegurar que el resultado positivo de una
prueba indica con precisión la presencia del analito en cuestión.
Anticuerpos Monoclonales - Proteínas Recombinantes
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APLICACIÓN DEL INMUNODIAGNÓSTICO.
• Estudios del Sistema Inmune:
- Salud.
- Enfermedad.
• Aspectos a evaluar:
- Evaluación del Sistema Inmune
- Detección de Enfermedades Infecciosas.
- Análisis General en el Laboratorio.
Hormonas, Drogas, Medicamentos, etc.
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* Desarrollo de Métodos Diagnósticos.
Aplicación en otras áreas ó especialidades.
•
•
•
•
Bioanálisis
Medicina
Veterinaria
Industria Farmacéutica.
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MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
Métodos directos
Ponen de manifiesto la presencia del antígeno
- Visualización directa
- Detección de ciertos componentes
Métodos indirectos
Permiten detectar la presencia de ciertos productos derivados
de la infección (Anticuerpos).
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MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
 Enfermedades infecciosas:
 Diagnóstico directo: detección de antígenos.


a) En enfermedades infecciosas: VHB.
b) Para identificar microorganismos en el laboratorio.
 Diagnóstico indirecto: detección de anticuerpos.
a) Enfermedades infecciosas: VIH, VHC, CMV, sífilis.

b) Determinación del estado inmunitario de individuos y
poblaciones. Conocer el porcentaje de personas de una población
expuesta a infecciones. (Herramienta epidemiológica) .

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APLICACIONES


Como pruebas de tamizaje (cribado):
En estudios poblacionales donde se desea investigar la existencia de probables
infecciones (aguda o crónica) mediante la detección de anticuerpos. Las mas
utilizadas en la actualidad son las técnicas inmunoenzimáticas.



Determinación del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg)
Búsqueda de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC) en bancos de
sangre.
Detección de anticuerpos contra el virus de la rubeola en mujeres no vacunadas.

En el diagnóstico clínico:

Se utilizan como complemento de las pruebas de tamizaje. Cuando se sospecha
de una determinada enfermedad infecciosa.
Deben ser muy sensibles y específicas:
aglutinación con látex, hemaglutinación, inmunofluorescencia e
inmunoenzimáticas.


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Pruebas Serológicas.
FACIL REALIZACION.
EVITAN PROCEDIMIENTOS INVASIVOS.
PERMITEN DETECTAR ANTIGENOS Y ANTICUERPOS
PERMITEN LA REALIZACION DE ESTUDIOS EPIDEMIOLÓGICOS DE
MANERA MÁS EFECTIVA.
SON ALTAMENTE ESPECÍFICAS Y SENSIBLES.
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DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO
La clase IgM se producen únicamente en la respuesta primaria.
(fase aguda)
aguda
Su presencia se interpreta como exposición-infección reciente,
reciente o
activa.
activa
Las IgM, no atraviesan la placente humana.
Importantes en diagnóstico de recién nacidos (infección fetal)
fetal
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Diagnóstico Serológico.
Las clase IgG pueden permanecer -incluso a tasas elevadas- mucho
tiempo (años) después de que la infección esté resuelta.
Contactos posteriores con Antígenos producen una respuesta de Acs clase
IgG (Respuesta Secundaria).
En el caso de microorganismos intracelulares puede persistir toda la vida.
(Toxoplasmosis, Herpesvirus etc..).
Memoria Inmunológica : Respuesta más inmediata y con mayor intensidad
(RESPUESTA ANAMNESICA).
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Cínetica - IgG e IgM
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Producción de Anticuerpos Monoclonales
Inmunización de un ratón para
estimular la producción de
anticuerpos
Linfocitos B
aisladas de Bazo
Células tumorales crecen
en cultivos tisulares
Linfocitos B se fusionan
con células tumorales
cultivadas
HIBRIDOMA
Producción de anticuerpos
por los hibridomas
Separación de clones de hibridoma
productoras de anticuerpo
Obtención de anticuerpos
monoclonales.
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Pruebas Serológicas.
Fijación del Complemento
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Aglutinación
Párticulas de Látex Sensibilizadas con Anticuerpos
Párticulas de Látex Sensibilizadas - Muestra
Aglutinació
n.
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Pruebas Serológicas.
Reacción de Aglutinación.
Células completas
- Bacterias
- Protozoos
- Eritrocitos
Partículas inertes
- Látex
- Bentonita
- Gelatina
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Pruebas Serológicas.
Reacción de Hemaglutinación.
Células completas
- Eritrocitos
Antígeno
Antícuerpo
Eritrocitos
Fase Sólida
Muestra
Mallas de Aglutinación
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Pruebas Serológicas.
Reacción de Hemaglutinación.
Células completas
- Eritrocitos
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Pruebas Serológicas.
Reacción de Precipitación.
Medio Semisolido
- Antígeno o Anticuerpo difundido en medio
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Pruebas Serológicas.
Reacción de Precipitación.
Precipitado formado
Medio Semisolido
- Antígeno o Anticuerpo difundido en medio
Zona de exceso
de Ac-Ag
Zona de equivalencia
Zona de exceso
de Ac-Ag
Concentración creciente de antigeno
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Pruebas Serológicas.
Inmunofluorescencia.
Conjugado Fluorescente
- Antígeno o Anticuerpo marcado con Fluorocromo
Directa
Indirecta
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Pruebas Serológicas.
Inmunoensayo Enzimático ELISA.
E
E
S
S
S
S
E
E
Antigeno
Buffer de bloqueo
Anticuerpo
E
E
E
S
E
S
S
Conjugado Enzimático
- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima
E
E
E
E
E
Enzima acoplada con un anti-Ig
Substrato
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Pruebas Serológicas.
Inmunoensayo Enzimático ELISA.
E
E
Antigeno
Buffer de bloqueo
Anticuerpo
E
S
E
S
E
S
E
S
E
S
E
S
S
Conjugado Enzimático
- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima
E
E
E
E
E
Enzima acoplada con un anticuerpo
Substrato
Dr. César Pérez-Maldonado.2009
Pruebas Serológicas.
Inmunoensayo Enzimático ELISA.
(Auro-Dex Helicobacter pylori MultiTest)
Dr. César Pérez-Maldonado.2009
G racias por su
atención …