Acetaldehído - R

Acetaldehído
BOEHRINGER MANNHEIM / R-BIOPHARM
Enzymatic BioAnalysis/Food Analysis
Método UV
Para uso in vitro solamente
Para la determinación de
alimentos y otros materiales
acetaldehído
en
Esta traducción en español has sido realizada por R−Biopharm
Latinoamérica con el objeto de ayudar a los usuarios a entender el
procedimiento, pero no se actualizan regularmente por lo que no
pueden remplazar las instrucciones en inglés. Las instrucciones de
uso que son válidas, son aquellas incluidas en cada kit en Alemán y
en Inglés, dado que están escritas e impresas por el fabricante
(Roche). Refiérase siempre a las instrucciones incluidas en cada kit.
Cat. No. 10 668 613 035
Test-Combinado para 3 x 11 determinaciones
Principio (Ref. A1)
El acetaldehído de oxida cuantitativamente a ácido acético en
presencia de aldehído deshidrogenasa (Al-DH) y adenina
nicotinamida dinucleótido (NAD).
+
Acetaldehído + NAD + H2O ⎯ AlDH → ácido acético + NADH + H
+
La cantidad de NADH formado es estequiométrica con la cantidad de
acetaldehído. El NADH se mide por medio de su absorbancia a 334,
340 ó 365 nm.
El test combinado contiene
1. Botella 1 con aprox. 600 ml de solución de:
Buffer potasio difosfato, pH aprox. 9.0
2. Botella 2 con aprox. 30 tabletas, cada una contiene:
NAD, aprox. 0.8 mg
3. Tres Botellas 3 con aldehído deshidrogenasa liofilizada, aprox. 4 U
cada una
Preparación de las soluciones
1. Usar la suspensión de la Botella 1 sin diluir.
2. Disolver una tableta de la botella 2 con 3 ml de la solución de la
botella 1 en un recipiente ó tubo de centrífuga para cada ensayo
(blanco y muestras) dependiendo del número de determinaciones.
Usar una pinza para sacar las tabletas de la botella. Para acelerar la
solubilización se puede moler la tableta con varilla de vidrio; esto
resulta en la mezcla de reacción 2*.
3. Disolver el contenido de una botella 3 con 0.6 ml de agua
bidestilada.
Estabilidad de los reactivos
El contenido de la Botella 1 es estable a 2-8ºC (ver etiqueta).
Llevar la Solución 1 a 20-25ºC antes de su uso.
El contenido de la Botella 2 es estable a 2-8ºC (ver etiqueta).
La mezcla de reacción 2 es estable por una semana a 2-8ºC.
Llevar la mezcla de reacción 2 a 20-25ºC antes de su uso.
El contenido de la Botella 3 es estable a 2-8ºC (ver etiqueta).
La solución 3 es estable por una semana a 2-8ºC.
Procedimiento
1
Longitud de onda :
2
Cubeta de vidrio :
Temperatura:
Volumen final:
Leer contra aire
Soluc. de muestra:
Almacenar a 2-8° C
340 nm, Hg 365 nm ó Hg 334 nm
1.00 cm de paso de luz
20-25ºC
3.250 ml
(sin cubeta en el paso de luz) ó contra
3
agua ó blanco
4
0.5-20 ug acetaldehído/ensayo
(0.200-0.500 ml de volumen de
Pipetear en la cubeta
Muestra
mezcla reacción 2*
3,000 ml
3,000 ml
solución muestra.**
-
0,200 ml
0,200 ml
-
agua bidestilada
Mezclar ***, luego de aprox. 3 min., leer las absorbancias de las
soluciones (A1). Comenzar la reacción por el agregado de:
solución 3
0,050 ml
0,050 ml
Mezclar ***, luego de finalizada la reacción (aprox. 3-5 min.) leer las
absorbancias de las soluciones inmediatamente una tras la otra (A2).
Es absolutamente necesario tapar las cubetas durante la medición, ej.
con Parafilm.
* Para simplificar el procedimiento es posible pipetear directamente los 3.000 ml de solución 1
en la cubeta. Agregar 1 tableta de la botella 2 y disolverla (para ello moler la tableta con varilla
de vidrio ó con la espátula plástica). Continuar con el esquema descrito. El error del volumen
de aprox. 1% (aumento de volumen causado por el agregado de la tableta / 3.250 ml de
volumen final) debe tomarse en cuenta en el cálculo, si es necesario: resultado x 1.01
** Enjuagar el tip de la pipeta con solución de muestra antes de dispensar la solución de
muestra.
*** Por ejemplo, con una espátula plástica ó por agitación después de cubrir la cubeta con
Parafilm (marca registrada de la American Can Company, Greenwich, Ct., USA).
Determinar la diferencia de absorbancias (A2 – A1) para el blanco y las
muestras. Sustraer la diferencia de absorbancia del blanco de la
diferencia de absorbancia de la muestra correspondiente.
∆A = (A2 – A1)muestra - (A2 – A1)blanco
Las diferencias en las medidas de absorbancia debe, como regla, ser
al menos de 0.100 unidades de absorbancia para obtener suficiente
precisión en los resultados (ver “Instrucciones para el rendimiento del
ensayo” y “Sensibilidad y límite de detección”, punto 4).
Cálculos
De acuerdo a la ecuación general del cálculo de las concentraciones:
V x PM
x ΔA (g/l)
c =
V
v
MW
d
ε
muestra)
1 La absorción máxima de NADH es a 340 nm. En espectrofotómetros las mediciones se
toman a la máxima absorción, si se utilizan fotómetros espectrales equipados con lámpara
de vapor de mercurio, las mediciones se toman a 365 nm ó 334 nm.
2 Si se desea se pueden utilizar cubetas descartables en lugar de cubetas de vidrio.
3 Por ejemplo cuando de utiliza un espectrofotómetro de doble haz.
4 Ver las instrucciones para el rendimiento del ensayo.
Blanco
ε x d x v x 1000
= volumen final (ml)
= volumen de muestra (ml)
= peso molecular de la sustancia a ensayar (g/mol)
= paso de luz (cm)
= coeficiente de extinción del NADH a:
-1
-1
340 nm = 6.3 (l x mmol x cm )
-1
-1
Hg 365 nm = 3.4 (l x mmol x cm )
-1
-1
Hg 334 nm = 6.18 (l x mmol x cm )
Corresponde para acetaldehído:
3.250 x 44.05
11.30
c = ------------------------------ x ∆A = ------------ x ∆A (g acetaldehído. / l
ε x 1.00 x 0.200 x 1000
ε
de sol. de muestra
Si la muestra se ha diluido durante la preparación, los resultados
deben multiplicarse por el factor de dilución F.
2013-10
1/4
Cuando se analizan muestras sólidas ó semisólidas que se pesan
para la preparación de la muestra, los resultados se calculan a partir
de la cantidad pesadas:
c acetal. (g/l de sol.
Contenido acetaldehído = ----------------------------------------- x 100 (g/100g)
peso muestra en g/l sol.
1. Instrucciones para el funcionamiento del kit
La cantidad de acetaldehído presente en el ensayo debe ser entre 1
ug y 20 ug (medidos a 365 nm) ó 0.5 ug y 10 ug (medidos a 340, 334
nm) respectivamente. Para obtener una diferencia de absorbancias
suficiente, la solución de muestra debe diluirse para dar una
concentración de acetaldehído entre 0.02 y 0.10 g/l ó 0.01 y 0.05 g/l
respectivamente.
Tabla de dilución
Cantidad estimada de
acetaldehído por litro
Dilución con
agua
Dilución
factor F
medido a
340 ó 334 nm
365 nm
< 0.05 g
< 0.10 g
0.05-0.5 g
0.10-1.0 g
1+9
10
0.5-5.0 g
1.0-10 g
1 + 99
100
> 5.0 g
> 10g
1 + 999
1000
-
1
Debido a la volatilidad del acetaldehído, la dilución de las muestras
debe hacerse de la siguiente forma:
Llenar el recipiente hasta la mitad con agua, pipetear la muestra con
pipeta con tip bajo la superficie del agua. Llevar a volumen.
Si la medida de la diferencia de absorbancias (∆A) es muy pequeña
(ej. < 0.100), debe prepararse nuevamente la solución de muestra
(pesar mas cantidad de muestra ó diluir menos la muestra) ó el
volumen de muestra que se pipetea en la cubeta puede aumentarse
hasta 0.500 ml. El volumen de la solución 1 ó la mezcla de reacción
2 respectivamente, deben ser las mismas (3.000 ml).
2. Información técnica
2.1. El acetaldehído es extremadamente volátil (punto de ebullición
aprox. 21ºC), por lo que todos los recipientes de muestra, soluciones
controles deben estar firmemente cerrados.
2.2. Debido a la alta volatilidad del acetaldehído, siempre es
necesario pipetear las soluciones que contienen acetaldehído bajo la
superficie del agua ó de las soluciones buffer, ej. cuando se
preparan las muestras ó las soluciones controles del ensayo,
especialmente cuando se diluyen dichos materiales ó cuando se
dispensan dichas soluciones en las cubetas.
2.3. El acetaldehído se oxida fácilmente (en presencia del oxígeno
del aire) dando ácido acético, por lo tanto las muestras deben
analizarse lo mas rápido posible luego de muestrearse. Las
soluciones controles del ensayo también son estables por poco
tiempo.
2.4. El acetaldehído se polimeriza luego de un tiempo de
almacenamiento. El acetaldehído polimerizado no reacciona en el
sistema enzimático del ensayo. Es por ello que el acetaldehído debe
destilarse fresco inmediatamente antes de preparar la solución
control del ensayo.
2.5. El acetaldehído tiene un olor penetrante; irrita las mucosas y
tiene propiedades narcóticas. Es por ello que el acetaldehído debe
almacenarse de -15 a -25 ºC antes de hacer el control del ensayo.
También es recomendable pipetear el acetaldehído con pipeta de
vidrio también almacenada de -15 a -25 ºC, bajo la superficie del
agua en el recipiente. (cerrar siempre el recipiente de dilución: ver
punto 2.1.).
3. Especificidad
La Al-DH también convierte, aunque a muy baja velocidad, otros
aldehídos como propionaldehído, glicolaldehído y benzaldehído. En
presencia de estos aldehídos, el acetaldehído puede medirse por
extrapolación de A2 al tiempo de adición de la solución 3 (Al-DH). Bajo
las condiciones del ensayo anteriormente descritas, la oxidación de
formaldehído, crotonaldehído y gliceraldehído es tan poco importante
que su influencia en la determinación de acetaldehído puede
excluirse, aún en gran exceso.
En el análisis de acetaldehído comercial destilado en fresco (ver Pto.
2.4.) se esperan resultados aprox. del 100% (una recuperación menor
del 100% no significa una conversión enzimática incompleta, sino que
indica una pérdida del acetaldehído durante el manipuleo de la
muestra y la preparación de la solución de muestra, así como durante
el pipeteo de la solución de acetaldehído diluido en el sistema de
análisis.
Nota: Con la determinación de acetaldehído en muestras que
también contienen sulfito, se cuantifica “acetaldehído total”, que
significa la suma acetaldehído libre y unido a sulfito.
4. Sensibilidad y límite de detección (Ref. 1.2)
La mínima diferencia en absorbancia para el procedimiento es de
0.005 unidades de absorbancia. Este valor corresponde a un volumen
máximo de muestra v = 0.500 ml, un volumen del ensayo de V = 3.550
ml y medición a 340 nm de una concentración aprox. de acetaldehído
de 0.25 mg/l de solución de muestra (si se utiliza un v = 0.100 ml y V =
3.150 ml, esto corresponde a aprox. 1 mg/l de solución de muestra).
5. Linealidad
La linealidad de la determinación es desde aproximadamente 0.5 ug
acetaldehído/ensayo (1 mg acetaldehído/l de solución de muestra,
volumen de muestra v = 0.500 ml; volumen del ensayo V = 3.550 ml)
hasta 20 ug acetaldehído/ensayo (0.2 ug acetaldehído/l de solución de
muestra; volumen de muestra v = 0.100 ml; volumen del ensayo V =
3.150 ml).
6. Precisión
En una determinación de Acetaldehído por duplicado utilizando una
única solución de muestra, pueden obtenerse diferencias de 0.005 a
0.010 unidades de absorbancia. Con un volumen de muestra de v =
0.200 ml, un volumen del ensayo de 3.250 ml y medido a 340 nm, esto
corresponde a una concentración aproximada de acetaldehído de 0.51 mg/l. (Si la muestra se diluye durante la preparación, el resultado
debe multiplicarse por el factor de dilución F. Si la muestra se pesa
durante la preparación, ej. usar 1 g de muestra /100 ml = 10 g/l, se
puede esperar una diferencia aprox. de 0.005-0.01 g/100 g).
En la literatura se han publicado los siguientes datos:
CV = 2.2%
x = 4 ug/ensayo
x = 20 ug/ensayo
(Ref. 1.1)
CV = 3.7%
CV = 0.77%
n = 16
n = 16
(Ref. 1.2)
7. Interferencia / Fuentes de error
Los componentes de origen animal no interfieren en la determinación
de acetaldehído. Los (Poli) fenoles de plantas reducen la velocidad de
la reacción.
Los alcoholes no interfieren en la reacción aún en exceso. Tampoco
sustancias reductoras como ácido ascórbico, dióxido de azufre (hasta
50 ug SO2/ensayo) afectan la determinación de acetaldehído.
8. Reconociendo interferencias durante el desarrollo del ensayo
8.1 Si la conversión de acetaldehído se completa de acuerdo al tiempo
estipulado en “Procedimiento”, se puede concluir, generalmente, que
no han ocurrido interferencias.
8.2 Al finalizar la reacción, la determinación puede reiniciarse
agregando acetaldehído (cualitativa ó cuantitativamente): si la
absorbancia se altera subsecuentemente a la adición del material
estándar, es también indicio que no han ocurrido interferencias.
8.3 Se pueden reconocer errores de operatividad ó interferencia de la
determinación por la presencia de sustancias presentes en la muestra
realizando una doble determinación utilizando dos volúmenes
diferentes (ej. 0.100 ml y 0.200 ml): las diferencias medidas de
absorbancia deben ser proporcionales a los volúmenes de muestra
utilizados.
Cuando se analizan muestras sólidas, se recomienda pesar diferentes
cantidades (ej. 1 g y 2 g) en recipientes de 100 ml. Las diferencias
2013-10
2/4
medidas de las absorbancias y los pesos de las muestras utilizados
deben ser proporcionales para volúmenes idénticos de muestra.
8.4 Se pueden reconocer posibles interferencias en la muestra
causadas por sustancias contenidas en ella utilizando estándares
internos como control: además de la determinación de la muestra,
blanco y estándar, se debe llevar a cabo una determinación con
muestra y solución control del ensayo en la misma largada. La
recuperación debe luego calcularse a partir de las diferencias de
absorbancias medidas.
8.5 Las posibles pérdidas durante la determinación pueden
reconocerse llevando a cabo ensayos de recuperación: las muestras
deben prepararse y analizarse con y sin el agregado de material
estándar. La cantidad adicionada debe recuperarse con el rango de
error del método.
9. Riesgo de los reactivos
Los reactivos utilizados en la determinación de acetaldehído no son
materiales riesgosos de acuerdo a las Regulaciones de Sustancias
Peligrosas, las Leyes Químicas ó la Regulación 67/548/EEC de la
CEE y subsecuentes Guías de alteraciones, suplementos y
adaptaciones. Aún así, deben cumplirse todas las medidas de
seguridad generales que se aplican a todas las sustancias químicas.
Luego de su utilización, los reactivos deben desecharse con el
descarte del laboratorio, pero deber observarse siempre las
regulaciones locales. El material de empaque puede desecharse en
recipientes destinados al reciclado.
10. Información general sobre la preparación de muestra
Al llevar a cabo el ensayo:
Usar muestras líquidas límpidas, incoloras y prácticamente
neutras directamente ó luego de diluirlas de acuerdo a la tabla de
dilución (para evita pérdidas de acetaldehído, se recomienda
especialmente pipetear la muestra siempre por debajo del volumen
del diluyente), y usar un volumen hasta 0.500 ml.
Filtrar soluciones turbias (es posible perder pequeñas cantidades
de acetaldehído);
Desgasear muestras que contengan dióxido de carbono (ej. por
filtración, ó para evitar perder muestra de acetaldehído por adición
de KOH ó NaOH sólido para que una CO2 como bicarbonato);
Ajustar muestras ácidas a pH 8-9 por el agregado de una solución
de hidróxido de sodio ó potasio;
Ajustar muestras ácidas y levemente coloreadas a pH 8-9 por el
agregado de una solución de hidróxido de sodio ó potasio y posterior
incubación por aprox. 15 min;
Medir muestras “coloreadas” (si es necesario ajustadas a pH 8-9)
contra blanco de muestra (= buffer ó agua dest. + muestra), ajustar
el fotómetro a 0.000con el blanco en el haz.
Tratar las muestras “altamente coloreadas” que se usan sin diluir
ó en grandes volúmenes con polivinilpolipirrolidona (PVPP) ó con
carbón activado, ej. 2 g/100 ml;
Muela ú homogeneice las muestras sólidas ó semisólidas, extraer
con agua caliente ó disolver en agua y filtrar si es necesario, remover
turbidez ó restos por clarificación de Carrez;
Desproteinizar muestras que contengan proteínas con ácido
perclórico, alternativamente se pueden clarificar con reactivos de
Carrez;
Extraer muestras que contengan grasa con agua caliente en un
recipiente con condensador (la temperatura de extracción debe ser
mayor que el punto de fusión de la grasa involucrada). Enfriar para
permitir que la grasa se separe, enjuagar el condensador con agua
destilada, llevar a volumen. Colocar el recipiente en baño de hielo
por 15 min y filtrar, alternativamente se puede clarificar con solución
de Carrez luego de la extracción con agua caliente;
Clarificación de Carrez:
Pipetear la muestra líquida en un recipiente graduado de 100 ml que
contenga aproximadamente 60 ml de agua destilada, ó pesar una
cantidad suficiente de muestra dentro del recipiente graduado de 100
ml que contenga aproximadamente 60 ml de agua bidestilada.
Seguidamente agregar con mucho cuidado 5 ml de solución de
Carrez I (hexacianoferrato de potasio (II) (ferrocianuro), 85 mM =
3.60 g K4[Fe(CN)6] × 3 H2O/100 ml) y 5 ml de solución de Carrez-II
(sulfato de zinc, 250 mM = 7.20 g ZnSO4 × 7 H2O/100 ml). Ajustar a
pH 7.5-8.5 con solución de hidróxido de sodio (0.1 M; ej. 10 ml).
Mezclar luego de cada adición. Llenar el volumen a 100 ml, mezclar
y filtrar.
Filtrar los jugos turbios, ajustar el pH de los jugos coloreados a aprox.
8.0 e incubar por aprox. 15 min, medir contra un blanco de muestra.
Decolorar los jugos fuertemente coloreados con carbón activado, ej. 2
g/100 ml, si es necesario diluir de acuerdo a la tabal de dilución, ó
usar un volumen de muestra hasta 0.500 ml.
Determinación de acetaldehído en vino (Ref. 3.1, 3.2)
Ajustar el pH del vino blanco a 8.0 con 2 M de hidróxido de sodio.
Usar inmediatamente 0.100-0.500 ml para el ensayo.
Nota:
Con la determinación de acetaldehído en muestras que también
contienen sulfito, se cuantifica “acetaldehído total”, esto es la suma de
acetaldehído libre y unido a sulfito.
Determinación de acetaldehído en vino tinto (Ref. 3.1, 3.2)
Decolorar el vino tinto si es necesario, antes del ensayo, de la
siguiente forma:
Mezclar 10 ml de vino tinto con 0.2 g de carbón activado, agitar por
aprox. 30 s y filtrar rápidamente. Usar la solución clara y generalmente
incolora sin dilución posterior. Usar 0.200 ml para el ensayo
(Generalmente, no es necesaria una neutralización luego de la
decoloración).
Nota:
Con la determinación de acetaldehído en muestras que también
contienen sulfito, se cuantifica “acetaldehído total”, esto es la suma de
acetaldehído libre y unido a sulfito.
Determinación de acetaldehído en licores
Usar licores sin diluir con un v = 0.200 ml (si es necesario 0.500 ml)
directamente para el ensayo.
Determinación de acetaldehído en cerveza (Ref. 3.3) y champagne
Para remover el CO2, agitar las muestras con un agitador por 30 s, ó
agregar KOH sólido ó NaOH hasta pH 9 (en el análisis de muestras
coloreadas) con el objeto de unir CO2 como bicarbonato, si es
necesario diluir de acuerdo a la tabla de dilución ó usar un volumen
hasta 0.500 ml.
Determinación de acetaldehído en yogur y yogur frutado
Pesar exactamente 40 g de yogur (ó yogur frutado respectivamente)
en un recipiente, agregar 4 ml de solución de ácido cítrico (20% p/v),
agitar ligeramente, transferir la solución a un recipiente de 50 ml con
agua y llevar a volumen con agua. Mezclar y filtrar a través de un
papel de filtro, centrifugar si es necesario. Descartar los primero ml,
usar la solución usualmente clara con v = 0.200 ml para el ensayo.
Determinación de acetaldehído en productos frutihortícolas, pan
y productos lácteos sin grasa
Pesar con exactitud la muestra homogeneizada en un recipiente de
100 ml, extraer con agua (agitar el recipiente cerrado vigorosamente).
Llevar a volumen, mezclar y filtrar. Si el filtrado no es suficientemente
claro, clarificar con soluciones de Carrez. Si es necesario diluir de
acuerdo a la tabla de diluciones ó usar un volumen de muestra hasta
0.500 ml.
Determinación de acetaldehído en café, cacao y productos
lácteos con grasa (ej. manteca)
Pesar con exactitud la muestra homogeneizada en un recipiente de
100 ml, extraer con agua caliente a una temperatura por encima del
punto de fusión de la grasa usando un condensador. Enjuagar el
condensador con agua, ajustar a 20 – 25 ºC y llevar a volumen.
Colocar el recipiente en baño de hielo ó en refrigerador por aprox. 15
min y filtrar el material frío. Si es necesario diluir de acuerdo a la tabla
de diluciones, ó usar un volumen de muestra hasta 0.500 ml.
12. Otras aplicaciones
El método también puede utilizarse para el análisis de muestras
biológicas.
Para detalles de muestreo, tratamiento y estabilidad de la muestra, ver
Bernt, E. & Bergmeyer, H. U. (1974) in Methods of Enzymatic Analysis
(Bergmeyer, H. U., ed.) 2nd ed., vol. 3, p. 1506, Verlag Chemie,
Weinheim/Academic Press, Inc., New York and London, as well as
Ref. 1.
11. Ejemplos de aplicación
Determinación de acetaldehído en jugos de fruta
2013-10
3/4
Referencias
1.1 Lundquist, F. (1974) in Methoden der enzymatischen Analyse (Bergmeyer, H. U.,
(Hrsg.) 3. Aufl., Bd. 2, S. 1555-1559, Verlag Chemie, Weinheim and (1974) in
Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H. U., ed.) 2nd ed., Vol. 3, p. 15091513, Verlag Chemie, Weinheim/Academic Press, Inc., New York and London.
1.2 Beutler, H.-O. (1984) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H. U., ed.)
3rd ed., vol. VI, pp. 606-613, Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach/Florida,
Basel.
2.1 Gombocz, E., Hellwig, E., Vojir, F. & Petuely, F. (1981) Deutsche LebensmittelRundschau 77, 8.
2.2 Schweizerisches Lebensmittelbuch (1985); Kapitel 61 B/5.1.
2.3 Brautechnische Analysenmethoden, Band III, Seiten 547-550 (1982),
Methodensammlung der Mitteleuropäischen Analysenkommision (MEBAK),
Herausgegeben von F. Drawert im Selbstverlag der MEBAK, Freising.
3.1 Joyeux, A. & Lafon-Lafourcade, S. (1979) Dosage de l'acétaldéhyde dans les vins
par méthode enzymatique, comparaison avec les méthodes chimiques, Ann. Fals. Exp.
Chim. 72, 321-324.
3.2 McCloskey, L. P. & Mahaney, P. (1981) An enzymatic assay for acetaldehyde in
grape juice and wine, Am. J. Enol. Vitic. 32, 159-162.
3.3 Delcour, J. A., Caers, J. M., Dondeyne, P., Delvaux, F. & Robberechts, E. (1982)
An enzymatic assay for the determination of acetaldehyde in beers, J. Inst. Brew. 88,
384-386.
Solución control de acetaldehído del ensayo
Además de acetaldehído (Pto. 2.4) se puede utilizar también
acetaldehído de amonio (= 1-amino etanol) ej. de FLuka/Buchs
(Suiza), Cat. Nro. 00090, como material control del ensayo para
controlar el procedimiento.
Nota:
El acetaldehído de amonio es irritante para la piel y es inflamable.
Cuando se manipula este material, se deben mantener las medidas
generales de seguridad que se aplican a todos las sustancias
químicas. En caso de contacto con la piel, lavar con agua; en caso de
contacto con los ojos, lavar exhaustivamente con agua por 15 min. Si
es necesario contactar un oftalmólogo.
Solución control del ensayo
Disolver aprox. 80 mg del material control (que corresponde a aprox.
50 mg de acetaldehído) en 1 l de agua destilada. Preparar fresco
antes de su uso.
Aplicación:
1. Adición de la solución control de acetaldehído al ensayo:
La solución control se utiliza en el ensayo en el lugar de la solución
de muestra. (La medición de la solución control no es necesaria para
el cálculo de los resultados del ensayo).
2. Reiniciar la reacción, cuantitativamente:
Luego de completada la reacción con la solución de muestra y
medida A2, agregar 0.100 ml de solución control del ensayo a la
mezcla de reacción. Leer la absorbancia A3 luego de finalizada la
reacción (aprox.5 min.). Calcular la concentración de la diferencia de
(A3-A2) de acuerdo a la ecuación general para cálculo de la
concentración. La alteración del volumen total debe tomarse en
cuenta. Los resultados obtenidos casi no difieren de los resultados
esperados debido a la dilución de la mezcla de reacción por el
agregado de la solución control del ensayo.
3. Estándar interno:
La solución control del ensayo puede utilizarse como estándar interno
para controlar el correcto funcionamiento del ensayo (errores
groseros) y para ver si la solución de muestra está libre de sustancias
interferentes.
Pipetear dentro de la
cubeta
Mezcla reacción 2
Agua destilada
Solución muestra
Control ensayo
Blanco
Muestra
Estándar
3.000 ml
0.200 ml
-
3.000 ml
0.200 ml
-
3.000 ml
0.200 ml
Muestra
+
estándar
3.000 ml
0.100 ml
0.100 ml
La recuperación del estándar se calcula de acuerdo a la siguiente
fórmula:
2 x ∆A muestra + estándar - ∆A muestra
recuperación = ----------------------------------------------- x 100 (%)
∆A estándar
2013-10
4/4