TINCIONES HEMATOLÓGICAS La realización de extensiones y

TINCIONES HEMATOLÓGICAS
La realización de extensiones y tinciones es práctica habitual en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las
muestras, al no ser considerado procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detecte
mediante análisis previos alguna alteración.
La correcta realización, así como una buena interpretación de lo observado, permite en muchos casos el
diagnóstico de hematopatías.
1. INTRODUCCIÓN.
Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que
componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el
medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visual izadas microscópicamente con mayor
facilidad.
2. TIPOS DE TINCIONES.
Las tinciones hematológicas pueden clasificarse según distintos criterios:
• Atendiendo al nivel de vitalidad de las células que se pretende colorear, se dividen en tinciones vitales
y no vitales.
• Atendiendo al momento en el que empezaron a ser utilizadas para el diagnóstico hematológico, se
dividen en tinciones tradicionales y especiales.
2.1. TINCIONES VITALES Y NO VITALES.
Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre células que están vivas.
Las tinciones vitales son aquellas que se efectúan sobre células que están vivas, mediante la introducción de
un colorante en la circulación de un organismo vivo. Son colorantes vitales, por ejemplo, el verde Jano y el
azul de metileno.
Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos, pero que están aislados
del organismo del que proceden. Las tinciones no vitales se realizan sobre células muertas. La coloración de
células muertas requiere un proceso previo de fijación, que tiene por objeto el mantener inalterada su
estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del portaobjetos. La fijación puede realizarse mediante
calor, aunque habitualmente se realiza con etanol o metanol.
2.2. TINCIONES TRADICIONALES Y ESPECIALES.
Tradicionalmente, las tinciones se han logrado mediante el uso de colorantes que con frecuencia derivan de la
anilina (tinciones tradicionales o clásicas). Estos colorantes se reúnen en 4 grupos:
• Colorantes ácidos: tienen una especial afinidad por las estructuras alcalinas de las células, como por
ejemplo la hemoglobina. El principal de ellos es la eosina.
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• Colorantes básicos: tienen una especial afinidad por las estructuras ácidas de las células, como por
ejemplo los ácidos nucleicos. Uno de ellos es el azul de metileno.
• Colorantes neutros: son sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el
citoplasma de otro. Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno.
• Colorantes indiferentes: son los que no tienen afinidad por estructuras ácidas o básicas. Son
insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del
líquido empleado para preparar la solución colorante. Uno de ellos es el Sudán III empleado para teñir
las grasas.
También hay combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones polícromas. Una coloración es panóptica
cuando se utilizan sucesivamente sustancias colorantes neutras y es pancrómica cuando se aplican todas las
sustancias colorantes neutras juntas.
El primero que tuvo la idea de realizar una de estas combinaciones fue Romanowsky, y los colorantes
hematológicos utilizados en la actualidad suelen derivar del que él preparó.
Los colorantes de tipo Romanowsky constan de un colorante ácido (eosina) y de colorantes básicos (tiacinas).
Las tiacinas son el azul de metileno y sus derivados obtenidos por desmetilación oxidatiya (colorantes -tipo
azur).
Las tinciones realizadas con colorantes de tipo Romanowsky, que más frecuentemente se emplean en el
diag-nóstico hematológico, son la de Wright y la de Giemsa (utilizada sola o en combinación con la de
May−Grünwald).
También hay tinciones panópticas rápidas que producen una coloración fácil y rápida de las estructuras
celulares. Las tinciones especiales sólo se usan en circunstancias específicas. Son de dos clases:
• Tinciones fluorescentes: emplean colorantes (fluorocromos) que se fijan a las células y que, cuando
son estimulados por una luz ultravioleta, emiten una radiación visible, de un color característico. Los
fluorocromos más utilizados en esta clase de tinciones son el naranja de acridina y el rojo neutro.
• Tinciones citoquimicas: demuestran la presencia, más o menos abundante, o la ausencia de
deteminadas sustancias, localizadas en el interior de los gránulos citoplasmáticos de los leucocitos.
Sirven para reconocer células leucocitarias (normales o anómalas) y, por tanto, para diferenciar unas clases de
leucemias de otras. Por ejemplo, un colorante preparado a base de diaminobenzidina y de agua oxigenada,
descubre la presencia de peroxidasa endocelular, y por consiguiente permite atribuir el origen de unas células
leucocitarias inmaduras a la línea granulocítica o a la monocítica.
3. DENOMINACIÓN DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS.
Atendiendo a sus apetencias tintoriales, las estructuras celulares pueden nombrarse de las siguientes formas:
• Estructuras acidófllas u oxifilas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza ácida.
Si el colorante ácido que captan es la eosina, se dice que son eosinófilas. Con las tinciones tradicionales
adquieren un color rosado.
• Estructuras basófllas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza alcalina.
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Con las tinciones tradicionales adquieren un color azulado. Si se tiñen de lila o púrpura con colorantes de tipo
azur, se llaman azurófllas.
4. CAUSAS DE ERROR EN LAS TINCIONES REALIZADAS A FROTIS SANGUÍNEOS.
Si la tinción de una extensión sanguínea es demasiado rosa, probablemente esto se deba a:
• Un pH bajo del colorante.
• Un tiempo de coloración insuficiente.
• Un lavado excesivamente prolongado.
• Si la tinción es demasiado azul, posiblemente, esto esté causado por: un grosor excesivo de la
extensión, o un pH alto del colorante.
• Una coloración excesivamente prolongada.
• Un lavado insuficiente.
Si tras la tinción aparecen artefactos o/y precipitados en la extensión, probablemente esto se deba a:
• Un empleo de portaobjetos sucios.
• Una falta de filtración del colorante.
• Una coloración excesivamente prolongada.
• Un secado del colorante durante la tinción.
• Un lavado insuficiente.
Muchos de estos errores pueden obviarse utilizando teñidores automáticos de las extensiones sanguíneas.
Actualmente, no suelen emplearse en la práctica clínica.
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