BBL Rapid Urea Broth


BBL Rapid Urea Broth
8808851 • Rev. 02 • abril 2015

PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD
I
INTRODUCCION
Rapid Urea Broth (caldo rápido de urea) se utiliza para la identificación presuntiva de Helicobacter pylori en muestras de
biopsia gástrica antral.
II
REALIZACION DEL PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
1. Inocular muestras representativas con los cultivos enumerados a continuación.
a. Inocular directamente a partir de un cultivo reciente de reserva cultivado en Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood.
b. Incubar los frascos con las tapas flojas a 36 ± 1 °C durante 24 h en atmósfera aerobia.
2. Examinar los tubos a intervalos de 1, 4 y 24 h para determinar un cambio de color del caldo.
3. Resultados previstos
Organismos
Campylobacter coli
Campylobacter jejuni
*Escherichia coli
*Helicobacter pylori
Klebsiella pneumoniae
Proteus vulgaris
ATCC
834
29428
25922
43504
33495
8427
Color del caldo
Sin reacción a trazas de rosa en 24 h
Sin reacción en 24 h (amarillo anaranjado pálido)
Sin reacción en 24 h (amarillo anaranjado pálido)
Rojo medio a rojo rosado dentro de las 4 h
Sin reacción en 4 h, trazas de rosa a rojo medio en 24 h
Rojo rosado en 24 h
*Cepa de organismo recomendada para control de calidad del usuariso.
III
CONTROL DE CALIDAD ADICIONAL
1. Examine los frascos como se describe en la sección "Deterioro del Producto".
2. Examinar visualmente los frascos representativos para asegurarse de que los defectos físicos existentes no interfieran con
el uso.
3. Determinar el pH potenciométricamente a temperatura ambiente para verificar el cumplimiento de la especificación de 6,8 ± 0,2.
4. Incubar frascos representativos no inoculados a 33 – 37°C y 20 – 25°C durante 72 h y examinar para detectar
contaminación microbiana.
IV
USO PREVISTO
Rapid Urea Broth (caldo rápido de urea) se utiliza para la identificación presuntiva de Helicobacter pylori en muestras de
biopsia gástrica antral.
V
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
En 1983, Warren y Marshall reseñaron por primera vez la presencia de bacilos pequeños, curvos y con forma de "S" en las
muestras de biopsia antral1. Posteriormente, otros investigadores observaron una asociación entre este organismo, conocido
ahora como Helicobacter pylori y la gastritis2-4. Sin embargo, el aislamiento y la identificación del organismo en medios
primarios pueden requerir hasta siete días, lo que demora el tratamiento5.
McNulty desarrolló una prueba rápida de diagnóstico para la gastritis asociada a Helicobacter. Al observar que H. pylori
presenta una característica hidrólisis rápida de urea, colocó muestras de biopsia en caldo de urea al 2% de Christensen y
observó un cambio de color. Según el número de organismos presentes en la muestra, se pueden observar resultados
positivos en menos de 1 h6.
VI
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
La enzima ureasa cataliza la hidrólisis de urea para producir amonio e iones de bicarbonato. Dado que la ureasa no es una
enzima humana, su actividad en la mucosa gástrica se debe principalmente a la presencia de H. pylori7. La enzima ureasa ya
formada que se encuentra presente en las muestras de biopsia hace que el caldo de ureasa sea alcalino y cambia a un color
de rosa a rojo el indicador de rojo fenol en el medio.
VII
REACTIVOS
Rapid Urea Broth
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de gelatina........................................................1,0
Dextrosa ............................................................................................1,0
Cloruro sódico ...................................................................................5,0
Fosfato potásico ................................................................................2,0
Urea ................................................................................................20,0
Rojo fenol .........................................................................................0,012
INFORMACION DEL PRODUCTO
g
g
g
g
g
g
*Ajustada y/o complementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
8808851
1
Español
Advertencias y precauciones: Para uso diagnóstico in vitro.
Los frascos con tapas ajustadas deben abrirse con cuidado para evitar lesiones por la rotura del vidrio.
En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y el virus de la
inmunodeficiencia humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre u otros líquidos corporales
deben seguirse las “Precauciones estándar”8-11 y las directrices del centro. Esterilizar en autoclave los recipientes para
muestras y cualquier otro material contaminado antes de desecharlos.
Instrucciones de almacenamiento: Al recibir los frascos, almacenarlos en lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C. No
congelar ni sobrecalentar. No abrir hasta que se vayan a utilizar. Reducir al mínimo la exposición a la luz. Los frascos en
tubos almacenados como se indica en sus etiquetas hasta momentos antes de su utilización pueden ser inoculados hasta la
fecha de caducidad e incubados durante los períodos recomendados de incubación. Dejar que el medio se caliente a
temperatura ambiente antes de la inoculación.
Deterioro del producto: No utilizar los frascos si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, precipitado,
evaporación o cualquier otro signo de deterioro.
VIII RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Las muestras de biopsia antral pueden colocarse directamente en Rapid Urea Broth, solución salina estéril u otro material
adecuado12,13. Las muestras deben obtenerse antes de administrar los agentes antimicrobianos. Se deben adoptar las
medidas necesarias para un transporte inmediato al laboratorio.
IX
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados: Rapid Urea Broth
Materiales necesarios pero no suministrados: Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para control de calidad y el
equipo de laboratorio que se requiera.
Procedimiento de análisis: Después de obtener la muestra mediante biopsia antral, debe colocarse de inmediato en Rapid
Urea Broth. Si la muestra se transporta en solución salina al laboratorio, debe transferirse inmediatamente al Rapid Urea Broth.
Colocar los frascos en una incubadora a 35 ± 2 °C y observar la aparición de color rojo en el plazo de 1 h. En el caso de un
resultado negativo, continuar la incubación y observar periódicamente durante un máximo de 4 h.
Control de calidad del usuario: Véase “Procedimientos de control de calidad”.
El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y/o nacional, a los requisitos de los organismos de
acreditación y a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio. Se recomienda consultar las instrucciones
pertinentes del CLSI y la normativa de la CLIA para obtener información acerca de las prácticas adecuadas de control de
calidad.
X
RESULTADOS
La presencia de ureasa se indica por un color rojo rosado intenso en todo el caldo. Una reacción negativa no presenta cambio
de color; es decir, el medio de caldo sigue presentando un color naranja amarillento. Los resultados deben confirmarse con
tinción de Gram y subcultivo en un medio apropiado, por ejemplo, medio Skirrows7,12,13.
XI
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Los medios de prueba de urea dependen de la demostración de alcalinidad; por consiguiente, no son específicos de la
ureasa. La utilización de peptonas por los organismos contaminantes u otras proteínas en el medio pueden elevar el pH hasta
producir alcalinidad, debido a la hidrólisis de las proteínas y la liberación de una cantidad excesiva de residuos aminoácidos,
lo que genera reacciones positivas falsas14,15.
XII
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Antes de su lanzamiento al mercado, todos los lotes de Rapid Urea Broth se analizan para verificar las características
específicas del producto. Las muestras se inoculan directamente con un cultivo reciente de Helicobacter pylori ATCC 43504 y
Escherichia coli ATCC 25922 cultivado en Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood. Los frascos se incuban con las tapas
flojas en una atmósfera aerobia a 35 – 37 °C. Una reacción positiva (cambio de color de naranja amarillento a rojo rosado) se
observa con H. pylori. E. coli sigue presentando un resultado negativo después de 24 h.
XIII DISPONIBILIDAD
Nº de cat.
Descripción
298330
BD BBL Rapid Urea Broth, pqt. de 10 frascos
8808851
2
Español
XIV REFERENCIAS
1. Warren, J.R., and B. Marshall. 1983. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis. Lancet
i:1273-1275.
2. Rauws, E.A.J., W. Langenberg, H.J. Houthoff, H.C. Zanen, and G.N.J. Tytgat. 1988. Campylobacter pyloridis-associated
chronic active antral gastritis. Gastroenterology 94:33-40.
3. Marshall, B.J., J.A. Armstrong, D.B. McGechie, and R.J. Glancy. 1985. Attempt to fulfill Koch’s postulates for pyloric
campylobacter. Med. J. Aust. 142:436-439.
4. Buck, G.E., W.K. Gourley, W.K. Lee, K. Subramanyam, J.M. Latimer, and A.R. DiNuzzo. 1986. Relation of Campylobacter
pyloridis to gastritis and peptic ulcer. J. Infect. Dis. 153:664-669.
5. Czinn, S.J., and H. Carr. 1987. Rapid diagnosis of Campylobacter pyloridis-associated gastritis. J. Pediatr. 110:569-570.
6. McNulty, C.A.M., and R. Wise. 1985. Rapid diagnosis of Campylobacter-associated gastritis. Lancet i:1443-1444.
7. Bates, H.M. 1987. C. pylori-induced gastritis and peptic ulcers. Lab. Management 25(11):27-31.
8. Clinical and Laboratory Standards Insitute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from
occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa.
9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human
Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control
Hospital Epidemiol. 17:53-80.
10. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological laboratories, HHS Publication (CDC),
5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers
from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1)
of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
12. Coudron, P.E., and D.F. Kirby. 1989. Comparison of rapid urease tests, staining techniques, and growth on different solid
media for detection of Campylobacter pylori. J. Clin. Microbiol. 27:1527-1530.
13. Nachamkin, I. 1995. Campylobacter and Arcobacter, p. 483-491. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover,
and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
14. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams &
Wilkins, Baltimore.
15. Westblom, T.U., E. Madan, J. Kemp, and M. Subik. 1988. Evaluation of a rapid urease test to detect Campylobacter pylori
infection. J. Clin. Microbiol. 26:1393-1394.
Servicio técnico de BD Diagnostics: póngase en contacto con el representante local de BD o visite www.bd.com/ds.
 Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
Sparks, MD 21152 USA
 Benex Limited
Pottery Road, Dun Laoghaire
Co. Dublin, Ireland
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. © 2015 BD
8808851
3
Español