Explotaciones con un sólo animal positivo a brucelosis bovina

MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; FERNÁNDEZ-MARDOMINGO, B; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; RODRÍGUEZ FERRI, E. F.; FERNÁNDEZ RODRÍGUEZ, F.
INTRODUCCIÓN:
Tras la realización de el análisis serológico a todas las explotaciones de Castilla y León en el año 2005, (se tomaron muestras a 1.048.248 animales, existentes en 18.583
explotaciones), se analizaron las explotaciones en las que aparecían un solo animal positivo a brucelosis bovina a los que llamados “positivos solitarios”. Los resultados obtenidos nos
muestran que del total de las 625 explotaciones positivas, 305 explotaciones presentaban un solo animal positivo.
La importancia de estos establos “positivos solitarios” en la prevalencia e incidencia de la brucelosis bovina en Castilla y León es la siguiente:
INCIDENCIA
Por otro lado, los establos positivos solitarios, constituyen el 59.84% de los establos
oficialmente indemnes con casos de brucelosis en la presente campaña, lo que
representa más de la mitad del total de la incidencia.
PREVALENCIA
Constituyen el 48.80% de los establos positivos de Castilla y León, por lo que suponen
casi la mitad de la prevalencia de establos positivos a brucelosis bovina de toda la
comunidad.
nº de
Establos
Reses
establos Prevalencia
AÑO
investigados investigadas
positivos
2005
18.583
1.048.248
625
3,36%
% de establos
nº de establos
% de establos
positivos
con un solo
positivos
solitarios en
animal
solitarios en
relación con
positivo
relación con el
los establos
(POSITIVOS
total
positivos
SOLITARIOS)
305
1,64%
AÑO
2005
48,80%
Establos
Reses
investigados investigadas
18.583
nuevos
positivos
% de los
nuevos
positivos
del total de
positivos
incidencia
249
39,84%
1,34%
1.048.248
Nº de
% de
establos
establos
positivos
positivos
solitarios de solitarios de
los nuevos
los nuevos
positivos
positivos
149
59,84%
OBJETIVO: Verificar si estos animales están infectados de Brucella spp. o se tratan de falsos positivos
MATERIAL Y MÉ
MÉTODOS:
Para la realización del estudio se consideraron 33 explotaciones de ganado bovino, de 6
provincias de Castilla y León, diagnosticadas como positivas solitarias en las campañas de
saneamiento ganadero mediante diferentes pruebas serológicas autorizadas (en el
estudio se emplearon: fijación de complemento, ELISAi, ELISAc, o varias de estas
pruebas).
Se tomaron muestras de órganos tras el sacrificio obligatorio de los animales en el
matadero. Posteriormente las muestras fueron enviadas al Laboratorio Regional de
Sanidad Animal de León donde se llevó a cabo el aislamiento de Brucella spp. Los aislados
fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia para la determinación de la
especie y el biotipo.
SEROLOGÍA
Título/Resultado
RESULTADOS:
1. En el 42.42% de las muestras de los animales positivos se aisló B. abortus biotipo 3,
incluso cuando los títulos a fijación de complemento no eran elevados, se consiguió aislar
el agente etiológico.
2. En el animal en el que se diagnosticó la enfermedad con el ELISAc y en los 2 animales
donde el diagnóstico se realizó con ELISAi, no se aisló Brucella spp.
3. En los dos de los animales en los que se diagnosticaron positivos, tras la realización de
una prueba positiva a fijación de complemento, seguido de un ELISA indirecto positivo se
aisló Brucella spp en una de las muestras.
% de
nº de
aislamientos de
Nº de
explotaciones
explotaciones explotacines
donde se aisló
positivas
positivas
solitarias a
solitarias
Brucella spp.
serología
Especie
20 U.I.
40 U.I.
80 U.I.
Fijación de
160 U.I.
Complemento
320 U.I.
640 U.I.
1280 U.I.
ELISAc
positivo
ELISAi
positivo
40 U.I./positivo
FC Y ELISAi
160 U.I./positivo
8
6
2
4
1
5
2
1
2
1
1
5
2
2
0
1
2
1
0
0
1
0
62,50% B.
33,33% B.
100,00% B.
0,00%
100,00% B.
40,00% B.
50,00% B.
0,00%
0,00%
100,00% B.
0,00%
TOTAL
33
14
42,42%
Biotipo
Observaciones
abortus
abortus
abortus
3
3
3
*
*
*
abortus
abortus
abortus
3
3
3
*
*
*
abortus
3
*
* Todas las especies y biotipos de
Brucella spp. fueron iguales
Extracto del PNT del Laboratorio Regional de Sanidad Animal de León para realizar el aislamiento de Brucella spp.
PROCESADO DE LAS MUESTRAS: Se realiza una limpieza (eliminación de grasa) y selección de las muestras a utilizar (Ganglios mamarios e iliacos, mama y útero, ganglios retrofaringeos y parótideos, en orden
descendente de preferencia). CULTIVO: Cultivo en medio selectivo sólido: Medio de Farrel, realizando la siembra por: impronta de cortes limpios de tejidos (para ello se seleccionan varias de las muestras recibidas)
o/y homogeneización de pequeños trozos limpios de muestras con suero fisiológico, sembrando a partir de hisopos sumergidos en la suspensión obtenida. Incubación en atmósfera enriquecida con 5% al 10% de
CO2. a 37 ºC. Las colonias de Brucella spp. suelen comenzar a ser visibles a los 3 días de incubación, momento en que examinan las placas al objeto de observar colonias compatibles morfológicamente con el género
(redondas, de márgenes lisos de color miel pálido, translucidas) que se resiembran en medio de Farrel y se repite la incubación. En las placas en donde no hay crecimiento los tres primeros días, continúan su
incubación realizando una observación diaria, hasta que transcurren 10 días, momento en el cual, si no existe ningún crecimiento, se desechan. IDENTIFICACIÓN DE LAS COLONIAS: Se hace una tinción de Gram . Si
son Gram- y cocobacilares, se realiza la aglutinación con antisueros específicos y pruebas bioquímicas si son necesarias. Las placas con colonias compatibles con Brucella spp., se duplican para conseguir cepas que se
conservan en crioviales manteniéndolos en congelación a -80ºC. Las aislamientos compatibles con Brucella spp., se envían al Laboratorio de Referencia. (Santa Fé, Granada) para su tipificación mediante extracción
de ADN y posterior PCR.
CONCLUSIONES
La aparición de positivos solitarios en las explotaciones presentan un posterior grado de aislamiento de Brucella spp. del 42.42%, lo que indica que no se tratan de falsos positivos,
debido a la dificultad del aislamiento de la bacteria.
En el marco de este estudio y teniendo en cuenta el escaso número de muestras utilizadas en el estudio, en ninguno de los animales en los que se diagnosticó la enfermedad
utilizando el ELISAi y el ELISAc se aisló la bacteria.