Documento 528195

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y
LABORATORIOS
PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS
Código:
LAB-PO-01-01
Revisión: 1
Página:
1 de 6
CICLO ESCOLAR: 2012- 2013 P
NOMBRE DEL DOCENTE: Ing. José Dolores Lira Maas. M.C
CARRERA(S):
Ingeniería en Industrias SEMESTRE:
Alimentarias
ASIGNATURA:
Sexto
Operaciones
GRUPO(S):
A
de PARCIAL: Tercer
transferencia de masa
NOMBRE DE LABORATORIO O DE LA INSTITUCIÓN EN CASO DE
PRÁCTICA EXTERNA:
Laboratorio de Biotecnología
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA:
Practica 3.- Extracción de pigmentos de hojas
FECHA Y HORA PROPUESTA DE LA PRÁCTICA: 17 de Junio del 2013 a las
10:00 a 13:00 am.
MATERIALES REQUERIDOS: 6 Equipos

5 Tubos gruesos con rosca

Chuchillo

Tabla para cortar

2 Pipetas de 10 ml

3 Pipetas de 5 ml

3 Vasos precipitados de 100 ml

2 Vasos precipitados de 250 ml

Un embudo de decantación

Soporte universal

Pinzas de embudos de decantación

Embudos de cristal

Etanol
Código:
LAB-PO-01-01
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
Metanol

Gasolina

Hojas de árboles (espinaca o hoja de Ramon)
Revisión: 1
Página:
Para el maestro

Un vaso precipitado de 1 L
EQUIPO REQUERIDO:

1 Placa de agitación y calentamiento
 Espectrofotómetro
Ing. José Dolores Lira Maas. M.C
NOMBRE Y FIRMA DEL DOCENTE.
20- MARZO -2013
FECHA DE ENTREGA
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Practica 3.- Extracción de pigmentos de hojas
Introducción.
El estudio de los compuestos biológicos implica su extracción y separación del
material (célula, tejido, órgano, etc.) en que se encuentren. Uno de los abordajes
más utilizados para este propósito consiste en el uso de técnicas
de cromatografía (proceso de separación de mezclas complejas mediante
particiones entre una fase fluida móvil y una fase estacionaria). Otra técnica es la
de separación por reparto entre disolventes inmiscible, que permite separar una
mezcla de sustancias en función de su solubilidad en distintos compuestos
inmiscibles.
Como aplicación de estas dos técnicas, en el desarrollo de esta práctica se
extraerán 4 tipos de pigmentos vegetales: clorofilas a y b, carotenos y xantofilas.
Todos ellos tienen carácter apolar, qunque su graod de polaridad varía en función
de su composición química. De esta forma, existe un gradiente de polaridad desde
el más apolar al menos apolar.
Esta propiedad permite su separación, y su distinto color su identificación.
Su color permite también su cuantificación por técnicas expectrofotométricas.
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Finalmente, mediante métodos polarográficos, con la ayuda de un
oxímetro (electrodo de oxígeno), se medirá el desprendimiento fotosintético de
O2 en un cultivo de cianobacterias (microalgas verde-azuladas).
Objetivo: Que el alumno métodos de extracción a través de solventes para l
obtención de pigmentos en hojas.
Materiales y métodos:

Cinco tubos gruesos con rosca

Chuchillo

Tabla para cortar

2 Pipetas de 10 ml

3 Pipetas de 5 ml

3 Vasos precipitados de 100 ml

2 Vasos precipitados de 250 ml

Un embudo de decantación

Soporte universal

Pinzas de embudos de decantación

Embudos de cristal

Etanol

Metanol

Gasolina

Hojas de árboles (espinaca o hoja de Ramon)
Para el maestro



Un vaso precipitado de 1 L
Placa de calentamiento
Espectrómetro
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Procedimiento:
Preparación de la muestra
1.- Trocear la hoja de espinaca. Introducir los trozos en un tubo de ensayo de
calibre grueso y añadir 10 mL de etanol. Taparlo con algodón y calentarlo al baño
‘María’ durante aproximadamente 5 min (retirarlo cuando el etanol adquiera un
color verde intenso). Verter el etanol con los pigmentos disueltos en otro tubo de
ensayo.
Proceso de extracción de los pigmentos
1.- Añadir al embudo de decantación (con la llave cerrada) 5 mL de gasolina.
2.- Tomar 5 mL de extracto de pigmentos y añadirlos sobre el embudo de
decantación. Se formarán dos fases (A y B).
3.- Añadir 2 mL de agua (o más, hasta que la fase inferior quede sin pigmentos).
Desechar la fase inferior (B).
4.- Añadir en el embudo 3 mL de metanol 92% .Se formarán dos fases (C y D).
5.- Recoger ambas fases en sendos tubos de ensayo (usar un tubo de ensayo
largo para la fase C)
6.- Añadir al tubo con la fase C 2 mL de KOH-metanólica 30% (p/v) y agitar bien
durante 2 min. Se formarán dos fases (E y F).
Espectrometría
1. Tomar 0.3 mL del extracto etanólico de pigmentos y añadir 2.7 mL de etanol
2. Medir la DO a 665 nm utilizando etanol como blanco
3.
[clorofila a]
-1 = D.O.665 nm x 13,14
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1. ¿Qué contiene cada una de las fases?¿Por qué esa distribución?
2. ¿Cómo se separarían los pigmentos de la fase D?
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