PRODUCT Name(s)

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254029.05
Rev.: Sep 2011
BD Martin Lewis Agar, Modified
USO PREVISTO
BD Martin-Lewis Agar, Modified (Agar Martin-Lewis, modificado) es un medio enriquecido
para el aislamiento selectivo de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis a partir de muestras
clínicas que contienen flora mixta de bacterias y hongos.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Carpenter y Morton describieron un medio mejorado para el aislamiento de gonococos en 24 h1.
La eficacia de este medio, agar GC suplementado con hemoglobina y concentrado de levadura,
se demostró en un estudio de doce medios en uso para el aislamiento de este organismo2. Más
tarde, se realizaron varias mejoras al medio3-5.
El agar Martin-Lewis es una modificación de una fórmula anterior para el aislamiento selectivo
de Neisseria patógena (N. gonorrhoeae y N. meningitidis) que tiene un mayor efecto inhibidor
de las bacterias gram positivas y levaduras que los agares Thayer-Martin6,7. En BD MartinLewis Agar, Modified, la amfotericina B se sustituye por anisomicina o la nistatina que se
utilizaba anteriormente para una mejor inhibición de la Candida albicans. Este organismo ha
demostrado inhibir a N. gonorrhoeae8,9.
En BD Martin-Lewis Agar, Modified, los nutrientes se obtienen del agar base Chocolate II, que
contiene caseína y peptonas de carne como fuentes de nitrógeno, fosfatos para mantener el pH
y almidón de maíz para neutralizar los ácidos grasos tóxicos que pueden estar presentes en el
agar. La hemoglobina proporciona el factor X (hemina). BD IsoVitaleX Enrichment es un
suplemento definido que proporciona el factor V (nicotinamida adenina dinucleótido, NAD) y
vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, iones férricos y otros factores que favorecen el
crecimiento de la Neisseria patógena.
Este medio contiene varios agentes antimicrobianos para eliminar la flora normal. La
vancomicina es activa principalmente contra las bacterias gram positivas. La colistina inhibe los
bacilos gram negativos, incluida la especie Pseudomonas, pero no es activo contra la especie
Proteus. La Trimetoprima inhibe la especie Proteus. Anfotericina B inhibe los hongos.
REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
BD Martin-Lewis Agar, Modified
Digerido pancreático de caseína
7,5 g
Peptona de carne seleccionada
7,5
Almidón de maíz
1,0
Fosfato dipotásico
4,0
Fosfato monopotásico
1,0
Cloruro sódico
5,0
Agar
14,0
Hemoglobina
10,0
IsoVitaleX Enrichment
10,0 ml
Lactato de trimetopima
0,005 g
Anfotericina B
0,005
Colistina
0,0075
Vancomicina
0,004
pH 7,2 0,2
BD IsoVitaleX Enrichment
Vitamina B 12
L-glutamina
Adenina
Clorhidrato de guanina
Ácido p-aminobenzoico
Nicotinamida adenina dinucleótido
Pirofosfato de tiamina
Nitrato férrico
Clorhidrato de tiamina
Hidrocloruro de cisteina
L-cistina
Glucosa
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PA-254029.05
- 1-
0,01 g
10,0
1,0
0,03
0,013
0,25
0,1
0,02
0,003
25,9
1,1
100,0
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamiento o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biólogicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que
se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar las placas en atmósfera
aerobia enriquecida con CO 2 durante 42 – 48 horas a 35  2 °C. Efectuar la lectura de las
placas después de 18 – 24 y después de 42 – 48 h de incubación.
Cepas
Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069
Neisseria meningitidis ATCC 13090
Neisseria sicca ATCC 9913
*Candida albicans ATCC 60193
Escherichia coli ATCC 25922
Proteus mirabilis ATCC 43071
Resultados del crecimiento
Crecimiento de promedio a excelente.
Crecimiento de bueno a excelente
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa, sin
agrupamiento dinámico.
Inhibición de parcial a completa
Color marrón chocolate, opaco.
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
Sin inocular
PROCEDIMIENTO
Material suministrado
BD Martin-Lewis Agar, Modified (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiológicamente.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Se trata de un medio selectivo para la especie Neisseria patógena, especialmente para el
aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y puede utilizarse para todos los tipos de muestras. Entre
las muestras frecuentes, se incluyen las torundas de las vías genitourinarias, el recto y la
orofaríngea (véase también CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL
PROCEDIMIENTO)6,10. Este medio también puede utilizarse para la detección de Neisseria
meningitidis a partir de muestras con flora normal, por ej., de torundas nasales de portadores en
investigaciones epidemiológicas de un brote de meningitis bacteriana. No se debe utilizar como
el medio exclusivo para el aislamiento primario de N. meningitidis de líquido cefalorraquídeo,
aunque puede utilizarse como medio de aislamiento adicional.
Recogida y transporte de las muestras
Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis son sensibles a las condiciones ambientales adversas.
Por consiguiente, deben utilizarse medios de transporte adecuados para todas las muestras en
las que se sospeche la presencia de Neisseria. Las muestras deben ser enviadas al laboratorio
PA-254029.05
- 2-
tan pronto como sea posible y no deben transcurrir más de 24 horas, aunque se utilicen medios
de transporte. La temperatura de transporte óptima es de 20 – 25 °C. ¡No refrigerar! 6, 10
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar cultivos puros de las muestras que
contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una
torunda, hacerla rodar sobre una pequeña sección cercana al borde, extendiendo luego para
hacer el aislamiento a partir de esta área inoculada. También debe inocularse una placa de agar
chocolate no selectivo, por ej., BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) para
proporcionar una indicación de Neisseria gonorrhoeae sensible a los elementos selectivos de
BD Martin-Lewis Agar, Modified11,12, y para la detección de N. meningitidis en el líquido
cefalorraquídeo. Además, deben incluirse los medios habituales para el cultivo aerobio, si se
considera necesario para detectar otros patógenos.
Incubar los medios inoculados en un entorno aerobio enriquecido con dióxido de carbono al 5 –
10% e incubar a 35  2 °C durante 42 – 48 h o más si fuese necesario. Efectuar la lectura de las
placas después de 18 – 24 y 42 – 48 h.
Resultados
La morfología característica de las colonias en BD Martin-Lewis Agar, Modified es la
siguiente:
Neisseria gonorrhoeae: Colonias pequeñas de grisáceas a transparentes.
Neisseria meningitidis: Colonias de tamaño medio a grande, de color gris azulado, mucoides.
Una identificación presuntiva puede realizarse mediante la tinción de gram y una prueba de
oxidasa6.
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Este medio se utiliza para el aislamiento selectivo de la especie Neisseria patógena a partir de
todas las muestras con flora contaminada y para la diferenciación de Neisseria gonorrhoeae y
N. meningitidis a partir de otras especies de Neisseria que por lo general se encuentran
inhibidas en este medio.
Se ha descrito la existencia de cepas de N. gonorrhoeae inhibidas por vancomicina y lactato de
timetoprima11,12. Por consiguiente, también debe inocularse una placa de agar de chocolate no
selectivo, por ejemplo, BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX). Si se conoce una alta
incidencia de cepas sensibles a la vancomicina en una determinada población de pacientes, se
puede utilizar BD GC-Lect Agar en lugar de BD Martin-Lewis Agar, Modified13.
No utilizar este medio como el único medio de aislamiento para la N. meningitidis a partir de las
muestras de zonas corporales primariamente estériles, tales como el líquido cefalorraquídeo.
Siempre incluir una placa de agar chocolate no selectivo (véase lo anterior).
Neisseria lactamica puede crecer en este medio y ser similar a N. meningitidis6.
Ciertas pruebas diagnósticas pueden efectuarse directamente en este medio; no obstante, para
lograr la identificación completa se necesitan pruebas bioquímicas, y (si así se indica), pruebas
inmunológicas usando cultivos puros. Consultar las referencias correspondientes6.
Las cepas de la especie Capnocytophaga pueden crecer en este medio cuando se inocula con
muestras orofaríngeas13.
REFERENCIAS
1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton. 1947. An improved medium for isolation of the
gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27:58-60.
2. Carpenter, C.M., et al. 1949. Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus.
Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33:164-176.
3. Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen. 1988. Manual of BBL products and laboratory
procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, Md.
4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer. 1967. Primary isolation of N.
gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82:361-363.
5. Vastine, D.W., et al. 1974. Comparison of media for the isolation of Haemophilus species
from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl.
Microbiol. 28:688-690.
PA-254029.05
- 3-
6. Janda, W.M., and J.S. Knapp. 2003. Neisseria and Moraxella catarrhalis. In: Murray, P. R.,
E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Martin, J.E. Jr., and J.S. Lewis. 1977. Anisomycin: improved antimycotic activity in modified
Thayer-Martin Medium. Public Health Lab. 35:53-62.
8. Hipp, S.S., W.D. Lawton, N.C. Chen, and H.A. Gaafar. 1974. Inhibition of Neisseria
gonorrhoeae by a factor produced by Candida albicans. Appl. Microbiol. 27:192-196.
9. Hipp, S.S., W.D. Lawton, M. Savage, and H.A. Gaafar. 1975. Selective interaction of
Neisseria gonorrhoeae and Candida albicans and its possible role in clinical specimens. J.
Clin. Microbiol. 1:476-477.
10. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
11. Cross, R.C., M.B. Hoger, R. Neibaur, B. Pasternack, and F.J. Brady. 1971. VCN-inhibited
strains of Neisseria gonorrhoeae. HSMHA Health Rep. 86:990-992.
12. Phillips, I., D. Humphrey, A. Middleton, and C.S. Nicol. 1972. Diagnosis of gonorrhea by
culture on a selective medium containing vancomycin, colistin, nystatin, and trimethoprim
(VCNT). A comparison with gram-staining and immunofluorescence. Brit. J. Vener. Dis.
48:287-292.
13. Reichart, C.A., L.M. Rupkey, W.E. Brady, and E.W. Hook III. 1989. Comparison of GC-Lect
and Modified Thayer-Martin media for isolation of Neisseria gonorrhoeae. J. Clin. Microbiol.
27:808-811.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Martin-Lewis Agar, Modified
Nº de cat. 254029.
Medios en placa listos para usar, 20 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2011 BD
PA-254029.05
- 4-